全 文 ：珍珠梅对四氯化碳致肝损伤大鼠自由基的影响
张学武　金海玲　赵　红　陈丽艳　孙　权
(延边大学医学院·延吉 133000)
　　珍珠梅(Sorbaria sorbifolia)属蔷薇科植物 , 又称“山高
粱” 、“八木条” , 广泛分布于云南 、贵州 、四川 、湖北 、甘肃 、宁
夏及东北 ,有活血化瘀 、消肿止痛作用 , 用于骨折及跌打损伤
的治疗[ 1] , 80年代初期研究发现珍珠梅水提物有抗缺氧作
用[ 2] ,我们曾研究过珍珠梅乙酸乙酯提取物对亚硝酸钠和四
氯化碳所致急性肝损伤具有保护作用[ 3] 。本次实验研究珍
珠梅对四氯化碳致肝损伤大鼠自由基的影响。
1　实验材料
1.1　药物　茎 、叶 、花 , 采集于吉林省延吉市市郊。乙酸乙
酯提取物:乙酸乙酯分 3 次浸泡珍珠梅 , 温度为 40℃, 每次
12h ,合并3 次滤液 , 用旋转蒸发器减压浓缩 , 获珍珠梅乙酸
乙酯提取物浸膏(1g珍珠梅有效成分相当于 33.3g生药)。
1.2　试剂　超氧化歧化酶 、丙二醛试剂盒为南京建成生物
工程研究所产品 ,其他试剂均为国产分析纯。
1.3　动物　Wistar雌性大鼠 , 体重为 180 ～ 200g , 由延边大学
医学院动物科提供。
1.4　仪器　Centrikon-1055 型超速离心机 , LXJ-74-10 型
离心机 , CSS-200 型超声波粉碎机 , 722 型分光光度计 , 旋转
蒸发仪 ,电热恒温水浴箱。
2　实验方法
2.1　造模及给药方法　取Wistar大鼠 30 只 ,分为正常组 、模
型组 、给药组 3 个组。给药组按 13.2g/kg 剂量灌胃 5d , 正常
组 、模型组以等体积生理盐水灌胃。第 4d , 模型组和给药组
按5.0ml/ kg剂量背部皮下注射 CCl4 ,正常组背部皮下注射等
体积生理盐水。
2.2　检测指标
2.2.1　血清 SOD及MDA 测定　皮下注射 CCl4 24h 后 , 摘眼
球取血 ,分离血清 , 用比色法进行测定。
2.2.2　肝匀浆 SOD及 MDA测定　大鼠处死后 , 迅速取出肝
脏 ,称取 1.0g 放入置有冰冷匀浆介质(pH=7.5 , 0.25mol/L蔗
糖 , 0.005mol/1Tris-HCl , 0.001mol/ LEDTA)的玻璃匀浆器中 ,
在冰浴中制成 10%匀浆 , 在 2000×g 下离心 10min , 取上清
液 ,用比色法进行测定。蛋白质含量用双缩脲法测定。
2.2.3　肝线粒体 SOD及 MDA 测定　用低温超速离心机以
16000×g离心 20min ,取其沉淀部分 , 即为线粒体。再加入匀
浆介质(pH =7.5 , 0.25mol/ L 蔗糖 , 0.005mol/1Tris-HCl , 0.
