全 文 ：中 药 药 理 与 临 床 1 99 1 ; 7 ( 6 )
祁州漏芦对大鼠 B型单胺氧化酶活性的抑制作用
邹莉波 于庆海 蔡 红
(沈 阳药学院中药药理教研室 , 1 1 0 0 1 5)
提要 体外实验证明 , 祁州 漏 芦乙醉提取物能显著抑 制大 鼠大脑 线拉体 B 型单
胺乳化酶 ( M A O 一 B ) 的活性 , 而对肝 M A O 一 B 活 性 的抑 制作 用仅为对脑抑制作用
的 5 0%左右 。 酶促动 力学研 究表明 , 祁州漏 芦对 M A O 一 B 活性 的抑制作用属竟争性
抑制 。
关挂词 祁州漏芦: M A O 一 ;B 衰老
人体大脑 M A O一 B活性升高与衰 老 及一些老年
病的发生密切相关 , M A O一 B 被 称 为 “ 老 化 相 关
酶 ” t ` 二。 抑制 M A O 一B 活性的药物研究近来日益受
到重视 。 祁州漏芦是菊科多年生草本植物 , 《神农
本草经 》 记载漏芦 “ 下乳汁… …轻身 益气 、 耳 目聪
明 , 不老延年 ” 。 本实验研究漏芦对 M A O 一 B 活性
的影响 , 以期为漏芦延缓衰老等作用提供一定的实
验依据 。
材 料 与 方 法
一 、 动物: W i s t a r雄性大鼠 , 体重 2 0 0一 2 509 ,
由本院动物室供应 。
二 、 药物和试剂 : 漏芦R h a p o n t i e u m u n i f l o r -
u n ( L
.
) D C
. 沈阳市中医研究所提供 。用0T % 乙醇提
取 。 节胺为北京化工厂产品 , 其它所用试剂皆为市
售分析纯 。
三 、 脑 M A O 一 B制备 : 参照 K a n和 B e o e d e t t i 方
法 L” , 取大鼠脑于 0 . 2M 磷酸缓冲液中制备匀浆 ,
离心 30 00 r p也 , 10 m in , 取上清液再离心 15 000 r p m ,
30 m in
。 得沉淀部分为含M A O 一 B的线粒体 , 重新混
悬于磷酸缓冲液中 , 置 一 20 ℃冰箱贮存备用 。
四 、 脑 M A O 一 B 活 性 测定 : 参 照 M c e w en 方
法 ’ 〕 , 并加修改 , 反应体系为 s m M节胺 0 . 3创 、 漏
芦乙醇提取物0 . 0 05 “ D . 13 5创 、 酶液 o . s m l 、 用 0 . 2
M磷酸缓冲液 (P H = 7 . 4) 补足体积 至 3 , 5ml , 37
℃温育振荡2 . 5小时 。 加60 %高氯酸终止 反应 , 反
应产物节醛经4 nlr 环已烷提取后 , 在 2 42 n m 处测定
光密度 。 空白管温育后加节胺 , 其它操作相同 。 酶
特异活性以节醛 n ln ol / nI g 蛋白质 /小时表示 。 蛋白
质测定采用 L o w yr 法 , 以小牛血清 蛋白为标准蛋
白。
五 、 肝 M A O 一 B制备 : 参照 T a n a k a 等方法〔4 ’ ,
取大鼠肝于 0 . 25 M蔗糖溶液中制备匀浆 , 离心 3 00 0
r p m
,
10 m in
, 取上清液 , 离心 10 D00 r p m 、 10 m in ,
将沉淀混悬于蔗糖溶液中再离心 I O00 0 rp m 、 I Om hi ,
得沉淀部分为含 M A O 一 B 的线粒体 , 重新混悬于蔗
糖溶液中 , 于 一 20 ℃贮存备用。
六 、 肝M A O 一 B活性的测定 : 参照 T a k e u c ih 等
方法比 〕测定 。 反应体系为 DI m M 节胺 o . 4m l , 漏芦
乙醇提取 物 0 . 005 ~ 0 . 13 50 1、 O . ZM 磷 酸 缓 冲液
(P H ~ 7
.
4) o
.
