全 文 ：收稿日期:2012-10-30; 修订日期:2013-03-30
基金项目:湖北省自然科学基金重点项目( No． 2010CDA047)
作者简介:郜红利( 1967-) ，男( 土家族) ，湖北恩施人，现任湖北民族学院
副教授，学士学位，主要从事民族药物的开发与利用研究工作．
* 通讯作者简介:谭玉柱( 1985-) ，男( 土家族) ，湖北恩施人，现任成都中
医药大学教师，硕士学位，主要从事中药有效成分及质量标准化研究工
作．
恩施州野生蜘蛛香特征指纹图谱研究
郜红利1，谭玉柱2*
(1．湖北民族学院，湖北 恩施 445000; 2．成都中医药大学，四川 成都 611137)
摘要:目的 对恩施州产野生蜘蛛香进行特征指纹图谱研究，以期为药材质量优劣评价提供参考，有利于栽培蜘蛛香的质
量评控。方法 利用 HPLC － DAD对蜘蛛香药材进行波长扫描，确定最大吸收波长为 254nm，建立其特征指纹图谱。结果
建立了蜘蛛香 15 个共有峰的特征指纹图谱，达到指纹图谱建立的技术要求。结论 该特征指纹图谱能够反映蜘蛛香药
材的主要化学信息，可以作为评控蜘蛛香药材标准的技术指标。
关键词:蜘蛛香; 指纹图谱; 质量评控
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 07． 093
中图分类号:Ｒ282． 5; Ｒ288 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 07-1749-02
蜘蛛香又名马蹄香、土细辛、鬼见愁、雷公七等，为败酱科植
物蜘蛛香 Valerianajatamansi Jones 的干燥根茎和根［1］，性味辛、
苦，温，具有理气和中、散寒除湿、活血消肿的功效，主要用于治疗
脘腹胀痛、呕吐泄泻、小儿疳积、风寒湿痹、脚气水肿、月经不调、
跌打损伤等症［2］。现代研究表明，蜘蛛香有良好的镇静、催眠、
抗惊厥和镇痛的作用，水煎剂对革兰氏阳性菌及轮状、非轮状病
毒性肠炎都有较好的疗效［3］。蜘蛛香主要分布在云南、湖北、贵
州等偏远山区，其中湖北恩施自治州各县市资源丰富。其化学成
分主要是挥发油、环烯醚萜、黄酮及其他一些成分［4］。目前对蜘
蛛香的研究主要集中在其化学成分及药理研究方面，缺乏综合评
价该药材品质的标准，如今蜘蛛香药材日益受到医药市场青睐，
然而蜘蛛香药材品质受野生条件、加工方法、储存条件的影响存
在较大差异，从而造成目前蜘蛛香药材质量良莠不齐和无法科学
评价的局面。本研究采用 HPLC － DAD 建立蜘蛛香药材特征指
纹图谱，为合理评价蜘蛛香药材质量优劣提供参考、同时也为人
工栽培蜘蛛香药材的质量差异性评价提供参考标准，对于蜘蛛香
野生转家种的可行性研究具有重要意义。
1 仪器与试药
1． 1 仪器与试剂 Angenlent 1200 高效液相色谱仪;Agilent 1200
ChemStation 4． 0 色谱工作站 BP121S 型 Sartorius 电子天平(北京
Sartorius天平有限公司十万分之一) ;Kromasil C － 18 色谱柱(250
mm ×4． 6 mm，5 μm)。缬草三酯(纯度﹥ 98%，成都植标化纯生
物科技有限公司) ，乙腈、甲醇(色谱纯，美国 Fisher 公司) ，超纯
水(实验室自制) ，其余试剂均为分析纯。
1． 2 药材 实验用蜘蛛香药材分别采自湖北省恩施州恩施市、利
川市、宣恩县、巴东县、咸丰县、建始县等 6 个县市，共计 12 个批
次，经湖北民族学院中药鉴定教研室鉴定为败酱科植物蜘蛛香
Valerianajatamansi Jones的干燥根茎和根。其来源见表 1。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 Kromasil C － 18 色谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5
μm) ，以乙腈 －水为流动相进行梯度洗脱(梯度洗脱程序见表
2) ，流速 0． 8 ml·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 254 nm。
表 1 不同批次蜘蛛香药材来源
批次 产地 采集时间 备注
1 建始景阳镇 2012-07 野生
