全 文 ：二★★七年六月　　　　　　　　　　重庆中草药研究　　　　　　　　　　　　第 1期(总第 55期)　　11　
高效液相色谱法测定长果雪胆中雪胆甲素的含量
王贤英
(重庆市中药研究院制药厂 重庆 400065)
　　摘要:目的:应用高效液相色谱法(HPLC法)测定雪胆中雪胆甲素的含量。方法:采用 C18色谱柱 , 流动相为
乙腈 -水(40:60),流速:1.0ml/min,检测波长为 210nm。结果:雪胆甲素在进样量 0.4994 ～ 2.497μg(r=0.9999)
范围内呈良好的线性关系;平均加样回收率为 99.80%, RSD=0.16%(n=5)。结论:本法操作简便 、准确 , 灵敏度
高 , 重现性好 ,可用于雪胆药材中雪胆甲素的含量测定。
关键词:雪胆　雪胆甲素　高效液相色谱法(HPLC法)
　　长果雪胆 HemsleyadolichocarpaW.J
Chang主要含雪胆甲素及少量雪胆乙素和皂苷
成分 ,主要用于菌痢 、肠炎 、支气管炎及急性扁
桃体炎 ,具有抗菌效价高 ,剂量小 ,副作用小等
优点。了解其在药材中的含量高低 ,对于合理
用药及开发药物资源均有十分重要的意义 。曾
有文献报道建立了雪胆中雪胆甲素的反相高效
液相色谱法含量测定法[ 1] ,但其峰形 、峰高及分
离度均较差 。本文重新建立了雪胆中雪胆甲素
的高效液相色谱法含量测定方法 ,并对不同批
次的雪胆中雪胆甲素含量进行了比较 。
1　仪器和试药
1.1　仪器
岛津 LC-2010A高效液相色谱仪;岛津 AEG
-45SM十万分之一电子分析天平(日本);FA2004
分析天平(上海天平仪器厂制造);SK250LH超声
仪(上海科导超声仪器有限公司)。
1.2　试药
雪胆甲素对照品(1518-200101,供比色测
定用 ,中国药品生物制品检定所);乙腈 (色谱
纯);乙醇(分析纯);雪胆(药材市场购买)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱 Diamonsil(钻石 )柱 4.6mm ×
150mm, 5μm(C18柱 ,迪马公司),柱温:25℃,流
动相:乙腈 -水(40:60),流速:1.0ml/min, 检
测波长:210nm, 灵敏度 0.05AUFS,进样量为
10μl。
2.2　线性关系
精密称取经五氧化二磷减压干燥至 12小
时以上的雪胆甲素对照品适量 ,以甲醇为溶剂 ,
配成浓度为 0.2497mg/ml的对照品溶液 ,用色
谱仪的自动进样器分别进样对照品溶液 2、4、
6、8、10μl,测定峰面积 ,以雪胆甲素(μg)为横
坐标 X,峰面积为纵坐标 Y,得回归方程为 Y=
1420.65+382009.3112X, r=0.9999。结果表
明在 0.4994 ～ 2.497μg间有良好线性关系 。
2.3　样品测定
称取雪胆粉(过 20目筛)1g,精密称定 ,置
25ml容量瓶中 ,加甲醇约 20ml,超声提取 30分
钟 ,静置冷却 ,再用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,滤
过 ,精密量取续滤液 10ml于中性氧化铝柱上
(中性氧化铝 , 200 ～ 300目 , 10g,干法装柱),用
甲醇 50ml分次洗脱 ,收集甲醇洗脱液于水浴上
蒸干 ,残渣加甲醇溶解并定容至 5ml,摇匀 ,即
得样品溶液。经 0.45μm微孔滤膜过滤。将样
品分别按上述色谱条件测定。每次进样 10μl,
每份测定 2次 ,取其平均值 ,由回归方程计算出
每份样品中雪胆甲素的含量。得样品 、对照品
色谱图(见图 1)。
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雪胆甲素对照品
雪胆药材
图 1　对照品 、样品色谱图
2.4　精密度试验
取对照品溶液 ,连续进样 5次 ,测定雪胆甲
素峰面积积分值 ,结果 RSD=0.39%。
2.5　稳定性试验
对同一对照品及供试品溶液分别进样 ,每
隔 0hr, 3hr, 5hr, 7hr, 11hr, 16hr,测定雪胆甲素
峰面积 。结果 RSD分别为 0.50%, 2.20%,表
明有良好的稳定性。
2.6　重复性试验
精密称取同一批样品 5份 ,同法提取 、测定 ,
测得其平均含量为 3.1521mg/g, RSD=0.53%。
2.7　加样回收率试验
称取已知雪胆甲素含量的样品约 1g,精密
称定 ,精密加入 1.0ml雪胆甲素对照品溶液 ,按
样品溶液制备项下的方法提取 ,测定 ,计算回收
率。结果见表 1。
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表 1　加样回收率实验结果
样品含量
mg
加入量
mg
测得量
mg
回收率
%
平均回收率
%
RSD
%
3.1535 3.15 6.3025 99.97
3.1453 3.15 6.2848 99.67
3.1726 3.15 6.3128 99.69 99.80 0.16
3.1525 3.15 6.2926 99.68
3.1368 3.15 6.2861 99.98
2.8　样品测定
根据上述色谱条件 ,依法测定 5个批号 ,每
批测定 4次 ,结果见表 2。
表 2　雪胆中雪胆甲素含量测定结果(n=4)
批　号 雪胆甲素含量(mg/g) RSD%
20040601 0.8377 0.64
20050801 2.4297 0.58
20051002 3.5644 0.81
20060401 3.8186 0.98
20061002 3.1521 0.75
3　讨论
3.1　提取方法的选择
本文曾试验过样品用乙酸乙酯 、95%乙醇 、
三氯甲烷 、丙酮 、甲醇超声提取样品中雪胆甲素
的含量 ,同时对提取溶剂的用量做了选择性试
验 ,对提取方法的选择是先用了文献报道的用
乙酸乙酯回流[ 1]提取方法 ,但需要的雪胆甲素
峰较小 ,杂质峰较大 ,后选用了本文中样品处理
方法 ,使得雪胆甲素峰较大 。
3.2　检测波长的选择
本文曾试验过用文献中报道的检测波长及流
动相测定样品含量 ,雪胆甲素在 288nm处的吸收
值较小 ,使得峰高较低。对雪胆甲素对照品在
190nm～ 400 nm进行紫外扫描 ,发现雪胆甲素在
210nm处的吸收值大 ,是最大吸收 ,在雪胆药材样
品中响应值大 ,测出的雪胆甲素峰较好。因此 ,本
文选用了 210nm作为检测波长。
3.3　流动相的选择
本文曾试验过用文献中报道的及流动相甲
醇︰水(55︰ 45)测定样品含量 ,后又选用了乙
腈︰水(60︰ 40)、乙腈︰水(25︰ 75)、乙腈
︰水(70︰ 30)、乙腈︰水(30︰ 70)、乙腈︰
水(40︰ 60)、乙腈︰水(50︰ 50)、乙腈︰水
(80︰ 20)、乙腈︰水 (90︰ 10)作为流动相 ,
最后选定了乙腈︰水(40︰ 60)作为样品测定
的流动相 。
结论:该方法简便 ,稳定 ,重现性好 ,可作为
雪胆药材的质量控制。
参考文献
[ 1] 施亚琴 , 杨培全 , 台云梅.反相高效液相色谱法测
定不同采收期长果雪胆中雪胆甲素的含量 , 中国
中药杂志 , 1996, 21(5):276-277.