全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１６（０３）：１０６～１０８
第一作者简介：刘晓光（１９８０－），女，河北石家庄人，博士，讲师，现
主要从事野生植物资源开发与利用等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚａｏｓｙ１２６
＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：承德市财政局资助项目（ＣＺ２０１４００４）。
收稿日期：２０１５－０９－２４
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０３０２９
山杏胚培养影响因素研究
刘 晓 光１，李 贺 丹２
（１．河北民族师范学院 化学系，河北 承德０６７０００；２．河北农业大学 生命学院，河北 保定０７１００１）
摘 要：以当年生野生山杏成熟种子为试材，采用组织培养法，研究了种皮、不同浓度赤霉素
（ＧＡ３）以及光照条件对山杏种子萌发的影响。结果表明：光照１６ｈ、黑暗８ｈ条件下，ＭＳ培养基
中添加０．１６ｍｇ／Ｌ ＧＡ３能有效促进去种皮山杏种子的萌发，未去除种皮的山杏种子均未萌发；在
遮光条件下，去种皮种子在添加了０．１６ｍｇ／Ｌ与０．５０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基中发芽率均为
１００％，幼苗比光照１６ｈ、黑暗８ｈ培养条件下的高且生长速度快，但黄化现象严重；将幼苗移至土
壤中，能够正常生长，成活率达１００％。
关键词：山杏；胚培养；ＧＡ３
中图分类号：Ｓ ６６２．２０３．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１６）０３－０１０６－０３
山杏（Ｐｒｕｎｕｓ ｓｉｂｉｒｉｃａ Ｌ．）即西伯利亚杏，是重要的
野生资源。为生产苦杏仁的主要树种，具有很高的药用
价值和营养价值［１］。山杏适应性强，喜光，根系发达深
入地下，具有耐寒、耐旱、耐瘠薄的特点，是一种优良的
水土保持植物。国家提出了“南有油茶，北有山杏”的中
国生态经济林格局，把发展山杏产业纳入国家木本粮油
安全战略的重要组成部分，山杏在承德地区也作为重要
发展的林业经济树种。但农民对山杏的栽培管理观念
淡薄，育种采用传统方式，将成熟种子存储一冬后第２
年再进行播种育苗，一般需要３～４年，导致山杏产业进
展非常缓慢。因此，缩短山杏的育苗周期是促进山杏产业
发展的一项重要任务。对于山杏种子处理的研究报道很
少，并且年代较为久远。现以成熟山杏种子为试材，研究
了其在组培条件下最佳萌发条件，缩短了山杏种子的发
芽及育种时间，以期为山杏的种苗繁育奠定了一定的
基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
山杏的成熟胚取自承德市围场县，树体自然野生状
态生长。ＭＳ培养基中添加５．５ｇ／Ｌ琼脂、３０ｇ／Ｌ蔗糖，
ｐＨ ５．８，在１２１℃下灭菌１７ｍｉｎ备用。
１．２ 试验方法
１．２．１ 种皮处理 取去除外果皮硬壳完整无损的果核，
自来水中洗干净，在无菌条件下，用７５％酒精浸泡２～
３ｍｉｎ，０．１％升汞灭菌８ｍｉｎ，用无菌水浸泡并冲洗４～
５次。将灭菌的山杏种子分为去种皮与带种皮２种处理
分别接种到ＭＳ培养基上，置于２５℃、光照１６ｈ、黑暗８ｈ
的条件下培养。
１．２．２ 不同浓度ＧＡ３处理 将灭菌的山杏种子去种皮
后接种到添加了０．０２（Ｔ１）、０．１０（Ｔ２）、０．１６（Ｔ３）、
０．５０ｍｇ／Ｌ（Ｔ４）ＧＡ３的ＭＳ培养基上（表１）。置于２５℃、
光照１６ｈ、黑暗８ｈ的条件下培养。
表１ 不同浓度ＧＡ３处理
Ｔａｂｌｅ １ Ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＡ３ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
种皮
Ｔｅｓｔａ
不同培养基
Ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉａ
Ｔ１ 去种皮 添加０．０２ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
Ｔ２ 去种皮 添加０．１０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
Ｔ３ 去种皮 添加０．１６ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
Ｔ４ 去种皮 添加０．５０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
对照组 去种皮 未添加ＧＡ３的 ＭＳ培养基
