全 文 ：火绒草对大鼠系膜增生性肾小球肾炎的影响
徐 珊，赵明琦，李增强，左代英，吴英良*
(沈阳药科大学生命科学与生物制药学院，沈阳 110016)
摘 要 目的:探索火绒草乙醇提取物对实验性系膜增生性肾小球肾炎模型( MsPGN) 的治疗作用，并对其作用机制进行初
探。方法:采用慢性血清病肾炎法复制大鼠 MsPGN模型，随机分为正常组、模型组、火绒草 70%乙醇总提物高( 800 mg /kg) 、低( 400
mg /kg) 剂量组，雷公藤多苷片组( 15 mg /kg) 。电镜及光镜下观察肾脏病理变化，并测定肾重指数、24 h 尿蛋白、尿肌酐、血清肌酐、
肌酐清除率、血清尿素氮和血清总蛋白等指标。结果:火绒草高( 800 mg /kg) 、低( 400 mg /kg) 剂量组 MsPGN大鼠的 24 h 尿蛋白和
血清尿素氮水平显著降低，尿肌酐和血清总蛋白水平显著升高;火绒草高( 800 mg /kg) 剂量组肾重指数和血清肌酐水平显著降低，
肌酐清除率水平显著升高。电镜及光镜下病理形态学观察显示火绒草高( 800 mg /kg) 剂量组肾组织损伤明显改善。结论:火绒草
70%乙醇总提物对 MsPGN具有较好的治疗作用，其作用机制可能与抑制肾小球系膜细胞的增殖、改善肾小球滤过功能及减轻炎性
细胞浸润等作用相关。
关键词 火绒草;系膜增生性肾小球肾炎
系膜增生性肾小球肾炎(mesangial proliferative glomerulone-
phritis，MsPGN)是一个病理形态学术语，它是一组以光镜下肾
小球呈弥漫性系膜细胞增生和 /或系膜基质增多为特征的肾小
球性肾炎，是我国原发性肾病综合征中最常见的病理类型。对
于该病现代医学尚无特效治疗方法，临床仍以糖皮质激素、免
疫抑制剂及对症治疗为主，存在一定的不确定性及毒性和不良
反应。而中药对于 MsPGN 的治疗则具有一定的疗效且毒性和
不良反应小［1］。火绒草是菊科火绒草属植物的一种，火绒草具
有利尿［2］、降血糖［3］、抗菌［4］、抗炎及镇痛［5，6］等功效，其主要有
效成分包括咖啡酸、香草酸、原儿茶醛、反式桂皮酸和阿魏酸等
化合物［7］，火绒草在治疗急、慢性肾炎方面取得了较满意的疗
效［8］，但对火绒草治疗 MsPGN 疗效及作用机制尚不清楚。本
研究采用改良的慢性血清病性 MsPGN 大鼠模型，探索火绒草
70%乙醇提取物对 MsPGN大鼠的治疗作用，为临床进一步应用
提供实验依据。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 实验用火绒草采集于辽宁营口，经沈阳药
科大学中药学院生药学教研室教授李玉山教授鉴定为菊科火
绒草属植物火绒草 (Leontopodium leontopodioides (Willd．)
Beauv．)。取火绒草干燥全草 3． 0 kg，剪碎，用 9 倍量体积分数
为 70%的乙醇溶液加热回流提取 3 次，每次 2 h，减压回收溶
剂，得浸膏 456 g，收率为 15． 2%。雷公藤多苷片(Tripterygium
glycosides)，上 海 复 旦 复 华 药 业 有 限 公 司 生 产 (批 号
Z31020415)。
1． 2 动物 SD大鼠(SPF 级)50 只，雌雄各半，体重 150 ～ 200
g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，动物合格证号:
SCXK(京)2009-0004。
1． 3 试剂 完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂，Sigma 公司生产
(批号 F5881、F5506);牛血清白蛋白(BSA)，Amresco 公司生产
(批号 0332);尿蛋白定量试剂盒，南京建成生物工程研究所生
产(批号 20111028);血清总蛋白定量试剂盒，南京建成生物工
程研究所生产(批号 20111022);血、尿肌酐试剂盒，南京建成生
物工程研究所生产(批号 20111016);尿素氮试剂盒，南京建成
生物工程研究所生产(批号 20111008)。
