全 文 ：中兽医医药杂志　JTCVM
2006年第 1期
5　 　
调查研究
火绒草的抗菌活性研究
黄利权 1 ,伍义行2
(1.浙江大学动物科学学院动物医学系 ,浙江杭州　310029;2.浙江大学药学院中药与天然药物研究室)
　　摘　要:　采用试管稀释法 ,分别测定了火绒草水煎液 、水提醇沉液 、醇提物 、醇提石油醚部分 、醇提乙酸乙酯
部分 、醇提正丁醇部分 、醇提水溶部分等 7种提取物对大肠杆菌 C83882 、大肠杆菌 C83903 、大肠杆菌 C83914 、沙门氏菌
C79-20、金黄色葡萄球菌 NewbouldS-305、金黄色葡萄球菌临床分离株等 6株病原菌的最低抑菌浓度(MIC)和最
低杀菌浓度(MBC)。试验结果表明 ,火绒草醇提物及其石油醚部分和乙酸乙酯部分对两种金黄色葡萄球菌具有
较强的抑制作用 , 其 MIC为 0.14mg/ml生药浓度 , MBC为 0.27 mg/ml生药浓度 , 而其它部分对金黄色葡萄球菌
的抑制作用较弱。火绒草醇提正丁醇部分和水溶部分对 3株大肠杆菌和 1株沙门氏菌具有较强的抑制作用 ,其
MIC为 2.70mg/ml生药浓度 , MBC为 2.70 mg/ml生药浓度 ,显示了较强的抗菌活性。
　　关键词:　火绒草;试管稀释法;抗菌活性
　　中图分类号:S853.74　 　　　文献标识码:A　 　文章编号:1000-6354(2006)01-0005-03
　　火绒草系菊科火绒草属植物火绒草〔Leontopodiumleon-
topodioides(Willd.)Beauv.〕的干燥全草。广泛分布于我国北
部和西部 ,特别是青藏高原 , 野生资源极为丰富。具有疏风
解表 、清热解毒 、凉血止血 、益肾利水 、消炎利尿等功效 。药
理研究和临床试验表明 ,火绒草水提物具有降血糖和利尿作
用 , 70%和 95%的乙醇提取物具有抗炎作用;其复方和乙醇
制剂对急 、慢性肾炎有较好疗效。 目前已从火绒草中分离出
咖啡酸(cafeicacid)、香草酸(vanilicacid)、原儿茶醛(proto-
catechualdehyde)、反式桂皮酸(thans-cinnamicacid)、阿魏酸
(ferulicacid)、β -谷甾醇(β -sitosterol)和苯乙双胍(phen-
formin)7个结晶单体。笔者在前人研究的基础上 , 就火绒草
不同极性提取部分的体外抗菌活性作了初步探讨。
1　材料与方法
1.1　药材
火绒草:Leontopodiumleontopodioides(Willd.)Beauv., 采
自甘南草原 ,由农业部新兽药工程重点开放实验室天然药物
研究室鉴定。
1.2　试验药液(均为生药浓度)
水煎液:1 g/ml;水提醇沉液:1 g/ml;醇提水溶部分:
345.84 mg/ml;乙醇浸膏丙酮溶液:70.25 mg/ml;石油醚丙酮
溶液:166.52mg/ml;乙酸乙酯丙酮溶液:299.73 mg/ml;正丁
醇丙酮溶液:499.56 mg/ml;丙酮:对照。
1.3　试验菌株
金黄色葡萄球菌 NewbouldS-305标准株:瑞典国家兽
医研究所奶牛乳房炎研究室惠赠(本院临床医学教研室提
供 ,以下简称 S-305株);金黄色葡萄球菌临床分离株:分离
自临床乳腺炎病例(以下简称临床株);大肠杆菌 C83903:购自
中国兽药监察所;大肠杆菌 C83914:购自中国兽药监察所;大
肠杆菌 C83882:浙江省农科院病毒所提供(购自中国兽药监察
收稿日期:2005-10-18
作者简介:黄利权(1957-),男 ,教授 ,主要从事兽医临床医学研究。
所);沙门氏菌 C79-20:浙江省农科院病毒所提供(购自中国
兽药监察所)。
1.4　方法
1.4.1　菌液制备　从保种斜面上挑取菌苔划线接种营养琼
脂平板 ,置 37℃培养 18 h, 挑取单个菌落接种到 5 ml肉汤
中 ,在 37℃下培养 18h,置 4 ℃冰箱保存备用。
1.4.2　菌落计数　吸取菌液 1 ml,用生理盐水作 10倍顺序
稀释为 10-1 、10 -2、10-3…… 10-8。取稀释度为 10-5 ～ 10-8
的菌液各 0.1ml在营养琼脂平板上涂匀(每一稀释度做 2个
平板), 于 37 ℃培养 18 h。挑取菌落数在 30 ～ 300个之间的
平板计数 ,取两个平板的平均菌落数进行计算。根据菌液的
稀释倍数 ,计算每毫升菌液的活菌数(cfu/ml)。
根据平板计数结果 , 将试验菌液用生理盐水稀释成含菌
量为 105 cfu/ml。
1.4.3　最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)的测
定　试管稀释法。取 10支灭菌具塞试管 , 分别加入营养肉
汤 1 ml。在第 1管中加入试验药液 1 ml, 混匀后吸取 1 ml
加入到第 2管中 , 第 2管按同样方法混匀后吸取 1 ml加入
到第 3管 , 依次稀释至第 9管 , 第 9管混匀后弃去 1 ml, 第
