全 文 ：基金项目:科技部科技支撑计划项目 (2011BAI03B01)
作者简介:吕政，男，硕士研究生 研究方向:中药生物技术 * 通讯作者:杨世海，男，教授，博士生导师 研究方向:中药资源 Tel /
Fax:(0431)84533086 E-mail:jlyangs@ yahoo. com. cn
关苍术毛状根培养体系建立及其多糖含量测定
吕政，张淑丽，路放，杨世海* (吉林农业大学中药材学院，长春 130118)
摘要:目的 建立关苍术毛状根的诱导方法和培养体系，并对关苍术中多糖含量进行分析。方法 用发根农杆菌 Ｒ1000 和
Ｒ1601菌株感染关苍术叶、茎、根外植体，诱导毛状根产生，对扩大培养体系进行优化，并对毛状根进行 PCＲ检测，利用紫外分
光光度计测定关苍术中多糖的含量。结果 Ｒ1000 感染叶片诱导率最高为(62 ± 2. 58)%，最佳增值培养基为 White，应用
PCＲ证实 Ｒ1000 和 Ｒ1601 Ｒi质粒上的 rolB基因片段以成功转入被感染的关苍术叶和根中。结论 关苍术毛状根多糖含量
为(126. 7 ± 16. 2)mg·g －1。
关键词:关苍术;毛状根;发根农杆菌;多糖含量
doi:10. 11669 /cpj. 2014. 16. 005 中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1001 － 2494(2014)16 － 1386 － 07
Establishment of Culture System of Atractylodes japonica Koidz. ez Kitam. Hairy Ｒoots and Determination
of Polysaccharide
L Zheng，ZHANG Shu-li，LU Fang，YANG Shi-hai* (School of Chinese Herbal Medicine，Jilin Agricultural University，
Changchun 130118，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To establish the hairy roots culture system of Atractylodes japonica Koidz. ez Kitam． and study the hairy
roots growth and analyze the polysaccharide content in hairy roots culturing system. METHODS The leaves，stalks，and roots were
infected with two Agrobacterium rhizogenes strains Ｒ1601 and Ｒ1000 to induce hairy roots，the expansion of the training system was op-
timized，and the hairy roots were detected by PCＲ. The purity of polysaccharide in Atractylodes japonica Koidz. ez Kitam was deter-
mined by UV. ＲESULTS The induction rate of strain Ｒ1000 for leaves could reach as high as (62 ± 2. 58)%. The value-added cul-
ture medium was White. The PCＲ examination result showed that rol B genes were successfully inserted into the hairy roots of Atrac-
tylodes japonica Koidz. ez Kitam. CONCLUSION The content of polysaccharide was (126. 7 ± 16. 2)mg·g －1 in the hairy roots.
KEY WOＲDS:Atractylodes japonica Koidz. ez Kitam;hairy root;Agrobacterium rhizogenes;polysaccharide
关苍术(Atractylodes japonica Koidz. ez Kitam. )
