全 文 ：北方药学 2011年第 8卷第 7期
田基黄水煎液对应激+ 高脂血症模型大鼠血脂、免疫功能的影响
胡向阳 1 马 义 2 李莉莉 2（1.中山大学附属第五医院 珠海 519000；2.暨南大学生命科学院 广州 510632）
摘要：目的：观察田基黄水煎液对应激+高脂血症模型大鼠血脂、免疫功能的影响。方法:将 60只Wistar雄性大鼠随机分为 4组:
正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组、田基黄水煎液组，建立应激负荷下的高脂血症模型，检测各组大鼠血脂、T淋巴细胞亚群
的变化。结果:田基黄水煎液降低应激+高脂血症模型大鼠血脂代谢紊乱水平，升高 CD4、降低 CD8的表达。结论:田基黄水煎液
对应激负荷下高脂血症大鼠的血脂、免疫功能有改善作用。
关键词：田基黄 高脂血症 应激 T淋巴细胞亚群
中图分类号：R285.5 文献标识码：B 文章编号：1672-8351（2011）07-0043-03
应激使机体产生系列防御反应，涉及到神经、内分泌及免
疫等生理功能，持续的应激负荷会使小鼠肠系膜脂肪酶活性
降低，导致机体血脂代谢紊乱[1]。高脂血症是导致动脉粥样硬
化的首要危险因素，因高脂肪饮食致使血脂增高，动脉内沉积
过量的胆固醇类脂质物质，内皮源性舒血管物质减少，炎症因
子表达增多，白细胞黏附、聚集、游出，形成粥样板块[2]。田基黄
为藤黄科金丝桃属植物地耳草的干燥全草，具有清热散瘀、消
肿解毒的功效，药理研究表明具有保护肝脏、调节免疫、抑制
癌细胞及抗氧化等作用[3，4]。本研究拟通过观察田基黄水煎液
对应激+高脂血症模型大鼠血脂、免疫功能的作用，探讨其对
应激负荷下高脂血症大鼠的血脂代谢及免疫功能的影响。
1 材料与方法
形分布计算，urel（x4）= 30%
3姨
=0.173；
因此，计量特性引入的相对标准不确定度：
urel（x）= urel2（x1）+urel2（x2）+urel2（x3）+urel2（x4）=姨 0.266。
2.2.2采样点的布置和测量的不确定度 u（y）
根据表 1的测试结果，进行测量不确定度的 A类评定。
u（y）=SE=
L
i=1
Σ（Ai-M）2
L（L-1）姨 ；其相对标准不确定度：urel（y）=
（y）
M 。
①粒径≥0.5μm的悬浮粒子测量的相对标准不确定度：
urel（y0.05）= u（y0.05）M0.05
= 228824574 =0.0931；
②粒径≥5μm的悬浮粒子测量的相对标准不确定度：
urel（y5）= u（y5）M5
= 1471103 =0.133。
2.2.3测量环境条件的不确定度：环境影响因素主要有温度、相
对湿度、压差。当空调净化系统运行稳定后，经测量缓冲间的
温度和相对湿度稳定在 26℃和 45%左右，相对于非洁净区的
静压差恒定为 15±0.5Pa。因而，环境因素引入的不确定度可忽
略不计，以简化计算。
2.3合成标准不确定度 uC rel（M）
①对粒径≥0.5μm的悬浮粒子：
uC rel（M0.05）= urel2（x）+urel2（y0.05）姨 +0.282；
uC（M0.05）=M0.05·uC rel（M0.05）=24574×0.282=6930粒/m3；
②对粒径≥5μm的悬浮粒子：
uC rel（M5）= urel2（x）+urel2（y5）姨 =0.297；
uC（M5）=M5·uC rel（M5）=1103×0.297=328粒/m3。
2.4扩展不确定度 U（M）
取包含因子 k=2（置信概率为 95%）：
①对粒径≥0.5μm的悬浮粒子：
U（M0.05）= k·uC（M0.05）=2×6930=13860粒/m3；
②对粒径≥5μm的悬浮粒子：
U（M5）= k·uC（M5）=2×328=656粒/m3。
2.5不确定度报告
UCL=M+t×SE（t=2.35）
①缓冲间粒径≥0.5μm的悬浮粒子平均浓度可表示为：
24574±13860粒/m3（k=2）；
以 UCL报告：UCL=29951±13860粒/m3（k=2）；
②缓冲间粒径≥5μm的悬浮粒子平均浓度可表示为：
1103±656粒/m3（k=2）；
以 UCL报告：UCL=1448±656粒/m3（k=2）。
3 讨 论
3.1对测量不确定度贡献的主要因素
上述不确定度分析显示，对洁净室悬浮粒子的测量不确
定度主要分量为仪器计量性能引入的不确定度及各采样点
的布置和测量引入的不确定度，其中仪器性能中流量误差引
入的不确定度最小；因为是在相对密闭的空间内，且温度、相
对湿度、气压相对恒定，所以环境条件引入的不确定度可以
忽略。
3.2实验过程应注意的问题
悬浮粒子测试时严格遵守《医药工业洁净室（区）悬浮粒
子的测试方法》[4]的测试规则和注意事项。因本次实验的测试