10管不加药液作对照。各管分别加入试验菌液 0.1 ml, 混
匀置 37 ℃下培养 18 h, 以肉眼观察无菌生长的药液最低浓
度为最低抑菌浓度(MIC)。
测出最低抑菌浓度(MIC)后 , 再依次从未见细菌生长的
各管中吸取 0.1ml培养物分别接种于琼脂平板 , 37 ℃培养
18 ～ 24h,平板上生长的菌落数小于 5个的药液最低浓度 ,即
为最低杀菌浓度(MBC)。
2　结果与分析
2.1　最低抑菌浓度(MIC)
7种供试药液对 6种试验菌的抑菌作用及 MIC见表 1。
水煎液对金黄色葡萄球菌 NewbouldS-305株的抑制作用最
强 ,其 MIC为 15.63 mg/ml;其次是金黄色葡萄球菌临床株 、
大肠杆菌 C83903和沙门氏菌 C79-20 , 而对大肠杆菌 C83882抑制
DOI :10.13823/j.cnki.j tcvm.2006.01.001
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2006年第 1期
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调查研究
作用最弱。水提醇沉液对沙门氏菌 C
79-20的抑制作用最强 ,
其 MIC为 31.25 mg/ml;其次是金黄色葡萄球菌临床株和大
肠杆菌 C83903 , 而对大肠杆菌 C83882抑制作用最弱。醇提物对
金黄色葡萄球菌 NewbouldS-305株和临床株的抑制作用最
强 ,其 MIC均为 0.14 mg/ml;其次是大肠杆菌 C
83914
, 而对大
肠杆菌 C83882、大肠杆菌C83903和沙门氏菌 C79-20抑制作用最弱。
醇提石油醚部分对金黄色葡萄球菌 NewbouldS-305株和临
床分离株的抑制作用最强 ,其 MIC均为 0.33mg/ml;其次是大
肠杆菌 C
83914
, 而对大肠杆菌 C
83882
、大肠杆菌 C
83903
和沙门氏菌
C79-20抑制作用最弱。醇提乙酸乙酯部分对金黄色葡萄球菌
NewbouldS-305株抑制作用最强 , 其 MIC为 0.59 mg/ml;其
次是金黄色葡萄球菌临床株 , 而对大肠杆菌 C83882、大肠杆菌
C83903、大肠杆菌 C83914和沙门氏菌 C79-20抑制作用最弱。 醇提
正丁醇部分对大肠杆菌 C83903的抑制作用最强 , 其 MIC为
7.81mg/ml;其次是金黄色葡萄球菌 NewbouldS-305株 、大
肠杆菌 C83882、大肠杆菌 C83914和沙门氏菌 C79-20 , 而对金黄色
葡萄球菌临床株抑制作用最弱。 醇提水溶部分对大肠杆菌
C83903、大肠杆菌 C83914和沙门氏菌 C79-20抑制作用最强 , 其
MIC均为 2.70 mg/ml;其次是大肠杆菌 C
83882
,而对金黄色葡
萄球菌临床株抑制作用相对较弱。
表 1　7种试验药物对 6株试验菌的最低抑菌浓度(MIC)
试验药物
/mg· ml-1
金黄色葡萄球菌
(NewbouldS-305)
金黄色葡萄球菌
(临床株)
大肠杆菌
(C83882)
大肠杆菌
(C83903)
大肠杆菌
(C83914)
沙门氏菌
(C79-20)
水煎液 15.63 31.25 500 31.25 125 31.25
水提醇沉液 125 62.5 250 62.50 125 31.25
醇提物 0.14 0.14 35.13 35.13 17.56 35.13
石油醚部分 0.33 0.33 83.26 83.26 41.63 83.26
乙酸乙酯部分 0.59 2.34 149.87 149.87 149.87 149.87
正丁醇部分 15.61 62.45 15.61 7.81 15.61 15.61
水溶部分 10.81 21.62 5.40 2.70 2.70 2.70
丙酮 100 50 50 50 100 50
　　注:试验药物的 MIC为生药浓度 ,对照溶剂丙酮的 MIC为百分比浓度。
　　从表 1可见, 溶剂丙酮对金黄色葡萄球菌临床分离株、大
肠杆菌 C83882、大肠杆菌 C83903和沙门氏菌 C79-20的 MIC均为
50%的百分比浓度;而对金黄色葡萄球菌 NewbouldS-305株
和大肠杆菌 C83914的 MIC为 100%的百分比浓度。显然 , 丙酮
对 6种试验菌的抑制作用均很弱。
2.2　最低杀菌浓度(MBC)
7种试验药物对 6株试验菌的最低杀菌浓度(MBC)见
表 2。
表 2　试验药液对 6株试验菌的最低杀菌浓度(MBC)
试验药物
/mg· ml-1
金黄色葡萄球菌
(NewbouldS-305)
金黄色葡萄球菌
(临床株)
大肠杆菌
(C83882)
大肠杆菌
(C83903)
大肠杆菌
(C83914)
沙门氏菌
(C79-20)
水煎液 15.63 31.25 500 62.25 125 31.25
