全 文 ：北方园艺２０１２（０７）：１１５～１１９ ·生物技术·
第一作者简介：罗成华（１９８９－），男，湖北公安人，在读硕士，现主要从
事植物基因工程研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｕｏｃｈｅｎｇｈｕａ８９０４２０＠１６３．ｃｏｍ。
责任作者：闫洁（１９６９－），女，博士，副教授，现主要从事生物化学与
分子生物学教学与科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｅｙ＠ｓｈｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。
收稿日期：２０１２－０１－０４
橡胶草高频再生体系的建立
罗 成 华，闫 洁，祝 建 波
（石河子大学 生命科学学院，新疆 石河子８３２００３）
摘 要：以橡胶草叶片为外植体，研究了消毒时间、外源激素等因素对外植体成活率、不定芽
的诱导、伸长和生根的影响。结果表明：用０．１％的升汞处理７ｍｉｎ为最佳消毒方法，最佳的再生
培养基为ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，平均诱导率为９７．３％，芽伸长培养基为 ＭＳ＋
２．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．０２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．４ｍｇ／Ｌ ＧＡ３，生根培养基为１／２ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，生
根率为１００％，所获得的组培苗生长健壮且移栽成活率高，最终摸索出了橡胶草最佳的再生体系。
关键词：橡胶草；再生体系；生根
中图分类号：Ｓ ６８２．１＋９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）０７－０１１５－０５
蒲公英青橡胶草（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｋｏｋ－ｓａｇｈｙｚ Ｒｏｄｉｎ）是
菊科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）蒲公英属多年生宿根草本植物，又称
俄罗斯蒲公英，在我国俗称橡胶草［１］。橡胶草与巴西三
叶胶、银胶菊一起并称为全球三大产胶植物，其根叶均
有乳管组织，多年生植株的根内含有高达２０％的橡
胶［２］，结构和功能与巴西橡胶相似，是具有良好开发前
景的产胶植物，同时也是能用来研究橡胶树产胶机理的
模式植物，具有很好的研究前景。目前国内学者对橡胶
草的研究仍旧停留在形态学方面［３－４］，国外学者对橡胶
草的产乳胶蛋白颗粒及相关的酶进行了分子生物学方
面的研究［５－７］，但有关其高效再生体系建立的研究未见
发表。现对橡胶草的离体培养进行了研究，建立了高效
的再生体系，以期为橡胶草的组培快繁和遗传转化研究
奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
橡胶草植株于２０１１年６月采自新疆石河子市蘑菇
湖水库边，移栽至温室培养。
１．２ 试验方法
１．２．１ 外植体的灭菌 采集橡胶草新生幼嫩叶片，用洗
洁精水溶液浸泡１０ｍｉｎ，用棉球轻轻擦拭表面，自来水
清洗５次，在超净工作台内用７０％酒精处理３０ｓ，再用
０．１％升汞做表面消毒处理，处理时间分别为５、６、７、８和
９ｍｉｎ。消毒后用无菌水清洗５次，每次５ｍｉｎ，最后将叶
片边缘和主叶脉剪掉，剪成大小为１ｃｍ×１ｃｍ的外植
体，正面朝上接种于未添加激素的空白培养基上，比较
消毒效果，３次重复。
１．２．２ 培养基的配置 采用 ＭＳ、１／２ＭＳ基本培养基，
添加蔗糖３０ｇ／Ｌ，植物凝胶２．０ｇ／Ｌ，ｐＨ ５．８，分装并高
压灭菌后添加不同种类和浓度的植物生长调节剂，倒于
培养皿或三角瓶中备用。
１．２．３ 不定芽的诱导 采用ＭＳ基本培养基，添加不同
浓度的６－ＢＡ和ＮＡＡ作为再生诱导激素，采用正交设计
Ｌ１６（４５），设置２个因素分别为６－ＢＡ和ＮＡＡ，每个因素
设置４个水平（表１），３次重复。
表１ 因素与水平
Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ
水平 因素Ｆａｃｔｏｒｓ
Ｌｅｖｅｌｓ ６－ＢＡ／ｍｇ·Ｌ－１ ＮＡＡ／ｍｇ·Ｌ－１
１ ０．５ ０．１
２ １．０ ０．２
３ １．５ ０．５
４ ２．０ ０．８
１．２．４ 不定芽的伸长 将已分化出不定芽的外植体分
别接种到添加不同浓度激素的ＭＳ基本培养基中，其中，
６－ＢＡ浓度为２．０ｍｇ／Ｌ，赤霉素浓度为０．２和０．４ｍｇ／Ｌ，
ＮＡＡ浓度为０和０．０２ｍｇ／Ｌ。
１．２．５ 不定芽的生根 将生长健壮，长２．０ｃｍ左右的
不定芽掰下，于室温下在ＩＢＡ浓度为１００ｍｇ／Ｌ的液体
ＭＳ培养基中浸泡１６ｈ，然后分别接种到ＮＡＡ浓度为
０、０．２和０．５ｍｇ／Ｌ的１／２ＭＳ培养基上，先暗培养２ｄ，
后移至自然光下培养。
１．２．６ 培养条件 丛生芽诱导、芽伸长和不定根的诱导
均在光照强度２ ６００ｌｘ，光照时间１６ｈ／ｄ，温度２６℃条件下
进行培养。每１５ｄ更换１次培养基，观察并记录。
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·生物技术· 北方园艺２０１２（０７）：１１５～１１９
２ 结果与分析
２．１ 消毒时间对橡胶草叶片外植体的影响
从表２可看出，用０．１％的升汞溶液处理橡胶草叶
片，随着消毒时间的增加，污染率逐渐降低，但外植体的
表２ 不同消毒时间对橡胶草的污染率、
褐变率及成活率的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｈｅ ｐｏｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｒａｔｅ ｏｆ Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｋｏｋ－ｓａｇｈｙｚｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
消毒时间
Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
污染率
Ｐｏｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ／％
褐化率
Ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ／％
成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ／％
Ⅰ Ⅱ Ⅲ
平均
Ａｖｅｒａｇｅ
Ⅰ Ⅱ Ⅲ
平均
Ａｖｅｒａｇｅ
Ⅰ Ⅱ Ⅲ
平均
Ａｖｅｒａｇｅ
５ ７４ ７２ ６９ ７１．７ ４ ６ ２ ４．０ ２４ ２５ ２９ ２６．０
６ ４８ ４９ ４６ ４７．７ ５ ４ ７ ５．３ ４９ ４９ ５０ ４９．３
７ ６ ６ ４ ５．３ ８ １０ ６ ８．０ ９２ ８７ ９０ ８９．７
８ ２ ４ ３ ３．０ ２４ １８ １９ ２０．３ ６９ ７２ ７８ ７３．０
９ ０ ０ ０ ０ ４５ ３２ ４３ ４０．０ ５０ ５５ ４８ ５１．０
褐化率也随着时间的增加而上升，当消毒时间为９ｍｉｎ
时，褐化率达到４０．０％。而外植体的成活率却随着消毒时
间的增加呈现出先上升后下降的趋势。综合比较污染率、
褐化率与成活率３个指标，最终确定橡胶草叶片外植体升
汞消毒的最佳时间为７ｍｉｎ，此时污染率为５．３％，褐化率
为８％，成活率为８９．７％，能够满足组培需要。
２．２ 不同浓度６－ＢＡ和ＮＡＡ对橡胶草不定芽诱导的影响
２．２．１ 正交实验结果 选择最合适的消毒方法进行处
理后，将外植体正面朝上接种至不同浓度组合的再生培
养基上，先暗培养２ｄ，后移至自然光下培养。在按照正
交设计的橡胶草不定芽诱导培养基中，外植体的分化程
度差异显著。在接种７ｄ后，个别外植体卷曲，边缘加
厚，个别继续膨大形成淡黄色的愈伤组织，个别则在边
缘出现绿色芽点。由表３可知，最佳诱导不定芽培养基为
ＭＳ＋６－ＢＡ １．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ。
表３ 橡胶草叶片外植体丛生芽诱导的正交实验结果
Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｈｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｋｏｋ－ｓａｇｈｙｚｂｌａｄｅ ｅｘｐｌａｎｔ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ／％
Ⅰ Ⅱ Ⅲ
平均
Ａｖｅｒａｇｅ
／％
现象
Ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ
１ ０．５ ０．１ ０ ０ ０ ０ 外植体接种后生长缓慢，１５ｄ后边缘出现轻微膨大，２０ｄ左右长出愈伤组织，随后发生褐化并死亡
２ ０．５ ０．２ ０ ０ ０ ０ 外植体接种后生长缓慢，９ｄ后边缘出现膨大，１５ｄ左右愈伤组织强烈生长
３ ０．５ ０．５ １０ ７ ０ ５．７ 多数外植体只长愈伤，个别出芽缓慢，且平均出芽数低
４ ０．５ ０．８ ０ ０ ０ ０ 外植体接种后７ｄ左右开始出现愈伤组织，随后只见愈伤组织膨大，不见有出芽趋势
５ １．０ ０．１ ２４ ２７ ３２ ２７．７ 接种２０ｄ左右开始出现个别绿色芽点，平均出芽数低，多数外植体仍旧只长愈伤不出芽
６ １．０ ０．２ ８６ ９０ ７８ ８４．７ 接种１５ｄ左右开始有绿色芽点出现，２５ｄ左右普遍出芽，且平均出芽数为８
７ １．０ ０．５ ７８ ７４ ７５ ７５．７ 接种后愈伤组织增长迅速，出芽缓慢，１２ｄ左右开始有绿色芽点出现
８ １．０ ０．８ １５ ２４ １８ １９．０ 外植体边缘愈伤组织增殖快，接种２０ｄ以后才开始有少量绿色芽点出现，且芽生长缓慢
９ １．５ ０．１ ９５ ９７ １００ ９７．３ 外植体接种后４ｄ，边缘加厚并轻微膨大，１５ｄ左右开始有绿色芽点出现，２０ｄ普遍出芽，最终平均出芽数为１０
１０ １．５ ０．２ ８６ ７９ ８３ ８２．６ 接种１２ｄ左右开始有绿色芽点出现，２５ｄ左右普遍出芽，且平均出芽数为４
１１ １．５ ０．５ ７６ ７６ ７４ ７５．３ 外植体长出轻微愈伤后即开始出芽，但平均出芽数低，只有３
１２ １．５ ０．８ ３５ ２８ ３６ ３３．０ 外植体出愈迅速，接种１５ｄ后长出大量愈伤组织，未见有芽点出现
１３ ２．０ ０．１ ４２ ４６ ５２ ４６．７ 接种４ｄ后边缘开始有明显膨大，１５ｄ左右开始出现不定芽，平均出芽数为３，多数外植体生长缓慢，不见出芽
１４ ２．０ ０．２ ６８ ７４ ６８ ７０．０ 接种２０ｄ左右开始出芽，平均出芽数为６．３
１５ ２．０ ０．５ ６５ ５９ ６２ ６２．０ 外植体出愈严重，接种２０ｄ后个别才开始有芽点出现，平均出芽数为３
１６ ２．０ ０．８ ３６ ３６ ３７ ３６．３ 外植体愈伤增殖严重，１５ｄ后出现少量芽点，不定芽诱导及生长缓慢
２．２．２ 对６－ＢＡ和ＮＡＡ正交组合结果进行方差分析及
多重比较 为了探明６－ＢＡ和ＮＡＡ对丛生芽诱导的显
著性及其各水平间的差异，对正交实验结果进行了方差
分析和多重比较（表４、５、６）。由表４可知，６－ＢＡ和ＮＡＡ
２种植物激素以不同浓度组合诱导丛生芽，均达到了显
著差异水平。为进一步探明显著因素中各水平之间的
差异情况，需进行２个因素内部的多重比较（表５、６）。
表４ 不同浓度６－ＢＡ和ＮＡＡ组合对橡胶草
不定芽诱导的方差分析
Ｔａｂｌｅ ４ Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ６－ＢＡ ａｎｄ
ＮＡＡ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｈｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｋｏｋ－ｓａｇｈｙｚ
来源
Ｏｒｉｇｉｎ
自由度
Ｆｒｅｅｄｏｍ
平方和
Ｓｕｍ ｏｆ ｓｑｕａｒｅｓ
均方
Ｍｅａｎ ｓｑｕａｒｅ
Ｆ Ｐ
Ａ ３ ３．３０６ １．１０２ ４８．２６７ ０．０００
Ｂ ３ ０．９９４ ０．３３１ １４．５１０ ０．０００
误差Ｅｒｒｏｒ ３ ０．９３６ ０．０２３
总变异Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ９ ５．２３６
表５ 不同浓度６－ＢＡ对橡胶草丛生芽
诱导的多重比较