1． 4 仪器 IX71 型倒置荧光显微镜(OLYMPUS);JEM-
1200EX型透射电镜(JEOL)。
1． 5 方法 大鼠适应性饲养 1 周后，经检测尿蛋白均为阴
性。按体重随机留取 10 只为正常对照组，其余大鼠均采用改良
慢性血清病法复制 MsPGN 模型［9 ～ 11］:10%水合氯醛(300 mg /
kg)腹腔注射麻醉，常规消毒后，通过背部切除左侧肾脏。而正
常对照组大鼠则进行至切开肌肉层后缝合。术后大鼠休养 1
周，然后开始进行药物造模。除正常对照组，其余造模大鼠双侧
足垫皮下注射完全弗氏佐剂 0． 1 ml加 3 mg BSA，并于第 1、2 周
末各加强 1 次。第 3 周末，腹腔连续注射 4 次 BSA，间隔时间 1
h，注射剂量分别为每只 0． 5、1． 0、1． 5、3． 0 mg，次日晨加强 1 次
(2 mg /只)。之后每日腹腔注射 BSA，剂量从每只 0． 5 mg开始，
每日增加 0． 5 mg至 5． 0 mg，然后继续每周加量 1 mg 至 10 mg
为止。除麻醉意外和超敏反应死亡 3 只，将剩余大鼠于造模第
5 周末应用考马斯亮蓝法测定所有大鼠 24 h尿蛋白含量。剔除
造模后尿蛋白反应呈弱阳性的 3 只，其余大鼠按 24 h尿蛋白水
平随机均衡分为模型对照组、雷公藤多苷片组、火绒草高剂量和
火绒草低剂量组。于造模第 6 周开始灌胃给药(10 ml /kg)，每
日 1 次，连续 6 周:①正常组和模型组:按体重给予相应容量的
0． 5% CMC-Na溶剂;②雷公藤多苷片组:15 mg /kg剂量灌胃;③
火绒草低剂量组:以 400 mg /kg 剂量灌胃;④火绒草高剂量组:
以 800 mg /kg /d剂量灌胃。
1． 5． 1 尿液指标测定 分别于造模第 5 周末、给药第 3 周
末、第 6 周末(即实验结束前一天)，收集大鼠 24 小时尿液，测
量 24 h尿蛋白、尿量及尿肌酐水平。
1． 5． 2 血液指标测定 实验结束时，所有大鼠以 10%水合氯
醛(300 mg /kg)腹腔注射麻醉后，腹主动脉采血，3000 rpm 离心
10 min后，取上清，然后立刻进行血清肌酐，血清尿素氮和血清
总蛋白等血液生化指标的测定。
1． 5． 3 肾脏组织病理学形态观察 大鼠腹主动脉取血后立刻
801 中药药理与临床 2013;29(4)
* 通讯作者
剖取右侧肾组织，迅速切取少量皮质(约 1 mm3)放入 2． 5%戊二
醛中固定，以备透射电镜观察，并将剩余肾脏称重，计算肾重指数
(kidney index，KI)，然后将其投入 10%中性福尔马林溶液中固
定，以备 HE染色观察。KI =右侧肾重(g)×100 /体重(g)
2 结果
2． 1 24 h尿蛋白的变化 给药 3 周和 6 周后，模型组大鼠 24
h尿蛋白水平升高，与正常组相比具有极显著性的差异。给药 3
周后，与模型组相比，雷公藤多苷片组及火绒草提取物高(800
mg /kg)剂量组 24 h 尿蛋白水平显著降低，而给药 6 周后，各给
药组 24 h尿蛋白水平均下降，与模型组相比具有极显著性的差
异，见表 1。
表 1 火绒草 70%乙醇总提物对 MsPGN 大鼠 24 h 尿蛋白定量的
影响(珋x ± s)
组别
剂量
(mg /kg)
鼠数
(只)
治疗前
(mg /24h)
治疗后 (mg /24h)
3 周末 6 周末
正常对照 9 5． 34 ± 1． 34＊＊ 5． 58 ± 2． 33＊＊ 5． 11 ± 2． 83＊＊
模型对照 8 15． 93 ± 4． 11 25． 13 ± 9． 58 39． 97 ± 14． 14
雷公藤多苷片 15 9 16． 05 ± 5． 56 13． 19 ± 5． 69＊＊12． 09 ± 4． 68＊＊
火绒草 400 8 15． 63 ± 4． 50 16． 98 ± 6． 74 17． 15 ± 6． 18＊＊
火绒草 800 8 15． 11 ± 2． 07 13． 82 ± 5． 74* 13． 55 ± 5． 76＊＊
与模型组相比 * P ＜0． 05，＊＊ P ＜0． 01(下同)