3ml
、 酶 0 . 了m l , 以蒸馏水调至最终
体积为2 . Om l。 37 ℃温育振荡 1 . 5小时 , 加30 %三氯
醋酸0 . 2m l 终止反应 , 反应产物经 4 m l环已烷提取
后 , 在2 4 2n m 处测定光密度 。 空白管在温育前加三
氯醋酸 , 温育后加酶 , 其它操作相同。
结 果
一 、 泊芦乙醉提取物对M A O一 B的抑翻作用
取不同剂量的漏芦乙醇提取 物 加 入反应体系
中 , 以不加漏芦的酶活性 为 10 % 。 结果表明 , 漏
芦对大脑及肝 M A O 一 B 活性均呈显著的剂量依赖性
抑制作用 。 其对肝 M A O 一 B 活性的抑制作用较弱 ,
仅为脑的 50 %左右 。 见表 1 、 表 2 。
二 、 翻芦乙醉提取物对M A O一 B活性的抑制特征
通过对不同底物浓 度 下 漏 芦 乙 醇 提 取物对
M A O
一 B 活性抑制的动力学研究表明 , 漏芦对大鼠
DOI : 10. 13412 /j . cnki . zyyl . 1991. 06. 009
中 药 药 理 与 临 床 9 19 1; ( 6)
塑 .登传即 2 1。从
大脑 、 肝线粒体 M AO 一 B活性的抑制作用均属于竞
争性抑制 .见图 1、 图 2 .
衰 1.芦乙茸提取钧对大民肺M AO 一 B活性的
抑翻作用 /
剂 量
( mg / m) l
M OA
一 B活性
特异活性 (节醛 nM o l/相对活性 (%) 五 · mg蛋白)
48 1
.
7 1士 16 . 8 0
24 1
.
5 3士 15 . 8 2
2 1 1
.
5 3士 7 . 6 2
7 0
.
8 0士 4 .5 8
5 4
.
9 1士 9 . 27
D0 I士 1 1. 34
8 4
.
0 4士 10 . 6 8
8 1
.
9 0士 5 . 14
7 4
.
7 8士 3.7 2 -
37
.
06士 6 . 2 6 -
`) , , 0 , , · ’ 。 . 2 0 一 , ’ 。 的 李
图 2 节胺浓度与单胺氧化速度关系的
L i n e w e a v e r一 B u r k 图 (肝 )
。
~ 无 漏芦
, ▲一▲漏芦 2 . 5m g /ml ,
x 一 x 漏芦67 . 5 m g / m l
心dOU丹b叮J .性,曰601勺
.…门IJ任,曰QUJ.人心d
一
P < 0
。
0 1
裹 2 月芦乙醉提取钧对大叹肝 M AO一 B活性的
抑翻作用
M A O
一 B活性剂 量 — -— —( m g / m l) 特异扩于性 (节醛 n M ol / 相对活性 ( % )h · m g蛋白 )83 . 44士 1 . 9 3了3 . 2 5土 3 . 9262 . 72士3 . 9 24 5 . 50土 5 . 0 6
21
.
6 8士3 . 64
99
.
8 7士 2 . 42
87
.
7 8士 1 . 38
75
.
1 7士 4 . 68 .
5 1
.
1 2士 5 . 93 .
2 5
.
98士4 . 36 。
,自甲.
,曰月`,曰丹O
.
P < 0
.
00 1 , 表中数据为 4 次试验的平均值 ( X 士 SD )
图 1 节胺浓度与单胺氧化速度关系的
L i n e w e a v e r一 B u r k 图 (脑 )
。一。无漏芦 、 x 一 x 漏芦4 . 2 9m g / m l ,
▲一` 漏芦 12 . 86 m g /口 1
讨 论
据报道川 , 人脑中 M A O 一B 活性在 45 岁以后随
年龄增长而急剧增加 。 从而引起脑内儿茶酚胺代谢
紊乱 , 生理活动失调 。 M A O 一B 可 间接反映生物体
老化程度 , 故又称 “ 老化相关酶 ” 。 iF cn h提出 f “ , ,
脑儿茶酚胺的变化是控制下丘脑的中央衰老钟的主
要发条 , 而 M A O 一B 抑制则是调节这种发条的重要
因素 。 因此 , 寻找效率高 、 副作用小的 M A O 一B抑
制剂 , 对延缓衰老 、 防治老年性疾病有着重要的意
义 。 本实验观察到 , 漏芦乙醇提取物能显著地抑制
大鼠大脑线粒 体 中 M A O 一 B 活性 , 从 而可以减缓
M A O
一 B对体内单胺类神经介质和激素的灭活作用 ,
延长这些神经介质和激素的生理效应 , 调节中央衰
老钟的运行 。 试验证明 , 漏芦对肝M A O 一 B 活性抑
制作用较弱 , 因此 , 对体内某些有害的单胺在肝胜
的分解代谢影响轻微 。 本实验结果 , 为漏芦用于老
年病的防治及延缓衰老提供了一定的实验依据 。
. 考 文 欲
( 1 〕 贾雪梅等 : 国外医学老年学分册 19 8 ,
( 4 ) : 14 5
〔 2 〕 K a n · J : B e n e d t t i M . J N e u or e h e m
19 8 1
,
36 : 156 1
〔 3 〕 M e E w e n C : M o n o a m i n e o x i d a s e . I n :
M e t五o d s in E n z y m o l o g y . ( T a b o r ,
H
.
a n d T a b o r
,
C
.
e d s ) X 班 B . N e w
Y o r k an d L o n d o n
:
197 1 : 69 2一 6 98
( 4 〕 T a n a k a 5 . e t a l : P l a n t a m e d 19 87 :
53 ( 1 ) : 5
2 6 7 (6 )
〔5 〕 T ak e e uh i
9 7 1 3:2 6 :
T
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中 药 药 理 与 临 床 19 9 1;
J A n t ib i ot ie s〔 6〕
12 6
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u m u n i f l o r u m ( L
.
