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泥胡菜抗炎作用的实验研究



全 文 :Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
第16卷 第2期
Vol.16 No. 2
2010年 2月
February.2009
泥胡菜抗炎作用的实验研究 *
龚梦鹃,邹忠杰
(广东药学院中药学院,广东 广州 510006)
[摘要] 目的:观察泥胡菜的抗炎作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀法、大鼠棉球肉芽肿法、大鼠尿酸盐结晶所致痛
风性关节炎模型,观察泥胡菜的抗炎作用,并采用甲醛致小鼠足肿胀法观察其对炎症局部组织中前列腺素(PGE2)的影响。结
果:泥胡菜能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀,减少大鼠棉球肉芽肿的形成,对微晶型尿酸钠致大鼠踝关节肿胀有显著抑
制作用,降低炎性组织中PGE2的含量。结论:泥胡菜具有明显抗炎作用,其机制与抑制组织中PGE2生成有关。
[关键词] 泥胡菜;抗炎;前列腺素
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X(2010)02-0059-02
Experimental Studies on the Anti-inflammatory Activities of Ethanol Extract of
Hemistepta lyrata Bunge.
GONG Meng-juan,ZOU Zhongjie
Guangdong College of Pharmacy, Guangzhou, China, 510006
[Abstract] Objective To study the anti-inflammatory activities of the ethanol extract of Hemistepta lyrata Bunge. Methods
The methods of xylene-induced ear edema in mice, granuloma induced with cotton ball in rats and hind paw edema induced
with crystallite sodium urate in rats were used to observe the anti-inflammatory effects. The content of PGE2 was measured in
hind paw edema induced with formaldehyde in mice. Results The ethanol extract of H. lyrata Bunge. could inhibit xylene-in-
duced ear edema, granuloma induced with cotton ball and hind paw edema induced with crystallite sodium urate in rats, de-
crease the content of PGE2. Conclusion The ethanol extract of H. lyrata Bunge. has significant anti-inflammatory effects, which
was related to its inhibitory effects on PGE2.
[Key words] Hemistepta lyrata Bunge.; anti-inflammatory; PGE2
泥胡菜(Hemistepta lyrata Bunge.)为菊科泥胡菜属植
物,广泛分布于我国各地。该植物性味苦凉,有清热解毒,消
肿祛瘀的作用[1],临床用于治疗痔漏、痈肿、疔疮、外伤出血和
骨折等。笔者对泥胡菜的化学成分及抗炎作用进行了系统研
究[2,3],现报告如下。
1 材 料
1.1 药品与试剂 泥胡菜:采自江西省九江市,经江西九江
森林植物研究所谭策铭研究员鉴定为Hemistepta lyrata
Bunge.。泥胡菜药材以8倍量95%乙醇加热回流提取3次,每次
1 h,合并提取液回收溶剂,即得供试样品;吲哚美辛肠溶片
(25 mg/片,广东华南药业有限公司,批号:070801);秋水仙碱
片(0.5 mg/片,西双版纳药业有限责任公司,批号:070104)。
1.2 仪器 PV-200足趾容积测量仪(成都泰盟科技有限公
司);UV-1800紫外可见光光度计(北京瑞利分析仪器公司)。
1.3 实验动物 NIH小鼠,雌雄各半,18-22 g,SPF级,由广东
省医学实验动物中心提供,合格证号:2006A017。SD大鼠,雄
性,160-180 g,SPF级,由广东省医学实验动物中心提供,合格
证号:2006A015。
2 方 法
2.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[4] 取NIH小鼠75只,雌雄
各半,体重18-22 g,随机分为5组,分别以生理盐水、吲哚美辛、
泥胡菜高剂量、中剂量、低剂量灌胃,给药容积为20 mL/kg,
1次/d,连续给药4 d,第5天灌胃后1 h致炎(二甲苯涂擦右耳正
反面,0.05 mL/只,左耳作对照)。30 min后将小鼠颈部脱臼处
死,用直径7 mm的打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳
片,电子天平称重,求左、右耳片重量差值为肿胀度,比较组
间差异。
2.2 对大鼠棉球肉芽肿的影响[4] 取雄性SD大鼠60只,体重
160-180 g,随机分成5组,戊巴比妥钠麻醉后,在大鼠腹部皮
层消毒后剪开1 cm长小口,以血管钳扩充皮下组织,用眼科
镊子将重量为50 mg的灭菌棉球(棉球加头孢呋辛钠0.1 mL以
防感染)植入左右两侧腹股沟皮下,然后缝合。手术当天开始
灌胃给药,分别以生理盐水、吲哚美辛、泥胡菜高剂量、中剂
量、低剂量灌胃,1次/d,给药容积为10 mL/kg,连续给药7 d,第
8天脱颈处死大鼠,打开原切口,将棉球连同周围结缔组织一
起取出,剔除脂肪组织,在70℃烘箱中放置6 h后称重,将称得*基金项目:广东药学院引进人才科研基金(2007ZYX02)