对象是小洁净室，气流特别易受人的活动等外界因素影响，
并由此而造成对测量的干扰，故测试人员以 1 人为宜，并在
更换采样点时动作要轻缓，测试时待数据相对稳定时再计
数，避免人为因素造成测试数据的波动而影响对不确定度的
准确评定。
参考文献
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北方药学 2011年第 8卷第 7期
1.1实验动物
Wistar大鼠，SPF 级，雄性，体重 200±20g，由南方医科大
学实验动物中心提供，合格证号：粤检证字 2009C218，室温适
应性饲养 1周后用于本实验。
1.2实验药物
辛伐他汀（商品名:舒降之），杭州默沙东制药有限公司生
产,批准文号 H19990366，20mg/片，临用前以生理盐水溶解浓度
为 2mg/mL。田基黄饮片由广东省中医院提供，水煎液制备：田
基黄 3.0kg，以每克生药加水 6ml，冷水浸泡 40min后，开始武火
煎煮，煮沸后用文火慢煎 3Omin，趁热过滤。煎煮第二遍按每克
生药加水 4ml，煎法同上，合并滤液。60℃恒温下旋转蒸发浓
缩，浓缩为含生药 2.25g/m1的水煎液，置 4℃冰箱保存备用。
1.3 试剂与仪器
高脂饲料（0.2%胆酸钠+2%胆固醇+10%食用油+87.8%基
础饲料），胆固醇、胆酸钠、丙基硫氧嘧啶（广州天马精细化工
厂），10%泰洛沙泊（批号 2009030046，上海复星药业有限公
司），胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-
C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒（中生北控生物科技
有限公司）；兔抗大鼠 CD4、CD8等单克隆抗体试剂盒（浙江东
瓯生物工程有限公司）。全自动生化分析仪（日本日立-7060
型）；FACS Calibur流式细胞仪（BD-TY1218）。
1.4动物分组
Wistar大鼠 60只，数字随机分组法分为 4组，即正常对照
组、模型对照组、辛伐他汀组、田基黄水煎液组。
1.5动物模型制备
除正常对照组外，参照 Bozoky[5]等方法建立大鼠高脂血模
型，大鼠腹腔注射 10%泰洛沙泊溶液 5ml/kg，禁食 12h后进行
试验。辛伐他汀组、紫檀芪组均以 10mg/kg剂量灌胃，正常对
照组、模型对照组则以等体积生理盐水灌胃。参照何蓉蓉[6]等
方法，除正常对照组外，其余各组大鼠在给药后 2h，放进大鼠
束缚装置，束缚应激负荷 12h，束缚应激期间禁食禁水，连续 8
周。动物处死前禁食 12h，腹腔静脉取血，分离血清，取出脾脏。
1.6指标检测
将采取的新鲜血加入含肝素抗凝的试管中，混匀，4℃，3500
转/分离心 15分钟，收取上清液（血清）。采用酶比色法使用全自
动生化分析仪测定 TC、TG、HDL-C、LDL-C，操作步骤均按照试
剂盒说明书进行，并依据公式计算动脉粥样硬化指数
（Atherosclerotic index，AI），计算公式：AI=（TC-HDL-C）/HDL-C。
将脾脏置于玻璃匀浆器中，添加 PBS溶液研磨，4℃1000r·min-1
离心 10min，弃上清液，加入红细胞裂解液，静置 5min后，加
PBS溶液终止裂解反应，离心 5min，弃上清液，PBS溶液调整脾脏
淋巴细胞数为 5×106个/mL，取流式细胞分析专用管，每管加入细
胞悬液 100μL，分别加入 CD4、CD8抗体，室温避光孵育 30min
后，各管加入 500μL PBS溶液，振荡混匀后上流式细胞仪分析。
1.7统计学处理
使用 SPSS 14.0统计软件对数据进行重复测量资料的方
差分析，定量指标以（x±s）表示，方差分析，组间两两比较采用
q检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1各组大鼠血脂代谢情况
与正常对照组比较，各实验组大鼠血清 TC、TG、LDL-C、
AI含量均有不同程度的升高（P＜0.01或 P＜0.05）；HDL-C含量
降低（P＜0.05）。与模型对照组比较，辛伐他汀组、田基黄水煎液
组 TC、TG、LDL-C、AI含量均有不同程度的降低（P＜0.01或 P＜
0.05），HDL-C含量升高（P＜0.05）。与辛伐他汀组比较，田基黄
水煎液组 TC、LDL-C、AI含量降低（P＜0.05），见表 1。
表1 各组大鼠血脂情况比较（n=15，m m ol/L，x±s）
注：与正常对照组比较，1）P＜0.01，2）P<0.05；与模型对照组
比较，3）P＜0.01，4）P＜0.05；与辛伐他汀组比较，5）P＜0.05。
2.2各组大鼠脾脏 T淋巴细胞亚群的变化
与正常对照组比较，模型对照组大鼠脾脏 CD8+显著升高