2． 2 体重、右侧肾重及肾重指数的变化 如表 2 所示，模型组
大鼠右侧肾重及肾重指数均有所增加，与正常组相比具有极显
著性的差异。雷公藤多苷片组及火绒草高(800 mg /kg)剂量组
大鼠的肾重指数有所下降，与模型组相比具有显著性差异。
表 2 火绒草 70%乙醇总提物对 MsPGN 大鼠体重、右侧肾重及肾
重指数的影响(珋x ± s)
组别
剂量
(mg /kg)
鼠数
(只)
体重
(g)
右侧肾重
(g)
肾重指数
(g /100g)
正常对照 9 342． 3 ± 98． 6 1． 18 ± 0． 26＊＊ 0． 353 ± 0． 043＊＊
模型对照 8 317． 3 ± 71． 7 1． 82 ± 0． 44 0． 576 ± 0． 075
雷公藤多苷片 15 9 327． 1 ± 46． 5 1． 52 ± 0． 26 0． 500 ± 0． 059*
火绒草 400 8 339． 6 ± 61． 0 1． 70 ± 0． 23 0． 509 ± 0． 089
火绒草 800 8 337． 1 ± 57． 0 1． 62 ± 0． 26 0． 487 ± 0． 071*
2． 3 尿肌酐、血清肌酐及肌酐清除率的变化 如表 3 所示，模
型组大鼠尿肌酐和肌酐清除率水平降低，与正常组相比具有显著
性的差异，血清肌酐水平升高，与正常组相比具有极显著性的差
异。各给药组尿肌酐水平均升高，与模型组相比具有极显著性的
差异，雷公藤多苷片组及火绒草提取物高(800 mg /kg)剂量组血
清肌酐和肌酐清除率水平与模型组相比有显著性差异。
表 3 火绒草 70%乙醇总提物对 MsPGN大鼠尿肌酐、血清肌酐及
肌酐清除率的影响(珋x ± s)
组别
剂量
(mg /kg)
鼠数
(只)
尿肌酐
(μmol /L)
血清肌酐
(μmol /L)
肌酐清除率
(ml /min)
正常对照 9 9． 73 ± 2． 12＊＊63． 65 ± 12． 61＊＊0． 900 ± 0． 444*
模型对照 8 3． 93 ± 1． 61 99． 57 ± 20． 90 0． 452 ± 0． 152
雷公藤多苷片 15 9 7． 05 ± 1． 97＊＊74． 71 ± 16． 44* 0． 746 ± 0． 340*
火绒草 400 8 7． 05 ± 1． 74＊＊80． 47 ± 25． 81 0． 702 ± 0． 352
火绒草 800 8 8． 85 ± 2． 36＊＊71． 42 ± 17． 86* 0． 732 ± 0． 271*
2． 4 血清总蛋白、血清尿素氮的变化 如表 4 所示，模型组
大鼠血清总蛋白和血清尿素氮水平与正常组相比具有极显著
性的差异。各给药组与模型组相比，血清总蛋白水平均明显升
高，血清尿素氮水平均明显降低。
表 4 火绒草 70%乙醇总提物对 MsPGN 大鼠血清总蛋白、血清尿
素氮的影响(珋x ± s)
组别
剂量
(mg /kg)
鼠数
(只)
血清总蛋白
(mg /ml)
血清尿素氮
(mmol /L)
正常对照 9 60． 00 ± 10． 40＊＊ 8． 80 ± 4． 56＊＊
模型对照 8 43． 43 ± 4． 54 23． 75 ± 7． 85
雷公藤多苷片 15 9 52． 11 ± 10． 65* 14． 67 ± 2． 34＊＊
火绒草 400 8 51． 70 ± 8． 59* 17． 18 ± 6． 74*
火绒草 800 8 58． 48 ± 10． 6＊＊ 13． 14 ± 4． 72＊＊
2． 5 肾脏组织 HE染色光镜观察结果 正常组肾小球及肾小
管结构正常，系膜细胞和基质无增生，肾小球毛细血管管腔通
畅，无炎性细胞浸润及纤维化。模型组肾小球明显增大，部分肾
小管上皮细胞呈空泡状或颗粒状变性或水肿，毛细血管内皮细
胞和系膜细胞弥漫性增生，系膜基质增多，部分肾小球毛细血管
管腔受压变窄甚或闭塞，肾小球囊腔出现灶状粘连，组织伴有多
形核炎性细胞浸润。雷公藤多苷片组肾小球肿胀较轻，肾小球
大小变化较模型组减轻，肾小管结构基本正常，系膜细胞和基质
增生程度亦有所减轻;肾小球囊腔基本无粘连，组织伴有少量炎
性细胞浸润。火绒草提取物高(800 mg /kg)剂量组肾小球增大
