全 文 ：· 方药纵横·
羊耳菊中总黄酮含量测定研究*
黄　勇　郑　林　李勇军　周　雯　王永林* * 　贵阳医学院药学院 (贵阳 550004)
　摘　要　目的:建立羊耳菊中总黄酮含量测定的方法。方法:对药典中总黄酮测定的方法进行改进 ,
以芦丁为对照品 ,采用比色法测定羊耳菊中总黄酮。结果: 以改进的比色法测定羊耳菊中
总黄酮 ,在 0. 094mg /m l～ 0. 47mg /ml范围内呈良好线性关系 (γ= 0. 9999) ,平均回收率
为 102. 9% , RSD为 2. 74%。 结论:改进方法稳定、可靠 ,测定结果更能反映客观实际 ,可
作为羊耳菊质量控制指标。
　主题词　菊科 /化学　黄酮 /分析　比色法
　　羊耳菊又名白牛胆、山白芷 ,为菊科植物羊耳菊 Inula
Cappa ( Buch. -Ham. ) DC.的新鲜或干燥全草 ,分布于我国西
南各省 ,民间常用于治疗感冒发热、咽喉肿痛等 [1 ]。 据文献报
道 [2] ,羊耳菊含有黄酮类及酚类成分 ,目前还未见有该药材总
黄酮含量测定方法的报道。 为确保临床用药安全、有效和质量
稳定可控 ,本研究在参考药典及文献中总黄酮测定方法的基础
上 [3, 4] ,对测定方法进行改进 ,采用比色法测定了羊耳菊中总黄
酮的含量 ,为药材的质量控制提供依据。
1　仪器与试药　 UV-2401分光光度计 (岛津 ) ; AE240分
析天平 (赛多利斯 ) ;芦丁对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批
号 0080-9705) ;亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠为分析纯 ;羊耳菊
药材 ,购自药材公司 ,由贵阳中医学院陈德媛教授鉴定 ,为菊科
旋覆花属植物羊耳菊。
2　方法与结果
2. 1　对照品溶液制备　以 60%乙醇制得含芦丁 0. 5mg /
ml的对照品溶液 ,备用。
2. 2　空白溶液和测定波长选择
2. 2. 1以试剂为空白溶液: 取羊耳菊供试品溶液 5ml,置
25ml容量瓶中 ,加 5%亚硝酸钠溶液 1ml,摇匀 ,放置 6min,加
10%硝酸铝溶液 1ml,摇匀 ,放置 6min,加氢氧化钠试液 10ml,
再加 30%乙醇至刻度 ,摇匀 ,放置 15min。 参照药典方法 ,以相
应试剂作为空白溶液 ,于 200～ 700nm波长范围扫描。同时依法
操作得同条件下芦丁对照品光谱图 ,经比较该法供试品光谱图
干扰较大 ,没有明显的吸收峰 ,对照品芦丁在 500nm处有最大
吸收 ,谱图特征与对照品差异较大 ,说明以试剂为空白不恰当 ,
不拟采用。
2. 2. 2以不加氢氧化钠试液的供试液为空白溶液: 取羊耳
菊供试品溶液 5ml,置 25ml容量瓶中 ,按照 2. 2. 1所示方法 ,自
“加 5%亚硝酸钠 1ml”起 ,制备供试品溶液。 另取供试品溶液
5ml,除不加氢氧化钠试液外 ,均依法操作 ,作为空白溶液 ,于
200～ 700nm波长范围扫描。 同时依法操作得同条件下芦丁对
照品光谱图 ,经比较供试品与对照品光谱特征接近 ,共同在
* 国家科技部科技支撑计划课题 [2006BAI06A01-03]
贵州省科学技术基金项目 [黔科合 J字 ( 2006) 2095号 ]
* * 通讯作者
520nm处有一圆钝吸收峰 ,故选择此空白扣除背景干扰。
2. 3　工作曲线制备　精密吸取对照品溶液 0、 1、 2、 3、 4、
5m l,分别置 25ml量瓶中 ,补加 60%乙醇 5、 4、 3、 2、 1、 0ml,同 2.