Ｔａｂｌｅ ５ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｏｆ ６－ＢＡ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ｓｈｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｋｏｋ－ｓａｇｈｙｚ
（Ｉ）６－ＢＡ （Ｊ）６－ＢＡ 标准误差Ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ Ｐ
Ａ２ ０．０６１６９ ０．０００
Ａ１ Ａ３ ０．０６１６９ ０．０００
Ａ４ ０．０６１６９ ０．０００
Ａ１ ０．０６１６９ ０．０００
Ａ２ Ａ３ ０．０６１６９ ０．００２
Ａ４ ０．０６１６９ ０．７４７
Ａ１ ０．０６１６９ ０．０００
Ａ３ Ａ２ ０．０６１６９ ０．００２
Ａ４ ０．０６１６９ ０．００５
Ａ１ ０．０６１６９ ０．０００
Ａ４ Ａ２ ０．０６１６９ ０．７４７
Ａ３ ０．０６１６９ ０．００５
注：均值差值在０．０５级别上较显著，下同。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ ｍｅａｎ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ０．０５ｌｅｖｅｌ ｉｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ，ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
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北方园艺２０１２（０７）：１１５～１１９ ·生物技术·
表６ 不同浓度ＮＡＡ对橡胶草丛生芽
诱导的多重比较
Ｔａｂｌｅ ６ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｏｆ ＮＡＡ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ｓｈｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｋｏｋ－ｓａｇｈｙｚ
（Ｉ）ＮＡＡ （Ｊ）ＮＡＡ 标准误差Ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ Ｐ
Ｂ２ ０．０６１６９ ０．０１１
Ｂ１ Ｂ３ ０．０６１６９ ０．０６４
Ｂ４ ０．０６１６９ ０．００２
Ｂ１ ０．０６１６９ ０．０１１
Ｂ２ Ｂ３ ０．０６１６９ ０．４５４
Ｂ４ ０．０６１６９ ０．０００
Ｂ１ ０．０６１６９ ０．０６４
Ｂ３ Ｂ２ ０．０６１６９ ０．４５４
Ｂ４ ０．０６１６９ ０．０００
Ｂ１ ０．０６１６９ ０．００２
Ｂ４ Ｂ２ ０．０６１６９ ０．０００
Ｂ３ ０．０６１６９ ０．０００
多重比较结果表明，６－ＢＡ各水平中，Ａ２（１．０ｍｇ／Ｌ）
和Ａ４（２．０ｍｇ／Ｌ）之间差异显著，ＮＡＡ各水平中Ｂ２
（０．２ｍｇ／Ｌ）和Ｂ３（０．５ｍｇ／Ｌ）之间差异显著。
２．３ 不同浓度激素对不定芽伸长的影响
将生长良好的已诱导出不定芽的外植体接种至不
同浓度的芽伸长培养基上，结果表明，不定芽均能伸长，
只是在伸长时间上存在差异。从表７可看出，最佳芽伸
长培养基为 ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．４ｍｇ／Ｌ ＧＡ３＋
０．０２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ。
表７ 不同浓度激素对不定芽伸长的影响
Ｔａｂｌｅ ７ Ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｈｏｒｍｏｎｅｓ
ｏｎ ｔｈｅ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｈｏｏｔｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＧＡ３
／ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
现象Ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ
１ ２．０ ０．２ ０
芽生长缓慢，约１４ｄ后个别出现明显
伸长
２ ２．０ ０．２ ０．０２
接种约８ｄ后芽开始有明显伸长，且不定
芽生长健壮，约２０ｄ后长度达到１ｃｍ
３ ２．０ ０．４ ０
接种后芽生长较慢，１０ｄ后个别不定芽
出现明显伸长
４ ２．０ ０．４ ０．０２
接种约５ｄ后可以看见明显伸长，约１６ｄ
后长度达到１～２ｃｍ，且不定芽生长健壮
２．４ 不定芽的生根
在试验中发现，橡胶草不定芽的生根较为困难，在
１／２ＭＳ培养基中单独添加一定浓度的ＮＡＡ诱导生根缓
慢，且生根质量欠佳。然而在将不定芽插入到生根培养
基前于室温下在含１００ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ的液体 ＭＳ培养基
（添加３０ｇ／Ｌ蔗糖，ｐＨ为５．８）中浸泡１６ｈ，然后插入生
根培养基中，各浓度ＮＡＡ均能很快诱导不定芽生根。
从表８可看出，橡胶草不定芽的根诱导需要ＮＡＡ的存
在，且浓度为０．２和０．５ｍｇ／Ｌ的ＮＡＡ处理均能在短期
内达到１００％的生根率，为节约成本考虑，在今后的试验
中应选择１／２ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ作为根诱导培养基。
表８ 不同浓度ＮＡＡ对不定芽生根率的影响
Ｔａｂｌｅ ８ Ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ＮＡＡ
ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｈｏｏｔｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｅ／％
现象
Ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ
１ ０ ０
不定芽接种后生根缓慢，个别只见伸长，极个别在
接种２５ｄ后才表现出生根趋势，且组培苗弱小，叶
片有时泛黄
２ ０．２ １００
生根迅速，７０％不定芽在接种１０ｄ后即表现出生
根趋势，２０ｄ左右生根率达到１００％，且生根质量
好，苗粗壮，叶片呈浓绿色
３ ０．５ １００
生根迅速，８５％不定芽在接种１０ｄ后即表现出生
根趋势，２０ｄ左右生根率达到１００％，且生根质量
好，苗粗壮，叶片呈浓绿色
３ 结论与讨论
３．１ 结论
该研究结果表明，橡胶草叶片外植体直接诱导丛生
芽的最适培养基为 ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ，该培养基诱导产生不定芽时间短，外植体出芽率
高，出芽整齐，且芽形好。通过方差分析及多重比较发
现，所选择的２种激素均表现出显著性差异，６－ＢＡ各水
平中Ａ２（１．０ｍｇ／Ｌ）和Ａ４（２．０ｍｇ／Ｌ）之间差异显著，
ＮＡＡ各水平中Ｂ２（０．２ｍｇ／Ｌ）和Ｂ３（０．５ｍｇ／Ｌ）之间差
异显著；最佳芽伸长培养基为 ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋
０．０２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．４ｍｇ／Ｌ ＧＡ３，已出芽的外植体接种
到该培养基后能很快看见不定芽有明显伸长，且能在短
期内达到理想的长度；最佳的生根培养基为１／２ＭＳ＋
０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，该培养基中诱导生根迅速，生根质量
好，长出的组培苗健壮，叶片浓绿，移栽后成活率高。
３．２ 讨论
在植物的组织培养中，外植体灭菌的时间长短直接
影响着外植体的污染率和存活率［８］。在该研究中，选择
了表面消毒效果最佳的０．１％升汞溶液，设置了消毒处
理的时间梯度。结果表明，在处理时间为７ｍｉｎ时，外植
体的污染率下降到了５．３％，褐化率为８．０％，成活率为
８９．７％，而当处理时间增加至９ｍｉｎ时，尽管污染率降至
０，但是褐化率却增加到了４０．０％，而且添加抑制物也很
难降低褐化，外植体成活率也下降至５１．０％。可能因为
升汞是一种强表面消毒剂，在消毒振荡过程中会使外植
体因为液体剪切力而受伤，从而导致升汞进入叶片伤口
而难以在后续处理中清洗干净，继而在后面的培养过程
