全 文 ：·38· 中国药业 China Pharmaceuticals
2010年第 19卷第 18期
图 2 夜香牛药材图
图 1 夜香牛原植物图
夜香牛的质量标准研究
陈黄保，胡等芳
(广东省湛江市药品检验所，广东 湛江 524037)
摘要:目的 建立夜香牛的质量标准。方法 采用显微、薄层色谱(TLC)法进行定性鉴别，用高效液相色谱法测定其中木犀草苷的含量。结果 TLC
法鉴别专属性强; 木犀草苷对照品质量浓度在0． 927 ～ 9． 270 μg / mL 范围内与峰面积线性关系良好，r = 0． 999 8，平均加样回收率为
99． 25%，RSD = 0． 77%(n = 6)。结论 该方法操作简便、结果准确、重复性好，可有效控制夜香牛的质量。
关键词:夜香牛;质量标准;木犀草苷;显微;薄层色谱法;高效液相色谱法
中图分类号:R282． 5;R284． 1;R282． 71 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2010 )18 － 0038 － 02
Study on Quality Standards of Vernonia Cinerea
Chen Huangbao，Hu Dengfang
( Zhanjiang Municipal Institute for Drug Control，Zhanjiang，Guangdong，China 524037 )
Abstract:Objective To establish the quality standards for Vernonia cinerea． Methods The microscopy and TLC method were used for the
qualitative identification of Vernonia cinerea，HPLC was adopted to detect the content of luteolin glycosides． Results TLC identification had
good specificity;the reference substance of luteolin glycosides showed the good linear relationship in the range of 0． 927 － 9． 270 μg，r =
0． 999 8． The recovery rate was 99． 25% ，RSD = 0． 77% ( n = 6 ) ． Conclusion The method is simple，accurate and repeatable． The quality
standards can be effective in controlling the quality of Vernonia cinerea．
Key words:Vernonia cinerea;quality standards;luteolin glycosides;microscopy;TLC;HPLC
夜香牛为民间用药，始载于《岭南采药录》，别名伤寒草、消山
虎、寄色草、返魂香、假咸虾、枝香草 [ 1 － 2 ]，为菊科植物夜香牛 Ver-
nonia cinerea(L．)Less 的干燥全草，具有清热、除湿、解毒功效，治
外感发热、急性黄疸型肝炎、湿热腹泻、疔疮肿毒。为了有效控制其
质量，笔者采用显微、薄层色谱(TLC)法进行定性鉴别，用高效液相
色谱(HPLC)法测定其中木犀草苷的含量，报道如下。
1 仪器与试药
Agilent 1100 型高效液相色谱仪，含 DAD 检测器，Agilent 1100
化学工作站;梅特勒－托利多 AG135型电子天平;HENGAO HS3120
型超声清洗仪(功率 120 W，频率 40 kHz)。D101 大孔吸附树脂柱(批
号为 050901，天津市海光化工有限公司)。夜香牛于 2006 年 5 月在
湛江自采，另由广东恒诚制药有限公司提供两批，均经广东省湛江市
药品检验所王其新主任中药师及笔者鉴定为菊科植物夜香牛 Ver-
nonia cinerea(L．)Less 的干燥全草; 木犀草苷对照品(批号为
111520 － 200201，含量测定用，中国药品生物制品检定所);乙腈为色
谱纯;甲醇(色谱纯，批号为 051029101，天津市四友生物医学技术有
限公司)，水为超纯水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2．1 生药学鉴定
来源:本品为菊科植物夜香牛Vernonia cinerea(L．)Less的干燥
全草。原植物为 1年生草本，高 20 ～ 80 cm。茎直立，上部有分枝，稍被
灰白色短茸毛，有纵向条纹，叶互生，具柄;叶片披针形至卵形或倒孵
形，长 3． 5 ～ 6． 5 cm，宽 1． 5 ～ 3． 5 cm，先端钝或尖，基部楔形，边缘有
浅齿或波状齿，背脉明显，侧脉 3 ～ 4对，两面均被疏毛。花全年开放，
头状花序长约 0． 7 cm，宽 0． 3 cm，具柄排成
疏散的伞房状圆锥花序，总苞较花短，总苞
片尖锐，小花约 20朵，两性，全为管状花，淡
紫红色。瘦果圆柱形，灰褐色，长约 0． 2 cm，
项端被白色冠毛 [3 ](见图 1)。
