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　　由方差分析结果可知 ,炒炙温度对黄芪甲苷的含量
具有显著影响 ,炒炙时间与投料量对黄芪甲苷含量无显
著影响 ,结合直观分析 ,确定黄芪蜜炙的最佳炮制工艺
是炒炙温度 100 ℃,炒炙时间 15 min ,投料量 16 kg 。
3.4　蜜炙黄芪性状　结果见表 4。
表 4　蜜炙黄芪性状
实验号 　　　　　性 状
饮片 圆片状 ,切面黄白色 ,具放射性纹理 ,气微 ,味微甜 ,嚼之有豆腥味。
1 皮黄棕色 ,片面褐色 ,气微香 ,味甜 ,略有焦苦味。断面黄色。
2 棕褐色 ,气焦香。味焦苦略甜。残渣黑褐色。
3 同1和 2。
4 黄色 ,气微香 ,味甜 ,略有豆腥味 。
5 浅黄色 ,气微香 ,味甜 ,略有豆腥味。
6 黄棕色 ,口嚼酥脆 ,味甜 ,略有焦苦味。
7 浅黄色 ,折断面黄白色 ,黏手 ,气微 ,味甜 ,嚼之有豆腥味。
8 表面黄色 ,折断面淡黄色 ,略黏手 ,味甜 ,嚼之略有豆腥气
9 色比 8略深 ,折断面浅黄色 ,略黏手 ,味甜 ,嚼之略有豆腥气
手工炒炙 表面浅黄色 ,略带黏性 ,味甜 ,嚼之略有豆腥气
标准[ 1] 浅黄色或黄色 ,具蜜香气 ,味甜 ,略带黏性 ,嚼之微有豆腥气
　　从性状来看 ,实验 4 ,5 , 8和 9与药典炙黄芪项下
的性状标准基本一致 ,也与传统手工炮制情况相符 ,
按炒炙温度 100 ℃、炒炙时间 15 min 、投料量 16 kg
炒炙的黄芪虽然黄芪甲苷含量较高 ,但炮制品性状较
差 ,粘手 、豆腥气味较浓 ,与传统手工炮制和炮制规范
中的标准不符;可以通过增加炒炙时间来改善性状。
综合考虑 ,最终确定黄芪蜜炙的最佳炮制工艺是炒炙
温度为 100 ℃,炒炙时间 25 min ,投料量 16 kg 。
3.5　验证实验　取黄芪饮片按照最终优选出的最佳
蜜炙工艺即炒炙温度为 100 ℃、炒炙时间 25 min 、投
料量 16 kg 进行炮制 ,结果测定 3批炮制品黄芪甲苷
的含量为 0.210 7%,0.208 6%和 0.217 2%,RSD值
为 2.11%。3批炮制品表面黄色 ,略粘手 ,具蜜香气 ,
味甜 ,嚼之略有豆腥气 ,符合标准要求 ,与传统手工炒
炙样品一致。
4　结论
①由正交实验及方差分析结果可知 ,炒炙温度对
黄芪甲苷的含量具有显著影响 ,炒炙温度的影响大于
投料量和炒炙时间。与宋崎[ 7] 、刘萍[ 8] 研究认为温度
是蜜炙黄芪的主要影响因素的结果相一致。
②通过 L9(34)正交实验 ,以炮制品黄芪甲苷的
含量为考察指标 ,并进行机械化炮制品与传统手工炮
制品外观性状对比研究 ,综合考察后我们得到最佳机
械化炮制工艺为炒炙温度为 100 ℃、炒炙时间 25
min 、投料量 16 kg ,所得炮制品含量较生黄芪饮片有
明显提高 ,通过验证实验 ,得到的 3 批炮制品含量稳
定 ,性状符合标准。
③应用 XCYD-750自控温旋盖电热炒药机蜜炙
黄芪 ,操作简单 ,并且降低了劳动强度 , XCYD-750
自控温旋盖电热炒药机应用于蜜炙黄芪饮片的生产 ,
可以得到质量均一稳定的合格炮制饮片。本实验为
蜜炙黄芪饮片工业化生产提供了理论依据。
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(收稿日期:2010-03-19)
毛头牛蒡子醇提物抗氧化活性研究
张浩科1 ,葛　亮1 , 2 ,田树革1 , 2＊(1.新疆医科大学中医学
院 , 新疆 乌鲁木齐 830011;2.新疆名医名方与特色方剂学重
点实验室 , 新疆 乌鲁木齐 830011)
摘要:目的　研究毛头牛蒡子提取物的抗氧化活性。方法　
将毛头牛蒡子乙醇提取物采用溶剂萃取法 , 分成极性不同的
4 个部分 , 并采用 DPPH 法和邻苯三酚自氧化法测定各部分
的清除 DPPH 自由基和超氧阴离子自由基的能力 , 以测定其
抗氧化活性 , 并与抗坏血酸进行比较。结果　清除 DPPH 自
由基能力大小为:抗坏血酸>醋酸乙酯部分>正丁醇部分>
氯仿部分>95%乙醇部分 ,清除超氧阴离子自由基的能力以醋