001mol/LEDTA)2ml ,用超声波采碎线粒体膜性结构 , 制成线
粒体悬浮液 ,用比色法进行测定。蛋白质含量用双缩脲法测
定。
2.3　统计学处理　数据以 x±s 表示 , 应用 SPSS-10.0 统计
软件进行方差分析。
3　结果
3.1　珍珠梅乙酸乙酯提取物对 CCl4 致肝损伤大鼠血清 SOD
及 MDA的影响　见表1。
表 1 珍珠梅乙酸乙酯提取物对 CCl4 致肝损伤大鼠血清
SOD及MDA 的影响( x±s)
组别 动物数(只)
CCl4
(ml/ kg)
提取物
(g/ml)
SOD　
(NU/ml)　
MDA　
(nmol/ L)　
正常组 　10 　0 　0 40.1±1.53＊ 1.27±0.56＊
模型组 　9 　5.0 　0 14.5±6.20 2.70±0.77
给药组 　9 　5.0 　13.2 24.7±3.00＊ 1.80±0.70＊
　　与模型组比较＊P<0.05
　　结果表明:珍珠梅乙酸乙酯提取物明显升高四氯化碳致
肝损伤大鼠血清SOD的活力 , 降低MDA 的含量。
3.2　珍珠梅乙酸乙酯提取物对 CCl4 致肝损伤大鼠肝匀浆
SOD及MDA 的影响　见表 2。
表 2 珍珠梅乙酸乙酯提取物对 CCl4 致肝损伤大鼠
肝匀浆 SOD及MDA的影响( x±s)
组别 动物数(只)
CCl4
(ml/ kg)
提取物
(g/ml)
SOD　
(NU/mg·prot/ml)
MDA　
(nmol/mg·prot)
正常组 　10 　0 　0 49.7±8.0＊ 1.27±0.36＊
模型组 　9 　5.0 　0 20.1±6.5 6.91±1.15
给药组 　9 　5.0 　13.2 30.7±9.1＊ 4.02±1.72＊
　　与模型组比较＊P<0.05
　　结果表明:珍珠梅乙酸乙酯提取物明显升高四氯化碳致
肝损伤大鼠肝匀浆SOD的活力 , 降低MDA 的含量。
3.3　珍珠梅乙酸乙酯提取物对 CCl4 致肝损伤大鼠肝线粒体
SOD及MDA 的影响　见表 3。
表 3 珍珠梅乙酸乙酯提取物对 CCl4 致肝损伤大鼠肝线粒体
SOD及MDA 的影响( x±s)
组别 动物数(只)
CCl4
(ml/ kg)
提取物
(g/ml)
SOD　
(NU/mg·prot/ml)
MDA　
(nmol/mg·prot)
正常组 　10 　0 　0 59.8±8.3＊ 0.80±0.17＊＊
模型组 　9 　5.0 　0 22.3±9.3 5.15±1.72
给药组 　9 　5.0 　13.2 34.4±5.8＊ 2.36±2.23＊＊
　　与模型组比较＊P<0.05, ＊＊P<0.01
　　结果表明:珍珠梅乙酸乙酯提取物明显升高四氯化碳致
肝损伤大鼠肝线粒体 SOD的活力 , 降低MDA 的含量。
4　讨论
　　自由基是人体正常生化过程的中间产物 ,在机体正常及
病理过程中都存在 ,同时机体在进化过程中获得了灭活氧自
由基的一些酶 , 如超氧化歧化酶。因此 , 只有当自由基产生
过多或者机体内的酶系统过少时才导致疾病。 氧自由基可
促使不饱和脂质自由基形成 ,脂质自由基可引起细胞膜的流
动性 、通透性和完整性的破坏 , 进而使其双层结构发生断裂 ,
引起膜镶嵌的一系列酶的排列紊乱 , 功能丧失 , 细胞的能量
·373·2001年第 8 卷第 6 期 中国中医药科技　　　　　　　　
产生系统瘫痪[ 4] 。目前 ,公认 CCl4引起肝损伤的机理系 CCl4
在肝微粒体细胞色素 P450激活下生成自由基 CCl3·及 Cl· , 这
些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合 ,也可攻击膜下
