全 文 ：［收稿日期］ 20140609(023)
［基金项目］ 河南省科技厅重点科技攻关项目(122102310185)
［第一作者］ 李喜凤，教授，从事中药新药及质量标准研究，Tel:13783632576，E-mail:lxf_52@ yeah． net
［通讯作者］ * 朱艳琴，教授，从事肿瘤病理研究，Tel:15038096960，E-mail:7921083@ qq． com
禹州漏芦抗炎和抑菌有效部位的筛选
李喜凤，张伟晓，王优湑，安硕，朱艳琴*
(河南中医学院，郑州 450046)
［摘要］ 目的:研究禹州漏芦不同提取部位对小鼠耳肿胀的抗炎及其抑菌作用，进而对有效部位进行筛选。方法:对禹
州漏芦进行乙醇回流提取，所得浸膏依次用石油醚，三氯甲烷，乙酸乙酯，正丁醇萃取得各部位浸膏，将小鼠随机分为模型组，
阿司匹林组(0. 11 g·kg －1)和不同溶剂萃取部位高、低剂量组，采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型，考察禹州漏芦不同溶剂萃取
部位的抗炎作用;采用试管二倍稀释法，用划线法确定最低抑菌浓度(MIC)，考察不同部位提取物对金黄色葡萄球菌，大肠埃
希氏菌，枯草芽孢杆菌，伤寒沙门氏菌，铜绿假单胞菌的抑菌作用。结果:与模型组比较，禹州漏芦三氯甲烷萃取部位的高、低
剂量组对小鼠耳廓肿胀的抑制率均高于 60%(P ＜ 0. 01)，其他部位的抑制率较低;乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位对 5
种菌种均有抑制作用，乙酸乙酯萃取部位对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的 MIC最低，正丁醇萃取部位对金黄色葡萄球菌
和铜绿假单胞菌的 MIC最低，均为 312. 5 g·L －1。结论:禹州漏芦抗炎的有效部位是三氯甲烷萃取部位，抑菌的有效部位是乙
酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位，为禹州漏芦的进一步开发利用提供依据。
［关键词］ 禹州漏芦;抗炎;抑菌;有效部位
［中图分类号］ Ｒ285． 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)03-0138-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015030138
Screening Effective Part of Echinopsis Ｒadix via Bacteriostasis and Anti-inflammatory Activities
LI Xi-feng，ZHANG Wei-xiao，WANG You-xu，AN Shuo，ZHU Yan-qin* (Henan University of Traditional
Chinese Medicine，Zhengzhou 450046，China)
［Abstract］ Objective:To screen the effective parts of Echinopsis Ｒadix through bacteriostasis and anti-
inflammatory activities． Method:Echinopsis Ｒadix was firstly extracted by ethanol，and followed by petroleum
ether，chloroform，ethyl acetate，and n-butanol to obtaine the different parts of extraction． Mice were randomly
divided into blank group，aspirin group (0. 11 g·kg －1)，and high-，low-dose of different extraction parts groups．
The anti-inflammatory activity of different solvent extraction parts of Echinopsis Ｒadix was examined by xylene-
