全 文 ：收稿日期：2016-04-10
基金项目：承德市科学技术研究与发展计划项目（No.20157008）。
*通讯作者
2016年
第 4期
2016
№4
辽 宁 林 业 科 技
Journal of Liaoning Forestry Science＆ Technology
山杏（Prunus sibirica），蔷薇科杏属植物[1]，具有
耐旱、耐瘠薄、耐风沙、生长快等生物学特性，是我
国北方干旱山地丘陵区的先锋造林树种，也是固沙
保土、涵养水源、改善生态环境的优良乡土树种[2]。
山杏浑身是宝，苦杏仁可用于饮料、食品生产，还具
有止咳、清肺平喘等药用功能 [3]；杏仁油除可食用
外，还是高级润滑油，可作化妆品原料[4]。山杏叶可
以做饲料添加剂[5]；杏核壳是生产活性炭的上好原
料[6]；山杏壳活性炭加工过程中的副产品木醋液，又
称为植物酸，是极好的液体肥料和杀菌剂，广泛应
用于食品、医药、农林等多个领域[7]。山杏是三北地
区特有的经济林树种，集生态效益、社会效益和经
济效益于一体[8]。目前，我国山杏面积200余万hm2
（2012年，中国山杏产业网），据估算每年秋天山杏
落叶的产量为1.2亿 t。但总体来说，山杏叶的利用
率极低，我们前期研究发现，山杏叶含有五环三萜
类化合物、黄酮类化合物等生物活性物质[9-10]。为了
探讨山杏叶的抗氧化生物活性，采用浸提、过柱、梯
度洗脱和浓缩等方法制备山杏叶提取物，测定提取
物的DPPH自由基清除率、抑制羟自由基能力、总抗
氧化能力，以及黄酮和总酚的含量，研究山杏叶提
取物的抗氧化能力，以及与黄酮和总酚含量的相关
性，为进一步开发利用山杏叶提供基础数据。
1 材料与方法
1.1 材 料
山杏叶采自河北民族师范学院院内，分别于
山杏叶提取物体外抗氧化活性研究
张 婷 1，路 佳 1，李 洁 2*
（1.河北师范大学生命科学院，河北 石家庄 050024；2.河北民族师范学院，河北 承德 067000）
摘 要：为研究山杏叶提取物的抗氧化活性，采用浸提、过柱、梯度洗脱和浓缩，制备山杏叶提取
物，分别测定其DPPH自由基清除率、抑制羟自由基能力、总抗氧化能力、总酚和黄酮含量。结果表
明：40%乙醇提取物清除 DPPH自由基能力和抑制羟自由基能力均最强，分别为 88.11%和
174.25 U·mL-1，与黄酮和总酚含量呈显著相关和极显著相关性；而纯水提取物的总抗氧化能力最
强，与黄酮和总酚含量相关性不显著。
关键词：山杏叶提取物；DPPH；羟自由基；总抗氧化能力；总酚；黄酮
中图分类号：S792.110.7 文献标识码：A 文章编号：1001-1714（2016）04-0009-03
Research in vitro antioxidant activity of leaf extract of Prunus sibirica
ZHANG Ting1，LU Jia1，LI Jie2*
（1.Hebei Normal University，College of Life Science，Shijiazhuang 050024，China；2.Hebei Normal University for Nationalities，
Chengde 067000，China）
Abstract：In order to study the antioxidant activity of Prunus sibirica leaf extract，Prunus sibirica leaf extract by using column，gradi-
ent elution and enrichment，preparation，were determined in the extracts DPPH free radical clearance，inhibiting hydroxyl free radical
ability and total antioxidant capacity，and the content of total phenol and flavonoids，found that 40% ethanol extract to remove DPPH
free radicals and inhibition of hydroxyl free radical ability strongest，were 88.11% and 174.25 U·mL-1，and flavonoids and total phe-
nol content show strong and significant correlation；And the water extract of total antioxidant capacity，strongest 71.04 U·mL-1，and no
significant correlation between flavonoids and total phenol content.
