全 文 ：北方药学 2013年第 10卷第 10期
GC法测定额尔敦尼七味汤中异土木香内酯的含量
丁 华（内蒙古鄂尔多斯市食品药品检验研究中心 鄂尔多斯 017000）
摘要：目的：建立额尔敦尼七味汤中异土木香内酯含量的测定方法。方法：选用气相色谱法。结果：异土木香内酯进样量在
20.72ng～414.4ng范围内可靠，回归方程为 Y=2154.6X+2199.6，r=0.9999。平均回收率（n=9）为 99.25%，RSD为 1.51%。结论：本法
可用于额尔敦尼七味汤中异土木香内酯的含量测定，为一种结果准确、灵敏、可行的方法。
关键词：GC法 额尔敦尼七味汤 异土木香内酯 含量测定
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1672-8351（2013）10-0006-02
额尔敦尼七味汤是由苦参、珍珠杆、栀子、川楝子、山奈、
土木香、诃子七味组成的蒙药验方，主要用于未成熟热，疫热，
“赫依”、血交博之热。土木香为此方中主要药味之一，也为蒙
医习用药材之一。文献报道[3]，土木香中含挥发油成分，主要有
效化学成分为萜类。近几年有采用高效液相色谱法对土木香
中或其制剂进行测定的报道，结果为色谱中杂质成分干扰严
重，有效成分峰无法达到较好的分离，故本文通过提取酯类挥
发油的方式，对本制剂中土木香采用 GC法进行条件摸索，确
定了比较理想的色谱条件，为额尔敦尼七味汤制定了含量测
定方法，更好地控制了制剂的质量，也为传统蒙药复方制剂分
析和临床药物治疗提供了实验依据。
1 仪器、试剂、试药
1.1仪器：岛津 GC-2010气相色谱仪、FID检测器、色谱工作站
GC solution、岛津紫外分光光度仪 uv-1700型、十万分之一
Sartorius BP211D型电子分析天平、百万分之一 Mettler Toledo
电子天平。挥发油测定装置，电子可调温电热套。
1.2试剂、试药：异土木香烃内酯由中国食品药品鉴定研究院
提供（批号：110761-200203）。
额尔敦尼七味汤样品三批 （批号：120706、120811、
121005）；由内蒙古鄂市鄂托克旗蒙医医院提供；水为超纯水，
乙酸乙酯为分析纯。
2 方法与结果
2.1色谱条件的选择
2.1.1色谱柱：本实验研究采用 HP-INNOWAX型毛细管柱（柱
长 30m，内径 0.32mm，膜厚 0.50μm）及 RTX-5型毛细管柱（柱
长 30m，内径 0.25mm，膜厚 0.25μm）。
2.1.2 检测器：FID检测器，氢气流速为 40ml/min，空气流量为
400ml/min，检测器温度为 280℃。
2.1.3进样口：进样口温度为 240℃，柱流量为 7.5ml/min，分流
比为 1∶5。
2.1.4柱温：分别采用 200℃和 150℃柱温进行恒温度条件摸
索，但样品主成分土木香内酯和异土木香内酯及杂质峰均未
得到较好的分离，于是采用程序升温的方式进行渐近组分分
离，结果各组分得到了较好的分离效果，样品中异土木香内酯
与其他杂峰成分的分离度在 5.3以上，确定的程序升温条件为
初始温度 160℃，保持 10分钟，以 50℃/分钟升至 240℃，保持 5
分钟，以 10℃/分钟升至 250℃，保持 2分钟。
2.1.5理论板数（n）：对 3批样品多次测定结果表明，异土木香
内酯峰的理论板数每次均在 13000以上，分离度 R均在 5.3
以上，《中国药典》规定 R＞1.5，故本制剂标准规定按异土木香
内酯峰计理论板数应不低于 10000。
2.2提取溶剂、提取方法、提取时间的选择及考察
2.2.1提取溶剂：比较石油醚、乙酸乙酯、乙醚、甲醇等提取溶剂
对土木香中异土木香内酯提取，结果为乙酸乙酯的提取效率
最高，故本标准草案选取乙酸乙酯作为此含量提取溶剂。
2.2.2提取方法：曾采用正己烷、乙酸乙酯等溶剂进行超声处理
15分钟提取有效成分，但因处方中含有大量干扰成分，分离效
果不好，且供试品溶液黏度大，滤过困难，含量损耗严重，考虑
到异土木香内酯为挥发性成分，故采用提取挥发油作为供试
品溶液，具体操作见专属性样品溶液的制备。
2.2.3提取效率：取本品 3份，每份各约 5g，精密称定，置挥发
油测定提取装置烧瓶中，刻度侧管加乙酸乙酯 3ml，分别提取
挥发油 2小时、5小时、7小时后，取下装置，放冷至室温，用乙
酸乙酯转移至 25ml量瓶中，另用乙酸乙酯洗涤刻度侧管，洗
液并入量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，按上述色谱条件测
定，结果样品中异土木香内酯的含量分别为：0.098mg/g、
0.158mg/g，0.159mg/g。由此可见，提取 7小时后，样品中异土木
香内酯的含量和 5小时后差别不大，故将提取时间定为 5小时。
2.3溶液的制备
2.3.1对照品溶液的制备：取干燥至恒重的异土木香内酯对照
品约 5mg，精密称定，加乙酸乙酯配制成 80μg/ml的溶液（取对
照品 0.00436g用乙酸乙酯定容至 50ml量瓶中,浓度为 87.2μg/
ml）即得。
2.3.2供试品溶液的制备：取本品粉末约 5.0g，精密称定，立即