不明显，肾小管结构基本正常，系膜细胞和基质增生程度较模型
组均有所减轻，毛细血管管腔受压程度亦明显减轻，肾小球囊腔
粘连减少，基本无炎性细胞浸润，见图 1。
图 1 肾脏组织 HE染色观察结果( × 400)
2． 6 肾脏组织电镜观察结果 正常组肾小球系膜细胞和系
膜基质无增生，内皮细胞结构正常，足细胞足突结构清晰完整，
呈杵样并列排列于基底膜外侧，基底膜结构完整，厚度均匀。模
型组肾小球系膜细胞明显增生，系膜基质增多，系膜区增宽，内
皮细胞结构不规则，基底膜呈节段性不规则增厚，足突肿胀，排
列紊乱，出现节段性轻、中度融合，系膜区可见云雾状电子致密
物质沉积。雷公藤多苷片组肾小球系膜细胞和系膜基质增生不
明显，或仅呈轻度增生，足突形态结构基本正常。火绒草高
(800 mg /kg)剂量组肾小球系膜细胞和系膜基质增生不明显，
系膜区宽度与模型组相比，明显变窄，足突结构有部分损伤，基
901中药药理与临床 2013;29(4)
底膜结构和厚度基本正常，云雾状电子致密物沉积不明显，见 图 2。
图 2 肾脏组织透射电镜观察结果( × 5000)
3 讨论
本研究采用了改良的慢性血清病肾炎法复制大鼠 MsPGN
模型。从我们对实验动物的连续观察发现，自注射 BSA 后第 2
周，造模组大鼠开始出现蛋白尿，至最终实验结束，其尿蛋白水
平进一步升高;血清肌酐、血清尿素氮水平亦较正常组升高;同
时病理检查可见模型组大鼠系膜细胞增生，系膜区增宽及系膜
基质增多，符合 MsPGN病理改变，与文献报道的一致［10，11］。这
表明本实验成功复制了 MPsGN动物模型。
24 h尿蛋白定量是反映肾小球功能正常与否的重要指标，
一般说来，持续性的蛋白尿往往代表肾脏有病变，尿蛋白的多
少反映了病变程度，临床可据此作疗效观察。本实验研究表明，
火绒草治疗组的 24 h尿蛋白水平明显低于模型组，且火绒草高
(800 mg /kg)剂量组的降低程度与阳性对照雷公藤多苷片组相
似，提示火绒草提取物能有效减轻模型大鼠肾脏病变程度。
当肾小球滤过功能受损时，血中肌酐浓度将随之升高。因
此临床常把测定血清肌酐浓度作为判断肾功能的一项重要指
标。尿素氮是人体蛋白质代谢的主要终末产物，在肾功能正常
的情况下，尿素氮从肾小球滤出，故其用作肾小球滤过功能的
诊断指标。本实验研究表明，火绒草治疗组血清尿素氮、血清肌
酐明显低于模型组，提示火绒草提取物具有较好的改善肾功能
和肾小球滤过率，促进损伤组织修复的作用。
残余肾的代偿性肥大和高代谢状态是肾小球肾炎进行性
恶化的重要机制［12］，本实验研究表明，与模型组相比，火绒草治
疗组大鼠右肾重量、肾重指数均有所降低，提示火绒草提取物
能抑制肾脏代偿性肥大，有助于减少肾小球硬化的发生，延缓
肾小球肾炎的进一步发展。
此外，肾组织病理学结果表明火绒草能有效地抑制大鼠系
膜细胞增殖，减少基质积聚，与阳性对照药雷公藤多苷片相比
无明显差异，进一步证实火绒草提取物具有减轻 MsPGN模型大
鼠肾脏病理损害、促进肾小球病理改变恢复的作用，为火绒草
提取物治疗 MsPGN提供了一定的实验依据。
参考文献
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医学，2002;17(3)∶ 430 ～ 431
Effect of Leontopodium leontopodioides (Willd．)Beauv． on
mesangial proliferative glomerulonephritis (MsPGN)of rats
Xu Shan，Zhao Mingqi，Li Zengqiang，Zuo Daiying，Wu Yingliang
(School of Life Science and Biopharmaceuticals，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016)
Objective:To explore the therapeutic effect and mechanism of 70% ethanol extract from Leontopodium leontopodioides (Willd．)
