全 文 ：的鉴别特征。性状鉴别就是用眼观、手摸、鼻闻、口尝、水试、
火试等十分简便的鉴定方法，来鉴别药材的外观性状。这些
方法在我国医药学宝库中积累了丰富的传统鉴别经验，它具
有简单、易行、迅速的特点。在临床实践工作中，除仔细观察
样品外，有时尚须核定标本和文献。直观的性状鉴定是很重
要的，也是中药鉴定工作者必备的基本功之一。中药师在日
常调剂工作中要面对数百种中药饮片，必须注意经验积累，可
以通过抓住中药饮片的典型特征并加以比较归纳总结，做到
对中药饮片、尤为易混淆中药饮片的快速鉴别。对部分仍然
难以鉴别的品种，还可采用来源和品种鉴定、显微鉴定、理化
鉴定、指纹图谱鉴定等方法。对一些地方性强或新增加的品
种，常缺乏有关资料和标准样品，可邀请该药材产地的中药材
生产部门、销售物流部门、专业技术机构协助鉴定。在日常调
剂工作中，须不断提高中药调剂工作者的技术业务水平，确保
中药调剂的准确，保证患者用药安全、有效。
参考文献
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京:中国医药科技出版社，2010，214-215.
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出版社，2006，554-555.
加速溶剂萃取技术提取垂盆草总黄酮及其抗肝癌研究
马黄璜，江 川，郭晓芳，张增弟，池志珍，吴学辉(福建中医药大学附属人民医院 福州 350004)
摘要:目的 研究垂盆草总黄酮的加速溶剂萃取法提取工艺及其抗肝癌作用。方法 采用加速溶剂萃取法，以总黄酮得率为指标，正交实验
考察其最佳提取工艺，采用 MTT法测定细胞增殖考察垂盆草总黄酮的抗肝癌作用。结果 垂盆草总黄酮的最佳加速溶剂萃取法工艺条件为:
采用无水乙醇为溶媒，在压力为 90Kpa，温度为 100℃，提取 3 次。总黄酮得率可达 8. 241%。垂盆草总黄酮对肝癌 HepG2 细胞增殖的有明显的
抑制作用，并随浓度的增加而增强，呈一定的量效趋势。结论 该实验得到的垂盆草总黄酮的提取工艺合理可行，提取率高，提取得到的总黄
酮具有一定的抗肝癌作用。
关键词:垂盆草;加速溶剂萃取;抗肝癌
中图分类号:Ｒ965 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2015)-09-04125-0040-02
作者简介:马黄璜，女(1986. 11 －)。毕业于福建中医药大学。职称:
药师。从事中药学。联系电话:13003895086
垂盆草(Sedum sarmentosum)为景天科植物垂盆草的全
草，为历版《中国药典》收载的常用中药之一。该药味甘、淡、
性凉，具有清热解毒、利尿消肿、排脓生肌之效，主治丹毒溃
疡。小便不利及急慢性肝炎等。药理学研究发现，垂盆草具
有抑制炎性渗出，减少肝细胞损伤的作用，能显著降低肝炎患
者血清谷丙转氨酶，临床广泛应用于治疗慢性病毒性肝炎，且
无副作用〔1 ～ 4〕。其中关于黄酮类成分研究较多，但采用加速
溶剂萃取技术提取其总黄酮成分及其抗肝癌活性，尚未报道，
本研究采用加速溶剂萃取法提取垂盆草中的总黄酮成分，通
过 MTT法评价其体外抗肝癌活性，以期为垂盆草总黄酮的提
取及应用提供参考。
1 材料与方法
1. 1 材料 垂盆草中药饮片(毫州徐重道中药饮片厂)，芦
丁(中国药品生物制品检定院)，无水乙醇(国药集团化学试
剂有限公司);细胞株肝癌细胞 HepG2，购自中科院上海细胞
库;ＲPMI1640 培养基、胰蛋白酶(Trypsin)，Hyclone公司;胎牛
血清(Fet al bovine serum，FBS)，Gibco 公司;四甲基偶氮唑蓝
(Methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)干粉，Sigma公司;
1. 2 仪器 溶液快速萃取仪(One PSE UserManual)，紫外可
见分光光度计(型号:Tu-1810spv)，上海亚荣旋转蒸发器 ＲE-
5299;ELX800 酶标仪:BioTek 公司;二氧化碳培养箱:德国
Heraeus;倒置相差显微镜:日本 OLYMPUS。
1. 3 实验方法
1. 3. 1 正交实验考察加速溶剂萃取垂盆草总黄酮的提取工
艺:分别称取垂盆草药材各 1g，60℃烘箱干燥 0. 5h，置于 PSE
样品池中，选择乙醇浓度、压力、温度、提取次数为考察因素，
在前期单因素考察的基础上，各取 3 个水平，进行 L9(4
3)正
交实验，按照下列正交设计因素水平表(见表 1)，以垂盆草总
黄酮得率为指标，筛选其最佳提取工艺。
表 1 垂盆草加速溶液萃取方法正交实验因素水平表
因素
A乙醇浓度
(%)
B压力
(kPa)
C温度
(℃)
D提取次数
(次)
1 80 80 80 1
2 90 90 90 2
3 100 100 100 3
1. 3. 2 垂盆草总黄酮的紫外测定方法:精密称取芦丁对照
品，配制成芦丁母液 0. 9032mg·mL －1，精密量取芦丁母液 0、
0. 1、0. 5、1. 0、2. 0、3. 0、5. 0mL分别置于 25mL容量瓶中，各加
30%乙醇 5mL，再各精密加入 5% NaNO2 溶液 0. 7mL 摇匀，
放置 6min，然后再各精密 10% Al(NO3)3 溶液 0. 7mL 摇匀，
放置 6min，最后再各精密加入 1mol·L －1的 NaOH溶液 10mL
分别用 30%乙醇稀释至 25mL摇匀，放置 15min后，置比色皿
中于 508nm处测吸光度。
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海峡药学 2015 年 第 27 卷 第 9 期
1. 3. 3 垂盆草总黄酮抑制细胞增殖的实验:①细胞培养:将
肝癌 HepG2 细胞置于含 10%热灭活胎牛血清(FBS)的 ＲPMI-
1640 培养液中，于 37℃、5% CO2 饱和湿度的细胞培养箱中培
养。②MTT 法测定细胞增殖:取对数生长期的肝癌细胞
HepG2，用 0. 25%胰酶消化并收集细胞。以 ＲPMI-1640 培养
液(含 10% FBS)制成细胞悬液，进行细胞计数，调整细胞密
度为 1 × 105 个 /mL，接种于 96 孔培养板中，每孔 100μL，常规
培养 24h，使细胞同步化。垂盆草总黄酮组(终浓度分别:0、
0. 5、1、2、4mg·mL －1)，以上各组均设 8 个复孔。继续培养
24h，吸弃各孔中的液体，每孔加入 0. 5mg·mL －1的 MTT溶液
100μL，37℃孵育 4h，然后吸弃各孔中的液体，加入 DMSO
100μL /孔，振荡混匀，室温放置 10min，使结晶充分溶解并混
匀，于全自动酶标仪 570nm 测定各组吸光度值(即 OD 值)，
并按下列公式计算细胞活力(%)=实验组吸光度值 /对照组
平均吸光度值 × 100%。抑制率(%)= 100(%)－细胞活力
(%)。③细胞形态学观察:肝癌细胞 HepG2 培养 24h 后，用
倒置显微镜下观察细胞的形态变化。
1. 3. 4 统计学分析:采用 SPSS 16. 0 软件进行分析，实验数
据用 x ± s表示，组间比较采用 t检验。
2 结果与讨论
2. 1 垂盆草总黄酮的正交实验结果 按照表 1 所示，分别称
取垂盆草药材 9 份，按照因素水平表进行实验。在紫外测定
中，以加 0mL芦丁母液的样品做空白对照品，以浓度为横坐
