全 文 ：收稿日期:2006-01-18
基金项目:国家“十五”重大科技专项(2001BA701A56)
SupportedbyKeyScienceResearchProjectofNationalTenthFive-year
Plan(2001BA701A56)
作者简介:王永刚(1974-),中药学硕士,电话:02084111288,传真:
020-84112398,E-mail:awad7476@163.com
编号 产地 来源 备注
01 广西桂林 2002年8月购于广西桂林药材站 饮片
02 广西桂平 2002年8月购于广西桂平 长40cm
03 广西梧州 2002年7月彭维采集 长60cm
04 广西百色 2002年6月购于广西百色 饮片(已切断)
05 广西 2002年9月购于广州清平药材市场 长30cm
06 广西柳江 2002年9月采集 长25cm
07 广西宜州 2002年9月采集 长32cm
08 广西来宾 2002年8月采集 长37cm
09 广西南宁 2003年1月采集 长15cm
10 广西玉林 2002年7月采集 饮片(已切断)
11 广西都安 2002年6月采集 长40cm
12 广西南宁 2002年7月采集 长36cm
13 广西 江西众鑫药业有限公司提供 长25cm
14 广西 江苏安格药业有限公司提供 长28cm
15 广西 河南龟山神草药业有限公司提供 长27cm
16 广西钦州 2003年2月采集 长约20cm
17 湖南郴州 2003年3月采集 饮片(已切断)
18 云南昆明 购于云南昆明 饮片(已切断)
19 云南蒙自 购于云南蒙自 长15cm
20 云南蒙自 2003年7月采集 长18cm
21 湖南常德 2003年7月采集 饮片(已切断)
22 湖南双峰 2003年7月采集 长30cm
23 江西万安 2003年7月采集 长40cm
24 湖南邵阳 2003年7月采集 饮片(已切断)
25 湖南郴州 2003年8月采集 长28cm
26 广西浦北 2003年7月采集 长约28cm
27 广西浦北 2003年7月采集 长22cm
28 广西南宁 2003年7月采集 长28cm
29 广西梧州苍梧 2003年8月采集 长25cm
30 广西梧州藤县 2003年8月采集 长30cm
31 广东湛江 2003年8月采集 长30cm
32 广东韶关 2003年8月采集 长22cm
33 福建龙岩 2003年8月采集 长28cm
34 浙江温州 购于浙江温州 饮片(已切断)
35 广西 2002年8月购于广西桂平 大叶田基黄
36 广西 2002年8月购于广西桂平 遍地金
表1 样品来源
田基黄药材指纹图谱研究
王永刚,杨立伟,苏薇薇(中山大学生命科学学院,广东 广州 510275)
摘要:本研究构建了田基黄药材 HPLC指纹图谱,获得了其指纹特征。利用指纹图谱特征可全面监控田基黄药材的质
量,保证其稳定、均一、可控。
关键词:田基黄;指纹图谱;HPLC
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1673-4254(2006)07-1001-02
田基黄注射液是治疗急慢性重症肝炎的良
药,其原料药田基黄为藤黄科金丝桃属植物地耳
草HypericumjaponicumThunb.的干燥全草[1]。笔
者收集了30多个不同产地的田基黄药材样品,经
过色谱条件的选择和优化,构建了田基黄药材
HPLC指纹图谱,获得了其指纹特征,利用指纹特
征考察了不同来源的田基黄药材间的质量差异。
利用指纹图谱监控田基黄药材的质量未见报道。
1药材的收集与鉴定
本研究所用药材主要来自广西、广东、湖南、
江西、福建、云南、浙江七产区,共36批(表1)。所
收集药材长度15~60cm,大部分药材呈黄绿色,
少部分药材呈灰暗色。经中山大学生命科学学院
廖文波教授鉴定:1~34号样品为藤黄科金丝桃属
植物田基黄 HypericumjaponicumThunb.的全草;
35、36是田基黄的民间混用品种,其中:35号为大
叶田基黄(又名珍珠菜),系报春花科植物星宿菜
LysimachiafortuneiMaxim.的全草;36号为遍地
金,系藤黄科植物遍地金 Hypericumwightianum
Wal.exWightetArn.的全草。
2田基黄药材HPLC指纹图谱的构建
2.1仪器与试剂
DIONEXP680泵;DIONEXASI-100自动进
样器;DIONEXPDA-100检测器。采用指纹图谱
计算机辅助相似性评价软件(中南大学提供)。乙
腈为色谱纯;水为高纯水;其余试剂均为分析纯。
2.2供试品溶液的制备
取田基黄药材粉末0.5g,加60%乙醇超声处理
(功率 360W,频率 35kHz)3次,每次 20ml,10min
后滤过,合并滤液,减压回收溶剂至干。加入 50%甲
醇 10ml使溶解,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取滤