induced ear swelling mice． The effects against Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Bacillus subtilis，Salmonella
typhimurium，and Pseudomonas aeruginosa were examined by scraping line method and tube dilution method．
Ｒesult:The chloroform extraction part of Echinopsis Ｒadix showed an inhibition rate of higher than 60% in ear
swelling mice，while the effect of the other extraction parts was very weak． The ethyl acetate extraction part showed
the lowest MIC against S． aureus and B． subtilis (312. 5 g·L －1)，while the n-butanol extraction part showed the
lowest MIC against S． aureus and P． aeruginosa (312. 5 g·L －1)． Conclusion: It shows that the chloroform
extraction is the anti-inflammatory part of Echinopsis Ｒadix，the ethyl acetate extraction and n-butanol extraction
are the bacteriostatic parts． It provides the evidence for the further development and utilization of Echinopsis Ｒadix．
［Key words］ Echinopsis Ｒadix;anti-inflammatory;bacteriostasis;effective part
禹州漏芦［1］为菊科植物蓝刺头或华东蓝刺头
的干燥根。其味苦、性寒、归胃经，具有清热解毒、排
脓止血、消痈下乳的功效，用于治疗诸疮痈肿，乳痈
肿痛，乳汁不通，瘰疬疮毒等。关于禹州漏芦化学成
分的研究已有报道［2］，但关于其抗炎抑菌有效部位
的研究较少。本文以二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型考
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察禹州漏芦不同提取部位的抗炎作用，采用试管二
倍稀释法考察不同提取部位的抑菌作用，为进一步
的研究工作提供依据。
1 材料
1. 1 动物及菌株 昆明种小鼠，体重(20 ± 2)g，雄
性，(20 ± 2)℃的动物实验管理中心，专人饲养和管
理。实验鼠喂饲为标准全价饲料，均购自河南省实
验动物中心，合格证号 SCXK(豫)2010-0002。菌种
包括:金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus，批号
CMCC(B)26003，大肠埃希菌 Escherichia coli，批号
CMCC(B)44102，枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis，批
号 CMCC (B)10211，伤寒沙门氏菌 Salmonella
typhimurium，批号 CMCC(B)50094，铜绿假单胞菌
Pseudomonas aeruginosa，批号 CMCC(B)10104，均由
河南中医学院第一附属医院药学部提供，购自中国
药品生物制品检定所。
1. 2 药物及试剂 禹州漏芦(Ｒadix Echinopsis)购
自亳州药材市场，经河南中医学院董诚明教授鉴定
为菊科植物蓝刺头 Echinops latifolius 的干燥根。样
品收集后去泥、洗净、晾干，用万能粉碎机粉碎并过
45 目筛，放入 4 ℃冰箱中保存备用。阿司匹林肠溶
片(西安利君制药股份有限公司，批号 201112515)，
二甲苯(天津科密欧化学试剂开发中心，批号
20100604)，MH琼脂培养基、MH 肉汤培养基(北京
三药科技开发公司，批号分别为 100611，100428)，