2. 2所示方法 ,制备梯度供试品溶液及空白溶液。 在 520nm波
长处测定吸收度 ,以吸收度为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,回归方程
为 C= 0. 4154A+ 0. 0149(γ= 0. 9999,浓度范围 0. 094mg /ml～
0. 47mg /ml)。
2. 4　供试品溶液制备研究　不同浓度乙醇和不同提取方
法比较:根据黄酮类化合物溶解于乙醇等有机溶剂 ,试验考察
了以不同浓度乙醇回流提取、不同提取方法的结果比较。 取羊
耳菊粉约 0. 4g,精密称定 ,置于磨口烧瓶中 ,精密加入各溶剂
50ml,称定重量 ,按表 1各法提取 ,以同一溶剂补足减失重量混
匀 ,滤过 ,照 2. 2. 2所示方法 ,制备供试品溶液及空白溶液 ,在
520nm波长处测定吸收度 ,以标准曲线求取溶液浓度 ,计算药
材含量。 结果见表 1,以 60%乙醇回流提取效率最高。
表 1　不同提取方法、不同浓度乙醇回流提取结果比较
提取方法
乙醇浓度 (% )
索氏提取
60
　 超声提取
60 40
　 回流提取
60 80 95
含量 (% ) 2. 34 　 2. 02 2. 27　 2. 57 2. 42 2. 29
　　索氏提取时间为 8h ,超声提取时间为 1h ,回流提取时间为 4h。
2. 5　重复性试验　按上述方法 ,以同一药材制备 5份供
试品溶液 ,连续测定 ,总黄酮平均含量为 2. 53% , RSD为 2.
15% ,表明本法重复性良好。
2. 6　回收率试验　称取已测定含量的羊耳菊药材 (总黄
酮含量 2. 53% ) 5份 ,精密加入芦丁对照品适量 ,按上述方法制
备 5份供试液 ,分别测定峰吸光度 ,计算结果列入表 2,芦丁的
平均回收率为 102. 9% , RSD= 2. 74%。
表 2　羊耳菊药材含量测定回收率试验
实验
次数
样品量
( mg )
含总黄
酮 ( mg)
芦丁加
入量 ( mg )
测得量
( mg )
回收率
(% )
平均回
收率 (% )
RSD(% )
1 201. 3 5. 093 5. 123 10. 134 98. 40 　 　
2 198. 3 5. 017 5. 123 10. 375 104. 6 　 　
3 204. 5 5. 174 5. 123 10. 399 102. 0 102. 9 2. 74
4 206. 2 5. 217 5. 123 10. 615 105. 4 　 　
5 203. 8 5. 156 5. 123 10. 495 104. 2 　 　
　　 2. 7　样品测定　按上述确定的羊耳菊总黄酮含量测定方
1391陕西中医 2008年第 29卷第 10期
法 ,分别测定不同批次药材含量 ,结果见表 3。
表 3　羊耳菊药材中总黄酮含量测定结果
批　号 药材来源 含量 (% )
20010908 贵州省药材公司 2. 53
20020430 贵阳市药材公司 2. 02
20020906 贵州省药材公司 3. 12
20030911 贵阳市药材公司 2. 773
　　 3　讨　论　 3. 1　对于空白溶液的选择本实验进行了详
细的对比研究 ,发现以不同的空白溶液进行测定 ,对照品芦丁
和羊耳菊溶液的光谱特征完全不一致 ,因此就不具备比较进而
求取准确含量的基础 ,可能是来自于样品溶液中的有色成分。
经典方法 [3 ]以溶剂为空白 ,忽略了这种差异。 加入氢氧化钠显
现酒红色是显色反应的关键步骤 (有色杂质不会有这种特征性
的变化 ) ,本研究以不加入氢氧化钠试液的样品作为空白 ,经光
谱扫描可见 ,对照品与供试品有相似的谱图 ,说明此改进方案
有效扣除了背景干扰 ,使总黄酮的测定专属性、准确度得到提
高 ,试验结果表明本法稳定可行。 因此本法可作为测定总黄酮
时 ,采用比色法有较大背景干扰时的借鉴。
3. 2　在测定过程中发现按照药典方法 [3, 4 ] ,测定样品在显
色剂加毕以水定容后 ,会出现细小絮状沉淀 ,造成测定结果不
稳定。 分析其原因 ,可能是由于提取液中的非极性物质含量过
高 ,加入水溶性试剂后析出造成。因此 ,将以水定容改为稀乙醇
( 30% ) ,增加溶液中非极性成分的溶解度 ,结果发现无沉淀产
生 ,溶液澄明稳定。
3. 3　本研究还对回流提取时间 、对照品和样品溶液稳定
性进行了考察。结果表明 ,药材提取 3h即可将羊耳菊药材中总
黄酮提取完全 ;显色后的芦丁对照品溶液和供试品溶液在
30min内稳定。
参考文献
[ 1]　贵州省药品监督管理局编著 .贵州省中药材、民族药
材质量标准 ( 2003年版 ) [ M ].贵州科技出版社 , 2003: 176.
[ 2]　中国药品生物制品检定所等编著 .中国民族药志 (第
二卷 ) [M ].北京: 人民卫生出版社 , 1990: 215-221.
[ 3]　王自军 ,薛　梅 ,边　丽 ,等 .白芥子中总黄酮和多糖
的微波提取与含量测定 [ J]. 陕西中医 , 2005, 26( 6): 582-583.