中伤害植物组织，导致酚类氧化物加速氧化而增加外植
体的褐变几率。
在该研究的预试验中，发现橡胶草叶片外植体经直
接消毒后接种至培养基上极易导致褐化，有时褐化率竟
高达１００％。在植物组织培养中，褐化一般可分为二大
类：一类是在氧化酶催化下的多酚类物质的氧化变色，
７１１
·生物技术· 北方园艺２０１２（０７）：１１５～１１９
称为酶促褐变；另一类是如美拉德反应、焦糖化作用等
产生的褐变没有酶的参与，称为非酶褐变［９］。多数认
为，植物组织培养中的褐化现象主要是由酶促褐变引起
的［１０］，即由多酚氧化酶（ＰＰＯ）作用于天然底物酚类物质
而引起的［１１］，品种褐化难易可能与该品种中多酚类物质
含量的多少及多酚氧化酶活性的差异有关［１２］。培养材
料褐变主要是由伤口分泌的酚类化合物引起的［１３］，由于
组织中多酚氧化酶被激活，使细胞中的代谢发生变化，
酚类化合物被氧化后产生醌类化合物，它们会逐步扩散
到培养基中，抑制其它酶的活性，毒害整个外植体组织，
导致组织代谢紊乱，生长受阻，最终逐渐死亡［１４］。前人
在对果蔬的组织培养研究中指出，外植体总多酚含量与
褐化关系密切［１５－１７］，其中ＰＰＯ活性的高低是引起材料褐
变的关键。段艳欣等［１８］通过对不同基因型的柑橘胚性
愈伤组织的多酚含量和多酚氧化酶活性的测定发现，柑
橘胚性愈伤组织褐化与多酚含量成正相关，而多酚氧化
酶活性则与愈伤组织的褐化无明显相关。Ｗａｈｌｅｒ Ｄ等［６］
研究表明，在橡胶草体内含有大量活性很高的ＰＰＯ，正
是这些ＰＰＯ能在短时间内让橡胶草伤口处分泌的乳胶
迅速褐化凝聚，从而避免乳胶的不必要流失。该研究中
可能正是因为橡胶草体内存在的高浓度ＰＰＯ而导致了
极高的褐化率。
为尽量降低褐化率，尝试了多种防止褐化的方法。
结果表明，在培养基中添加活性炭（３ｇ／Ｌ）虽然能明显降
低褐化率，但是由于活性炭的无选择性吸附，外植体在
接种到培养基后很难生长，在２周后相继黄化并死亡。
有研究指出，活性炭不仅能吸收有毒物质，但同时也能
吸收植物生长所必须的营养元素。刘真华等［１９］在蝴蝶
兰的组织培养中发现活性炭能有效控制褐化和促进生
长，但不利于不定芽的分化；添加一定量的（２．０ｍｇ／Ｌ）
的维生素Ｃ也不能达到很好的效果，外植体褐化率仍然
高达３０％；在将外植体消毒处理并接种至培养基后先低
温暗培养２ｄ，再移至自然光下培养，２ｄ后倒板至添加
了一定量的２０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３的ＭＳ培养基中，能显著降低
褐化率。这可能是因为温度过高或光照过强，都会加速
酚类化合物的氧化，而低温处理或暗培养能使外植体在
伤口愈合的过程中避免高温或强光，从而能有效防止褐
化［２０］。欧阳磊［２１］在桉树培养中发现，减少光线的照射，巨
桉带芽茎段在５℃低温下处理几天，可以有效降低外植体
诱导的褐化率。在培养基中加入抗氧化剂Ｎａ２Ｓ２Ｏ３也能
有效防止褐化，韩素英等［２２］在核桃的组织培养中使用
Ｎａ２Ｓ２Ｏ３作为抗氧化剂防止褐化，取得了很好的效果。
龚晓洁［２３］通过对马铃薯愈伤组织培养的研究发现
２０ｇ／Ｌ的Ｎａ２Ｓ２Ｏ３防褐效果最好，可以将褐化率降低到
１５％以下。
可能是因为外源因素的影响，橡胶草不定芽在直接
插入到含有ＮＡＡ的１／２ＭＳ培养基后生根缓慢且生根
率低，但采用接种前用一定浓度ＩＢＡ的液体ＭＳ培养基
浸泡不定芽的方法能在短期内获得极高的生根率。
Ｃａｓｔｉｌｏｎ Ｊ等［２４］在对同样是产胶植物的银胶菊不定芽的
生根培养中采用了这种方法，最终获得了高达１００％的
生根率。段莹莹等［２５］用ＩＢＡ溶液对食用菊插穗基部进
行浸泡处理诱导生根，结果表明ＩＢＡ能明显促进生根，
用１５０ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ浸泡２ｈ处理的生根率最高，可由
７５％提高到１００％。董必慧等［２６］在菊花水插生根的研究
中采用不同浓度的ＩＢＡ溶液浸泡处理，发现经过浸泡处
理能明显缩短插穗生根时间，且在浓度为１００ｍｇ／Ｌ时
效果最佳，而浓度过高时则会抑制根的生长。容惠玲［２７］
在金钱树插条进行不同浓度ＩＢＡ溶液的浸泡处理发现，
１５０～２００ｍｇ／Ｌ的浓度最能促进生根。
在橡胶草的遗传转化研究中，Ｓｃｈｍｉｄｔ Ｔ等［７］采用