其余试剂均为分析纯。
1. 3 仪器 YUEPINGFA2004b 型电子天平(上海
越平科学仪器有限公司)，FW-100 型超速万能粉碎
机(北京中兴伟业仪器有限公司)，SW-CJ-1B 型无
菌操作台(苏州亿达净化设备有限公司)，LMQ． Ｒ
型立式灭菌器(山东新华医疗器械股份有限公司)，
301AB-1 型隔水式培养箱(上海申光仪器仪表有限
公司)，倒置光学显微镜(日本 Olympus公司)。
2 方法
2. 1 药物制备
2. 1. 1 阿司匹林的配制 取阿司匹林 1 片，研磨粉
碎，用蒸馏水配至 40 mL，用前摇匀，放置 4 ℃冰箱
中冷藏备用。
2. 1. 2 禹州漏芦药材总提取物的制备 称取干燥
粉碎并过 45 目筛的禹州漏芦药材，用 95%乙醇回
流提取 3 次，时间分别是 3，3，2 h，溶剂倍量分别是
10，8，6 倍量，过滤，合并滤液，减压浓缩得总提取物
浸膏。参照《中国药典》2010 年版规定的禹州漏芦
的人的常用剂量为 5 ～ 10 g，取 10 g，按人平均体重
60 kg计算，则人的常用剂量为 0. 17 g·kg －1，以人用
剂量的 7. 5，15，30 倍分别作为小鼠给药的低，中，高
剂量组，即分别为 1. 25，2. 5，5 g·kg －1。将总提物浸
膏用 5‰的 CMC-Na 溶液溶解，配制成定量的供试
液，备用。
2. 1. 3 禹州漏芦药材不同溶剂部位的制备 称取
干燥粉碎并过 45 目筛的禹州漏芦药材 200 g，用
95%乙醇回流提取 3 次，时间分别是 3，3，2 h，溶剂
倍量分别是 10，8，6 倍量，过滤，合并滤液，减压浓
缩;浸膏用 100 mL 水分散，依次用石油醚，三氯甲
烷，乙酸乙酯，正丁醇各 100 mL萃取 3 次，各萃取液
及水溶液减压浓缩，得到各部位浸膏，各部位提取率
见表 1。
表 1 禹州漏芦药材不同溶剂萃取部位得率
Table 1 Different solvent extraction yield of Ｒadix Echinopsis
溶剂萃取部位 浸膏质量 / g 得率 /%
石油醚部位 3. 49 1. 74
三氯甲烷部位 1. 83 0. 92
乙酸乙酯部位 1. 60 0. 80
正丁醇部位 4. 80 2. 40
水部位 7. 03 3. 52
2. 2 抗炎实验
2. 2. 1 禹州漏芦总提取物对二甲苯引起小鼠耳廓
肿胀的影响［3］ 将小鼠 50 只，随机分为 5 组，每组
10 只，分别为模型组、禹州漏芦高、中、低剂量组、阿
司匹林组，连续给药 7 d，于最后一次给药后 1 h，将
25 μL二甲苯滴于小鼠右耳，左耳作为对照。1 h 后
将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径
为 8 mm 的打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆
耳片，称重。以左右耳质量之差为其肿胀程度。
肿胀率 =肿胀度 /左耳片质量 × 100%
抑制率 =(空白组肿胀度均数 －受试组肿胀度均数)/
空白组肿胀度均数 × 100%
2. 2. 2 禹州漏芦不同溶剂萃取部位对二甲苯引起
小鼠耳廓肿胀的影响 将小鼠 120 只，随机分为 12
组，每组 10 只，模型组，阿司匹林组，禹州漏芦石油
醚部位高、低剂量组，三氯甲烷部位高、低剂量组，乙
酸乙酯部位高、低剂量组，正丁醇部位高、低剂量组，
水部位高、低剂量组，给药及处理见 2. 2. 1。测定各
组小鼠的耳肿胀程度，肿胀百分率，受试组抑制率。
2. 3 体外抑菌实验最低抑菌浓度(MIC)测定［3-5，7］
称取禹州漏芦药材粉末 50 g，用 95%乙醇回流提
取 3 次，时间分别是 3，3，2 h，溶剂倍量分别是 10，
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8，6 倍量，过滤，合并滤液，减压浓缩;浸膏用 20 mL
水分散，依次用石油醚，三氯甲烷，乙酸乙酯，正丁醇
各 20 mL萃取 3 次，各萃取液及水部位减压浓缩，挥
干溶剂，用 0. 5%聚山梨酯 － 80 将各部位提取物定
容至 25 mL。无菌微孔滤膜过滤除菌，备用。取无
菌试管(13 mm × 100 mm)10 支，排成一排，每管加
入 MH肉汤 2 mL，在第 1 管加入抗菌药物原液(1 g·
mL －1)2 mL混匀，然后吸取 2 mL 至第 2 管，混匀后