性状:本品茎呈圆柱形，上部有分枝，长
20 ～ 80 cm，直径 0． 2 ～ 0． 4 cm;表面绿褐色，
有纵皱纹，稍被白色短茸毛。叶互生，多皱缩
或脱落，展开后呈披针形、孵形或倒孵形，边
缘有浅齿或呈微波状。头状
花序顶生，总苞绿褐色或黄
棕色。瘦果圆柱形，灰褐色，
长约 0． 2 cm，顶端被白色冠
毛。根淡黄色，细小，多分支。
质脆，易折断，断面髓部白
色。气微，味淡(见图 2)。
显微特征: 本品茎横切
面观呈圆形，边缘有突出的棱角。表皮细胞 1 列，呈类方形，外被角
质层，并可见非腺毛，棱角处有厚角组织。皮层细胞类圆形，有的作
径向排列，内含黄绿色色素。中柱鞘纤维束呈帽状，约 16 ～ 25 束断
续排列成环。韧皮部窄。形成层成环，次生木质部导管呈圆形或椭
圆形，直径 8 ～ 56 μm，单个散在;射线细胞2 ～ 9 列;近髓部处有初
生木质部。髓部宽广，薄壁细胞较大，呈圆多角形(见图 3)。
2．2 薄层色谱鉴别
取本品粉末 2 g，加水 50 mL，加热回流 1 h，滤过，滤液加盐酸
至酸性，滤过，用乙酸乙酯振摇提取 3 次(每次 15 mL)，合并乙酸乙
酯溶液，蒸干，残渣加甲醇 1 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取夜
香牛对照药材 2 g，同法制成对照药材溶液。照 TLC 法 [ 2005 年版
《中国药典(一部)》附录Ⅵ B ]试验，吸取上述两种溶液各 5 μL，
分别点于同一以羧甲基纤维钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以甲
苯 －乙酸乙酯 －甲酸 －水(6 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 3)的上层溶液为展开剂，展开，
取出，晾干，喷以 1%三氯化铁试液与 1%铁氰化钾试液(1 ∶ 1)混合
溶液。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相
同颜色的斑点(见图 4)。
2．3 木犀草苷含量测定
2． 3． 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱: 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 流动相:甲醇－
0． 2%磷酸溶液(44 ∶ 56); 检测波长:350 nm; 柱温: 室温; 流速:
1． 0 mol / L; 进样量:20 μL。理论板数按木犀草苷峰计算应不低于
3 500。色谱图见图 5。
2． 3． 2 溶液制备
精密称取药材粉末 2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，
药物鉴定
中国药业 China Pharmaceuticals ·39·
2010年第 19卷第 18期
表 1 木犀草苷回收率测定结果 ( n = 6 )
图 3 夜香牛茎横切面
显微特征(× 400)
溶剂前沿
T:30 ℃
RH: 70%
表皮
厚角组织
中柱鞘纤维
韧皮部
木质部
髓部
1 － 3． 供试品溶液 4． 对照药材溶液
图 4 夜香牛薄层色谱图
10
5
0
0 20 40 0 20 40
10
5
0
A B
1． 木犀草苷
A． 对照品溶液 B． 供试品溶液
图 5 夜香牛高效液相色谱图
样品
060301
060302
060303
来源
药厂提供
药厂提供
自采
含量(mg / g)
0． 139
0． 142
0． 125
X(mg / g)
0． 135
RSD (% )
1． 05
表 2 样品含量测定结果
称定质量，超声处理(功率 120 W，频率 40 kHz)30 min，取出，放冷，
再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过;精密量取续滤液
30 mL，蒸干，残渣加甲醇约 5 mL 使溶解，加到预先处理好的 D101
大孔吸附树脂柱(内径 1． 5 cm，柱高 15 cm)上，用水 50 mL洗涤，再
用甲醇 100 mL洗脱，弃去前 15 mL，收集续洗液，蒸至近干，残渣加
甲醇 30 mL使溶解，转移至 150 mL圆底烧瓶中，加入盐酸 9 mL，置
水浴中加热回流 30 min，放冷，转移至 50 mL 量瓶中，加甲醇至刻
度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取木犀草苷对照品适
量，精密称定，加 2 mol / L 盐酸甲醇溶液制成每 1 mL 含 2． 5 μg 的
溶液，即得对照品溶液。
2． 3． 3 方法学考察
线性关系考察:精密量取对照品溶液(9． 27 μg /mL)1，2，4，8，
10 mL，置 10 mL量瓶中，加 2 mol / L盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，即
得每 1 mL含 0． 927，1． 854，3． 708，7． 416，9． 270 μg的系列溶液。分
别精密吸取 20 μL，注入液相色谱仪，依法测定，以对照品的质量浓
度(μg / mL)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程