2 建始景阳镇 2012-08 野生
3 利川福宝山 2012-07 野生
4 利川福宝山 2012-08 野生
5 巴东野三关 2012-07 野生
6 巴东野三关 2012-08 野生
7 咸丰甲马迟 2012-07 野生
8 咸丰清平镇 2012-07 野生
9 咸丰黄金洞 2012-07 野生
10 恩施望城坡 2012-07 野生
11 宣恩东门关 2012-08 野生
12 宣恩东门关 2012-09 野生
表 2 蜘蛛香梯度洗脱程序
时间 /min B(乙腈)%
0 10
20 55
60 95
2． 2 供试品的制备 取本品粉末(过三号筛)约 2 g，称定，置具
塞锥形瓶中，精密加入甲醇 100 ml，密塞，称定重量，超声处理(功
率 500 W，频率 28 kHz)30 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇
补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2． 3 对照品的制备 取缬草三酯适量，用无水甲醇溶解配制成浓
度 109μg /ml的标准贮备液，以供参照峰对照。
2． 4 色谱分析 精密吸取样品溶液 10 μl，注入高效液相色谱仪，
记录色谱图(图 1)和各色谱峰的保留时间，以面积归一化法计算
各色谱峰的相对峰面积(A Ｒ)。
图 1 蜘蛛香药材特征图谱
2． 5 方法学考察
2． 5． 1 精密度考察 按“2． 2”操作方法，随机取同一批蜘蛛香药
材制备供试液，连续进样 6 次，记录 HPLC 图，选择 15 个共有峰
进行比较，结果表明各共有峰相对保留时间 ＲSD 小于 3%，各共
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有峰相对峰面积的 ＲSD小于 3%，表明仪器精密度良好。
2． 5． 2 重现性考察 随机取同一批药材，按“2． 2”操作方法平行
操作，制备 6 份蜘蛛香药材供试品溶液，记录其 HPLC 图。结果
各共有峰相对保留时间 ＲSD ＜ 3%，各共有峰相对峰面积 ＲSD ＜
3%。
2． 5． 3 稳定性考察 取同一批蜘蛛香药材的供试品溶液，分别经
过 0，1，2，3，4，5 h 记录 HPLC 色谱图，对 15 个共有色谱峰进行比
较。结果各共有峰相对保留时间 ＲSD ＜ 3%，各共有峰的相对峰
面积 ＲSD ＜ 3%，表明样品在 5 h内稳定性良好。
2． 6 特征色谱图的构建
2． 6． 1 相对保留时间 α的计算 选择一个出峰时间较居中、在各
样品中均存在的组分作为参照峰(α = 1)。计算所有峰的相对保
留时间:tＲi / tＲα，式中 tＲi为各组分的出峰时间，tＲα为参照峰的出
峰时间
2． 6． 2 参照峰的选择 通过对照品色谱图与各供试品比较，发现
缬草三酯出峰时间较居中且在各供试品特征图谱中为强信号峰。
因此，选取色谱图中的 12 号峰(缬草三酯)为参照峰，计算各峰
的相对保留时间。参照“中药注射剂指纹图谱研究的技术要
求”，研究测定了 12 批蜘蛛香药材的色谱图，并制定了以缬草三
酯为参照物的标准特征图谱和 12 批药材特征图谱的相似性，分
别见图 1 ～ 2。
图 2 12 批蜘蛛香药材特征图谱
2． 6． 3 共有峰的标定 记录 60 min 的色谱图，采用相对保留时
间标定共有峰，以图谱中保留时间为 45． 8 min (12 号)的峰为参
照物(S) ，将各特征峰保留时间与同一图谱中参照峰的保留时间
比较，其比值为各特征峰的相对保留时间。计算 12 批药材特征
图谱中各特征峰的相对保留时间，标定其共有峰有 15 个。12 批
药材中各共有峰相对保留时间值 ＲSD均 ＜ 3%。见表 3。
2． 6． 4 共有峰的相对面积 根据“中药注射剂指纹图谱研究的技
术要求”规定，各共有特征峰的面积比值必须相对固定。设定峰
12 为参照峰，经测定结果符合特征图谱研究的技术要求。见
表 4。
表 3 蜘蛛香药材共有峰相对保留时间测定结果
编号
共有峰相对保留时间
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
S1 0． 26 0． 44 0． 52 0． 56 0． 72 0． 79 0． 82 0． 83 0． 87 0． 95 0． 98 1． 00 1． 08 1． 07 1． 26
