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第 1 0卷 第 6 期
2008 年 6 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 10 No. 6
Jun .，2008
火绒草，Leontopodium leontopodioides （Willd.）
Beauv是菊科火绒草属植物的一种。我国主要分布
于东北、西北、华北及西南地区，青藏高原，多生于典
型草原、山地草原及草原砂质地，野生资源极为丰富
[1]。有研究报道火绒草中含有酚酸类、甾类、黄酮类
化合物。火绒草味微苦，性寒。入肾、膀胱二经。具
有疏风解表、清热解毒、凉血止血、益肾利水、消炎利
尿之功效。主治急(慢)性肾炎、尿道炎、蛋白尿、血
尿等多种肾脏疾病，以及风热感冒、创伤出血等；蒙
医用于肺热咳嗽、支气管炎的治疗；藏医用于治疗
流行性感冒、瘟病时疫、矿物药中毒、砒霜中毒、肉
瘤、疮疖疔毒、出血，亦可作艾灸用。另有研究报道
火绒草具有降血糖的作用[2]。
火绒草为民间常用中药材，我们实验室早在
九几年就开始对火绒草药材进行研究，尤献民等
从火绒草中分离出火绒草多糖，并测定其含量为
4.57%~8.39%[4]。目前，指纹图谱已成为国际公认的
控制中药与天然药物质量的有效手段，但火绒草药
材的指纹图谱研究未见报道，本文采用反相HPLC
法，初步建立火绒草药材的HPLC指纹图谱，为火绒
草药材的质量控制提供一定的科学依据，作为今后
对火绒草进一步研究的基础。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪：四元泵、在线脱
气机、柱温箱、DAD检测器（美国Agilent公司）。
乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其他试剂
均为分析纯；样品编号火绒草为（S1~S10），来源分
别为S1、S2、S3、S4、S5、S6来源于沈阳东陵地区，
S7、S8来源于辽宁千山，S9、S10来源于沈阳新城子
地区；
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色 谱 柱：Ultimate XB-C18 5μm，
4.6mm×200mm（美国月旭公司）；流动相AB：0.5％
冰醋酸，流动相B：甲醇：乙腈：四氢呋喃（3：2：1），
梯度洗脱条件见表1；流速：1mL/min；DAD检测器，
检测波长：325nm；柱温：20℃；进样量：10μl，谱图
记录60min。
表1 梯度洗脱条件
时间（min） A（%） B（%）
0 85 15
15 70 30
35 68 32
42 64 36
60 45 55
2.2 供试品溶液的制备 各取干燥的火绒草药
材1g，剪碎，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚
（30~60℃）提取1h，药渣挥干溶剂，置50mL锥形瓶
中，加50％乙醇25mL，称定重量，回流提取2h，用
50％乙醇补足重量，经0.45μm滤膜滤过，作为供试
火绒草HPLC指纹图谱初步研究
姜 鸿，王光函，邸子真，邹桂欣，尤献民
（辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳 110034）
摘 要：目的：采用高效液相色谱法(HPLC)建立火绒草的指纹图谱，为火绒草的质量控制提供标准。方法：选
用Ultimate XB-C18（5μm，4.6mm×200mm）色谱柱；流动相：A.甲醇-乙腈-四氢呋喃（3∶2∶1），B.0.5%冰醋酸
溶液；柱温：20℃；流速：1mL/min；记录时间60min；二级管阵列检测器，检测波长为325nm；采用药典委员会的色
谱指纹图谱相似度计算软件（2004A版）进行分析。结果：确定了火绒草有15个共有峰，图谱中主要色谱峰分离较好，
达到指纹图谱要求，可有效地分析和评价药材的质量。结论：所建立的指纹图谱特征性及专属性强，方法稳定可靠、
简便快捷，适用于火绒草药材的质量控制。
关键词：火绒草；HPLC；指纹图谱
中图分类号：R284.1 文献标识码：B 文章编号：1673-842X (2008) 06- 0196- 02
Study on Fingerprint of Leontopodium by HPLC
JIANG Hong，WANG Guang-han，DI Zi-zhen，ZOU Gui-xin，YOU Xian-min
（Liaoning Academy of TCM，Shenyang 110034，Liaoning,China）
Abstract：Objective：To establish Fingerprint of Leontopodium by HPLC, to provide a method of
quality control for Leontopodium.Methods：The column of Ultimate XB-C18 （5μm，4.6mm×200mm）was
selected. The mobile phase consisted of A: methanol-acetonitrile-tetrahydrofuran (3:2:1), B: 0.5% glacial
acetic acid. The column temperature was 20℃ , and the flow rate Was 1 mL·min-1, and recording time was
60 min. The DAD detection wavelength was at 325nm. The data calculation was performed with similarity
evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM (Version 2004A).Results：The result showed that
15 peaks were common. The constituents distribution information provided quality information for accessing
medicinal materials, a good fingerprint of Leontopodium were obtained. Conclusion：This method with good
characteristics and specificity can be used in the quality control of Leontopodium.