再吸取 2 mL 至第 3 管，如此连续倍比稀释至第 9
管，并从第 9 管中吸取 2 mL弃去，第 10 管为不含药
物的生长对照。用移液枪在已稀释好药物浓度的试
管内加入上述制备好的接种物各 100 μL，其中第 9
管不加菌液做阴性对照。将接种好的稀释管塞好塞
子，置 35 ℃普通空气孵箱中孵育 16 ～ 20 h，在营养
琼脂培养基平板上，用划线法确定 MIC。该实验平
行做 3 次，以 2 或 3 次相同结果为准。
2. 4 统计学处理 采用 SPSS 17. 0 软件统计，实验
结果数据用 珋x ± s 表示，各组比较均选用 t 检验，以
P ＜ 0. 05 为有统计学差异。
3 结果
3. 1 禹州漏芦总提取物对二甲苯诱发小鼠耳廓肿
胀的影响 禹州漏芦高、中剂量组及阿司匹林组能
明显降低二甲苯所致小鼠耳肿胀的程度，与模型组
比较，有显著性差异(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)，中剂量组
效果更明显(P ＜ 0. 01)。见表 2。
表 2 禹州漏芦总提取物对二甲苯诱发小鼠耳廓肿胀的影响(珋x ± s，
n = 10)
Table 2 Effects of total extract of Ｒadix Echinopsis on mouse ear
auricle swelling induced by xylene(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/ g·kg －1
肿胀度
/mg
肿胀率
/%
肿胀抑
制率 /%
模型 － 15. 03 ± 1. 97 123. 00 －
阿司匹林 0. 11 8. 97 ± 2. 212) 69. 67 40. 32
禹州漏芦总提取物 1. 25 14. 37 ± 3. 17 116. 00 4. 39
2. 5 10. 02 ± 2. 862) 74. 28 33. 33
5 13. 25 ± 3. 251) 92. 33 11. 84
注:与模型组比较1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01(表 3 同)。
3. 2 禹州漏芦不同溶剂萃取物对二甲苯诱发小鼠
耳廓肿胀的影响 三氯甲烷部位高、低剂量组，乙酸
乙酯部位低剂量组，正丁醇部位高、低剂量组，水部
位低剂量组对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀均有一定
的抑制作用，与模型组相比有统计学差异(P ＜
0. 01)，其中三氯甲烷萃取部位效果更好，低剂量组
效果要优于高剂量组，与阿司匹林组无差异。见
表 3。
表 3 禹州漏芦不同溶剂萃取物对二甲苯诱发小鼠耳廓肿胀的影响
(珋x ± s，n = 10)
Table 3 Effects of different solvents extraction of Ｒadix Echinopsis
on mouse auricle swelling induced by xylene(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/ g·kg －1
肿胀度
/mg
肿胀率
/%
肿胀抑
制率 /%
模型 － 9. 65 ± 1. 91 122 ± 25 －
阿司匹林 0. 11 5. 71 ± 2. 29 73 ± 22 40. 8
石油醚部位 0. 087 9. 26 ± 3. 40 119 ± 30 4. 0
0. 044 8. 15 ± 3. 34 107 ± 22 15. 5
三氯甲烷部位 0. 046 3. 47 ± 1. 112) 48 ± 13 64. 0
0. 023 3. 45 ± 1. 132) 46 ± 36 64. 3
乙酸乙酯部位 0. 040 8. 27 ± 3. 05 100 ± 35 14. 3
0. 020 4. 78 ± 1. 822) 63 ± 20 50. 5
正丁醇部位 0. 120 5. 89 ± 2. 052) 85 ± 33 39. 0
0. 060 5. 51 ± 2. 062) 734 ± 29 42. 9
水部位 0. 176 9. 62 ± 2. 86 136 ± 39 0. 3
0. 088 5. 02 ± 2. 172) 66 ± 32 48. 0
3. 3 禹州漏芦不同萃取部位抑菌实验 MIC 结果
禹州漏芦药材石油醚萃取部位对金黄色葡萄球菌和