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方药研究
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2010.02.035
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February.2010Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
的重量减去棉球原重量即得肉芽肿的重量(按mg/100 g体重
计)。比较各组肉芽肿重量的差别。
2.3 对微晶型尿酸钠致大鼠踝关节肿胀的影响[5] 取雄性SD大
鼠60只,体重160-180 g,随机分成5组,即生理盐水空白对照
组、秋水仙碱阳性药物对照组、泥胡菜高、中、低剂量组,每组
灌胃给予相应的药物,空白对照组给予等容积的生理盐水,1
次/d,给药容积为10 mL/kg,连续3 d,试验前每鼠左后足踝关
节处用记号笔作一清晰横线,用足趾容积测量仪测量大鼠足
趾容积。末次给药1 h后,无菌操作,每鼠左后足跖皮下注射
10%尿酸钠混悬液0.1 mL,分别于1、2、3、4、5 h各测鼠足趾容积
1次,计算足肿胀百分率。
2.4 对甲醛致小鼠足肿胀组织中PGE2含量的影响[6] 取NIH小
鼠60只,雌雄各半,体重18-22 g,随机分成5组,即生理盐水
组、吲哚美辛阳性对照组、泥胡菜高、中、低剂量组,给药容积
为20 mL/kg,对照组给予等量的生理盐水,1次/d,连续5天,末
次给药后1 h,各小鼠右后足跖皮下注射2.5%甲醛生理盐水溶
液50 μL/只,24 h后处死小鼠,距右踝关节上1 cm处剪下右足,
剥皮后浸泡于5 mL生理盐水中1 h,以1500 r/min离心10 min,吸
取上清液0.5 mL,加入0.5 mol/L氢氧化钠-甲醇溶液2 mL,在
50℃水浴箱中水浴异构化20 min,加甲醇稀释至20 mL,于紫外
分光光度计278 nm处测定吸收值,并按下述公式计算PGE2含
量:PGE2含量(μg/g)=(E278×13.13×Vt×D)/W。比较各组间差异。
[注:Vt=PGE2浸泡液总体积,D=稀释倍数,W=右下肢重量(g),
E278=278 nm处的吸收值]
3 结 果
3.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 泥胡菜高、中、低剂量
组与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.01),表明泥胡
菜对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显抑制作用,且与剂量有关,
随剂量的增大而增强。(见表1)
表1 泥胡菜对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 (x±s)
组别 剂量(生药g/kg) 动物(只) 耳肿胀度(mg) 抑制率(%)
生理盐水组 - 15 3.59±1.27 -
吲哚美辛组 15 mg/kg 15 0.94±0.85a 73.74
泥胡菜高剂量组 2 15 1.11±0.51a 69.22
泥胡菜中剂量组 1 15 1.18±1.09a 67.13
泥胡菜低剂量组 0.5 15 1.36±0.68a 62.26
注:与生理盐水组比较,aP<0.01。
3.2 对大鼠棉球肉芽肿的影响 泥胡菜高、中、低剂量组与
生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.01),说明泥胡菜能
明显抑制大鼠棉球肉芽肿的形成,提示泥胡菜对肉芽肿亚急
性炎症具有一定的抗炎作用,且随剂量增大而增强。(见表2)
表2 泥胡菜对大鼠棉球肉芽肿的影响 (x±s)
组别 剂量(生药g/kg) 动物(只) 肉芽重量(mg/100 g)
生理盐水组 - 12 96.52±20.70
吲哚美辛组 15 mg/kg 12 50.03±13.97a
泥胡菜高剂量组 2 12 55.20±10.92a
泥胡菜中剂量组 1 12 57.07±9.11a
泥胡菜低剂量组 0.5 12 64.68±17.30a
注:与生理盐水组比较,aP<0.01。
3.3 对微晶型尿酸钠致大鼠踝关节肿胀的影响 与生理盐
水组比较,泥胡菜高剂量组对致炎1 h、2 h、3 h、4 h、5 h时大鼠
的踝关节肿胀具有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01),说明
泥胡菜高剂量组对微晶型尿酸钠致大鼠踝关节肿胀具有显
著抑制作用,且起效快,作用时间长。(见表3)
表3 泥胡菜对尿酸钠致大鼠踝关节肿胀的影响 (n=12,x±s)
剂量 足肿胀率(%)
(生药g/kg) 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h
生理盐水组 -
秋水仙碱组 1.5 mg/kg
泥胡菜高剂量组 2
泥胡菜中剂量组 1
泥胡菜低剂量组 0.5
注:与生理盐水组比较,aP<0.01,bP<0.05。
19.54±8.99
6.21±2.14a
7.28±2.12a
13.08±7.92
15.06±8.09
19.97±5.15
6.41±1.34a
11.02±6.11b
12.14±8.04
15.20±6.16
20.36±5.12
7.30±1.16a
12.06±6.08a
15.10±7.11
18.16±6.05
21.41±6.08
8.41±2.20a
13.19±5.07b
17.14±7.11
20.18±7.12
22.43±5.08
9.36±2.19a
13.09±4.11a
16.10±6.12
23.07±6.13
组别
3.4 对甲醛致小鼠足肿胀组织中PGE2含量的影响 泥胡菜高
剂量组与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.05),表明
泥胡菜高剂量组可明显降低炎症组织中的PGE2含量。(见表4)
表4 泥胡菜对甲醛致小鼠足肿胀组织中PGE2含量的影响
(x±s)
组别 剂量(生药g/kg) 动物(只) PGE2含量(μg/g)
生理盐水组 - 12 98.12±20.23
