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田基黄水煎液对高脂血症模型大鼠血脂、免疫功能的影响



全 文 :北方药学 2011年第 8卷第 8期
·实验研究·
田基黄水煎液对高脂血症模型大鼠血脂、免疫功能的影响
胡向阳1▲ 马 义2 李莉莉 2(1.中山大学附属第五医院 珠海 519000;2.暨南大学生命科学院 广州 510630)
摘要:目的:观察田基黄水煎液对高脂血症模型大鼠血脂、免疫功能的影响。方法:将 48只Wistar雄性大鼠随机分为 4组:正常
对照组、模型对照组、辛伐他汀组、田基黄水煎液组,建立高脂血症模型,检测各组大鼠血脂、T淋巴细胞亚群的变化。结果:与模
型对照组比较,辛伐他汀组、田基黄水煎液组 TC、TG、LDL-C、AI含量均有不同程度的降低(P<0.01或 P<0.05),HDL-C含量升
高(P<0.05);田基黄水煎液组 CD4+、CD4+/CD8+均显著升高(P<0.01),CD8+降低(P<0.01)。与辛伐他汀组比较,田基黄水煎液组
TC、LDL-C及 CD8+含量降低(P<0.05)。结论:田基黄水煎液对高脂血症大鼠的血脂、免疫功能有调节作用。
关键词:田基黄 高脂血症 T淋巴细胞亚群
中图分类号:R285.5 文献标识码:B 文章编号:1672-8351(2011)08-0042-02
由高脂肪饮食摄入而导致的高脂血症已成为重要的代谢
性疾病之一,高脂血症是动脉粥样硬化的首要病因,亦与冠心
病、中风、脂肪肝等疾病的发生、发展关系密切。通常血脂升高
不引起症状,因此常常被忽视,但是,随着心血管疾病的发病
率及死亡率的增加,作为危险因素的高脂血症开始引起人们
的重视[1]。田基黄为藤黄科金丝桃属植物地耳草的干燥全草,
具有清热散瘀、消肿解毒的功效,药理研究表明具有保护肝
脏、调节免疫、抑制癌细胞及抗氧化等作用[2,3]。本研究拟在高
脂血症模型基础上,探讨田基黄水煎液对高脂血症大鼠血脂
代谢及免疫功能的影响。
1 材料与方法
1.1实验动物
Wistar大鼠,SPF 级,雄性,体重 200±20g,由南方医科大
学实验动物中心提供,合格证号:粤检证字 2009C518,室温适
应性饲养 1周后用于本实验。
1.2实验药物
辛伐他汀(商品名:舒降之),杭州默沙东制药有限公司生
产,批准文号 H19990366,20mg/片,临用前以生理盐水溶解浓
度为 1mg/ml。田基黄饮片由广东省中医院提供,水煎液制备:
田基黄 3.0kg,以每克生药加水 6ml,冷水浸泡 40min后,开始
武火煎煮,煮沸后用文火慢煎 30min,趁热过滤。煎煮第二遍按
每克生药加水 4ml,煎法同上,合并滤液。60℃恒温下旋转蒸发
浓缩,浓缩为含生药 2.25g/ml的水煎液,置 4℃冰箱保存备用。
1.3试剂与仪器
高脂饲料(0.2%胆酸钠+2%胆固醇+10%食用油+87.8%基
础饲料),胆固醇、胆酸钠、丙基硫氧嘧啶(广州天马精细化工
厂),10%泰洛沙泊(批号 2009030046,上海复星药业有限公
司),胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-
C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(南京建成生物试剂
公司);兔抗大鼠 CD4、CD8等单克隆抗体试剂盒(浙江东瓯生
物工程有限公司)。全自动生化分析仪(日本日立-7060型);
FACS Calibur流式细胞仪(BD-TY1218)。
1.4动物分组
Wistar大鼠 48只,数字随机分组法分为 4组,即正常对照
组、模型对照组、辛伐他汀组、田基黄水煎液组。
1.5动物模型制备
参照 Bozoky[4]等方法建立大鼠高脂血模型,除正常对照组
外,其余各组均以高脂饲料喂养,大鼠腹腔注射 10%泰洛沙泊
溶液 5ml/kg,禁食 12h后进行试验。辛伐他汀组、田基黄水煎
液组均以 10mg/kg剂量灌胃,正常对照组、模型对照组则以等
体积生理盐水灌胃,连续 8周。动物处死前禁食 12h,取出脾
脏,腹腔静脉取血,分离血清。
1.6指标检测