为菊科苍术属多年生草本植物，主要分布于我国东
北部地区，主治湿阻中焦，脘腹胀满，泄泻，水肿，脚
气痿蹙，风湿痹痛，风寒感冒，夜盲，眼目昏涩［1］。
现今，野生关苍术的资源遭到破坏严重，多采用人工
栽培的方式进行种植，人工栽培不仅周期长［2］，在
人工栽培中病害时有发生［3］，严重影响了关苍术的
产量。相关的药理实验研究证明，关苍术多糖中的
atractan A、B、C 对血糖的升高有明显的抑制作用，
此外其多糖成分还能有效促进脾细胞的发育，提高
免疫系统活性，导致关苍术药材价格逐年上涨［4］，
造成供需关系紧张，亟须寻找新的途径以解决关苍
术资源枯竭的问题。
发根农杆菌 (Agrobacterium rhizogenes)侵染是指
发根农杆菌将其所携带的 Ｒi 质粒上的 T-DNA 转移
到植物体中，并且在宿主细胞基因组中发生整合，而
形成无向地性的植物根部组织，这种方法即为发根农
杆菌介导法［5］。该方法可以有效提高次生代谢产物
的含量［6］，与其他外源基因法比较，发根农杆菌介导
法使细胞组织体系更加稳定［7］。发根农杆菌中 rol B
是一种能够高效诱导发根分化的基因，位于 T-DNA
内第 11 OFＲ［8］(图 1)，外源目的基因通过发根农杆
菌 Ｒi质粒上的 T-DNA 区转入到植物细胞中［9］。发
根农杆菌诱导菊科植物时毛状根虽然在粗细和颜色
上有着很大的区别，但在向地性、主根生长状况和无
侧根等方面都有着一定程度上的相似性，菊科植物应
用发根农杆菌介导法产生的发根所用的外植体材料
多为叶、茎、根，诱导率多在 60%以上［10-15］。
农杆碱型发根农杆菌 Ｒ1000 中含 pＲiA4 质粒，
有 3 种分子 pＲiA4a(180 kb)，pＲiA4b(250 kb)，
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图 1 发杆菌 Ｒi质粒模式
Fig. 1 Pattern of Ｒi plasmid of Agmbacterium rhizogenes
PＲiA4c(430 kb)，是 pＲiA4a 和 pＲiA4b 的整合体。
Ｒ1601 是在 Ｒ1000 的基础上改造后的衍生菌株，其
中 Ｒ1601 具有 C58 染色体背景。由于引入根癌农
杆菌 Ti 质粒的 Vir，以及在 TL-DNA 中引入 NPT-II
基因(来源于 E. coli 转座子 Tn5)，使 Ｒ1601 与
Ｒ1000 具有很强的感染毒性和一定的抗卡那霉素的
特性［16］。
1 材料与方法
1. 1 菌种活化
发根农杆菌菌株 Ｒ1601，Ｒ1000 由中国农业微
生物研究所菌种保藏中心提供。挑取保存在 － 70
℃灭菌甘油中的发根农杆菌菌株 Ｒ1601;Ｒ1000 于
灭过菌的 YEB液体培养基，28 ℃，暗培养，摇床 180
r·min －1的条件下复苏 24 h，用接菌环接种到无菌
YEB固体平皿上，25 ℃暗培养 96 h，挑取单克隆菌
斑，接种于加有 25 mL 卡那霉素(50 mg·mL －1)液
体 YEB培养基中，30 ℃，150 r·min －1震荡培养 24
h后用移液枪取出 1 mL 加入装有 50 mL 液体 YEB
培养基的三角瓶中，于相同的条件下再次培养 12 h，
这时培养基中活化的菌液达到对数生长期(A600为
0. 5)，对关苍术外植体进行侵染。
1. 2 无菌苗的获得
供试关苍术种子采自吉林农业大学药植园，由吉
林农业大学杨世海教授进行植物学鉴定。精选关苍
术种子 200粒于 50 mL烧杯中，将关苍术种子表面茸
毛去除，用无菌水清洗3次，加入 10 mL无菌水浸泡4
h后，将无菌水滤掉，用体积分数 75%的乙醇浸泡 30
s后用无菌水冲洗 2 次，再用 0. 1%的升汞消毒 5
min，用无菌水冲洗 5 次，将种子埋于 MS固体培养基
中(种子厚度的 1 /2)，置于光照强度 2 000 lx，光照 12
h·d －1，(25 ±1)℃条件下萌发，生长 25 d备用。
1. 3 毛状根的诱导
在超净工作台内切取关苍术无菌苗的幼嫩叶片
剪成 1. 5 cm ×1. 5 cm大小，茎段和根均切成 1. 5 cm
左右的小段。在已灭过菌的 MS固体平皿上接种 10
片(段)，且每个样品重复 10 次，之后置于(25 ±
1)℃，黑暗环境，预培养 60 h。
在无菌环境下，将上述预培养的外植体(根、茎
段、叶片)转移至已灭菌的 100 mL 锥形瓶中，然后
将达到对数生长期的菌液 Ｒ1601 和 Ｒ1000 倒入其
中，对其进行侵染 6 min。取出后用滤纸吸干菌液，