１．２．３ 遮光处理 将灭菌的山杏种子做去种皮处理，分
别接种到添加了０．０２、０．１０、０．１６、０．５０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的ＭＳ
培养基上，分别置于遮光环境（Ｔ５～Ｔ８）与光周期１６ｈ／８ｈ
（Ｔ９～Ｔ１２）中，观察并记录发芽率及幼苗生长情况。
表２ 遮光处理
Ｔａｂｌｅ ２ Ｓｈａｄｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
不同培养基
Ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉａ
Ｔ５
Ｔ６
Ｔ７
Ｔ８
遮光处理
添加０．０２ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
添加０．１０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
添加０．１６ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
添加０．５０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
Ｔ９
Ｔ１０
Ｔ１１
Ｔ１２
光照１６ｈ、黑暗８ｈ
添加０．０２ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
添加０．１０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
添加０．１６ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
添加０．５０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的 ＭＳ培养基
１．３ 数据分析
试验数据用ＳＰＳＳ软件采用ＬＳＤ进行方差分析，方
差置信区间为０．０１。
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北方园艺２０１６（０３）：１０６～１０８ ·生物技术·
２ 结果与分析
２．１ 种皮对山杏发芽率的影响
未去除种皮的山杏胚均未萌发，去除种皮的山杏成
熟胚在未添加植物生长调节剂的 ＭＳ培养基中也能萌
发，但发芽率仅为４０％。
２．２ 不同浓度ＧＡ３处理对山杏发芽率的影响
由表３可知，不同浓度ＧＡ３对山杏的萌发作用不
同。添加０．０２ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的处理山杏的发芽率为５５％，
添加０．１０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的处理山杏的发芽率为６５％，而添
加０．１６ｍｇ／Ｌ ＧＡ３与０．５０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３对山杏种子萌发的
影响没有显著性差异，发芽率分别为８０％与８５％，去除
种皮的山杏成熟胚在未添加植物生长调节剂的培养基
中也能萌发，但发芽率仅为４０％，远远低于添加ＧＡ３的
处理。在添加植物生长调节剂的处理中，山杏种子的发
表３ 不同浓度ＧＡ３对山杏胚培养的影响
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＧＡ３ｏｎ
ｅｍｂｒｙｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｗｉｌｄ ａｐｒｉｃｏｔ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
转绿率
Ｔｕｒｎ ｇｒｅｅｎ ｒａｔｅ／％
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ／％
Ｔ１ １００ ５５Ｃ
Ｔ２ １００ ６５Ｂ
Ｔ３ １００ ８０Ａ
Ｔ４ １００ ８５Ａ
对照组 １００ ４０Ｄ
注：不同英文字母表示差异达到显著水平（Ｐ＜０．０１）。下同。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｓｈｏｗ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ ０．０１ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
芽率高于空白ＭＳ培养基中的种子，说明山杏种胚中也
存在抑制萌发的物质［２］。
植物生长调节剂能有效打破山杏种子的休眠。试
验结果表明，添加适宜浓度的ＧＡ３能有效打破山杏种子
的休眠达到较好的发芽效果，且随着ＧＡ３浓度的增加山