Key Words：Prunus sibirica leaf extract；DPPH；Hydroxyl free radicals；total antioxidant capacity；total phenol；flavonoids
—— 9
2014和2015年9月选择６株生长势中庸的山杏树，
分别从东南西北４个不同的方向各采摘 50 g左右
山杏叶，采后45Ⅳ烘干备用。
1.2 试验试剂
植物总酚（Total Phenols，TP）试剂盒，苏州科铭
生物技术有限公司；总抗氧化能力（T-AOC）测定试
剂盒，南京建成生物工程研究所；羟自由基测定试
剂盒，南京建成生物工程研究所；二苯代苦味酰基
自由基（1，1-phenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH），梯希
爱（上海）化成工业发展有限公司；D101大孔吸附
树脂。
1.3 仪器设备
FA1204B电子天平（上海精密科学仪器有限公
司）；SYC-15C恒温水浴锅（南京桑力电子设备厂）；
RE-3000旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；
SHB-3循环水真空泵（郑州杜甫仪器厂）；1901紫外
可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.4 方 法
1.4.1 山杏叶提取物的制备
取 10 g山杏叶，粉碎成粗粉，用 60%的乙醇浸
泡提取 2次，乙醇用量分别为 100 mL、80 mL，每次
提取 2 h，过滤，合并 2次滤液，80 Ⅳ旋蒸浓缩至无
醇味，即为山杏叶提取物。然后上制备好的D101
大吸附孔树脂柱，依次用纯水、20%乙醇、40%乙醇、
60%乙醇、80%乙醇进行洗脱，洗脱体积为2倍柱体
积，收集提取物。将各提取物旋蒸浓缩至相同体
积，得山杏叶提取物。分 3次提取制备山杏叶提取
物，避光冷藏备用。
1.4.2 DPPH自由基清除能力的测定
参照李熙灿等方法 [11]。分别取山杏叶提取物
40 μL，加入6 mL DPPH自由基溶液，测定各管517 nm
的吸光度A，以各浓度乙醇代替样品作为对照测定
各管吸光度A0，并计算清除率。
清除率%=（A0-A）/A0×100%。
1.4.3 抑制羟自由基能力测定
采用羟自由基测定试剂盒测定山杏叶提取物
抑制羟自由基的能力。分别取山杏叶提取物50 μL
进行测定。规定每毫升样品在 37 Ⅳ下反应 1 min，
使反应体系中H2O2浓度降低1 mmol·L-1为1个抑制
羟自由基能力单位。将样品进行适当的稀释后，按
操作步骤进行测定。
1.4.4 总抗氧化能力测定
采用总抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒测定
山杏叶提取物总抗氧化能力。分别取山杏叶提取
物 0.2 mL进行测定。定义在 37 Ⅳ时，每分钟每毫
升样品使反应体系的吸光度（OD）值每增加 0.01
时，为1个总抗氧化能力单位。
1.4.5 黄酮含量测定
采用亚硝酸钠-硝酸铝结合法[12]测定。
1.4.6 总酚含量测定
将样品适当稀释后，采用植物总酚试剂盒测定
山杏叶提取物总酚含量。
总酚含量计算公式：
标准曲线：y=5.615x+0.0012，R2=0.9994
总酚含量（mg·g-1）=（A760-0.0012）÷5.615×V 反总÷
（V样÷V样总×W）
式中：V反总表示反应总体积，1 mL；V样表示反应
中样品体积，0.05 mL；V 样总表示加入提取液体积，
5 mL；W表示样品质量，g。
测定项目均重复3次，结果取平均值。
1.4.7 数据分析
采用SPSS软件进行相关性分析。
2 结果与分析
2.1 山杏叶提取物体外抗氧化活性
由表 1可见，不同山杏叶提取物其DPPH自由
基清除率、抑制羟自由基能力和总抗氧化能力不
同。DPPH自由基清除率和抑制羟自由基能力基本
趋势一致，从强到弱依次为：40%乙醇提取物＞20%
乙醇提取物＞纯水＞60%乙醇提取物＞80%乙醇提
取物；其中 40%乙醇提取物DPPH自由基清除率最
强，其次是20%乙醇提取物，80%乙醇提取物DPPH
自由基清除率最差，仅 4.07%。40%乙醇提取物与
20%乙醇提取物抑制羟自由基能力相当，其次为纯
水提取物，60%乙醇提取物和 80%乙醇提取物抑制
羟自由基能力相对较弱。
山杏叶提取物总抗氧化能力从强到弱为纯
水＞20%乙醇提取物＞60%乙醇提取物＞40%乙醇
提取物＞80%乙醇提取物。
2.2 山杏叶提取物总酚和黄酮含量
由表 2可见，40%乙醇提取物的总酚含量和黄
酮含量最高，其次是20%乙醇提取物，80%乙醇提取
辽 宁 林 业 科 技第 4期 2016年
—— 10
张 婷等：山杏叶提取物体外抗氧化活性研究第 4期 2016年
表2 山杏叶提取物的总酚和黄酮含量 mg·g-1
表1 山杏叶提取物体外抗氧化活性
物总酚含量和黄酮含量最低。与其DPPH自由基清 除率和抑制羟自由基能力基本趋势一致。
指 标
清除DPPH自由基能力/%