置于附加 10 μL 100 mg·mL －1头孢噻肟钠(AS)的
每个装有 20 mL MS 固体培养基的培养皿中，同时
以未被菌液感染的外植体作为对照。待开始发根
后，每 7 d转接被菌液感染的外植体，共 5 次后统计
诱导出的毛状根数，并且计算平均诱导率。关苍术
毛状根诱导率按以下公式计算:
毛状根诱导率 = 长出毛状根的外植体数 /接种
外植体的总块数 × 100%
取完全除菌后的毛状根转移到液体培养基中，
于 120 r·min －1，(25 ± 1)℃ 条件下暗培养。每 15
d继代培养 1 次，建立毛状根离体培养体系。
1. 4 rolB 的 PCＲ检测
取除菌彻底的毛状根鲜重 100 mg，应用 CTAB
法提取总 DNA，rol B位于 T-DNA 内，是一种能够高
效诱导发根分化的基因，所以利用 rol B 基因引物
(上游:CTCCTGACATCAAACTCGTC;下游:TGCT-
TCGAGTTATGGGTACA;购于金唯智生物科技有限
公司)进行 PCＲ 扩增。反应条件为 95 ℃ 变性 1
min，94 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min 35 个循环，
72 ℃ 10 min，4 ℃保温 20 min。
1. 5 关苍术毛状根多糖的提取
精密称取关苍术毛状根 3. 0 g(干重)，放置于
100 mL圆底烧瓶中，加入蒸馏水 60 mL，应用热回
流法，第一次回流 4 h，过滤，后加入 60 mL蒸馏水进
行第二次回流 2 h，过滤，后加入 60 mL 蒸馏水进行
第三次回流 2 h，过滤，收集滤液于 250 mL 量瓶中，
加蒸馏水定容至 250 mL［16］。
1. 6 对照品溶液的制备
选用葡萄糖(分析纯)为对照品，采用苯酚-硫酸
比色法测定苍术毛状根中多糖的含量。精密称取
105 ℃干燥至恒重的葡萄糖 0. 10 g，置 100 mL量瓶
中，加蒸馏水至刻度，再精密吸取 10 mL于另一量瓶
中，再加蒸馏水至刻度，摇匀备用，得 0. 1 mg·
mL －1的葡萄糖标准溶液。
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1. 7 葡萄糖标准曲线的绘制
分别精密吸取配制的 0. 1 mg·mL －1葡萄糖标
准溶液稀释成 0. 005，0. 01，0. 015，0. 02，0. 025，0. 03
mL，吸取 1 mL蒸馏水滴入具塞试管中，作为空白对
照。分别加苯酚试液 1 mL，摇匀，迅速加浓硫酸 5
mL，振摇 2 min后，旋转于沸水浴中加热 15 min，取
出冷却至室温。于 490 nm 处测吸光度为 0. 068，
0. 126，0. 190，0. 258，0. 328，0. 384 得回归方程:y =
12. 880x + 0. 000 3，r2 = 0. 999 0(n = 5)。
1. 8 苍术毛状根样品中多糖的含量测定
从“1. 6”项下多糖的提取液中吸取 1 mL 滤液
于 100 mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀备用，得
关苍术毛状根样品试品溶液，吸取 1 mL 于具塞试
管中，按“1. 7”项下的操作，测定 490 nm 处的吸光
度，由回归方程计算供试品中葡萄糖的含量。
2 结 果
2. 1 对关苍术毛状根诱导率产生影响的因素
2. 1. 1 种子灭菌 用 10%过氧化氢和 0. 1%升汞
灭菌，将种子接种到 MS 基本培养基，15 d 后，实验
结果见表 1。
不同消毒剂对关苍术出苗率的影响 6 min
0. 1%升汞大于 10% 过氧化氢，差异性显著(P ＜
0. 05)，对种子的处理方式选择 6 min 0. 1%升汞消
毒(表 1)。
2. 1. 2 不同发根农杆菌对关苍术毛状根诱导率的
影响 在共培养的基础上利用 Ｒ1601、Ｒ1000 2 种菌
株对关苍术的叶片和根进行诱导，以未被任何菌株
感染的外植体作为空白对照组(图 2)。从不同菌种
的诱导率情况可以看出，这 2 种菌株对关苍术的茎
段诱导率都为 0，可能是这 2 种菌株对其茎段没有
诱导能力(图 3)。Ｒ1000 对关苍术叶片的诱导率最
高，达到(62 ± 2. 58)%，差异性显著 (P ＜ 0. 05)，根
为(52 ± 2. 14)%，Ｒ1601 叶片诱导率 (24 ±
1. 21)%，根诱导率(14 ± 0. 89)%。因此，Ｒ1000 是
诱导关苍术的最佳菌种，最佳外植体是叶片。
2. 1. 3 外植体剪裁大小及预培养时间对关苍术毛