Y = 76． 32 X + 0． 057 5，r = 0． 999 8(n = 5)。结果表明，木犀草苷质
量浓度在 0． 927 ～ 9． 270 μg /mL之间与峰面积线性关系良好。
重复性试验:取同一批供试品(批号为 060301)溶液 6 份，依法
测定。结果的 RSD为 1． 5%(n = 6)，表明方法重复性良好。
稳定性试验:取同一份供试品(批号为 060301)溶液，分别在制
备后 0，2，4，6，8，12 h时进样测定。结果的 RSD为 0． 83%(n = 6)，
表明供试品溶液在 12 h内基本稳定。
中间精密度试验: 取同一批样品(批号为 060301)6 份，由 A，
B，C 3 人分别在不同的时间用同一台设备，依法测定。结果的 RSD
为 0． 46%，表明中间精密度良好。
回收率试验: 取同一批(批号为 060301，含量 0． 139 mg / g)已知
含量的样品 1 g各 6 份，分别精密加入对照品溶液(154． 5 μg /mL)
0． 5，1． 0，1． 5 mL，平行操作 2份，依法测定，计算回收率。结果见表 1。
2． 3． 4 样品含量测定
取不同样品，依法测定其中木犀草苷的含量。结果见表 2。
3 讨论
TLC 定性鉴别中，关于供试品溶液的制备，曾采用回流法，比
较了水、70%乙醇、酸性乙醇 3 种溶剂，结果以水回流、加盐酸至酸
性、用乙酸乙酯提取的效果较好;还比较了乙酸乙酯－丁酮 －甲酸
(10 ∶ 7 ∶ 1)、甲苯(水饱和)－乙酸乙酯 －甲酸(5 ∶ 4． 5 ∶ 0． 5)、甲苯 －
乙酸乙酯 －甲酸 －水(6 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 3)的上层溶液等 3种展开剂，结果以
最后一种的上层溶液展开效果较好;也比较了紫外光灯(365 nm)下
观察，以 1%三氯化铁试液与 1%铁氰化钾试液(1 ∶ 1)混合溶液为
显色剂两种方法，结果后一种的显色效果较好。
据文献记载，夜香牛全草显黄酮、酚类、氨基酸等化学反应 [ 2 ]，
从全草中可分离得香叶木素、木犀草素、木犀草素 － 7 － O －葡萄糖苷
等有抑菌和促进消化系统蠕动作用的成分。故根据其所含成分并参
照 2005年版《中国药典(一部)》中独一味胶囊的测定方法 [4 ]，选择木
犀草苷作为含量测定指标。在木犀草苷含量测定时，取木犀草素对照
品的甲醇溶液(0． 1 mg /mL)，在紫外分光光度计 250 ～ 400 nm波长
间扫描，结果在 350． 2 nm波长处有最大吸收，与文献 [4 ]的测定波长
(350 nm)基本一致，故以 350 nm为测定波长。
关于含量测定时供试品溶液的制备条件选择，曾考察药材的
乙酸乙酯、乙醇提取液，液相色谱均末见游离木犀草苷峰，而经酸水
解后高效液相色谱可见游离木犀草苷峰，说明夜香牛的木犀草苷以
不同的苷类形式存在，故需水解才能测定;比较了超声法及回流法，
结果用超声法提取效果最佳;曾分别用不同量的水、甲醇、75%乙醇、
乙醇洗脱，结果用 100 mL以内的水洗涤，可除去大部分水溶性杂质
且对被测成分无影响，用甲醇、75%乙醇、乙醇洗脱结果无明显差异，
但以甲醇洗脱、弃去前 15 mL再收集续洗液的效果稍优;曾分别将样
品置水浴中回流 15，30，45 min，结果水解 30 min 的效果较好;曾分
别加入盐酸 4． 5，9． 0，11． 0 mL考察酸浓度，结果溶液中酸的浓度为
2． 5 mol /L时水解较适合。另外，曾对甲醇提取液不过柱直接水解，由
于部分糖对测定有影响，结果回收率较低，故不宜采用。
作者简介:陈黄保(1966 －)，男，本科，副主任中药师，主要从
事药物分析、质量标准研究，(电话 ) 0759 － 3263359(电子信箱)
chenhuangbao1@ yahoo． com． cn。
参考文献:
[ 1 ] 江苏新医学院 ． 中药大辞典(上册)[M]． 上海:上海人民出版社，1977:916．
[ 2 ]《全国中草药汇编》编写组 ． 全国中草药汇编(上册)[M ] ． 北京:人民卫
生出版社，1978:472．
[ 3 ] 中国科学院植物研究所 ． 中国高等植物图鉴(第四册)[M ] ． 北京:科学
出版社，1987:402．
[ 4 ] 国家药典委员会 ． 中华人民共和国药典(一部)[M ] ． 北京:化学工业出
版社，2005:541．
(收稿日期:2009 － 02 － 05;修回日期:2009 － 06 － 21 )
1
17． 048
17． 061
1
药物鉴定
取样量 ( g )
1． 002 1
1． 012 0
0． 995 3
0． 998 5
1． 005 0
0． 997 6
样品含量 (μg )
139． 3
140． 7
138． 3
138． 8
139． 7
138． 7
加入量 (μg )
77． 2
77． 2
154． 5
154． 5
231． 8
231． 8
测得量 (μg )
215． 8
216． 7
293． 6
292． 9
368． 4
368． 3
回收率 (% )
99． 09
98． 45
100． 52
99． 74
98． 66
99． 05
X(%)
99． 25
RSD(%)
0． 77
U / mV U / mV
t / min t / min