玉米素和ＮＡＡ对丛生芽进行诱导。但是由于玉米素价
格昂贵，而６－ＢＡ完全可以替代ＺＴ，故在该研究中，通过
对６－ＢＡ和ＮＡＡ进行不同水平的正交实验，最终获得了
叶片外植体直接诱导丛生芽的最适培养基，且不定芽的
诱导率高达９７．３％，在经过芽伸长培养后所获得的不定
芽完全可以满足生根的需要，从而为橡胶草的组织培养
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ｗａｓ ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ９７．３％；ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｓｈｏｏｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．０２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．４ｍｇ／Ｌ ＧＡ３；ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｒｏｏｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ １／２ＭＳ＋
０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，ｔｈｅ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｗａｓ １００％，ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｌａｎｔｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｇｒｅｗ ｗｅｌ ａｎｄ ｈａｄ ｈｉｇｈ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ
ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ，ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｋｏｋ－ｓａｇｈｙｚ Ｒｏｄｉｎ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｆｉｎａｌｙ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｋｏｋ－ｓａｇｈｙｚ Ｒｏｄｉｎ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ；ｒｏｏｔｉｎ
ｇ
葡萄春季管理关键技术
春季是葡萄萌芽展叶、枝蔓伸长及抽穗、开花结果的季节，加强春季葡萄管理，可提高葡萄产量和品质。
２月中、下旬至３月初萌芽期灌催芽水，施速效氮肥。此阶段有条件的果园应及时全园灌水，以确保萌芽整齐。
而此时正是花芽继续分化和新梢开始旺盛生长的时候，需要大量的养分，因此施用腐熟的人粪尿混掺０．２％尿素，这
次施肥量约占全年的１５％左右。
３月份至４月中、下旬定梢、抹芽、花穗处理和病害防治。经过冬季整修后，结果母枝上的冬芽通常都有７０％～
８０％萌发，此时应该注意留芽。留芽太多，易浪费养分，树势弱，不利于坐果；但若留芽太少，易促发枝蔓旺盛生长严重
的易落花落果，因此要注意抹芽定梢。
抹芽：通常一条结果母枝上有多个芽萌发时，每隔１５～２０ｃｍ留１芽，每条结果母枝留２～５条新梢，其余的从基
部抹除。抹芽时，一般抹除双芽中的无花穗芽或弱芽，一个芽眼只留一条梢。为确保产量，也可在新梢长至４～５片
叶时，视其第１卷丝是否带花穗而决定其去留，但这样浪费养分较多。
定梢绑蔓：所保留的新梢开花前在花穗以上留５片叶摘心，而无花的梢留８片叶摘心。摘心后，大量萌发副梢，
只留顶部１～２个副梢并且留２片叶反复摘心，其余的副梢全部抹除。同时要根据蔓的生长适时绑蔓。
花果穗的处理：为确保坐果率，通常用人工方法将花穗１／５的穗尖摘除，花期喷施０．３％硼肥加０．５％尿素。花后
５ｄ对于结果较多的果树，进行人工疏果，然后套袋保护。
（来源：农民日报）
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