S2 0． 27 0． 44 0． 53 0． 57 0． 72 0． 79 0． 82 0． 83 0． 87 0． 95 0． 98 1． 00 0． 99 0． 99 1． 28
S3 0． 26 0． 44 0． 52 0． 56 0． 72 0． 79 0． 82 0． 83 0． 87 0． 95 0． 95 1． 00 1． 08 1． 07 1． 27
S4 0． 27 0． 44 0． 53 0． 57 0． 72 0． 79 0． 82 0． 83 0． 87 0． 95 0． 94 1． 00 1． 05 1． 06 1． 28
S5 0． 26 0． 44 0． 52 0． 56 0． 72 0． 79 0． 82 0． 83 0． 87 0． 92 0． 98 1． 00 1． 08 1． 07 1． 26
S6 0． 27 0． 44 0． 53 0． 57 0． 65 0． 79 0． 82 0． 82 0． 87 0． 95 0． 99 1． 00 1． 08 1． 07 1． 28
S7 0． 26 0． 44 0． 52 0． 56 0． 72 0． 79 0． 82 0． 83 0． 87 0． 95 0． 98 1． 00 1． 02 0． 99 1． 27
S8 0． 27 0． 42 0． 53 0． 57 0． 72 0． 79 0． 82 0． 83 0． 79 0． 95 0． 98 1． 00 1． 08 1． 06 1． 28
S9 0． 26 0． 44 0． 52 0． 56 0． 72 0． 79 0． 82 0． 83 0． 87 0． 95 0． 89 1． 00 1． 08 1． 08 1． 27
S10 0． 27 0． 44 0． 53 0． 57 0． 72 0． 72 0． 87 0． 83 0． 88 0． 94 0． 98 1． 00 1． 08 1． 08 1． 3
S11 0． 26 0． 44 0． 52 0． 56 0． 71 0． 79 0． 82 0． 81 0． 87 0． 95 0． 98 1． 00 1． 08 1． 06 1． 28
S12 0． 27 0． 44 0． 53 0． 57 0． 72 0． 79 0． 82 0． 83 0． 87 0． 95 0． 98 1． 00 1． 04 1． 04 1． 28
均值 0． 27 0． 44 0． 53 0． 57 0． 71 0． 78 0． 82 0． 83 0． 86 0． 95 0． 97 1． 00 1． 06 1． 05 1． 28
ＲSD% 1． 97 1． 32 0． 99 0． 92 2． 82 2． 58 1． 75 0． 75 2． 72 0． 94 2． 93 0． 00 2． 86 2． 98 0． 85
表 4 蜘蛛香药材指纹图谱相对峰面积数据
编号
共有峰相对保留时间
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
S1 0． 46 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 54 0． 31 0． 13 1． 00 0． 06 0． 28 0． 05
S2 0． 46 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 53 0． 3 0． 13 1． 00 0． 06 0． 27 0． 05
S3 0． 45 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 55 0． 32 0． 12 1． 00 0． 06 0． 27 0． 05
S4 0． 46 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 54 0． 31 0． 13 1． 00 0． 06 0． 28 0． 05
S5 0． 44 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 54 0． 33 0． 13 1． 00 0． 06 0． 28 0． 05