杏种子的发芽率增高。但过高的植物生长剂浓度也会
抑制植物的萌发。在去种皮处理中，添加０．１６ｍｇ／Ｌ与
０．５０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３对山杏种子的发芽率没有显著的影响，可
见ＭＳ＋０．１６ｍｇ／Ｌ ＧＡ３培养基就能满足山杏萌发的需要。
２．３ 遮光处理对山杏发芽率的影响
由表４可知，连续观察１２ｄ后，Ｔ７、Ｔ８处理下的山杏
种子发芽率能到达１００％，极显著高于Ｔ１２的６５％，遮光
条件下生长的山杏幼苗株高、根长也都优于光照１６ｈ黑
暗８ｈ培养下的幼苗。但如果山杏种子发芽后继续在遮
光条件下培养，幼苗植株细弱并出现黄化现象 （图１ａ、ｃ），
表４ 光照对山杏萌发及生长的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｌｉｇｈｔ ｏｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｗｉｌｄ ａｐｒｉｃｏｔ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ／％
平均根长
Ａｖｅｒａｇｅ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｒｏｏｔ／ｃｍ
平均芽长
Ａｖｅｒａｇｅ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｂｕｄ／ｃｍ
Ｔ５ ５０Ｄ ２．３３０ １．０２５
Ｔ６ ８５Ｂ ２．５６５ １．３２５
Ｔ７ １００Ａ ２．９５５ １．６５５
Ｔ８ １００Ａ ２．９５０ １．７４５
Ｔ９ ４０Ｅ ０．０４０ ０．０５０
Ｔ１０ ５０Ｄ ０．０５０ ０．０５０
Ｔ１１ ６０Ｃ ０．２００ ０．０７５
Ｔ１２ ６５Ｃ ０．３８０ ０．１５０
注：ａ．试验第１０天遮光条件下的Ｔ７处理，ｂ．Ｔ７处理的幼苗取出转至光培养２ｄ后转绿，ｃ．试验第１２天遮光条件下的Ｔ７处理，ｄ．试验第１２天转到
光下培养２ｄ的Ｔ８处理，根长达到９ｃｍ，ｅ．试验第１４天转到光下培养４ｄ的Ｔ８处理，株高达到５．５ｃｍ，ｆ．Ｔ１１处理，试验第１９天。
Ｎｏｔｅ：ａ．Ｔｈｅ Ｔ７ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ １０ｔｈ ｄａｙ，ｂ．Ｔｈｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｏｆ Ｔ７ｔｕｒｎｅｄ ｔｏ ｇｒｅｅｎ ａｆｔｅｒ ２ｄａｙｓ ｓｉｎｃｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ，ｃ．Ｔｈｅ Ｔ７ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ １２ｔｈ
ｄａｙ ｉｎ ｄａｒｋ，ｄ．Ｔｈｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｏｆ Ｔ８ａｆｔｅｒ ２ｄａｙｓ ｓｉｎｃｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ，ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｗａｓ ９ｃｍ，ｅ．Ｔｈｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｏｆ Ｔ８ａｆｔｅｒ ４ｄａｙｓ ｓｉｎｃｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ，ｔｈｅ
ｈｅｉｇｈｔ ｗａｓ ５．５ｃｍ，ｆ．Ｔｈｅ Ｔ１１ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ １９ｔｈ ｄａｙ．
图１ 光照对山杏萌发及生长的影响
Ｆｉｇ．１ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｌｉｇｈｔ ｏｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｗｉｌｄ ａｐｒｉｃｏｔ
７０１
·生物技术· 北方园艺２０１６（０３）：１０６～１０８
将其取出置于光照１６ｈ、黑暗８ｈ条件下培养，叶片会在
１～２ｄ内转绿且植株能够正常生长（图１ｂ），植株最高能
到达５．５ｃｍ，根最长能到达９ｃｍ（图１ｄ、ｅ）。而光照
１６ｈ、黑暗８ｈ条件下萌发的山杏幼苗节间短、子叶全数
转绿 （图１ｆ），但其平均株高与根长都低于遮光条件下的
幼苗。
植物对光的喜好程度不同，光照条件对其生长影响
差异较大，适度遮光处理对某些植物的生长非常有
利［３］。遮光处理对山杏种子的萌发也有影响，试验证实