（P＜0.01）；CD4+、CD4+/CD8+均显著降低（P＜0.01）；田基黄水煎
液组 CD8+升高（P＜0.05）；辛伐他汀组 CD4+、CD4+/CD8+均降低
（P＜0.05）。与模型对照组比较，辛伐他汀组 CD8+降低（P＜
0.01），CD4+/CD8+升高（P＜0.01）；田基黄水煎液组 CD4+、CD4+/
CD8+均显著升高（P＜0.01），CD8+降低（P＜0.01）。与辛伐他汀组
比较，田基黄水煎液组 CD4+升高（P＜0.05）。（见表 2）。
表2 各组大鼠脾脏T 淋巴细胞亚群的变化比较（n=7，x±s）
注：与正常对照组比较，1）P＜0.01，2）P＜0.05；与模型对照组
比较，3）P＜0.01，4）P＜0.05；与辛伐他汀组比较，5）P＜0.05。
3 讨 论
精神压力增大成为现代社会人们生活的主要特征，应激
是机体的非特异保护适应机制，如果劣性应激原持续作用于
机体，将导致神经-内分泌代谢紊乱，使糖尿病、高血压、动脉
粥样硬化、血脂紊乱等发病率升高[7]。以剥夺身体自由活动、束
缚制动刺激为应激原造成的应激称为束缚应激，束缚应激模
型与当今社会人们精神应激和活动减少的生活方式相近，是
目前实验医学领域最普遍应用的应激原。免疫系统是机体应
激反应系统的重要组成部分，应激可引起机体一系列非特异
性神经-内分泌反应，长期的应激负荷能破坏免疫器官的正常
结构，在脾脏和胸腺中可见典型凋亡细胞[8]。T淋巴细胞是机体
免疫细胞，T细胞分为 CD4+T细胞、CD8+T细胞两大亚群，CD4+
T细胞主要是 Th（辅助细胞），可分泌 IL-2、IL-3、TNF等细胞
因子，参与机体的炎症反应、免疫调控。CD8+T细胞为 Ts（抑制
细胞），通过“抑制性”细胞因子而抑制免疫应答反应，CD4+T/
CD8+T比值减少是机体免疫缺陷的重要指征[9]。
高脂血症属中医“湿浊”之范畴，是由于饮食不节，肝气郁
结，脾运失健，水谷精微化生异常，饮食中的糟粕、杂质混入营
血，形成“湿热痰浊毒”，治疗常以疏肝健脾为主。本实验在应
激+高脂血症大鼠模型基础上，选用辛伐他汀作为对照药物，
辛伐他汀是临床上应用广泛的调脂药，研究发现其还具有抗
炎、免疫调节作用、改善血管内皮功能、稳定和逆转粥样硬化
斑块等作用[10]。本实验结果发现：田基黄水煎液可以降低应激+
动脉粥样硬化大鼠血清 TC、TG、LDL-C、AI的含量，与辛伐他
汀组比较，田基黄水煎液组 TC、LDL-C、AI含量降低，有显著
的降低血脂代谢紊乱水平作用。田基黄水煎液可使模型大鼠
CD4+、CD4+/CD8+显著升高（P＜0.01），CD8+降低，增强大鼠免疫
应答功能。田基黄水煎液的上述药理效应可能与其“清热散
组别 TG TC HDL-C LDL-C AI
正常对照组 0.43±0.01 1.69±0.11 1.25±0.13 0.37±0.01 0.34±0.02
模型对照组 3.25±0.141） 24.51±1.461） 0.59±0.012） 8.44±0.121） 39.22±2.231）
辛伐他汀组 0.77±0.012，3） 13.29±1.351，4） 0.87±0.022，4） 2.48±0.122，4） 12.14±0.361，3）
田基黄水煎液组 0.83±0.012，3） 6.71±0.181，3，5）0.83±0.032，4） 0.72±0.012，3，5） 5.51±0.271，3，5）
组别 CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+
正常对照组 36.27±3.26 11.46± 33 2.41±0. 2
模型对照组 19.34±1.131） 48.23±2.121） 0.46±0.011）
辛伐他汀组 24.17±2.322） 16.67±1.253） 1.52±0.122，3）
田基黄水煎液组 39.18±3.123，5） 20.22±1.312，3） 1.93±0.113）
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北方药学 2011年第 8卷第 7期
·临床研究·
提高宫颈炎组织中TAP1、TAP2、β2-M G 蛋白表达△
郝 治 1 仵 燕 1 王 静 1 海提·阿布都力木 2
（1.新疆医科大学厚博学院机能教研室2.新疆医科大学基础医学院组胚教研室 乌鲁木齐 830054）
摘要：目的：探讨维吾尔族和汉族妇女宫颈炎组织中 TAP1、TAP2、β2-MG蛋白阳性率表达。方法：采用常规免疫组化 S-P法和改
良法检测 65例（汉族 35例，维吾尔族 30例）宫颈炎组织中 TAP1、TAP2、β2-MG蛋白表达。结果：TAP1、TAP2和 β2-MG蛋白在