水提醇沉液 125 62.5 250 62.50 250 62.25
醇提物 0.27 0.27 35.13 35.13 17.56 35.13
石油醚部分 0.65 0.33 83.26 83.26 41.63 83.26
乙酸乙酯部分 1.17 2.34 149.87 149.87 149.87 149.87
正丁醇部分 31.22 62.45 31.22 7.81 15.61 15.61
水溶部分 21.62 43.23 10.81 2.70 5.40 5.40
丙酮 100 100 50 50 100 50
　　注:试验药物的 MBC为生药浓度 ,对照溶剂丙酮的 MBC为百分比浓度。
　　从表 2可知 , 醇提物 、醇提石油醚部分和醇提乙酸乙酯
部分对金黄色葡萄球菌 NewbouldS-305株和金黄色葡萄球
菌临床株的杀菌作用最强 , 其 MBC为 0.27 ～ 2.34 mg/ml。
此外 ,醇提正丁醇部分和醇提水溶部分对大肠杆菌 C83882、大
肠杆菌 C83903、大肠杆菌 C83914和沙门氏菌 C79-20也具有较强
的杀菌作用 ,其 MBC为 2.70 ～ 31.22 mg/ml。
3　结论
通过对火绒草的体外抑菌 、杀菌试验结果表明 , 火绒草醇
提物及石油醚和乙酸乙酯部分对金黄色葡萄球菌具有很强的
抑(杀)菌作用 , 其 MIC最低可达 0.14 mg/ml生药浓度 , 其
MBC最低可达 0.27 mg/ml生药浓度, 而其它部分对该菌的抑
(杀)菌作用相对较弱。说明抗金黄色葡萄球菌活性部位主要
在火绒草醇提物低极性部分(石油醚和乙酸乙酯部分)。
火绒草醇提物正丁醇部分和水溶部分对大肠杆菌和沙
门氏菌具有较强的抑制作用 , 其 MIC最低可达 2.70 mg/ml
生药浓度 ,其 MBC最低亦可达 2.70 mg/ml生药浓度 , 显然 ,
抗大肠杆菌和沙门氏菌的活性部位主要在醇提物的极性部
位(正丁醇部分和水溶部分)。
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2006年第 1期
7　 　
调查研究
StudyontheantibacterialactivityofLeontopodiumleontopodioides(Wild.)Beauv.invitro
HUANGLi-quan
(DepartmentofAnimalMedicine, CollegeofAnimalScience, ZhejiangUniversity, HangzhouZhejiang310029, China)
Abstract:Minimalinhibitoryconcentration(MIC)andminimalbactericidalconcentration(MBC)ofsevenextractions(suchas
thedecoction, thesolutionofwater-extractionandalcoholprecipitation, thealcoholextractionanditsthepetroleumether-soluble
fraction, theethylacetate-solublefraction, then-butanol-solublefractionandthewater-solublefraction)fromLeontopodiumle-
ontopodioides(Willd.)Beauv.againstE.coliC83882 , E.coliC83903 , E.coliC83914 , SalmonelaC79-20 , StaphylococcusaureusNewbouldS
-305, andStaphylococcusaureusisolatedfromtheclinicalcaseofbovinemastitisweredeterminedbythedilutionmethod.There-
sultsindicatedthatthealcoholextractionanditspetroleumether-solublefractionandethylacetate-solublefractioncanstronglyin-
hibitthedevelopmentofStaphylococcusaureuswithMIC(0.14mg/ml)andMBC(0.27 mg/ml).Then-butanol-solublefraction
andthewater-solublefractionofthealcoholextractionhavepotentlyantibacterialactivityagainstE.coliandSalmonelawithMIC
(2.70mg/ml)andMBC(2.70 mg/ml).Thepotentlyantibacterialefectofthecommonedelweisswasprovedbythetest.