状根诱导率的影响 ①外植体剪裁大小:面积过大
或过小都会对毛状根的诱导率产生影响，叶面积过
大，菌液在短时间内无法侵染进植物组织内部，而剪
裁过小，会造成外植体的迅速死亡。本实验对关苍
术叶片面积(cm2)按照 0. 5 × 0. 5，1. 0 × 1. 0，
1. 5 × 1. 5，2. 0 × 2. 0，2. 5 × 2. 5 进行剪裁，然后分别
用发根农杆菌 Ｒ1000 进行侵染，观察结果(图 4)。
从图 4 中可以看出，在 0. 5 × 0. 5 ～ 1. 5 × 1. 5 cm2时
随着叶片面积的增大诱导率也有明显升高，当剪切
叶面积为 1. 5 × 1. 5 cm2诱导率达到最大为(62 ±
2. 58)%，差异性显著(P ＜ 0. 05)，而随着剪切叶片
面积的继续增大产生发根的诱导率反而降低。②
外植体预培养时间:植体产生伤口后，能释放出
乙酰丁香酮等酚类物质，形成能诱导发根农杆菌
的信号分子，以此来提高发根农杆菌的侵染效
率。随着预培养时间不同，叶片毛状根的诱导率
明显不同(图 5)。预培养时间少于 36 h，毛状根
诱导率随着时间的增加而增加，当预培养时间高
于 48 h，诱导率随着时间的增加反而减小。关苍
术叶片转化的最佳预培养时间是 36 ～ 48 h，显著
性差异(P ＜ 0. 05)。在 36 ～ 48 h 间无显著性差
异(P ＞ 0. 05)。
2. 1. 4 不同的侵染时间对关苍术毛状根诱导率的
影响 侵染时间会直接影响其菌体在植物细胞上的
附着密度，在合理范围侵染时间越长转化率也增高，
而侵染时间太长，农杆菌附着外植体表面过多，又会
伤害植物细胞。所以选用的原则是能够达到最大转
化效率的最短侵染时间。分别设置用于侵染的时间
为 2，4，6，8，10，12 min 时取出。2 周后根据毛状根
发根数筛选结果(图 6)。由图 6 可知，毛状根的诱
导率随着侵染时间的增加而增加，达到一定峰值后
下降。菌液浓度过低时，由于农杆菌数目不足而降
低对外植体的侵染效率;但当侵染时间过长时，叶
片变黑且开始软腐，过度繁殖的菌体则会杀死外植
体。结果表明，6 min 时生根个数达到最大值，差异
性显著(P ＜ 0. 05)，是诱导关苍术外植体发根适合
的侵染时间。
表 1 不同消毒剂对关苍术出苗率的影响． %，n = 5，珋x ± s
Tab. 1 Effects of different treatments on seedlings emergence of Atractylodis japonicae Koidz. ex Kitam． %，n = 5，珋x ± s
Sanitizer
Time of disinfection /min
2 4 6 8 10
10% Hydrogen peroxide 52 ± 1. 45 58 ± 1. 56 64 ± 1. 84 72 ± 1. 99 78 ± 1. 93
0. 1% Mercury(Ⅱ)chloride 13 ± 0. 07 52 ± 1. 82 89 ± 2. 16 21 ± 0. 33 0
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图 2 关苍术毛状根的诱导和增值
a －无菌苗;b － Ｒ1000 侵染关苍术叶;c － Ｒ1000 侵染关苍术茎;d － Ｒ1601 侵
染关苍术叶;e － Ｒ1601 侵染关苍术根;f － Ｒ1000 侵染关苍术叶的毛状根在
White培养液中大量增值
Fig. 2 Induction and culture of hairy roots
a － Aseptic seedling of A． japonica;b － A． japonica leaf infected by A． rhizogenes Ｒ
1000;c － A． japonica stem infected by A． rhizogenes Ｒ 1000;d － A． japonica leaf
infected by A． rhizogenes Ｒ 1601;e － A． japonica root infected by A． rhizogenes Ｒ
1601;f － Multiplication of hairy roots from A． japonica leaf infected by A． rhizo-
genes Ｒ 1000 cultured in White medium
图 3 发根农杆菌对关苍术毛状根诱导率的影响． n =3，珋x ± s
