全 文 ：表 4　洗脱剂乙醇浓度的考察结果表 ( n= 3)
乙醇浓度 (% ) 总酚酸 ( mg ) 干膏量 ( g )
30 32. 13 0. 0685
50 53. 78 0. 1005
70 53. 56 0. 1457
90 53. 67 0. 1487
　　实验结果表明 ,乙醇浓度为 30%时 ,固形物以及固
形物中总酚酸的量较少 ,而当乙醇浓度为 70%、 90%
时 ,洗脱的杂质较多 ,所得提取物中总酚酸纯度不高 ,
50%乙醇的洗脱物种总酚酸含量比较高 ,而且干膏量
小 ,因此本实验选择 50%乙醇作为洗脱溶剂。
2. 2. 8　洗脱剂用量的考察:称取 AB-8型大孔树脂
约 5g ,按上述确定的上样方法分别上样 15mL,水洗除
杂 ,然后用 50%乙醇洗脱 ,以 10mL为一份收集洗脱
液 ,测定每份洗脱液中总酚酸的含量。根据试验结果绘
制洗脱曲线。
图 2　蒲公英总酚酸洗脱曲线图
　　由图 2可知 ,当洗脱剂的用量为每 5g树脂需要
50%乙醇 40mL( 1BV约为 8mL)洗脱时能将总酸酸类
成分基本洗脱完全 ,故洗脱剂的用量定为 5BV。
2. 2. 9　验证试验:根据上述确定的树脂类型和最
佳工艺 ,扩大 10倍进行试验 ,结果树脂纯化后蒲公英
干膏量为 1. 0164g ,总酚酸的平均含量为 52. 26%。
3　讨　论　 大孔吸附树脂是一类不含交换基团
且具有大孔结构的高分子吸附剂。它具有良好的大孔
网状结构和较大的比表面积 ,可以通过物理吸附从水
溶液中有选择地吸附有机物 ,目前 ,大孔吸附树脂靠着
它的吸附量大、解吸和再生容易等优点广泛应用于中
药行业中。对于蒲公英有效成分总酚酸类 (包括有机酸
类和黄酮类 )的纯化尚无报道 ,因此 ,我们选择不同的
大孔吸附树脂进行了纯化工艺研究 ,其结果表明 , AB-
8型大孔树脂能很好的富集、纯化蒲公英总酚酸 ,纯化
后的含量在 50%以上。
在本试验中我们还对树脂的径高比进行了比较研
究 ,结果树脂的径高比在 1∶ 2以上便对吸附无大的影
响。再者 ,大孔吸附树脂可以再生是其优势所在 ,因此
为了适应其大生产的要求 ,在本试验的研究中 ,应该对
树脂的重复使用次数和再生条件进行进一步研究。
参考文献
[ 1]　 吴晓春 ,杜胜利 ,陈海生 . 蒲公英的研究与应用 [ J].
药物实践杂志 , 2002, 20( 4): 246-248.
[ 2]　 沈　琦 ,顾龚平 ,吴国荣 ,等 . 蒲公英研究进展 [ J].
中国医学生物技术应用 , 2004, 6( 2): 6-11.
[ 3]　 陈贤春 ,吴　清 ,李冀湘 . 大孔吸附树脂富集丹参总
酚酸的工艺研究 [ J].中国中药杂志 , 2007, 32( 12): 1158-1160.