Key Words：Leontopodium；HPLC；Fingerprint
收稿日期：2008-03-11
作者简介：姜鸿（1975-），男，辽宁铁岭人，助理研究员，学士，研究方向：中药质量标准。
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2008.06.198.jiangh.097
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品溶液。
2.3 方法学考察 （1）精密度试验：取同一供试品
溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，记录指纹图
谱。结果表明，各共有峰相对保留时间的RSD不大
于0.2％，相对峰面积的RSD不大于0.2％。
（2）重复性试验：精密称取干燥的同一火绒草
药材6份，每份1.0 g，按“2”项下制备供试品溶液，
在上述色谱条件下进行HPLC分析，记录指纹图谱。
结果表明，各共有峰相对保留时间的RSD不大于
0.5％，相对峰面积的RSD不大于1.0％。
（3）稳定性试验：取同一供试品溶液分别在0，
2，4，8，12，24 h进样分析，记录指纹图谱。结果表明，
各共有峰相对保留时间的RSD不大于1.0％，相对峰
面积的RSD不大于1.0％，说明供试品溶液在24h内
稳定。
2.4 指纹图谱的建立 （1）不同批次火绒草指纹图
谱比较：按“2”项下制备供试液[5-6]，记录色谱图，共
考察了120min，发现在60min后没有峰出现。10批
次火绒草药材测定结果见图1。根据结果，比较各
批样品色谱图，确定了15个共有峰，见图2，其中7
号峰为参比峰。共有峰中，峰面积占共有峰总面积
的5~10%有5个，分别是2、9、10、11和14号峰，峰面
积占共有峰总面积的10%以上的有3个，分别是1、7
和13号峰。
图1 10批火绒草药材HPLC图
图2 火绒草药材HPLC图
（2）指纹图谱的相似度计算：采用药典委员会
的色谱指纹图谱相似度计算软件（2004A版），依据
10批不同批次及来源火绒草药材的色谱指纹图谱
建立共有模式，计算样品与共有模式之间的相似度，
相似度计算结果见表2。
3 讨 论
本实验通过一系列筛选，建立了较好的色谱洗
脱条件，各色谱峰之间分离度良好，达到指纹图谱
的要求，所得到的火绒草的HPLC指纹图谱重现性、
精密度和稳定性均良好。运用DAD二极管阵列检
测器，采集190~400nm的三维HPLC UV联用图，发
现火绒草药材供试品溶液在325nm下有最大吸收波
长，无色谱峰丢失现象，综合考虑，选择325nm波长
作为火绒草药材指纹图谱检测波长。不同批号火
绒草药材所含各有效成分基本相同，但是各成分含
量略有差异，如果要保证药品的一致性，应注意药
材产地和采收时间。7号峰是稳定存在于火绒草药
材中的一个活性成分，重现性较好，分离度较好，含
量较高，因此选择7号峰为指纹图谱的参照物。根
据此方法确定了其中15个共有峰，并利用相似度软
件对火绒草指纹图谱进行匹配，结果表明10批火绒
草在整体上相似，因此以这10批样品的相对峰面积
和相对保留时间的均值建立了模式图谱，可初步用
于火绒草的真伪鉴别和质量评价。实验中比较了
水、50%乙醇、70%乙醇、甲醇等不同提取溶液及回
流、超声等不同提取方法和不同提取时间，结果表
明50%乙醇回流提取2h，效果最佳。而且实验中发
现，对于叶绿素较高的样品，先用石油醚（30~60℃）
提取不影响共有峰，但柱压会降低一些，对色谱
柱可起到保护作用。实验中试用了Eclipse XDB-
C18(Agilent)等C18色谱柱，各共有峰的出峰顺序没
有变化。为了得到较理想的分离效果，发现流动相
B用甲醇和四氢呋喃较好，但当A与B不同比例混
合时，柱压上升较快，原因是甲醇与水混合后黏性较
大，尤其是比例接近1：1时，黏性最大。为了保护色
谱仪和色谱柱，在B相中加入一定比例乙腈，柱压降
低很多，且分离效果更好。实验中对柱温也作了考
查，发现柱温对峰的分离和各共有峰的出峰顺序都
有很大影响，综合考虑，最后决定柱温采用20℃。
表2 不同批次火绒草指纹图谱相似度计算结果
样品号 相似度 样品号 相似度
S1 0.987 S6 0.979
S2 0.985 S7 0.951
S3 0.971 S8 0.969
S4 0.975 S9 0.972
S5 0.996 S10 0.961
本次实验还存在一些不足之处，在后续研究中
我们会积极完善。首先，是我们以7号峰为参照物，
但7号峰的成分确认还为完成，随着我们对火绒草
药材的进一步研究，会在指纹图谱的指导下对火绒
草各有效成分进行提取分离，并进行结构鉴定，确定
各共有峰的成分；其次，目前我们对火绒草药材的
收集不够完善，产地、批次不全，在后续的研究中，我
们要尽量收集各地不同季节的火绒草药材，建立一
个较为完善的指纹图谱。◆
参考文献
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