酸乙酯部分、正丁醇部分为好 , 其他部分认为尚无清除超氧阴
离子自由基的活性。结论　毛头牛蒡子醇提物醋酸乙酯部分
和正丁醇部分具有一定的抗氧化活性 ,有进一步研究的价值。
关键词:毛头牛蒡子;DPPH 自由基;超氧阴离子自由基;抗氧
化活性
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2010.05.015
中图分类号:R282　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2010)05-0346-03
基金项目:新疆维吾尔自治区重点实验室科研开放课题基金
(No.XJDX0910-2009-05)
作者简介:张浩科 , 男 ,硕士研究生
＊通信作者:田树革 ,男 , 教授 ,硕士生导师
　　毛头牛蒡子 , 维吾尔语名为“可热可孜乌拉盖” ,
菊科二年生草本植物牛蒡属植物毛头牛蒡(Arctium
tomentosum Mill.)的干燥成熟果实 ,性凉 ,味辛苦 ,性
寒 ,归肺胃二经[ 1-2] ,主要有木脂素 、挥发油 、酚羟基类
及硫炔类化合物等 ,还含有少量生物碱 、甾醇和维生
素[ 3] ,具有疏散风热 、宣肺透疹 、解毒利咽等功效 ,具
有抗衰老 、保肝 、抗肿瘤 、降血糖等药理学作用[ 4] 。研
究表明 ,衰老 、癌症及炎症等疾病与体内脂质过氧化
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和自由基有直接关系 ,自由基可与生物体内的许多物
质 ,如脂肪酸 、蛋白质等作用 ,夺取它们的氢原子 ,造
成相关细胞的结构与功能的破坏 ,更重要的是其氧化
产物和中间产物会破坏生物膜 、酶 、维生素 、蛋白质及
活细胞功能[ 5] ,因此探讨其消除自由基的作用具有实
际意义。本实验对毛头牛蒡子中醇提物不同极性部
位的抗氧化活性进行了研究。
1　仪器与材料
1.1　仪器 　GBC Cintra-40 紫外可见分光光度计
(澳大利亚 GBC 科学仪器公司);XS-105万分之一电
子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。
1.2 　药材 　毛头牛蒡子(Arct ium tomentosum
Mill.)采集于新疆阿勒泰地区(经新疆医科大学中医
学院李永和主任药师鉴定)。
1.3　试剂　DPPH 自由基(2 ,2-二苯代苦味酰基苯
肼基), Sigma 公司生产 ,批号 29802KI;t ri s-缓冲液
(三羟基甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液),上海生工生物
工程有限公司 ,批号 0818S02;邻苯三酚 ,天津市福晨
化学试剂厂 ,批号 20090804;抗坏血酸 ,天津天新精
细化工开发中心 ,批号 20090901 。
1.4　样品的制备 　取毛头牛蒡子粗粉 4 624 g ,石
油醚脱脂 ,按体积比 1 ∶8 加 95%乙醇回流提取 4
次 ,过滤 ,合并滤液 ,依次用氯仿 、醋酸乙酯 、正丁醇 、
乙醇萃取并回收溶剂 ,冷冻干燥 ,得到各部位质量分
别为 650.00 , 223.82 ,64.20和 96.26 g 。精密称取干
燥至恒重的氯仿部位 、醋酸乙酯部位 、正丁醇部位 、乙
醇部位各 200 mg ,溶于10 mL 95%乙醇中 ,配制成质
量浓度为 20 g ·L-1的 4种样品溶液备用。
2　方法
2.1　DPPH 法抗氧化活性分析　DPPH 自由基是
一种很稳定的以氮为中心的自由基 ,在 517 nm 处有
强吸收 ,其乙醇水溶液呈很深的蓝紫色 ,加入受试后 ,
517 nm 处可以动态监测 DPPH 自由基被清除的效
果 ,这种效果通常用对 DPPH 的清除率来表示。清
除率越大 ,DPPH 自由基清除越彻底 ,受试物的抗氧
化活性越强[ 6-7] 。计算清除率的公式为:
清除率=(A -A样)
A0
×100%
其中 , A0为未加样 DPPH 溶液的原始吸光度;A
为加样后 DPPH 液的吸光度;A样为样品溶液自身的