改良后免疫组化 S-P法中阳性率的表达为（81.54%、96.92%、95.38%），明显高于常规法（26.15%、36.92%、38.46%）（P＜0.005）。结
论：通过实验方法的改进，宫颈炎组织中 TAP1、TAP2、β2-MG的阳性率检测明显提高，可以把它们作为宫颈炎的标记物，以提高
临床上宫颈炎的检出率。
关键词：宫颈炎 TAP1 TAP2 β2-MG
中图分类号：R34；R392.11 文献标识码：B 文章编号：1672-8351（2011）07-0045-02
Improve to expression of the proteins( TAP1、TAP2、β2-MG) in cervicitis
Hao Zhi 1 Wu Yan1 Wang Jing1 Haimiti·Abudulimu2（1.Department of Functional Study，Houbo College 2.Department of Histology
and Embryology，College of Pre-clinical Medicine，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China）
Abstract：Objective：To study the proteins TAP1，TAP2 and β2-MG expression were positive in cervicitis tissues in Urghur and Han
nationalities women . Methods: The expression of proteins TAP1，TAP2 and β2-MG in 65 cervicitis tissues including 35 Han and 30
Urghur women were evaluated with S-P immunohistochemistry and improved method. Results: There were significant differences in
the expression of TAP1，TAP2 and β2-MG proteins in improved immunohistochemical S-P（81.54%，96.92%，95.38%，）compared to
the expression of those in conventional method（26.15%，36.92%，38.46%）in human cervicitis（P<0.005）.Conclusion: This study sug－
gested the detection of TAP1，TAP2 and β2-MG expression will improve the diagnosis rate of cervicitis.
Key words：Cervicitis TAP1 TAP2 β2-MG
免疫组化的基本原理是应用抗原与相应的抗体接触后形
成抗原-抗体复合物的化学反应来检测组织或细胞的某种成
分，并用指示剂标记，使其在显微镜下可见。待检组织在经过
石蜡制品过程后，其抗原受到不同程度的丢失和破坏，以及
背景着色对诊断结果的正确判断造成严重影响，甚至会出现
误判，在进行免疫组织化学染色时，就必须对组织抗原进行
修复和降低背景着色。我们以宫颈炎组织中 MHC-I类抗原呈
递相关性蛋白 TAP1、TAP2、β2-MG为例采用了常规免疫组化
S-P染色法和改良法进行对照实验，结果发现后者阳性率明显
提高。
1 材料与方法
1.1材料
收集 2002年 1月～2007年 7月新疆医科大学第一附属医
院及喀什地区人民医院宫颈炎石蜡包埋组织（子宫肌瘤手术
标本）65例，其中汉族 35例，维吾尔族 30例。
1.2主要试剂
一抗 TAP1（购自美国 Abgent公司，按 1∶50稀释）、TAP2
(购自瑞典 ATAs Antibodies 公司，按 1∶2000 稀释)、β2-MG（购
自丹麦 Dako Cytomation公司，按 1∶100稀释）即用型第二代免
疫组化 ElivisionTM plus光谱试剂合，即用型山羊血清，DAB
显色试剂盒（以上试剂均购于迈新公司）。
1.3方法
瘀、消肿解毒”作用相关。此外，田基黄的保护肝脏作用可能会
降低因束缚应激所致的血脂代谢紊乱、免疫功能失调，进而缓
解高脂血症的发生、发展进程。本实验结果提示田基黄水煎液
对应激负荷下高脂血症模型大鼠血脂代谢、免疫功能有改善
作用，但其作用或调控机制需要进一步研究。
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