Keywords:Leontopodiumleontopodioides(Willd.)Beauv.;thewaterextract;thealcoholextract;thetesttubedilutionmeth-
od;antibacterialactivity
骆驼刺对鸡生化指标 、免疫力及生产性能指标的影响
雷　红 , 祁成年
(塔里木大学动物科技学院 ,新疆阿拉尔　843300)
　　摘　要:　选择 1日龄三黄鸡 80只 ,随机分为两组 ,试验期为 4周 , 按常规免疫 , 对照组饲喂基础日粮 , 试验
组在基础日粮中添加 1.5%的骆驼刺 ,在 7、14、21、28日龄检测两组鸡的血液生理生化指标。结果表明 ,骆驼刺可
以提高鸡的抗体水平 、E玫瑰花环率 、红细胞数 、白细胞数 、淋巴细胞数 、体重以及免疫球蛋白 IgG、IgA、IgM、LDL、
IB、AST的含量 ,但差异不显著(P>0.05),骆驼刺对免疫器官胸腺和脾脏指数有升高作用 , 可降低嗜碱性细胞的
百分比 , 降低 TC、TG、HDL、TB、DB、ALP的含量 ,与对照组比较 , 差异不显著(P>0.05)。
关键词:　骆驼刺;生理生化指标;免疫力;生产性能
　　中图分类号:S852.42　　　　　 文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2006)01-0007-03
　　骆驼刺是多年生的豆科木质化草本植物 , 是一种良好的
蜜源植物和药用植物 , 花期可产出大量质地细腻 、气味芳香
的蜜糖 ,可用于治疗痢疾 、腹痛 、腹泻 、伤风感冒等;种子内服
治疗胃病 ,外用治牙痛等多种疾病 [ 1] 。基于以上因素 , 笔者
观察了塔里木盆地的骆驼刺对鸡血液生化指标 、免疫力及生
产性能的影响。
1　材料与方法
1.1　实验动物
实验用鸡苗为三黄鸡 , 购自阿克苏市养禽厂 , 按当地免
疫程序进行免疫。
1.2　实验材料
96孔 V型微量血凝板 , 微量加样器 , 恒温箱 ,电子天平 ,
淋巴细胞分层液 ,离心机 , OLYMPUS显微镜 ,血细胞计数板 ,
收稿日期:2005-09-28
项目来源:新疆生产建设兵团课题基金资助项目(项目编号:
NKBO3TNK20XM)
作者简介:雷　红(1966-),女 ,高级实验师 ,主要从事实验教学与中
草药研究。
半自动生化分析仪(荷兰惠普产), OLYMPUSAU400全自动
生化分析仪(日本产)。 ND抗原 ,购自农一师兽医站 , 马立克
氏疫苗 、鸡新城疫传染性支气管炎二联四价疫苗(活)、法氏
囊疫苗 、鸡新城疫弱毒活疫苗 ,均购自阿克苏地区兽医站 , 骆
驼刺从塔里木盆地采集。
1.3　实验方法
1.3.1　动物分组与饲养　1日龄三黄鸡苗 80只 , 随机分成
实验组和对照组 , 每组 40羽。用天康饲料厂生产的小鸡料
S110饲喂 ,至 22日龄用中鸡料 611S饲喂 , 实验组在饲料中
添加 1.5%的骆驼刺与疫苗同时使用 ,连用 5 d。 1日龄进行
马立克氏疫苗免疫(气雾法), 7日龄进行鸡新城疫传染性支
气管炎二联四价疫苗(活)免疫 , 14日龄进行鸡法氏囊疫苗
免疫 , 21日龄进行鸡新城疫弱毒活疫苗免疫 , 28日龄进行鸡
法氏囊疫苗免疫。
1.3.2　血液样品采集　在常规疫苗免疫后的第 7天 , 即 7、
14、21、28日龄上午 10 ～ 12时 , 每组随机抽取 5只鸡颈静脉
无菌采血 ,备用。
1.3.3　生化指标测定　在 28日龄时 , 每组随机抽取 5只鸡
进行颈静脉采血 ,检测 ND抗体(血凝抑制试验 , HI), E-玫