吸光度。
公式中引入 A0是为了消除样品溶液本身颜色对
实验结果的影响 。A 0的测定:用移液器取 2.0 mL
95%乙醇 ,再取 2.0 mL 已配制好的 DPPH 溶液(0.2
mmo l·L-1),充分振摇。稍后 ,在 517 nm 处测定吸
光度 ,为 A0 。A 样的测定:用微量移液管精密移取这 4
种样品溶液各 10 ,100 ,200 ,300 , 400 , 500 和 600 μL ,
加入 95%乙醇配成 4 mL 的溶液 ,混合 ,振摇 ,在 517
nm 处测定吸光度 ,即 A样 。A 的测定:用微量移液管
精密移取样品溶液 10 , 100 ,200 , 300 , 400 ,500和 600
μL ,各加入2.0 mLDPPH 溶液(0.2 mmo l·L-1),再
加入 95%乙醇配成 4 mL 的待测溶液 ,混合 ,充分振
摇 ,在 37 ℃水浴避光静置 30 min ,在 517 nm 处测定
吸光度为 A 。应用 SPSS13.0软件进行统计分析 ,采
用 t检验 ,数据用 x ±s表示 。
2.2　邻苯三酚自氧化法抗氧化活性分析　在1-4号比
色皿中分别加入3.0 mLpH值为8.2的 0.05 mol·L-1
(含 2 mmo l·L -1 EDTA 溶液)的 Tris溶液 ,然后在
1号比色皿中加再 0.1 mL 样品溶剂 ,在 2号比色皿
中加入 0.1 mL 样品溶剂和 0.1 mL 0.01 mol· L-1
的邻苯三酚溶液 ,迅速摇匀 ,以 1号比色皿调零测 2
号比色皿的吸光度 A0 。在 3号中加入 0.1 mL样品溶
液和 0.1 mL 0.01 mol·L-1的盐酸溶液 ,在 4号比色皿
中加入 0.1 mL 样品溶液和0.1 mL 0.01 mol·L-1的邻
苯三酚溶液 ,迅速摇匀 ,以 3号比色皿溶液调零测 4
号比色皿溶液的吸光度 A [ 8-9] 。
经过预实验 ,以上反应在 0 ～ 4 min 内 ,在 322
nm 处的吸光度也随反应速率呈线性增加 ,但由于抗
氧化剂的存在 ,邻苯三酚氧化成半醌和醌类氧化产物
的反应明显受到抑制 ,使得对应的吸光度受到明显的
抑制 ,即抗氧化剂清除反应中产生的超氧自由基有效
地抑制了邻苯三酚的自氧化反应。根据这一原理 ,通
过公式:
清除率=(ΔA1/ Δt-ΔA2/ Δt)ΔA1/ Δt ×100%
可计算出抗氧化剂对超氧自由基的清除率。式
中 ΔA1/ Δt为邻苯三酚自氧化速率 , ΔA2/ Δt为加入抗
氧化剂后邻苯三酚的反应速率 。
3　结果
3.1　毛头牛蒡子醇提物不同极性萃取部位 DPPH
法的抗氧化活性　用 DPPH 法进行抗氧化能力检
测 。各部位清除率均随浓度的增加 ,而不断增强。其
中 ,正丁醇部位不同浓度的清除率均最高 ,即抗氧化
能力最强 ,清除能力 DPPH 自由基顺序由大到小依
次为正丁醇部位>醋酸乙酯部位>氯仿部位>乙醇
部位 ,结果详见表 1。
表 1　毛头牛蒡子醇提物不同极性萃取部位清除 DPPH
自由基能力测定结果( x±s , n=2)
质量浓度
/g ·L-1)
清除率/ %
氯仿 醋酸乙酯 正丁醇 95%乙醇 抗坏血酸
0.012 5 16.3±0.95 18.2±0.24 20.3±0.11 16.6±0.41 25.6±1.58
0.125 0 24.2±0.68 29.2±0.56 33.2±0.33 19.9±0.58 64.1±2.11
0.250 0 30.0±1.65 35.9±0.65 45.2±2.18 22.0±2.62 70.1±2.35
0.375 0 28.9±1.85 38.7±0.85 54.9±1.68 22.3±1.55 74.1±1.65
0.500 0 36.0±2.35 41.3±1.02 57.1±1.19 27.0±1.38 74.5±1.36
0.625 0 34.6±1.65 44.6±1.12 61.9±0.80 28.1±1.69 75.0±2.58
0.750 0 37.7±1.25 46.6±0.96 64.7±0.28 30.2±2.05 75.3±0.68