吲哚美辛组 15 mg/kg 12 64.18±12.36a
泥胡菜高剂量组 2 12 75.37±18.61a
泥胡菜中剂量组 1 12 84.57±10.68
泥胡菜低剂量组 0.5 12 92.34±14.21
注:与生理盐水组比较,aP<0.05。
4 讨 论
采用二甲苯致小鼠耳肿胀法和大鼠棉球肉芽肿法等经
典动物实验方法,观察泥胡菜对炎症发生的早期和晚期的影
响。结果表明,泥胡菜既可抑制炎症早期的水肿,又可抑制炎
症晚期的组织增生和肉芽组织的生成,提示泥胡菜具有显著
的抗炎作用。同时,通过足部注射尿酸钠建立了痛风性关节
炎的模型,观察泥胡菜对痛风的影响,结果表明泥胡菜对尿
酸钠诱导大鼠足肿胀具有显著的抑制作用,且作用呈剂量依
赖性。
从炎症的病理生理来看,炎症介质PGE2等会使血管扩张
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Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
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骨碎补总黄酮含药血清
对大鼠成骨细胞AR mRNA表达的影响
段冠清1,蔡 莹2,沈 慧2
(1.长沙民政职业技术学院,湖南 长沙 410007;2.湖南中医药大学,湖南 长沙 410007)
[摘要] 目的:探讨骨碎补总黄酮含药血清对大鼠成骨细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)mRNA表达的影响。方
法:取1日龄SD大鼠分离原代成骨细胞培养后传代,进行细胞鉴定。细胞分为3组,分别进行骨碎补总黄酮含药血清、丙酸睾
酮、空白血清干预,RT-PCR方法测定成骨细胞雄激素受体mRNA表达的结果。结果:雄激素干预组及骨碎补干预组的AR mRNA表
达率差异无统计学意义(P>0.05),表明骨碎补总黄酮的效应类似于丙酸睾酮。结论:骨碎补总黄酮可促进AR mRNA表达,可
能与拟雄激素效应有关,从而可抑制骨吸收和促进骨生成,最终达到治疗雄激素水平下降所致骨质疏松症的目的。
[关键词] 骨碎补总黄酮;成骨细胞;AR;骨质疏松
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X(2010)02-0061-04
The Effect of Osteopractic Total Flavonoid Medicated Serum on the Expression of AR
mRNA from Osteoblasts in Rat
DUAN Guan-qing1, CAI Ying2, SHEN Hui2
1.Changsha Vocational and Technical College of Civil Administration;2.Hunan University of TCM, Changsha,China, 410007
[Abstract] Objective:To explore the effect of osteopractic total flavonoid medicated serum on the expression of Androgen
Receptor(AR) mRNA from osteoblasts in rat. Methods:Isolated culture primary osteoblasts in one -day old rats,and then
identified cells. Cells were divided into 3 groups, respectively interfered with osteopractic total flavonoid medicated serum ,
testosterone propionate and blank serum; RT -PCR determined the results of expression of androgen receptor mRNA from
osteoblasts .Results:There was no significant difference on the AR mRNA expression between the groups intervented by
Androgen and Drynaria(P >0.05),manifesting that the effect of osteopractic total flavonoid was equivalent to testosterone
propionate.Conclusion: Osteopractic total flavonoid can promote the expression of AR mRNA possibly because of its relation
to androgen-like effects.Consequently,it inhibits bone resorption as well as promotes bone formation, and ultimately achieve
the treatment in osteoporosis account for the decrease of androgen levels.
[Key words] Osteopractic total flavonoid; Osteoblast; AR; Osteoporosis
骨碎补为常用中药,目前研究发现:骨碎补黄酮对于去
势所致骨质疏松症模型有较好的实验疗效,其疗效机理是否
真的与雄激素效应相关,还需要进一步证明。本次实验研究
拟从细胞水平着手进行研究,主要考察骨碎补黄酮在骨组织
和组织水肿,并使机体痛觉增敏。本实验采用甲醛致小鼠足
肿胀法测定炎症组织中PGE2,结果表明泥胡菜高剂量组抑制
小鼠PGE2的产生,提示泥胡菜的抗炎作用机制之一可能与减
少炎症组织中PGE2含量有关。本实验为其应用提供了实验依
据。
参考文献
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(收稿日期:2009-10-19 编辑:李海洋)
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