枯草芽孢杆菌有抑制作用，MIC为 78. 125 g·L －1，其
他 3 种受试菌种没有抑制作用。禹州漏芦药材三氯
甲烷萃取部位对枯草芽孢杆菌有抑制作用，MIC 为
1 250 g·L －1，对其他 4 种受试菌种没有抑制作用。
禹州漏芦药材乙酸乙酯萃取部位对 5 种受试菌均有
抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌
的抑制作用最强，MIC 为 312. 5 g·L －1，对大肠埃希
菌和铜绿假单胞菌抑制作用次之，MIC 为 625 g·
L －1，对伤寒沙门氏菌的抑制作用最弱，MIC 为 1 250
g·L －1。正丁醇萃取部位对 5种受试菌均有抑制作用，
其中对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑制作用
最强，MIC为 312. 5 g·L －1，对另外 3 种受试菌的 MIC
也达到了 625 g·L －1。禹州漏芦药材水部位只对金
黄色葡萄球菌有抑制作用，MIC 为 1 250 g·L －1。见
表 4。
4 讨论
炎症分不同的时期:前期表现为红、肿、热、痛，
病理表现为毛细血管扩张，渗出增加;中期表现为白
细胞的游走;后期表现为瘢痕与粘连的形成［5-6］。
不同的药物抗炎的机制不同和针对作用的炎症分期
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表 4 禹州漏芦不同萃取部位抑菌实验 MIC结果
Table 4 Different extraction MIC bacteriostasis experiment results
of Ｒadix Echinopsis g·L －1
组别
金黄色
葡菌球菌
大肠
埃希菌
伤寒
沙门氏菌
枯草
芽孢杆菌
铜绿
假单胞菌
醇提总部位 500 500 － 625 250
石油醚部位 78 － － 78 －
三氯甲烷部位 － － － 1 250 －
乙酸乙酯部位 313 625 1 250 313 625
正丁醇部位 313 625 625 625 313
水部位 1 250 － － － －
也不同［7］，中药中清热解毒药主要作用于炎症的早
期，故本实验选择二甲苯致小鼠耳廓肿胀的病理模
型。在抗炎实验中，总部位的高、中、低剂量组实验
是用于筛选一个最佳的药效剂量，其中中剂量组活
性更明显;不同部位的高、低剂量是以总部位的中剂
量组为参考设置，结果显示三氯甲烷提取部位的低
剂量组活性最好。受试药物的灭菌时间、温度高低
可能会导致药物中热敏感化学成分的改变，因此，对
于不同溶剂萃取物采用微孔滤膜除菌的方法，实验
中要注意无菌操作。制备菌悬液时，先采用血球计
数仪，用显微镜直接计数法测定菌体个数，调至所需
浓度，因为浓度过低，接种菌量少，抑菌环常因之增
大;浓度过高，接种量过多，抑菌环则可减小。测定
最低抑菌浓度时，应注意稀释样品的顺序，每稀释一
个浓度都要更换移液管，尽可能的减小误差。在抑
菌实验中，不同溶剂萃取出的物质，其抑菌能力有一
定的差异性，这和不同溶剂萃取出的化学物质有关。
抑菌实验母液一般选择为 1 g·mL －1，在此基础上测
定 MIC，但本实验测定药物的 MIC 较大［8］，因为抑
菌效果与药物的浓度，培养基的厚度，药物的溶解性
等有很大关系。如培养基的厚度越大药物的抑菌效
果越好;溶解性小的药物不能够完全扩散到培养基
中，导致该药物的抑菌效果低于真实值，而有些药物
需要体内进一步分解或转化后才能发挥抗菌作用。
1992 年 Lin［9］报道了华东蓝刺头根的抗炎活
性，发现华东蓝刺头甲醇提取物中正己烷萃取部分
(40，200 mg·kg －1)、三氯甲烷萃取部分(20，40，200
mg·kg －1)及乙酸乙醋萃取部分(20，40，200 mg·
kg －1)能明显改善角叉菜胶所致的小鼠足部肿胀，研
究证明华东蓝刺头抗炎成分集中于三氯甲烷萃取部
分。本实验证明了三氯甲烷萃取部位的抗炎作用最
好，但是体外抑菌效果最差，可能与其所含的主要化
学成分含量不同有关，或是禹州漏芦中发挥抗炎与
抑菌作用的成分不同有关，有待进一步的研究，以明
确其药效和作用机制。
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［责任编辑 周冰冰］
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