将采取的新鲜血加入含肝素抗凝的试管中,混匀,4℃,
3500转/分离心 15分钟,收取上清液(血清)。采用酶比色法在
全自动生化分析仪测定 TC、TG、HDL-C、LDL-C,操作步骤均
按照试剂盒说明书进行,并依据公式计算动脉粥样硬化指数
(Atherosclerotic index,AI),计算公式:AI=(TC-HDL-C)/HDL-
C。将脾脏置于玻璃匀浆器中,添加 PBS溶液研磨,4℃ 1000r·
min-1离心 10min,弃上清液,加入红细胞裂解液,静置 5min
后,加 PBS溶液终止裂解反应,离心 5min,弃上清液,PBS溶液
调整脾脏淋巴细胞数为 5×106个/ml,取流式细胞分析专用管,
每管加入细胞悬液 100μL,分别加入 CD4、CD8抗体,室温避
光孵育 30min后,各管加入 500μL PBS溶液,振荡混匀后上流
式细胞仪分析。
1.7统计学处理
使用 SPSS 14.0统计软件对数据进行重复测量资料的方
差分析,定量指标以(x±s)表示,方差分析,组间两两比较采用
q检验,P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组大鼠血脂代谢情况
与正常对照组比较,各实验组大鼠血清 TC、TG、LDL-C、
AI含量均有不同程度的升高(P<0.01或 P<0.05);HDL-C含量
降低(P<0.05)。与模型对照组比较,辛伐他汀组、田基黄水煎液
组 TC、TG、LDL-C、AI含量均有不同程度的降低(P<0.01或 P<
0.05),HDL-C含量升高(P<0.05)。与辛伐他汀组比较,田基黄
水煎液组 TC、LDL-C含量降低(P<0.05),见表 1。
表1 各组大鼠血脂情况比较(n=12,m m ol/L,x±s)
注:与正常对照组比较,1)P<0.01,2)P<0.05;与模型对照组
比较,3)P<0.01,4)P<0.05;与辛伐他汀组比较,5)P<0.05。
2.2各组大鼠脾脏 T淋巴细胞亚群的变化
与正常对照组比较,模型对照组 CD4+、CD4+/CD8+均显
组别 TG TC HDL-C LDL-C AI
正常对照组 0.38±0.01 2.47±0.10 1.35±0.11 0.34±0.01 0.81±0.03
模型对照组 3.37±0.111) 8.26±1.121) 0.63±0.012) 3.18±0.111) 11.26±2.311)
辛伐他汀组 0.64±0.013) 4.34±0.362,3)1.08±0.034) 0.65±0.023) 3.52±0.212,3)
田基黄水煎液组 0.52±0.013) 3.15±0.122,3,5)1.14±0.014) 0.41±0.013,5)2.37±0.152,3)
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北方药学 2011年第 8卷第 8期
著降低(P<0.01),CD8+显著升高(P<0.01);辛伐他汀组
CD8+升高(P<0.05)。与模型对照组比较,辛伐他汀组 CD8+
降低(P<0.05),CD4+、CD4+/CD8+升高(P<0.01);田基黄水煎
液组 CD4+、CD4+/CD8+均显著升高(P<0.01),CD8+降低(P<
0.01)。与辛伐他汀组比较,田基黄水煎液组 CD8+降低(P<
0.05),见表 2。
表2 各组大鼠脾脏T 淋巴细胞亚群的变化比较(n=12,x±s)
注:与正常对照组比较,1)P<0.01,2)P<0.05;与模型对照组
比较,3)P<0.01,4)P<0.05;与辛伐他汀组比较,5)P<0.05。
3 讨 论
高脂血症是指血中的胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇
(LDL-C)、甘油三酯(TG)超过正常及(或)高密度脂蛋白胆固
醇(HDL-C)低下的一种表现。TG升高使血液凝固性增高,抑
制纤维蛋白降解,促进血栓形成;LDL-C增高使患冠心病的危
险因素增加,HDL-C如同血管内的清道夫,将胆固醇从组织转
移到肝脏,具有防止动脉粥样硬化的作用[5]。T淋巴细胞是机体