液。
2.3色谱条件的选择
2.3.1色谱柱 采用十八烷基硅烷键合硅胶柱(ODS
柱)对田基黄供试液(23号样品)进行分析。
2.3.2流动相以及洗脱梯度的选择 以乙腈(B)-0.05
mol/L磷酸二氢钾缓冲液(磷酸调pH3.0)(A)为流动
相,二元线性梯度洗脱:0min(A:96%,B:4%)→100
min(A:73%,B:27%),在此色谱条件下,各成分几乎
完全洗脱,峰形尖锐,分离度好,适用于构建田基黄药
2006;26(7) 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 1001· ·
样品号 相似度 样品号 相似度 样品号 相似度 样品号 相似度
01 0.9170 09 0.8840 17 0.9726 27 0.9444
02 0.9540 10 0.9550 18 0.9640 28 0.9561
03 0.9715 11 0.9337 21 0.9704 29 0.9488
04 0.9628 12 0.9758 22 0.9460 30 0.9515
05 0.9730 13 0.9856 23 0.9125 31 0.9424
06 0.9429 14 0.9378 24 0.9438 32 0.9143
07 0.9308 15 0.9724 25 0.9435 33 0.9489
08 0.9714 16 0.8995 26 0.9102 34 0.9276
表232批田基黄药材相似度评价结果
图2参照指纹图谱
异槲皮苷
槲皮苷
图132批田基黄药材HPLC指纹图谱
材的指纹图谱。 选择300nm作为检测波长。
2.4方法学考察
按照 《中药注射剂指纹图谱研究技术指南 (试
行)》的要求,采用指纹图谱计算机辅助相似性评价软
件(中南大学),依据指纹图谱的相似度评价结果进行
方法学考察。
2.4.1精密度试验 取供试品溶液(06号样品)连续进
样5次,进样量10μl,将所得色谱图进行相似度比
较,5次进样的相似度(中位数)均在 0.98以上,表明
精密度好。
2.4.2稳定性试验 取供试品溶液(06号样品)分别在
0、6、12、24、48h进样,进样量均为10μl,将所得色谱
图进行相似度比较,相似度(中位数)均在0.97以上,
表明稳定性好。
2.4.3重复性试验 取田基黄药材 (06号样品)5份,
按“供试品溶液的制备”方法操作,分别进样10μl,将
所得色谱图进行相似度比较,相似度(中位数)均在
0.96以上,表明本法重复性好。
2.4.4不同仪器的比较 使用同一色谱柱,分别在
Dionex和Agilent1100液相色谱仪上进样,进样量均
为10μl,相似度大于0.97。
2.5田基黄药材指纹图谱的确定
2.5.1田基黄注射液投料药材的纳入与剔除 分别取
各产地的田基黄药材 34批(1~34号)及混用品 2批
(35、36号),按2.2所述方法制备供试品溶液,进样
10μl,按 2.3所述色谱条件操作,将所得色谱图进行
相似度比较,结果如下:(1)35号大叶田基黄、36号遍
地金色谱图与田基黄色谱图有明显差别,相似度分别
为0.2786、0.0565。(2)云南蒙自的田基黄药材(编号
分别为19、20)的色谱图与其它样品色谱图有明显的
差别,相似度仅为0.2535、0.4356,因此该药材不能作
为田基黄注射液的投料药材。
2.5.2田基黄药材的指纹图谱 将上面提到的来自云
南蒙自的2批药材(19、20号样品)剔除,对剩余的32
批田基黄药材 HPLC指纹图谱(图 1)进行相似度评
价,结果见表2。
2.5.3参照指纹图谱的确立 选择相似度较高的 03
号药材指纹图谱作为参照指纹图谱(图2)。在挑选田
基黄注射液投料药材时,该药材指纹图谱与参照指纹
图谱的相似度应大于0.92。另外,利用DAD检测器,
同时测定对照品和供试品溶液,可鉴定参照指纹图谱
中的13、14号峰分别为异槲皮苷与槲皮苷。
3讨论
在32批田基黄药材中,相似度小于0.90的有2
批(9号、16号样品),相似度在 0.88~0.90之间,这 2
批田基黄药材长度均≤20cm,且质地柔软。云南蒙自
的 2批田基黄药材(19号、20号样品)长度为 15cm
和18cm(相似度仅为0.2523和0.4356)。说明不同生
长期的药材所含的次生代谢产物含量有差异,这种差
异在指纹图谱上必有所反映。因此规定药材的长度可
以间接地固定药材生长期。
在挑选田基黄注射液投料药材时,该药材指纹图
谱与参照指纹图谱(或共有模式)的相似度应大于0.92。
参考文献:
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典一九七
七年版一部[M].北京:人民卫生出版社,1978:198.
南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 第26卷1002· ·