抑制羟自由基能力/U·mL-1
总抗氧化能力/U·mL-1
20%乙醇
85.31±1.09
173.77±1.56
55.80±0.78
40%乙醇
88.11±1.16
174.25±1.43
28.12±0.23
60%乙醇
38.19±0.87
63.23±0.88
53.16±0.67
80%乙醇
4.07±0.09
42.10±0.37
6.96±0.11
纯水
72.28±1.13
90.69±1.21
71.04±1.02
指 标
总 酚
黄酮类化合物
20%乙醇
28.08±0.26
26.77±0.19
40%乙醇
30.58±0.30
35.96±0.23
60%乙醇
7.22±0.06
3.92±0.05
80%乙醇
2.08±0.03
1.22±0.02
纯水
17.25±0.21
17.46 ±0.11
2.3 山杏叶提取物抗氧化能力与黄酮、总酚含量相
关性分析
为进一步确定黄酮、总酚含量与抗氧化能力的
关系，将试验结果用SPSS软件进行相关性分析，结
果见表3。黄酮类化合物含量与DPPH自由基清除
能力显著相关（P<0.05），与抑制羟自由基能力极显
著相关（P<0.01）；而总酚含量与黄酮类化合物相
似。总抗氧化能力与总酚含量的相关系数为
0.304，与黄酮含量的相关系数为 0.194，t检验显著
性概率数据表明两者显著不相关。
3 结论与讨论
采用乙醇浸提法，将山杏叶中的主要成分溶解
出来，通过浓缩、过柱和不同浓度乙醇溶液梯度洗
脱，将山杏叶浸提物中主要成分依据溶解性不同进
行初步分离，制备 5种山杏叶提取物。分别测定不
同山杏叶提取物清除DPPH自由基能力、抑制羟自
由基能力和总抗氧化能力，发现山杏叶提取物清除
DPPH自由基能力与总酚含量和黄酮含量存在显著
相关，而抑制羟自由基能力与总酚含量和黄酮含量
呈极显著相关，其中清除DPPH自由基能力、抑制羟
自由基能力与总酚含量呈相关性，与陆广念等[13]测
定不同蔬菜的结果一致；而总抗氧化能力总酚和黄
酮含量之间相关性不显著。不同山杏叶提取物中，
40%乙醇提取物的DPPH自由基清除率和抑制羟自
由基能力最强，其总酚含量和黄酮含量也最高，说
明总酚和黄酮是其中的主要抗氧化物质；而山杏叶
提取物的总抗氧化能力表现为纯水提取物最强，推
测可能是总酚和黄酮之外的其它亲水性物质，对于
山杏叶提取物抗氧化物质及活性研究尚需进一步
进行。本研究结果表明，40%乙醇以下的山杏叶提
取物综合抗氧化活性较强，为山杏叶提取物抗氧化
剂的开发提供了基础数据。
参考文献：
[1] 俞德浚.中国植物志：38卷[M].北京：科学出版社，1986：27.
[2] 李洁，李旺，彭艳芳，等.野生山杏资源的综合开发和利用
[J].河北林业科技，2009，（3）：38-40.
[3] 孟辉.山杏资源概况及国内外研究进展[J].中国林副特产，
2009，（4）：100-101.
[4] Libing Wang. Properties of Manchurian apricot（Prunus
mandshurica Skv.）and Siberian apricot（Prunus sibirica L.）
seed kernel oils and evaluation as biodiesel feedstocks[J].
Industrial Crops & Products，2013，50：838-843.
[5] 李洁，于文清，唐冠敏，等.山杏叶发酵物对蛋鸡生产性能
和血液生化指标的影响[J].饲料研究，2011，（12）：75-77.
[6] 齐高强，赵忠，马希汉，等.山杏壳制备活性炭的最佳工艺
研究[J].林产化工，2013，（4）：49-52.
[7] 施琳.山杏壳木醋液有效化学成分及生物活性研究[D].
杨凌：西北农林科技大学，2013：3-4.
[8] 高阳，王义田，秦桂芳.阜新地区发展山杏经济林的探讨
[J].辽宁林业科技，1994，（5）：45-47.
[9] 李洁，高阳，刘云凤.不同树木落叶总三萜含量的测定和
比较分析[J].河北林业科技，2011，（2）：6-8.
[10] 彭艳芳，李洁，李旺，等.山杏叶桦木酸、齐墩果酸和熊果
酸的研究[J].河北林果研究，2012，27（2）：157-160.
[11] 钟远声，李熙灿，谢学明，等.荜茇清除DPPH自由基能
力的研究[J].辽宁中医药大学学报，2007，9（1）：144-145.
[12] 何书美，刘敬兰.茶叶中总黄酮含量测定方法研究[J].分
析化学，2007，35（9）：1365-1368.
[13] 陆广念，朱志雄，宋晓敏.常见蔬菜抗氧化活性与总酚含
量的研究[J].食品科技，2009，34（9）：68-71.
（责任编辑：张素清）
表3 山杏叶提取物抗氧化能力与黄酮、总酚含量相关性
注：*表示显著相关（P<0.05），**表示极显著相关（P<0.01）。
指 标
总酚含量
黄酮类化合物含量
相关系数
DPPH自由基
清除能力
0.954*
0.920*
抑制羟
自由基能力
0.982**
0.959**
总抗氧化
能力
0.304
0.194
—— 11