[ 4]　董明纲 ,郭春燕 ,张　力 ,等 .桃红四物汤中总黄酮提
取条件的研究 [ J]. 陕西中医 , 2006, 27( 8): 1000-1001.
(收稿 2008-02-20;修回 2008-05-10)
镇肝熄风汤的处方研究
吴　杰　马翠兰　南阳医学高等专科学校 (河南南阳 473061)
　摘　要　目的:探讨镇肝熄风汤处方组成的特点和临床应用的效果。方法:采用综合治疗法 ,在西医
基础治疗上运用中医辨证论治法。 结果:镇肝熄风汤与西医常规治疗有协同互补作用。
　主题词　镇肝熄风汤 /治疗应用　药物协同作用
　　 镇肝熄风汤是一个传统的经方 ,在现代临床应用当中结
合西药在中风病治疗中起到了一定的作用。中医学对肝阳上亢
证型中风病的认识是五志过极、心火暴盛 ,或素体阴虚 ,水不涵
木 ,复因情志所伤 ,肝阳暴动 ,引动心火 ,风火相煽 ,气血上逆 ,
心神昏冒 ,卒倒无知。 《素问玄机原病式· 火类》: “多因喜怒思
悲恐之五志有所过极而卒中者 ,由五志过极 ,皆为热甚故也” ,
《证治准绳》: “有热盛生风而为卒仆偏枯者…… ,当以河间法治
之” ,《绀珠经》云: “以火为本 ,以风为标 ,火暴甚 ,肾水必衰 ,肺
金既摧 ,肝木自旺 ,治法先以降心火为主……心火降则肝木自
平矣” ,《临证指南医案· 中风》:华岫云按: “今叶氏发明内风 ,
乃身中阳气之变动 ,肝为风脏 ,因精血衰竭 ,水不涵木 ,木少滋
荣 ,故肝阳偏亢 ,内风时起 ,治以滋液熄风 ,濡养营络 ,补阴潜
阳”。
1　镇肝熄风汤的组方特点　本方源于清代著名医家主张
中西医汇通 ,却仍以 “衷中”为主流的张锡纯所著《医学衷中参
西录》 ,专为因肝肾阴亏、肝阳暴张、阳化风动、血随气逆上冲所
致之症而设 ,认为该病本在肝肾阴亏 ,标在肝阳暴张 ,血随气逆
上冲于脑 .急则治其标 ,缓则治其本。 以镇肝熄风为主 ,平其亢
逆 ,辅以滋阴潜阳固本 ,重用牛膝、生赭石为君药 ,牛膝辛苦性
寒 ,归肝肾经 ,辛行苦降而活血祛瘀 ,引血下行 ,质润而滋肝肾 ;
生赭石苦寒 ,质重沉降 ,主入肝经 ,能重镇肝气 ,使气不逆则血
不逆上 ,同时肝气不逆不犯胃 ,噫气亦降 ;生龙骨 ,生牡蛎、生龟
板为水中之物 ,得阴气最厚而咸寒入心肝肾经 ,滋阴潜阳 ,平肝
安神 ,助君药滋潜制亢阳 ;玄参、天冬、白芍为阴柔性寒之品 ,玄
参、天冬甘苦微咸归肾经 ,助君药滋肾以制阳 ,白芍苦酸入肝 ,
助生赭石平抑肝阳。 肝阳上亢则肝气有余化火 ,佐茵陈、川楝
子、麦芽清泄肝阳有余 ,条达肝气郁结 ,甘草调和诸药 ,合麦芍
益胃和中 ,防重坠之品伤胃。
2　镇肝熄风汤药效学探讨　牡蛎中多种常量及微量元
素 ,对维护机体正常功能起重要作用 ,如钙离子可降低神经肌
肉兴奋而抑制抽搐 ,参与血液凝固 ,与止血有关 ,有抗实验性胃
溃疡作用。龙骨可促进血液凝固力 ,增强血管壁的致密性 ,阻
止白细胞及血清渗出血管外 ,减轻骨骼肌兴奋作用 ,有镇静 ,收
敛、固摄 ,止泻之效。茵陈的多种制剂及成分均有利胆作用 ,能
降低麻醉犬奥狄氏括约肌紧张度 ;对四氯化碳所致的大鼠肝损
害有保肝作用 ,能降血脂、扩冠、促纤溶、降压及利尿 ,对多种杆
菌、金黄色葡萄球菌、脑膜炎双球菌及流感病毒等有不同程度
的抑制作用。牛膝对实验小动物心脏、麻醉犬心肌有明显抑制
作用 ,降低血压 ,利尿消肿 ,有降低大鼠全血粘度 ,红细胞压积 ,
红细胞聚集指数的作用 ,有抗炎镇痛消肿作用 ,能提高机体免
1392 陕西中医 2008年第 29卷第 10期