(收稿 2009-04-17;修回 2009-06-16)　　
正交试验法优选雪莲花等六味藏药总生物碱的提取工艺*
贺拥军　曾南阳　张　敏　刘晓丽　孙芳云△　西藏民族学院医学系 (咸阳 712082)
　摘　要　目的:探讨雪莲花、雪上一枝蒿、川乌、大黄、栀子、 虫六味藏药总生物碱的提取工艺。方
法:用正交试验法对雪莲花、雪上一枝蒿、川乌、大黄、栀子、 虫总生物碱的提取工艺进行
优选 ,以渗漉膏的收率及总生物碱含量为考察指标 ,以药材粉碎度 ( A)、乙醇浓度 ( B)、乙
醇用量 ( C)浸渍时间 ( D)为因素进行三水平四因素的正交试验。 结果:因素相关性浸膏收
率上为 RA> RD> RC> RB。药材粉碎度 A为主要因素 ,乙醇浓度 B为次要因素 ;生物碱收
率上 RB> RD> RA> RC,乙醇浓度 B为主要因素 ,乙醇用量降为极次要因素。结论:综合
两个指标 ,证明最优渗漉工艺为 A2 B3 C3D1 ,即药材粉碎过 10目筛、加 80%乙醇浸渍 12h,收
集渗漉液为药材总重量的 12倍 ,回收乙醇 ,浓缩至比重为 1. 16mg /L( 50℃ )。
　主题词　　@渗漉膏　生物碱　正交试验 　@工艺
* 国家民委科研项目 ( 08年 NO: 08XZ03)
△课题负责人
　　雪莲花为菊科植物水母雪莲花 S. laniceps Hand. -
Mazz.的干燥全草。 其总生物碱和雪莲总黄酮对大鼠
关节急性炎症均有显著的对抗作用 [1 ];雪上一枝蒿为
1658 陕西中医 2009年第 30卷第 12期
毛茛科植物雪上一枝蒿 Aconi tum brachypodum Diels
干燥块根。其生物碱中主要含有乌头碱、次乌头碱 ,有
镇 痛 作用 ; 川乌 为毛茛 科植 物乌头 Aconi tum
Carmichaeli Debx的干燥母根。 其生物碱主要有川乌
碱甲、川乌碱乙、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱 ,有温通
经脉、活络止痛、消肿散结的功效 ;大黄为蓼科植物掌
叶大黄 Rheum Palmatum L. 唐古 特大黄 Rheum
Tanguticum Maxim. ex Balf 或药 用大黄 Rheum
o fficinale Bai llde的干燥根及根茎 [2 ]。其生物碱有几种
葡萄糖甙和甙元 ,有止血、收敛作用 ;栀子为茜草科植
物栀子 Gardenia ja sminoides Ellis的干燥成熟果实。有
清热利湿 ,有凉血止血作用 [3 ] ; 虫有破血逐瘀作用。
笔者在研究香莲祛痛霜时 ,进行了上述六药收膏
率及总生物碱提取工艺的正交试验 ,考察了上述六种
藏药的最佳提取方法 ,现报道如下。
1　仪器与试药　 1. 1　仪器　层析柱 (φ=
50mm , L= 500 mm);碱式滴定管 ; D-101型分析天平 ,
上海天平厂 ; 101-D恒温干燥箱 ,上海实验仪器厂。
1. 2　试药　雪莲花、雪上一枝蒿、川乌、大黄、栀
子、 虫均购自西藏拉萨市药材公司 ,经本室鉴定为药
典收品种。
表 1　 　　　 试验因素水平表
水平　
因　　　　素
A
粉碎度
B
乙醇浓度
C
乙醇用量
D
浸渍时间 /h
1 　 破碎 40% 8倍量 12 /h
2 　 10目 60% 10倍量 24 /h
3 20目 80% 12倍量 36 /h
表 2　　　　　正交设计表
因子 A B C D
列号 1 2 3 4
表 3　　　　正交实验设计
试验号　 因素
A1 B2 C3 D4
1 　 1 1 1 1
2 　 1 2 2 2
3 　 1 3 3 3
4 　 2 1 2 3
5 　 2 2 3 1
6 　 2 3 1 2
7 　 3 1 3 2
8 　 3 2 1 3
9 　 3 3 2 1
　　 2　 方法与结果　 根据有关资料和预试验 ,以乙
醇渗漉法提取渗漉液 ,蒸去乙醇 ,收膏、称重 ,分别测定
浸膏含水量 ,计算收膏率 ,测定总生物碱。 采用正交设
计法 ,选取药材粉碎度 ( A)、乙醇浓度 ( B)、乙醇用量
( C)、浸渍时间 ( D) 4个因素 ,每个因素 3个水平的试验
方案 [4 ] ,因素水平安排见表 1,正交试验设计见表 2,表
3。取样量为 100g ,以浸膏收率及总生物碱的收率为指