免疫细胞,T细胞分为 CD4+T细胞、CD8+T细胞两大亚群,CD4+
T细胞主要是 Th(辅助细胞),可分泌 IL-2、IL-3、TNF等细胞
因子,参与机体的炎症反应、免疫调控。CD8+T细胞为 Ts(抑制
细胞),通过“抑制性”细胞因子而抑制免疫应答反应,CD4+T/
CD8+T比值减少是机体免疫缺陷的重要指征[6]。
高脂血症属中医“湿浊”之范畴,是由于饮食不节,情志内
伤,脾胃失调,饮食中的糟粕、杂质混入营血,形成“湿热痰浊
毒”。其病位在血脉,其产生与肝、脾两脏最为密切,外因主要
与饮食、情志因素有关,病因病机是肝、脾功能失调为病之本,
湿浊、痰、瘀为病之标。田基黄具有清热散瘀、消肿解毒,研究
显示有保护肝脏、调节免疫及抗氧化等作用。本实验选用辛伐
他汀作为对照药物,辛伐他汀是临床上应用广泛的调脂药,研
究发现其还具有抗炎、免疫调节作用、改善血管内皮功能、稳
定和逆转粥样硬化斑块等作用[7]。本实验结果发现:田基黄水
煎液降低高脂血症大鼠血清 TC、TG、LDL-C、AI的含量,有显
著的降低血脂代谢紊乱水平作用;田基黄水煎液可使模型大
鼠 CD4+、CD4+/CD8+显著升高,CD8+降低,增强大鼠免疫功能。
本实验结果提示田基黄水煎液对高脂血症模型大鼠血脂代
谢、免疫功能有调节作用,田基黄水煎液的上述药理效应可能
与其“清热散瘀、消肿解毒”作用相关,但其作用或调控机制需
要进一步研究。
参考文献
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Des,2009,15(27):3133-3145.
▲作者简介:胡向阳(1975-),男,主治医师,研究方向:从事脑血
管及代谢疾病研究。
组别 CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+
正常对照组 27.35±2.26 13.17±1 24 2.12±0.11
模型对照组 13.52±1.141) 27.41±3.151) 0.47±0.021)
辛伐他汀组 25.63±3.713) 19.36±1.442,4) 1.14±0.133)
田基黄水煎液组 22.13±3.523) 14.32±1.263,5) 1.36±0.123)
中华鲟软骨活性成分体外抑制血管生成作用的实验研究
吕宝军 1 谢小铭 1 谭 敏 2*
(1.中山大学附属第五医院普通外科2区 珠海 519000;2.中山大学附属第一医院微创外科 广州 510080)
摘要:目的:探讨中华鲟软骨活性成分体外抑制血管生成的作用。方法:应用丙酮沉淀和超滤法抽提和分离中华鲟软骨活性成
分,通过鸡胚绒毛尿囊膜实验分析中华鲟软骨抑制血管生成的作用。结果:中华鲟软骨溶液 a组平均主血管数为(21.52±3.64),
相对于生理盐水平均主血管数(33.84±3.14)差异显著(t=4.922,P<0.05);b组平均主血管数为(28.41±2.13),与生理盐水组对照
差异不显著(t=2.032,P>0.05);c组平均主血管数为(7.16±1.31),相对于生理盐水平均主血管数有统计学差异(t=2.473,P<
0.05)。结论:中华鲟软骨活性成分对体外的血管生成有明显的抑制作用。
关键词:中华鲟软骨 血管生成 抑制作用
中图分类号:R285.5 文献标识码:B 文章编号:1672-8351(2011)08-0043-02
软骨成分的抑瘤作用早在 80年代就已经得到了人们的重
视。根据美国哈佛大学霍文博士有关“肿瘤生长需要首先建立
新生血管网络”的理论[1],能否抑制血管的形成和生长是防瘤、抑
瘤的关键。起初人们只是发现软骨本身并不长血管。自 80年代
开始,美国、古巴、澳大利亚、墨西哥、以色列等各国科学家,均
深入研究了鲨鱼软骨的临床应用,并取得了令人瞩目的成就[2]。
本实验从中华鲟软骨分离得到中华鲟软骨活性制剂,通过体外
实验对其抗肿瘤效应进行了初步的研究,同时也为我国生物
医药的发展及宝贵资源的发掘开辟了一条新路。
1 材料与方法
1.1原料与试剂
中华鲟(顺德市创世纪农业园馈赠)、盐酸胍(Sigma公
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