遮光条件下的山杏种子发芽率比光照１６ｈ、黑暗８ｈ条
件下的要高。但是因遮光条件下叶片无法进行光合作
用使得幼苗细弱、黄化现象严重。将发芽的山杏幼苗移
到光下培养，幼苗在１～２ｄ转绿，后期生长良好根茎都
有加粗现象。故可将２种方法结合起来，先将山杏种子
置于遮光条件下培养，当到达发芽高峰期后将山杏幼苗
取出置于光照１６ｈ、黑暗８ｈ的条件下培养，可快速获得
生长情况良好的幼苗。
３ 结论与讨论
去除种皮的山杏种子在未添加植物生长调节剂的
ＭＳ培养基中能萌发，而未去除种皮的山杏种子均未萌
发，这表明山杏种皮中确实含有抑制胚生长的物质，与
前人研究结果一致［４］。去种皮处理能有效打破种子的
休眠促进当年生山杏种子的萌发。
在果树育种育苗中通常采用低温处理的方法促进
萌发，一般低温处理的温度为０～５℃，最佳时长为８０～
１００ｄ，但是低温处理所需时间长且效果不甚理想［５－７］。
休眠的种子中脱落酸的含量高，而萌发中的种子赤霉素
含量高，因此用适宜浓度的外源ＧＡ３处理能有效打破种
子的休眠［７－１０］。该研究表明，添加０．１６ｍｇ／Ｌ ＧＡ３的ＭＳ
培养基能有效打破山杏种子的休眠。
此外，光照对植物的生长也有重要作用，不同植物
的萌发对光的需求差异较大。有些外植体在培养前期
需进行遮光培养，尤其是在叶片培养、生根培养和愈伤
诱导等试验［１１－１３］。不同植物萌发对光的需求不同，遮光
处理有利于山杏幼苗的生长。因此，先将山杏种子置于
遮光条件下培养，当到达发芽高峰期后将山杏幼苗取出
置于光照１６ｈ、黑暗８ｈ的条件下培养，可快速获得生长
情况良好的幼苗，将幼苗转移至土壤中，成活率达到
１００％，并且生长状况良好。该研究为山杏的种苗繁育
和快速繁殖奠定了基础。
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ＬＩＵ Ｘｉａｏｇｕａｎｇ１，ＬＩ Ｈｅｄａｎ２
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｈｅｂｅｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｃｈｅｎｇｄｅ，Ｈｅｂｅｉ ０６７０００；２．Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ，Ｈｅｂｅｉ ０７１００１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄｓ ｏｆ ｐｒｕｎｕｓ ａｒｍｅｎｉａｃａ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏ ｃｕｌｔｕｒｅ，
ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｔｅｓｔａ，ｓｈａｄｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ＧＡ３．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ
ａｄｄｅｄ ０．１６ｍｇ／Ｌ ｏｆ ＧＡ３ｃｏｕｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏ ｒｅｍｏｖｅｄ ｔｅｓｔａ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ ｐｅｒｉｏｄ １６ｈ／８ｈ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ
ｓｈａｄｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏ ｒｅｍｏｖｅｄ ｔｅｓｔａ ｗａｓ １００％ｉｎ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ａｄｄｅｄ ｏｆ ０．１６ｍｇ／Ｌ ａｎｄ
０．５０ｍｇ／Ｌ ｏｆ ＧＡ３．Ｔｈｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｇｒｏｗｔｈ ｗａｓ ｆａｓｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ ｐｅｒｉｏｄ １６ｈ／８ｈ，ｂｕｔ ｔｈｅ ｅｔｉｏｌａｔｉｏｎ ｗａｓ
ｏｂｖｉｏｕｓ．Ｔｈｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｔｏ ｓｏｉｌ ｗｅｒｅ ｎｏｒｍａｌ ｗｉｔｈ ｒｉｖａｌ ｒａｔｅ １００％．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｒｕｎｕｓ ａｒｍｅｎｉａｃａ；ｅｍｂｒｙｏ ｃｕｌｔｕｒｅ；ＧＡ３
８０１