标 ,选用 LS9( 34)正交试验表安排实验 ,结果见表 4、表
5、表 6 ,计算 K值及 R值。
表 4　　　正交法优选工艺实验结果
试验号 渗漉膏总量
( G)
含水量
(% )
收膏率
(% )
总生物碱
( mg )
1 13. 6 24. 28 10. 3 40. 5
2 32. 5 57. 6 13. 78 41. 9
3 14. 1 26. 11 10. 42 54. 6
4 17. 2 28. 8 12. 25 33. 3
5 22. 5 12. 78 19. 62 72
6 18. 3 19. 95 14. 65 70. 8
7 22. 5 26. 42 16. 6 29
8 14. 7 17. 93 11. 65 37. 92
9 16. 5 22. 4 12. 8 85. 47
表 5　　　以浸膏收率为指标计算结果
　 　 浸膏收率
A B C D
KI 　 34. 50 39. 15 36. 60 42. 72
K2 　 46. 52 45. 05 38. 83 45. 03
K3 　 41. 05 37. 87 46. 64 34. 32
R 　 4. 00 2. 60 3. 30 3. 60
表 6　　以总生物碱收率为指标计算结果
　 　 总生物碱收率
A B C D
K1 　 137. 00 102. 8 149. 22 197. 97
K2 　 176. 10 151. 82 160. 67 141. 70
K3 　 152. 39 210. 87 155. 60 125. 82
R 　 13. 00 36. 00 3. 80 24. 00
　　 3　小　结　 从表 5实验结果可见 ,收膏率上 RA
> RD> RC> RB,药材的破碎度 A为主要因素 ,乙醇
浓度 B为次要因素。生物碱收率上 RB> RD> RA> RC
乙醇浓度 B为主要因素 ,乙醇用量降为极次要因素综
合两个指标 ,对渗漉工艺进行研究 ,结果证明最优渗漉
工艺为 A2 B3 C3D1 ,即药材粉碎过 10目筛 ,加 80%乙醇
浸渍 12h ,收集渗漉液为药材总重量的 12倍 ,回收乙
醇 ,浓缩止比重为 1. 16g /cm3 ( 50. C)。按上述最优工艺
A2B3 C3D1 ,称取 100g药材按处方比例混合物 ,粉碎过
10目筛 ,加 80%乙醇浸渍 12h,收集渗漉液为药
(下转第 1666页 )
1659陕西中医 2009年第 30卷第 12期
致 [3, 4] ,王新德 [6]用脑微循环动力学测定仪对脑出血患者进行研
究 ,发现患者的脑部血供明显降低 ,且起病 1周内脑血流量有良
好恢复的患者预后较好 ,为了探讨葛根素对脑血肿周围水肿和
缺血病变的影响 ,本实验建立大鼠脑出血模型后 ,采用葛根素
腹腔注射治疗 ,通过病理及免疫组化对照研究取得了较好的效
果 ,结果表明: ①葛根素能促进血肿周围组织毛细血管增生 ,改
善缺血区血流。 ②葛根素能减轻血肿周围神经细胞的坏死 ,有
脑保护作用。③两组之间血肿周围胶质细胞的变化有一定的差
异 ,葛根素可能对胶质细胞的功能有一定的调节作用。
3. 2　葛根素对脑出血治疗的可能机制
3. 2. 1　葛根素对血肿周围神经细胞影响: 大量的基础研
究表明 ,葛根素可以抑制红细胞和血小板聚集 ,使红细胞变形
能力提高 ,增加血流速度 ,增加红细胞携氧能力 ,对正常和缺血
脑组织有保护功能 [7 ] ,减轻 PHT炎症反应及脑水肿 ,加快脑血
肿吸收 ,不同程度增加了胶质细胞、小胶质细胞增生 ,加速了巨
噬细胞对坏死组织的清除、使神经元缺血、肿胀得以改善。
3. 2. 2　葛根素改善血肿周围组织的血液循环: 脑血肿形
成可直接压迫周围脑组织和小血管 ,导致局部缺血和毛细血管
功能异常 ,葛根素可透过血脑屏障及具有的 β受体阻滞作用 ,促
进局部血液循环改善 ,改善局部组织缺氧的同时改善了毛细血
管的功能 ,与血肿的吸收可能有一定的关系 ,这方面值得进一
步研究。
3. 2. 3　葛根素对血肿周围神经胶质细胞的影响: 胶质细
胞目前是神经系统研究的热点 ,目前认为星形胶质细胞除了对
神经元提供营养支持保护、物质代谢、参与血脑屏障形成和免
疫功能外 ,还具有神经干细胞的特性、参与神经信号传递处理、
对脑的高级功能活动有特别的意义。本实验发现葛根素治疗组
星形胶质细胞有一定的改变 ,提示葛根素对胶质细胞的影响值
得进一步研究。