S6 0． 46 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 56 0． 31 0． 13 1． 00 0． 06 0． 26 0． 05
S7 0． 45 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 54 0． 31 0． 13 1． 00 0． 06 0． 28 0． 05
S8 0． 46 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 55 0． 31 0． 13 1． 00 0． 06 0． 28 0． 05
S9 0． 47 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 53 0． 33 0． 13 1． 00 0． 06 0． 28 0． 05
S10 0． 46 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 54 0． 32 0． 13 1． 00 0． 06 0． 27 0． 05
S11 0． 45 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 54 0． 31 0． 13 1． 00 0． 06 0． 28 0． 05
S12 0． 46 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 54 0． 31 0． 13 1． 00 0． 06 0． 28 0． 05
均值 0． 46 0． 03 0． 06 0． 03 0． 05 0． 04 0． 05 0． 05 0． 54 0． 31 0． 13 1． 00 0． 06 0． 28 0． 05
ＲSD% 1． 70 0． 00 0． 00 0． 00 0． 00 0． 00 0． 00 0． 00 1． 54 2． 87 2． 23 0． 00 0． 00 2． 42 0． 00
2． 6． 5 非共有峰的面积 对 12 批蜘蛛香药材供试品的测定，统
计各批非共有峰面积比，非共有峰面积百分比在 1． 29% ～
6． 22%，符合特征图谱研究规定小于 10%的检测要求。见表 5。
2． 6． 6 共有峰的相似度计算 利用 2004 版中药色谱特征图谱
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 7
相似度评价系统 A版，对 12 批蜘蛛香特征峰自动匹配，确定 15
个共有峰，相似度计算结果显示均大于 0． 90。这表明所建立特
征图谱的技术指标稳定，重现性好。
表 5 12 批蜘蛛香药材非共有峰面积
编号 总峰面积 共有峰面积 非共有峰面积 百分比(%)
S1 252027 243041 8986 3． 57
S2 144415 135432 8983 6． 22
S3 179706 169876 9830 5． 47
S4 265614 255876 9738 3． 67
S5 197305 189742 7563 3． 83
S6 354318 345345 8973 2． 53
S7 287896 278909 8987 3． 12
S8 489773 479875 9898 2． 02
S9 238795 233121 5674 2． 38
S10 497076 487983 9093 1． 83
S11 354557 346573 7984 2． 25
S12 773197 763210 9987 1． 29
3 讨论
本实验采用 DAD检测器进行全波长扫描，得到不同波长下
色谱图。结果显示，检测波长 254 nm色谱峰形最好，出峰数目较
多，各色谱峰分离度较好，故选择 254 nm 作为特征色谱检测波
长;考察了 Diamonsil、Kromasil、伊力特、Phenomenex 4 个色谱柱对
于特征峰的分离效果，其中 Phenomenex分离效果最好，但是特征
色谱峰相对保留时间不稳定，Kromasil 色谱柱分离效果适中，特
征峰相对保留时间较稳定，因此选择 Kromasil 作为分析用色谱
柱。蜘蛛香化学成分不稳定，易于分解，因此流动相考察条件主