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3.2　毛头牛蒡子醇提物不同极性萃取部位邻苯三酚
法清除率曲线　由图 1可以看出毛头牛蒡子醇提物
不同极性萃取部位对超氧自由基清除能力随浓度的
增加而增大 ,且醋酸乙酯部位 、正丁醇部位效果明显 ,
详见图 1。
图 1　不同极性萃取部位对超氧阴离子自由基清除率
3.3　毛头牛蒡子不同极性萃取部位清除 DPPH 、超
氧阴离子自由基 IC50 　毛头牛蒡子醇提物不同极性
萃取部位清除 DPPH 自由基 、超氧阴离子自由基
IC50值比较 ,顺序从大到小依次为:95%乙醇部位>
氯仿部位>正丁醇部位>醋酸乙酯部位 。详见图 2 。
图 2　不同极性萃取部位清除 DPPH自由基 、
超氧阴离子自由基 IC50比较
4　讨论
毛头牛蒡子醇提物体外抗氧化实验表明 ,毛头牛
蒡子醇提物的氯仿 、醋酸乙酯 、正丁醇 、95%乙醇 4个
不同极性部位均具有一定的抗氧化活性 ,其中以醋酸
乙酯部位和正丁醇部位活性较强 ,在 DPPH 自由基
生成体系中 ,抗氧化活性依次为:正丁醇部位>醋酸
乙酯部位>氯仿部位>95%乙醇部位。在超氧阴离
子自由基生成体系中 ,抗氧化活性次序为:醋酸乙酯部
位>正丁醇部位>氯仿部位>95%乙醇部位。在 DP-
PH 自由基清除体系中 ,醋酸乙酯部位 IC50为0.765 6 g
·L-1 ,正丁醇部位 IC50为 0.407 3 g · L-1 ,在超氧阴
离子自由基清除体系中 ,醋酸乙酯部位 IC50为 0.201 5
g ·L-1 ,正丁醇部位 IC50为 0.394 2 g ·L-1 。这与毛
头牛蒡子醇提物的不同极性部位中所含主要抗氧化成
分的种类不同有关。研究表明 ,醋酸乙酯部位和正丁
醇部位具有一定抗氧化活性 ,而且在醇提物中萃取率
较高 ,因此可将其作为研究重点 ,进一步分离其有效
活性成分 ,确定毛头牛蒡子抗氧化活性的物质基础 。
参考文献:
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(收稿日期:2010-05-09)
杜仲药材含量测定方法的研究
李　晔1 ,刘 　峰2 ,李彤晖1 ,辛永洁1(1.陕西省中医药
研究院 , 陕西 西安 710003;2.咸阳步长制药有限公司 , 陕西
西安 710075)
摘要:目的　对 2005 年中国药典中杜仲药材的含量测定方法
进行了简化实验性研究 , 并在此基础上探讨杜仲的最佳测定
方法。方法　用 H PLC 法测定松脂醇二葡萄糖苷的含量为指
标 , 采用多因素筛选药物的简便提取方法 , 并进行了方法学验
证。结果　用体积分数 50%的甲醇超声直接提取药材即可达
到测定目的。结论　杜仲药材可用甲醇作为提取溶剂 , 超声
处理 40 min , 以乙腈-0.5%甲酸的水溶液(12∶88)作流动相
测定含量 , 方法简便实用。
关键词:杜仲;松脂醇二葡萄糖苷;测定方法
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2010.05.016
中图分类号:R927.2　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2010)05-0348-03
基金项目:国家十一五科技支撑计划项目(编号:2006BAI06A
07-01)
　　杜仲为杜仲科植物杜仲 Eucommia ulmoides
Oliv.的干燥树皮[ 1] ,为我国特有经济树种 ,是常用的
滋补药材[ 2] ,具有补肝肾 、强筋骨 、安胎 、降压的功
效[ 3] ,文献[ 4]记载“久服 ,轻身耐老” 。随着杜仲药理
研究的深入 ,证明杜仲有治疗高血压和防癌抗癌的显
著效果 ,杜仲等系列产品的研究开发成功 ,其经济价
值剧增[ 5] 。但目前 2005年版中国药典一部规定 ,杜
仲药材的含量测定方法较为复杂 ,前处理过程繁琐 、
费时。本实验进行对比验证 ,以确定杜仲药材的最佳
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