脑出血的内科治疗目前还没有特异性方法 ,葛根素注射液
在脑出血治疗中对周围各组织成分的作用值得进一步深入研
究。
3. 3　关于本实验的说明及启示　 脑出血后水肿形成和周
围组织损害与血肿产生占位效应有关。有人采用微气囊充胀模
型实验 ,结果显示周围脑组织内存在血流量下降 [8] ,也有学者用
50ul微气囊充胀模型研究了单独占位效应引起的缺血性改变 ,
发现远隔区缺血性损伤明显轻于注入同等血量的脑出血模型 ,
说明血中释放的活性物质对脑组织有损害作用。 [9]本实验模型
制作过程中虽然加入了抗凝剂 ,但对照的建立消除了抗凝剂的
影响。
脑出血后血肿对周围组织的影响会持续相当长的时间 ,葛
根素治疗应该维持两周 ,可能实验结果更理想。
脑出血血肿周围的病理变化多以动物实验为依据 ,与临床
有相当的差异。在头颅 CT应用前和没有 C T检查的环境下 ,相
当的小量脑出血患者给了相反的治疗后也获得了好的临床效
果 ,建议要充分利用现代临床检查技术积极探索活血化瘀中药
对脑出血的治疗作用和机理。
参考文献
[1 ]　 DelBig io M R, Yan HJ, Buise R, et al . Experinental
intracer ebral hemo r rhage in ra tsmagnetic r esonance inaging and
histopatho log ical cor relates [ J]. str oke, 1996, 27: 2312.
[ 2 ]　 Wagner KR, Xi GH, Hua Y et al. Loba r
intracer ebral hemo rrhage model in pig s rapid edem a developm
ent in perihem atomal white ma tter [ J]. st roke , 1996, 27: 490-
497.
[ 3]　 贺　丹 ,赵静霞 ,刘青蕊 .治疗血肿周围缺血对高血
压性脑出血血肿吸收的影响 [ J].中国急救医学 , 2001, 21( 7):
399.
[ 4]　 贺　丹 ,张红良 ,董　强 .脑出血的病理损伤机制与
治疗 [ J]. 国外医学脑血管疾病分册 , 2000, 8( 6): 359.
[5 ]　 包新民 ,舒斯民 .大鼠脑立体定位图谱 . [M ]. 北京:
人民卫生出版社 , 1991: 1-2.
[6 ]　 王新德 .神经病学 [ M ].北京: 人民军医出版社 ,
2001, 159-161.
[7 ]　 徐雄鹰 ,管敏昌 ,蔡美琴 ,等 .葛根素注射液治疗原发
性脑出血的探讨 [ J]. 中国实用神经疾病杂志 , 2007, 10( 6): 3-
5.
[ 8 ]　 Sina r EJ, Mendelow AD, Graham DI, etal
Experimental intracer ebral hemo r rhage: effc tis of a tempo rar y
masslesion[ J]. Neuro surg , 1987, 66: 568-576.
[ 9]　 方　琪 ,许丽珍 ,包仕荛 .脑出血病理生理机制研究
[ J] .国外医学脑血管疾病分册 , 2002, 1: 60.
(收稿 2009-04-17;修回 2009-06-16)　　
(上接第 1659页 )
材总重量的 12倍 ,回收乙醇 ,浓缩止比重为 1. 16g / cm3
( 50. C) ,称重 ,测定浸膏含水量 ,计算收膏率为 20. 3% ,
测定总生物碱为 93. 38mg,测得结果高于正交实验的 9
组实验值 ,充分证明了优选结果的科学性。
参考文献
[ 1]　 现代中药学大辞典 [M ]. 1999, 1922, 1925, 1419.
[ 2 ]　 冉先德 .中华药海 [M ].哈尔滨: 哈尔滨出版社 ,
1998, 843, 530.
[ 3 ]　 江苏新医学院 .中药大辞典 [M ] .上册 .上海: 上海
科学技术出版社 , 1986, 2684.
[4 ]　 徐吉民 .正交法在医药科研中的应用 [M ] .北京: 中
国中医药出版社 , 1987: 20.
(收稿 2009-04-17;修回 2009-06-16)　　
1666 陕西中医 2009年第 30卷第 12期