Fig. 3 Effects of two kinds of A. rhizogenes on the induction
rate of hairy roots． n = 3，珋x ± s
图 4 关苍术毛状根叶面积剪切的大小对发根产生的影响．
n = 5，珋x ± s
Fig. 4 Effects of different leaf areas on the induction rate of
hairy roots． n = 5，珋x ± s
图 5 关苍术毛状根外植体预培养时间对发根产生的影响．
n = 5，珋x ± s
Fig. 5 Effects of different pre-culture time on the induction rate
of hairy roots． n = 5，珋x ± s
2. 1. 5 乙烯丁香酮(AS)对诱导率的影响 有研究
表明，受体植物与供体细菌相互作用中，在经过乙酰
丁香酮(As)作用后可增强发根农杆菌的诱导效果。
但如果利用了高浓度的 As，便会对植物外植体产生
残害作用，反而会抑制发根的诱导率。选择乙烯丁
香酮浓度分别为 0，0. 05，0. 1，0. 15，0. 2 mg·mL －1。
结果(表 2)表明，当加入 0. 05 mg·mL －1的 AS时诱
导率最高，与不添加 AS 的诱导率相比无显著性差
异，但其生长速度却慢于相同条件下不加 AS 所侵
染出的生根外植体。可能是因为关苍术外植体所分
泌的 AS，完全可以满足毛状根的生长，而外源 AS的
加入使总体的 AS浓度升高，进而降低了生长速率，
差异性显著(P ＜ 0. 05)。
2. 2 关苍术毛状根培养体系建立
2. 2. 1 转入时间筛选 将不同时间的 MS 固体培
养基中的毛状根导入液体培养基，将对毛状根在液
体培养基中增值产生影响。分别选择培养时间为
7，14，21，28，35，42 d 转入液体培养基中进行考察
(表 3)。表 3 结果显示，培养 7 d 后将毛状根转入
液体培养基中增值倍数最大，其次为 14 d，但由于固
体培养天数较短，转入液体 MS 培养基培养 1 ～ 2 d
后，液体会变为金黄色，进而出现大面积染菌，最终
导致毛状根死亡，而培养 21 d 后转入液体培养基
中，该类现象得到了很好的控制，而且毛状根体系增
值稳定。
图 6 不同侵染时间对关苍术发根产生的影响． n = 5，珋x ± s
Fig. 6 Effects of different infecting time on the induction rate of
hairy roots． n = 5，珋x ± s
表 2 在 MS培养基中加入 AS浓度对关苍术毛状根的影响．
n = 5，珋x ± s
Tab. 2 Effects of different AS concentration on hairy roots．
n = 5，珋x ± s
AS Concentration /mg·mL －1 Infection of explant Inductivity /%
0 100 62 ± 2. 58
0. 05 100 65 ± 3. 06
0. 1 100 41 ± 1. 68
0. 15 100 17 ± 0. 72
0. 2 100 0
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2. 2. 2 液体培养基类型筛选 在无菌条件下将关
苍术在固体培养基中长出分枝多且长的毛状根剪
下，分别放入到 MS、1 /2MS、White、B5、Ｒ2 和 N6 的
液体培养基中进行增殖培养，分别选取 7，14，21，28
d对瓶中毛状根增殖情况进行持续观察，最种筛选
出最为有利的液体培养基(图 7)。由图 7 可知，在
21 d时 White 培养基增值倍数最高，差异性显著
(P ＜ 0. 05)，毛状根增殖最快是在 14 ～ 21 d 之间，
White液体培养基对毛状根的增殖效果最佳，其他
依次为Ｒ2 ＞1 /2MS ＞ MS ＞ N6 ＞ B5。
2. 3 毛状根中 rol B基因的 PCＲ检测
提取苍术毛状根总 DNA，利用 PCＲ 扩增 rol B
基因片段。结果表明，在苍术毛状根中可以检测到
482 bp 的特异 DNA 片段，且在阳性对照(质粒
DNA)中扩增出的相同大小的特异性片段，而在阴
性对照中检测不到此片段(图 8)。
2. 4 方法学考察
对关苍术毛状根中多糖的含量测定方法进行了
方法学考察。结果表明，利用的测定方法符合标准，
见表 4。
2. 5 关苍术毛状根中多糖含量分析
根据总多糖绘制的标准曲线，计算得出关苍术