置挥发油提取装置烧瓶中，加乙酸乙酯 3ml于侧管，提取 5小
时后，取下，放冷，用滴管将侧管内乙酸乙酯转移至 25ml量瓶
中，侧管用乙酸乙酯 15ml分 3次洗涤，洗液并入量瓶中，并加
乙酸乙酯定容至刻度，摇匀即得。
2.3.3阴性对照试验：按上述供试品溶液制备方法另取按处方
比例（缺土木香）并以相同工艺制备的阴性对照。分别精密吸
取对照品、样品、阴性对照溶液各 1μl，在上述色谱条件下，分
别注入气相色谱仪。记录色谱图结果见图 A、B、C
从上图中可见，供试品色谱图中在与异土木香内酯对照
品色谱峰保留时间 14.1min处有色谱峰出现，且土木香内酯
（16.5min处）和异土木香内酯峰分离效果较好，而阴性对照在
14.1min处无色谱峰出现，表明在此条件下两峰不但达到基线
分离效果且阴性无干扰，具专属性。
2.4线性关系考察：取异土木香内酯对照储备液（取经五氧化
二磷干燥后的对照品 0.01036g，用乙酸乙酯定容至 25ml量瓶
中，摇匀，异木香内酯浓度为 0.4144mg/ml），用移液枪分别精
密吸取 0.5、1、2、3、5、10ml溶液分别置 6个 10ml量瓶中，然后
用乙酸乙酯分别稀释至刻度，按上述色谱条件，分别进样 1μl
测定其峰面积，以异土木香内酯的进样量为横坐标，峰面积为
纵坐标，进行回归分析，结果，回归方程为 Y=2154.6X+2199.6，
r=0.9999。异土木香内酯在 20.72ng～414.4ng范围内线性关系
良好。
图 色谱图结果
A异土木香内酯对照品 B额尔敦尼七味汤样品 C阴性对照
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北方药学 2013年第 10卷第 10期
2.5稳定性试验：取按“2.3.2”项下方法制得的供试品溶液 1μl，
分别于 0、3、6、9、12、24h进样测定，结果，异土木香内酯的平
均峰面积积分值为 384470，RSD为 1.56%，表明同一样品溶液
在 24小时内含量没有发生明显变化，峰面积保持稳定。
2.6精密度与准确度：对同一批样品 6份（批号 120706），各取
5g，精密称定，分别按“2.3.2”项下制备供试品溶液方法操作，
按上述色谱条件进行测定每份供试品含量，结果，该批样品中
的异土木香内酯含量为 0.171mg/g，RSD为 1.51%，说明本方法
重复性良好。
精密称取上述已知含量的样品 2.5000g，共 9份，按低、
中、高三个浓度（每 3份为一组）分别精密加入对照品溶液（异
土木香内酯浓度为 0.45mg/ml）0.5ml、1ml、2ml，置挥发油提取
装置中，按“2.3.2”项下制备溶液并对每份供试品进行含量测
定，计算平均回收率。异土木香内酯低、中、高浓度的总平均回
收率（n=9）为 99.25%，RSD为 1.68%。本方法加样回收率高。
2.7方法的耐用性：选用 HP-INNOWAX型毛细管柱与 RTX-5
型毛细管柱等不同品牌、不同型号的毛细管柱，取系统适应性
溶液及重复性试验中对照品、供试品分别进样，测定其含量，
结果，两种样品在不同毛细管柱上的分离度均大于 17，各成分
峰分离良好，表明不同毛细管柱对含量测定结果影响不大。
3 样品的测定
取本品按“2.3.2”项下的方法制备处理样品溶液并按上述
色谱条件测定，采用外标两点法进行计算，三批样品（120706、
120811、121005）中所含异土木香内酯的含量分别为 0.171mg/
g、0.170mg/g、0.169mg/g。
4 讨 论
4.1蒙药制剂标准制定过程中，我们曾对组方中“栀子”的栀子
苷和“苦参”的苦参碱含量进行了测定研究，但样品均难以提
纯处理分离各成分，有杂质干扰，故未予其建立含量测定方法。
4.2 由于不同产地土木香中所含异土木香内酯的含量有所不
同，根据我们所考察的多批土木香药材的含量结果显示，供样
单位提供的供试品含量经折算低于药典含量规定，可能与土
木香药材质量较差有关。
4.3 在标准制订过程中，曾采用 HPLC法对样品中土木香的异
土木香内酯进行了单独测定，但色谱图中土木香内酯峰和异
土木香内酯峰分离度仅为 1.2，不符合药典要求。还参照[1]《中
国药典》2010年版“土木香”含量测定程序升温条件“初始温度
为 190℃，保持 30min，以 120℃/分钟升至 240℃，保持 5分钟，
以 10℃/分钟升至 250℃，保持 2分钟”进行过系统适应性研
究，但基质干扰严重；最后通过提取挥发油的方式采用气相色
谱法进行条件摸索，终于确定了比较理想的色谱条件，土木香
内酯与异土木香内酯峰达到很好的基线分离效果和峰形，并
具合适的保留时间，但本文未对土木香内酯做进一步研究，只
对异土木香内酯进行了方法学考察。
4.4虽然本实验可以用 5%苯基聚甲基硅氧烷非极性柱进行色
谱分离，但还是推荐用聚乙二醇强极性毛细管柱进行分析测
定，因为聚乙二醇类液体固定相属一种氢键型固定液，它对羟
基和羧基化合物有较强的作用力，这类固定液对烷基苯类化
合物有很好的分离能力，故建议首选。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（第一部）[S].科学工
业出版社，2010.