标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。获得回归线性方程:y =
0. 0982x － 0. 0005，Ｒ2 = 0. 9993，正交实验结果(见表 2)。
表 2 正交试验表及结果
编号
A
乙醇浓度
B
压力
C
温度
D
提取次数
总黄酮得率
(%)
1 1 1 1 1 3. 619
2 1 2 2 2 5. 494
3 1 3 3 3 5. 829
4 2 1 2 3 7. 813
5 2 2 3 1 7. 016
6 2 3 1 2 6. 686
7 3 1 3 2 8. 134
8 3 2 1 3 8. 015
9 3 3 2 1 7. 038
K1 14. 94 19. 57 18. 32 17. 67
K2 21. 52 20. 53 20. 35 20. 31
K3 23. 19 19. 55 20. 98 21. 66
Ｒ 2. 75 0. 32 0. 89 1. 33
表 3 正交试验方差分析表
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 F P
A 12. 66 2 6. 33 63. 32 ＜ 0. 05
B 0. 21 2 0. 10 1. 34 ＞ 0. 05
C 1. 29 2 0. 64 6. 43 ＞ 0. 05
D 2. 74 2 1. 37 13. 69 ＞ 0. 05
F0. 05(2，2)= 19. 0，F0. 01(2，2)= 99. 0
结果分析:采用 SPSS 16. 0 统计分析软件，结果表明各因
素影响提取工艺的顺序是 A ＞ D ＞ C ＞ B(见表 2、3)，即乙醇
浓度(A)对垂盆草总黄酮含量有显著影响(P ＜ 0. 05)，其他
因素影响较小，根据上述结果，确定垂盆草总黄酮加速溶剂萃
取最佳工艺为，A3B2C3D3，即采用无水乙醇为溶媒，在压力为
90Kpa，温度为 100℃，提取 3 次。
2. 2 垂盆草总黄酮的最佳提取工艺的验证实验结果 为验
证最佳提取工艺，按上述条件制备 3 批样品，结果以其最佳方
法做 3 份样品，总黄酮得率分中辊为 8. 243%、8. 179%、
8. 301%，其平均总黄酮得率为 8. 241%，ＲSD 为 0. 74%。结
果表明该工艺稳定可靠。
2. 3 垂盆草提取物对肝癌细胞 HepG2 增殖的影响 垂盆草
提取物物浓度达到 0. 5mg·mL －1及以上，均对肝癌细胞
HepG2 增殖有明显的抑制作用(P ＜ 0. 01)，随着药物浓度的
升高对 HepG2 的抑制率也升高(见图 1)。
图 1 垂盆草提取物浓度与细胞活力的关系
2. 4 垂盆草总黄酮对肝癌 HepG2 细胞形态的影响 倒置显
微镜下观察，空白组 HepG2 细胞胞质均匀。核仁清楚，伸展
性好，生长良好，形成贴壁的梭形细胞。实验组当浓度为 5mg
·mL －1时，HepG2 细胞胞质混浊，细胞多呈圆形，体积缩小，
折光性差，细胞悬浮、脱落而死亡;当浓度为 5mg·mL －1时，
细胞形态无明显改变，但细胞生长慢、数量明显较少。
3 结论
加速溶剂萃取法具有比传统萃取方法耗时短、使用溶剂
量低、自动化高的优势〔4〕，现已成为较好的样品前处理方法
之一，广泛应用于食品、环境、药物等行业。本研究采用加速
溶剂法提取工艺提取垂盆草总黄酮，获得了较高的提取率，为
垂盆草总黄酮的提取提供了一种新的方法。药理实验结果显
示垂盆草总黄酮对肝癌 HepG2 细胞增殖的有明显的抑制作
用，并随浓度的增加而增强，呈一定的量效趋势。
参考文献
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 27 No. 9 2015