要是乙腈 －水、甲醇 －水，结果显示前者分离效果较好，因此选择
乙腈 －水作为梯度洗脱条件。
按照预设色谱条件记录到 60 min 后，以 95%乙腈流动相洗
脱色谱柱，记录后 60min色谱图，显示成分洗脱完全，因此，记录
时间定为 60 min 即可。通过色谱图相似性比较，各批样品色谱
图概貌一致，说明野生蜘蛛香群体成分的一致性、稳定性。制定
的特征图谱可对蜘蛛香药材组分群体特征的一致性作出判断。
蜘蛛香特征图谱具有自身化学条码特征，是其内在化学成分信息
的表达［5］。在蜘蛛香药材特征图谱的共有特征峰中，整体分离度
比较好，能充分反映蜘蛛香药材化学成分的特征。当然，要使蜘
蛛香指纹图谱能较准确代表其有效成分，还需借助多种技术手段
进行谱效关系研究，使其指纹图谱研究工作目标性更强［6］。
参考文献:
［1］ 中国药典委员会．中国药典［S］．北京:中国医药科技出版社，2010:
345．
［2］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志［M］．北京科学出
版社，2000．
［3］ 李 蓉，吴 莹．蜘蛛香的药理作用研究进展［J］．科技资讯，2009，
31:159．
［4］ 陈 磊，郑清明，郑汗臣，等．蜘蛛香的研究进展［J］．中国野生植物
资源，2002，21(1) :8．
［5］ 谭玉柱，童婷婷，潘晓丽．川牛膝的 HPLC 指纹图谱研究［J］． 成都
中医药大学学报，2011，34(3) :93．
［6］ 陈红英．黄连指纹图谱研究进展［J］． 中国中医药信息杂志，2012，
19(5) :112．
收稿日期:2012-11-04; 修订日期:2013-03-08
基金项目:黑龙江省中医药管理局科研项目( No． 2HY12 － W047)
作者简介:王乐平( 1978-) ，女( 汉族) ，山东日照人，现任齐齐哈尔医学院
讲师，硕士学位，主要从事中药质量与资源开发研究工作．
丹参引种黑龙江地区
适宜繁殖方式及有效成分含量研究
王乐平
(齐齐哈尔医学院药学院，黑龙江 齐齐哈尔 161000)
摘要:目的 研究从山东莒县引种到黑龙江地区的丹参适宜繁殖方式及有效成分含量。方法 采用育苗移栽、分根繁殖两
种不同繁殖方式引种，不同繁殖方式对丹参条数、根直径、根鲜重质量的影响。根据《中国药典》2010 版，采用高效液相色
谱对道地山东莒县丹参和引种黑龙江丹参进行丹参酮ⅡA、丹酚酸 B含量测定。结果 引种丹参适宜繁殖方式为分根繁
殖，有效成分含量符合药典规定。结论 该研究为丹参引种黑龙江地区，做了前期引种适宜性研究，丹参大面积引种，需
要进一步的高产栽培研究。
关键词:丹参; 育苗移栽; 分根繁殖; 丹参酮ⅡA; 丹酚酸 B; 高效液相色谱
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 07． 094
中图分类号:S567; Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 07-1751-02
丹参 Salvia miltiorrhiza Bunge 为唇形科鼠尾草属植物，其干
燥根及根茎入药，丹参有着丰富的化学组成，药理作用也较为全
面［1，2］。我国除黑龙江、吉林、内蒙古北部高寒地区［3］以外，几乎
各省、区、市均有分布。目前，据文献检索未见东北高寒地区种植
丹参的报道。但所在丹参道地药材产区(山东沂蒙地区)实地调
研得知，已有小部分药农赴吉林松源地区种植，但其丹参质量如
何尚无定论。
药用植物对土壤、气候、海拔等环境条件 有着严格的要求，
讲究地域性，并形成了所谓的地道药材［4］之说，因此，适宜人工
栽培的土地面积就十分有限。为避免盲目引种，浪费农业资源，
2010 年 5 月，由“全国先进中药材基地”尚志市北方中药材开发
研究所倡导，开始研究丹参引种黑龙江地区种植的适宜性。
道地山东丹参的通用繁殖方式为育苗移栽。2011 年 5 月采
用道地育苗，购苗移栽的繁殖方式进行引种，丹参生长发育不良，
无抽薹开花生殖生长阶段。从 2012 年 5 月，选取齐齐哈尔医学
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 7 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期