) D C o n m it o e h o n d r i a o f t y p e B m o n o a m in e e x i d a s e ( 入I A O一 B ) a e t i v i t y
o f r a t , 5 e e r e b r u m a n d i t s l i v e r t h r o u g h e x t r i n s i e e x p e r i m e n t
.
T h e r e s u l t p r o v e d t h a t t h e
a l e o h o l e x t r a e t io n e a n a p p a r e n t l y i n h i b i t M A O 一 B a e t i v i t y o f m i t o e h o n d r s a i n e e r e b r u m
w h i l e t h e i n h i b i t i o n u p o n t h e a e t i v i t y o f 11丫 e r M A O一 B w a s o n l y a bo u t 50% e o m p a r e d
w i t h t h a t u p o n r a t l s e e r e b r u rn
.
F r o m t h e a s p e e t o f e n z y m e k i n e t i e s s t u d y
,
t h e i n h i b i t i o n
o f r h a p o n t i e u m u n i f lo r u m ( L
.
) D C u p o n t h e M A O
一 B a e t i v i t y w a s o f e o m p e t
’
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i t io n
.
K e y w o rd s R h a P o n t i e u m u n i f lo r u m ( L
.
) : M A O
一 B
(上接第 43 页 )
除重点观察口腔溃疡外 , 还观察了少数牙眼炎 、
牙周病 、 舌叶状乳头炎 、 扁平苔鲜 、 屡缩性舌炎 ,
化脓性扁桃体炎 、 咽炎等 , 口 咽清亦有一定疗效 。
毒副反应 : 治疗组 2 8D 例中 , 无 一 例出现毒副
反应 。 对照组 48 例中 , 1例头昏 , 1 例舌麻木 , 1
例味觉消退 , 但停药一天后均消失 。
讨 论
综上所述 , 证明口咽清疗效非常显著 , 适用 于
对各种证型的治疗 , 对阴虚型及湿热型效果尤佳 。
对西医诊断为急性感染性口腔溃疡的厅效优于复发
性口腔溃疡急性发作期 。 对复发性口腔溃疡治疗后
部分追踪观察 , 不仅近期疗效肯定 , 重复用药仍然
有效 。 此外 , 在治疗牙酿炎 、 牙 周病 、 舌叶状乳头
炎 、 扁平苔醉 、 萎缩性舌炎等多种口腔疾病上也初
具端倪。
祖国医学对口腔溃疡的认识较早 , 始见于 《 内
经》 , 称为 “ 口疮 ” 、 “ 口糜 ” 。 历代医家认为口
腔溃疡的发生与内脏密切相关 , 脾开窍于口 , 心开
窍于舌 , 肾脉连咽系舌本 , 两颊及齿酿属于胃与大
肠 。 因而心脾积热 , 外感邪热 , 阴虚火旺 , 中气不
足等均可导致 口疮 、 口糜的发生 , 在扶正祛邪的总
治则下 , 常采用清热解毒 、 疏风散热 , 芳香化湿 、
养阴凉血 , 补益心脾等法治疗 。
本方正是根据以上理论 , 采用四味不同性味 、
归径 、 功效的内服中药组成 。 君 药 决 明子性味甘
苦 , 微寒 , 具清肝通便之效 ; 臣药野菊花 , 性味辛
凉 , 清热解毒力甚强 , 配以芳香化湿力强的蕾香及
养阴凉血效佳之品 , 既增强 了清 热 解 毒 , 芳香化
湿 , 养阴凉血之功 , 又避免了 “ 祛湿 则 伤 阴 ” 、
“ 养阴则助湿 ” 之弊。 给药途径采用含漱法 , 既发
挥了药物直接作用 , 又可经口腔枯膜吸收 , 通过经
咏于肚腑 , 治其本而愈其表 , 加速 口腔 溃 疡 的 愈
合 。 可谓立论有据 , 辨证准确 , 组方合理 , 配伍精
良。 这就是 口咽清抗炎抑菌作用虽远不如洗泌泰 ,
但疗效确优于洗必泰的原因所在 。 因此 , 在 目前 西
医对该病尚缺乏理想治疗药物情况下 , 能从中药另
辟蹊径 , 是很有意义的 .
, 考 文 做
〔 1 〕 张白嘉等: 中成药 198 9: 1 1 ( 10 ) : 27
(执笔: 高小珊 )