011 中药药理与临床 2013;29(4)
Beauv． on mesangial proliferative glomerulonephritis (MsPGN)． Methods:The model of MsPGN in rats was made through the means of
chronic serum sickness glomerulonephritis model，the mice were randomly divided into control group，model group，70% ethanol ethact from
Leontopodium leontopodioides (Willd．)Beauv． high(800 mg /kg)，low(400 mg /kg)dose group，and tripterygium glycosides group(15 mg /
kg)． We observed the change of kidney pathology by light and electron microscope，and measured the kindey index，urinary protein within 24
hours，urine creatinine，serum creatinine，creatinine clearance rate，serum urea nitrogen and total serum protein． Ｒesults:Leontopodium le-
ontopodioides (Willd．)Beauv． high(800 mg /kg) ，low(400 mg /kg)dose group could significantly decrease the level of urinary protein with-
in 24 hours and serum urea nitrogen ，increase the lever of urine creatinine and serum total protein;Leontopodium leontopodioides (Willd．)
Beauv． high(800 mg /kg)dose group could significantly decrease the kindey index and the lever of serum creatinine，and increase the lever
of creatinine clearance rate． The pathological observation of light and electron microscope also showed that Leontopodium leontopodioides
(Willd．)Beauv． group were less damaged than model group． Conclusions:70% ethanol extract from Leontopodium leontopodioides
(Willd．)Beauv． had a very promising therapeutic effect on MsPGN，the mechanism may relate to its inhibitive effect on proliferation of me-
sangial cells，improvement of the renal function and attenuation of the inflammatory infiltration of kidney．
Key words Leontopodium leontopodioides (Willd．)Beauv．(火绒草);mesangial proliferative glomerulonephritis
覆盆子对肾阳虚型 AD大鼠学习记忆的影响*