毛状根和关苍术籽中总多糖的含量。经计算毛状根
的总多糖含量为(126. 7 ± 16. 2)mg·g －1。
3 讨 论
无论是采用 10%过氧化氢还是 0. 1% 升汞对
关苍术种子消毒，污染率都会随浸泡时间的增长而
下降，但随着关苍术种子消毒时间的增长，苗的生长
态势也会发生变化，主要表现为发育迟缓(约 1 ～ 2
周)，茎部短小，叶片不能完全舒展、萎蔫等，经综合
考虑，本实验最终选用 6 min 0. 1%升汞消毒。
选用的外植体不同，毛状根的诱导率也不同。本
实验均采用 20 ～25 d叶子完全舒展的关苍术植株的
叶片、茎段和根，用发根农杆菌浸染，15 d后获得毛状
根，感染根外植体长出毛状根的时间相对于叶片外植
体菌要晚 5 d 左右，这可能是由于:①关苍术叶片外
植体的伤口面积更大更有利于菌株 Ｒ1000 和 Ｒ1601
的侵染;②叶片细胞壁薄于根部细胞壁，更容易侵染。
此外由于实验采用的为 20 ～ 25 d 的关苍术植株，茎
段的分生能力较叶片和根差，可能为致使菌株 Ｒ1000
和 Ｒ1601对关苍术茎段外植体没有诱导能力的因素。
菌株类型的不同对毛状根转化率存有一定的影
响，实验结果显示，Ｒ1000 对关苍术毛状根的诱导率
高于 Ｒ1601。原因可能是 Ｒ1601 经 Ｒ1000 改造的衍
生菌株，在不断继代的过程中，自身基因上的一些变
异或缺失导致了 Ｒ1601 对于关苍术外植体的侵染
能力下降。
叶面积剪切的大小不同也是导致关苍术毛状根
诱导率不同的因素。剪切的叶面积小于 1. 5 × 1. 5
cm2，毛状根诱导率随着面积的增加而增加，当剪切
的叶面积高于 1. 5 × 1. 5 cm2，诱导率随着面积的增
加反而减小。以此可以说明叶面积在 1. 5 × 1. 5 cm2
时叶片与 Ｒ1000 和 Ｒ1601 菌株的侵染能力相符。
表 3 不同的扩大培养时间对毛状根增值的影响． n =5，珋x ± s
Tab. 3 Effects of culture time on the growth of hairy roots． n =
5，珋x ± s
Day in
culture /d
Inoculum
concentration /g
Value added
on products /g
Multiple
/ t
7 0. 151 0 ± 0. 002 0 2. 741 3 ± 0. 021 5 18. 842 3 ± 0. 264 7
14 0. 148 3 ± 0. 001 1 2. 147 3 ± 0. 009 1 14. 476 3 ± 0. 053 5
21 0. 149 3 ± 0. 003 2 1. 650 0 ± 0. 023 2 11. 032 3 ± 0. 111 0
28 0. 147 7 ± 0. 003 8 1. 118 6 ± 0. 028 0 7. 576 0 ± 0. 112 0
35 0. 148 7 ± 0. 001 5 0. 406 3 ± 0. 013 3 2. 733 0 ± 0. 078 3
42 0. 148 3 ± 0. 002 5 0. 176 7 ± 0. 004 2 1. 191 0 ± 0. 012 5
图 7 不同液体培养基对毛状根增值倍数的影响． n =5，珋x ± s
Fig. 7 Effects of media on the growth of hairy roots． n = 5，珋x ± s
图 8 关苍术毛状根 PCＲ检测结果
M －Marker 2000;1 －质粒 DNA;2 － Ｒ1000 诱导关苍术叶片产生毛状根;3 －
Ｒ1000 诱导关苍术根产生毛状根;4 － Ｒ1601 诱导关苍术叶片产生毛状根;5 －
Ｒ1000 诱导关苍术根产生毛状根;6 －阴性对照
Fig. 8 PCＲ Ｒesults of hairy roots
M － Marker 2000;1 － Plasmid DNA;2 － Hairy roots from A． japonica leaf induced
by A． rhizogenes Ｒ 1000;3 － Hairy roots from A． japonica root induced by A． rhi-
zogenes Ｒ 1000;4 － Hairy roots from A． japonica leaf induced by A． rhizogenes Ｒ
1601;5 － Hairy roots from A． japonica root induced by A． rhizogenes Ｒ 1000;6 －