[2]内蒙古自治区食品药品监督管理局编.内蒙古蒙药制剂规范
（第五册）[M].内蒙古人民出版社，2007，10：41.
[3]李雪莲，朴惠善．土木香的化学成分及药理作用研究进展[J].
中国现代中药，2007，6（9）：28-29.
RP-HPLC法测定新疆不同产地锁阳中熊果酸的含量△
闫朝垒1 朱芸 2，3 王翔飞 2，3*（1.新疆博尔塔拉蒙古自治州食品药品检验所 博尔塔拉 833400；2.新疆石河子大学药
学院 石河子 832002；3.新疆特种植物药资源教育部重点实验室 石河子 832002）
摘要：以高效液相色谱法测定锁阳中熊果酸含量。采用 WondaSil C18分析柱 4.6nm×150nm，5μm，流动相：甲醇-0.5%磷酸水溶
液-乙腈（80∶15∶5），流速：1ml/min；柱温：35℃；检测波长 210nm，外标法定量。熊果酸的保留时间为 15.239min。熊果酸进样量在
0.841～8.096mg/mL范围内呈良好线性关系，其中熊果酸平均回收率为 93.90%～98.78%，RSD为 1.8%（n=6）。测得锁阳中熊果酸
含量为 0.466%～1.034%，此分析方法简单快捷，高效灵敏，重现性好。
关键词：高效液相色谱法 锁阳 熊果酸
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1672-8351（2013）10-0007-03
Determination of Ursolic Acid in Cynomorium SongaricumBy High Performance Liquid Chromatography
Yan Chaolei1 Zhu Yun2，3 Wang Xiangfei2，3*（Boertala Mongol Autonomous Prefecture of Xinjiang Food and Drug Control，2.College of
pharmacy，Shihezi University，shihezi ，Xinjiang，832002， 3. Key Laboratory of Xinjiang Phytomedicine Resources of the State
Ministry of Education，Shihezi 832002，China）
Abstract:A determination method of ursolic acid in Cynomorium songaricum by reversed phase high performanceliquid
chromatography was established. Using a WondaSail C18（4.6nm×150nm，5μm）column. The mobile phase consisted of methanol-0.5%
phosphoric acid-acetonitrile（80∶15∶5），flow rate=1mL/min and temperature T=35℃.The detection wave length was at 210nm. With the
range of 0.841～8.096μg for ursolic acid had good linearity. The average recovery was 96.54% ，RSD=1.8%（n=6）. The concentration
of ursolic acid in Cynomorium songaricum at 0.466～1.034%，the method is higher accurate，simple and precise.
Key Words:HPLC Cynomorium Ursolic
锁阳（Cynomorium songaricum Rupr.）隶属于锁阳科锁阳
属，为多年生肉质草本植物，全寄生在蒺藜科白刺的根部[1]。锁
阳主要分布于新疆、甘肃、青海、内蒙古等西北干旱荒漠和沙
漠地区。它对恶劣的荒漠生态环境具有很强的适应性，耐干
旱、抗风沙、耐盐碱、抗严寒，是西北干旱荒漠地区很有价值的
药食两用植物资源[2]。锁阳中含有三萜类、甾体类、黄酮类、鞣
质类、氨基酸类、有机酸、花色苷类等[3]。熊果酸为非极性的五
环三萜，具有抗始发突变、抗癌、抗氧化、抗细胞毒作用、抗血
管生成及诱导细胞凋亡等多种机制；对肝损伤也有保护作用，
调节中枢神经系统，抗病毒和抗菌作用[4]。
《中国药典》（2005版）中规定了锁阳主成分熊果酸采用的
薄层色谱的鉴定方法[5]，同时有文献报道用比色法测定熊果酸
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