黄丽萍，熊玉洁，赵梦岚，龚嘉华，谢一辉＊＊
(江西中医学院，南昌 330004)
摘 要 目的:考察覆盆子不同萃取部位对 D-半乳糖联合氢化可的松造成肾阳虚型 AD大鼠学习记忆的和血清睾酮的影响，
筛选覆盆子抗肾阳虚型痴呆的活性部位。方法:大鼠每天腹腔注射 D-半乳糖 12． 5mg /100g，连续 6 周，后 2 周每天肌肉注射氢化可
的松混悬液 2． 5mg /100g，造成肾阳虚痴呆模型，然后空白组和模型组灌胃生理盐水外，其余各组均预防性灌胃覆盆子氯仿部位、正
丁醇部位、乙酸乙酯部位、水部位 12g /kg每天，连续 4 周。进行历时 1 周的 Morris水迷宫实验，检测大鼠在 Morris 水迷宫中的逃避
潜伏期、空间探索能力，并检测各组大鼠血清睾酮含量。结果:与模型组比较，覆盆子氯仿部位、乙酸乙酯部位 12g /kg每天均可缩短
大鼠逃避潜伏期，增强大鼠空间探索能力，同时明显升高血清睾酮水平。结论:覆盆子改善肾阳虚型老年性痴呆大鼠学习记忆的有
效部位为氯仿部位和乙酸乙酯部位。
关键词 覆盆子;AD;学习记忆;肾阳虚
国内外文献报道的覆盆子［1，2］主要在抗衰老药效实验及其
他相关实验，对于肾阳虚型 AD动物的药效研究甚少，故难以阐
明覆盆子抗肾阳虚型老年性痴呆真实物质基础。本实验拟用
D-半乳糖联合氢化可的松造成肾阳虚型痴呆模型，检测大鼠在
morris水迷宫的学习记忆表现及血清睾酮水平，旨在筛选出覆
盆子抗肾阳虚型痴呆的活性部位，为进一步发现与找到覆盆子
抗肾阳虚型痴呆的活性成分奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 覆盆子购于江西省樟树药材市场，由江西中
医学院中药资源学科组刘庆华老师鉴定为蔷薇科悬钩子属植
物掌叶覆盆子 Ｒubus chingii Hu 的未成熟果。经鉴定该药材质
量符合 2005 版中国药典要求。取覆盆子药材粉末 80%乙醇渗
漉，回收乙醇得浸膏。浸膏用水混悬，依次用氯仿、乙酸乙酯、正
丁醇萃取，得到覆盆子全药、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水部分共
五个部位，由江西中医学院药物分析室谢一辉教授制备，-20 ℃
保存，临用前稀释至覆盆子全药 1． 2g生药 /ml、正丁醇部位 1． 2g
生药 /ml、水部位 1． 2g生药 /ml、乙酸乙酯部位 1． 2g 生药 /ml、氯
仿部位 1． 2g生药 /ml生药。
1． 2 动物 SD大鼠，SPF级，雄性，90 只，体重 220 ± 20g，均由
湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号 SCXK(湘)
2009-0004。
1． 3 试剂 D-半乳糖(solarbio);氢化可的松(solarbio);脑复
康(湖北华中药业有限公司提供，批号:20090945 );大鼠睾酮、
雌二醇酶联免疫检测试剂盒(西唐生物，进口分装)。
1． 4 仪器 Morris水迷宫实验系统(中国医学科学院北京药
物研究所)。
1． 5 方法 实验动物适应 1 周后，Morris 水迷宫实验筛选动
物，剔除 10 只后，将动物随机分成 8 组，每组 10 只:空白组、模
型组、全药组、脑复康组、氯仿部位组、正丁醇部位组、乙酸乙酯
部位组、水部位组。空白组腹腔注射生理盐水 0． 5ml /100g，其
余各组均腹腔注射 D-半乳糖 12． 5mg /100g 每天 1 次，连续 6
周，造成亚急性衰老模型。然后空白组和模型组灌胃生理盐水
1ml /100g，脑复康组 0． 4g /100g每天预防性灌胃给药，其余各组
均预防性灌胃 1． 2g /100g 每天相应药物，连续 4 周。预防性灌
胃最后 2 周，采用氢化可的松混悬液给大鼠肌肉注射 2． 5mg /
100g 每天造成肾阳虚模型，造模完成后进行历时 1 周的 Morris
水迷宫实验。实验过程中每 5 天称重一次，以便及时调整给药
剂量。
111中药药理与临床 2013;29(4)
* 基金项目:国家自然基金课题( 30960496) ＊＊通讯作者