Normal roots
·0931· Chin Pharm J，2014 August，Vol. 49 No. 16 中国药学杂志 2014 年 8 月第 49 卷第 16 期
表 4 关苍术毛状根中多糖含量测定方法学考察． n = 5
Tab. 4 Study on methodology of determination of contents of polysaccharides． n = 5
Ｒange
linearity /μg·mL －1
Linear
equation
Correlation
coefficient
Degree of precision
ＲSD /%
Stability
ＲSD /%
Ｒepeatability
ＲSD /%
Ｒecovery
/%
Polysaccharides 0. 05 ～ 0. 03 y =12. 880x +0. 000 3 0. 999 0 0. 82 1. 63 1. 92 98. 4
在外植体预培养 36 ～ 48 h 时，关苍术外植体诱
导率达到最高，其原因可能是:①叶片产生伤口后
36 ～ 48 h 会形成并且释放 AS 等酚类物质，作为诱
导发根农杆菌识别的信号分子;②叶片伤口处的细
胞属于生长的活跃期，正在形成大量的新细胞，使菌
株更容易侵染成功。
菌液对外植体感染时间在很大程度上影响着关
苍术外植体的诱导率，长时间地进行侵染或者运用
高浓度的菌液侵染，会导致植物外植体褐化、损伤甚
至坏死，而短时间的侵染或者运用低浓度的菌液侵
染，则会导致外植体没有感染上菌液，无法诱导出毛
状根。
发根农杆菌侵染受体植物后，经过乙酰丁香酮
(AS)的作用后可增强发根农杆菌的诱导效果［18］。
AS的浓度高低会在一定程度上影响关苍术毛状根
的诱导率。高浓度的 AS 不仅会抑制诱导率的提
升，对植物外植体产生一定危害，还会降低关苍术毛
状根的生长速率。本实验中虽然 AS 对毛状根生长
有一定的促进作用，但在后续培养中关苍术毛状根
的长势远不如没加 AS 的毛状根，这可能是由于在
培养基中 AS的残留抑制了关苍术毛状根的生长。
White 培养基中 KCl、Ca(NO3)2化学成分是
Ｒ2、1 /2 MS、MS、N6、B5 这 5 种培养基所不具备的，
在 White 的大量培养液体系中 KNO3 的使用量
(101. 11 mg·L －1)是上述 6 种培养基中的使用量
最少的，比 MS 培养基中的 KNO3少 20 倍。而 Mg-
SO4的使用量(720 mg·L
－1)是上述 6 种培养基中
MgSO4的使用量最多的，比 MS培养基中 MgSO4高出
2 倍。White的微量培养液体系中 CaSO4的使用量
(0. 001 mg·L －1)低于其他培养基中 CaSO4含量。
White的铁盐培养液体系中并没有加入 EDTA 类化
合物，仅有 Fe2(SO4)3存在。而烟酸(1. 0 mg·
L －1)、VB1(10. 0 mg·L
－1)、VB6(1. 0 mg·L
－1)、肌
醇(100. 0 mg·L －1)是 White 的有机培养液体系的
成分。通过以上实验数据我们分析认为 KCl、Ca
(NO3)2、KNO3、MgSO4、CaSO4、EDTA 类化合物、烟
酸、VB1、VB6、肌醇是影响关苍术毛状根扩大培养体
系建立的主要因素，但这些化合物对关苍术毛状根
扩大培养的重要次序还有待在今后进一步的研究。
综上所述，本实验建立关苍术毛状根体系的因
素考察结果为，用 0. 1% 升汞对关苍术籽消毒 6
min，应用 MS 培养基培养 25 d 后用于 Ｒ1000 与
Ｒ1601 的侵染，叶面积剪切至 1. 5 × 1. 5 cm2，预培养
36 h，菌种侵染 6 min，As 浓度为 0 mg·mL －1。用
Ｒ1000 感染叶片诱导率最高为 62% ＞ Ｒ1000 感染根
(52%)＞ Ｒ1601 感染叶片(24%)＞ Ｒ1601 感染根，
而 2 种菌株对茎段的诱导率均为 0。培养 21 d后转
入液体 White培养基中，14 ～ 21 d之间，关苍术毛状
根增值速度最快。关苍术毛状根多糖含量为
(126. 7 ± 16. 2)mg·g －1。
本实验建立了关苍术毛状根的培养体系，并优
化了其培养条件，最终对毛状根中的有效成分进行
了初步的含量测定分析。在今后的研究中还会对关
苍术毛状根进行深入的研究，进一步考察其他因素
对关苍术毛状根的影响，以确定诱导率最高，能够使
关苍术毛状根大量增值的条件，能积累更多的次生
代谢产物，为实现关苍术毛状根的产业化做进一步
的准备。从关苍术毛状根中分析研究不同的次生代
谢产物，明确活性成分，以进一步开发研究关苍术毛
状根在药理药效方面的功能，以便应用于生产实践。
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(收稿日期:2013-11-20)
关于举办 2014 年中国药学大会暨第十四届中国药师周的通知(第二轮)
由中国药学会主办、石药集团有限公司等协办 2014 年中国药学大会暨第十四届中国药师周，拟于 10 月 24 至 26 日在河
北省石家庄市举行。本次大会将深入贯彻落实党的十八届三中全会精神和习近平总书记系列重要讲话精神，牢牢抓住深化
改革机遇，充分发挥学会生力军作用，服务创新驱动发展战略，全面推动大健康文化和产业发展。同时，以提高我国医药创新
能力为核心，充分调动激发广大药学工作者的积极性创造性，积极搭建学术交流平台、政策研究平台和科普活动平台，为我国
医药卫生事业发展及实现中华民族伟大复兴的中国梦做出新贡献。
大会通过对中药和天然药物、药物化学、生化与生物技术药物、医院药学等 20 个药学专业领域广泛交流，分析研讨我国医
药卫生事业发展前景，并围绕我国医药科技创新驱动发展战略、推进大健康文化及产业发展等重大问题进行深入交流和研
讨，努力促进药学学科交叉融合，积极推动我国医药产业转型发展。大会开幕式上颁发 2014 年中国药学会优秀药师奖、中国
药学会-施维雅青年医院药学奖、中国药学会-赛诺菲青年生物药物奖、中国药学会科学技术奖;邀请我国医药卫生领域政府部
门领导、两院院士围绕会议主题及前沿、热点问题作大会报告，进行 10 个以上分会场、卫星会场专题报告交流;举办以安全合
理用药为主要内容的科普公益活动;召开 2014 年全国医药经济信息网工作会议、中国药学会 23 届理事会第四次会议等。
1 征文范围和要求 ①征文范围:欢迎广大会员和药学工作者积极投稿，征文范围包括药学领域学科即生化与生物技术药
物、中药和天然药物、药物化学、海洋药物、制药工程、药剂、抗生素、药物分析、医院药学、老年药学、药事管理、军事药学、药物
流行病学、应用药理、药物经济学、药学史、药物临床评价研究、药物安全评价研究、医药知识产权研究、生物药品与质量研究
及药物信息研究与利用等相关内容。②征文要求:请参会代表提交尚未在期刊发表的科研论文、专题报告或综述，每篇论文
只能投一个分会场;每篇字数控制在 4 000 字以内，采用 Word文档编辑，论文格式请参照中国药学杂志稿约要求。作者及单
位确保论文内容的真实性和客观性，文责自负。③注意事项:请登录会议网站(http:/ /cpacn． cbpt． cnki． net)，注册报名信息后
按照稿件所属专业上传提交论文全文或摘要，全部论文经专家评审后，符合要求者将收录论文集光盘。为扩大会议学术成果
影响，会后将论文集光盘向有关我国论文收藏机构和检索机构(CNKI 等)推荐，未向大会作特殊声明者，视为同意授权推荐。
④征文截止日期:2014 年 9 月 20 日。
2 论文评奖 由药学专家组成论文评审委员会，遴选出 200 篇论文在各分会场报告交流。根据现场论文报告交流情况，各专
业会场分别评出一等奖 1 名、二等奖 2 名、三等奖 3 名，奖励金额(含税)分别为 3 000 元、2 000 元、1 000 元，并颁发获奖证书。
获奖论文推荐在《中国药学杂志》、《药学学报》、《中国中药杂志》、《中国临床药理学杂志》、《中国新药杂志》、《中国医院药学
杂志》等期刊发表。
3 联系方式 中国药学会:地址:北京建外大街四号建外 SOHO九号楼 1802 室，邮编:100022，联系人:孙文虹、范玫杉、张子
烨，电话:010-58699280-819 /820 /822，传真:010-58694812，E-mail:yxhxsb@ vip． 163． com，信息网工作会议联系人:刘晓华(010-
65660788-118;liuxiaohua@ cmei． org． cn)，高三章(010-65660788-188;gaosanzhang@ cmei． org． cn)。财务联系人:郑巍、乔中兴
(010-58694879)。
详细情况请登陆会议网站(http:/ /cpacn． cbpt． cnki． net)和中国药学会网站(http:/ /www． cpa． org． cn)查询大会情况。
doi:10. 11669 /cpj. 2014. 16. 006 ［本刊讯］
·2931· Chin Pharm J，2014 August，Vol. 49 No. 16 中国药学杂志 2014 年 8 月第 49 卷第 16 期