饱和脂质 , 引起脂质过氧化 ,使肝细胞损伤。由于 SOD、MDA
的变化可以间接地反应疾病情况下自由基的变化。 本实验
中给药组血清 、肝匀浆 、肝线粒体中 SOD较模型组显著升高 ,
而MDA值显著降低 , 这说明珍珠梅乙酸乙酯提取物对四氯
化碳致肝损伤大鼠自由基具有清除作用。
　　参考文献
1　江苏新医学院编.中华大辞典[M] .上海:上海科学技术出版社 ,
1994;8
2　李亦秀 ,等.哈医大学报 1981;4:1
3　张学武 ,等.延边大学医学院学报 2001;24(3):186
4　柴可夫 ,等.中国中医药科技 2000;7(2):88
5　金贵善 ,等.中国中医药科技 1999;6(3):172
(修回:2001-10-11)
叶下珠复方体内抗鸭乙型肝炎病毒作用的实验研究
王荣国　张奉学1　朱宇同1　王新华1　周红燕1　董伯振1
(广州中医药大学 98级硕士生·广州 510405　1 广州中医大学热带医学研究所·广州 510405)
1　材料和方法
1.1　受试药物　叶下珠复方由本所制剂研究室提供 ,采用两种提取
方法 ,叶下珠水提复方 、叶下珠醇提复方 ,均为红色浸膏或粉剂 ,以蒸
馏水配成所需浓度。阿昔洛韦(ACV)购自湖北医药工业研究所。
1.2　动物　1d龄广州麻鸭 ,购自广州辛村孵化场 ,体重 40～ 50g/只 ,
雄性 ,每组 5～ 8只。
1.3　病毒　鸭乙型肝炎病毒 DHBV-DNA 强阳性血清 , 采自上海麻
鸭 , -70℃保存。DHBV 质粒由军事医学科学院生物技术研究所陈鸿
删教授惠赠 , NC 膜:购自 Amersham 公司。 缺口翻译药盒 , 购自
promega 公司。α-32p-dCTP ,购自北京亚辉公司 , Sephadex G-50 ,购自
Pharmacia 公司。G3002A型酶联免疫检测仪 ,国营华东电子管厂。
1.4　实验步骤
1.4.1　鸭乙型肝炎病毒感染　1d龄广州麻鸭 ,经腿静脉注射上海麻
鸭 DHBV-DNA 强毒株阳性血清 ,每只 0.2ml ,在感染后 13d取血 ,分
离血清 , -70℃保存待检。
1.4.2　药物治疗实验　DHBV感染雏鸭 13d后随机分组进行药物治
疗试验 ,每组 5～ 8只不等 ,给药组分几个剂量组 ,均口服 , 1d2次 , 14d
为 1疗程 ,另设病毒对照组(DHBV),以生理盐水代替药物 ,阳性药组
用无环鸟苷(ACV)口服 ,给药 200mg/ kg/ d , 1d2次 , 14d为 1疗程 ,在感
染后第 13d即用药前(TO),用药第 7d(T7),用药第 14d(T14)和停药后
第 3d(P3),自鸭腿胫静脉取血 ,分离血清-70℃保存待检。
1.4.3　检测方法　取上述鸭血清 , 每批同时点膜 , 测定鸭血清中
DHBV-DNA水平的动态 ,按缺口翻译试剂盒说明书方法 ,用32P 标记
DHBV-DNA探针 ,并作鸭血清斑点杂交 ,放射自显影膜片斑点 ,在酶
标检测仪上测定OD 值(滤光片为 490nm),计算血清 DHBV-DNA 密
度 ,以杂交斑点 OD值作为标本DHBV-DNA 水平值。
2　结果　见附表。
附表 中药叶下珠复方在鸭体内对 DHBV-DNA OD 值的抑制作用
批
次 组别　　　　 药物剂量　
鸭数
(只)
OD490值( X±S)
TO　　　 T7　　　 T14　　　 P3　　　
Ⅰ ACV 200g/ kg 7 1.31±0.28 0.06±0.07＊＊■ 0.06±0.04＊＊■ 0.9±0.64
叶下珠水提复方 10g/ kg 8 1.70±0.13 1.24±0.56＊ 0.59±0.56＊＊ 0.43±0.37＊＊
叶下珠醇提复方 10g/ kg 7 1.57±0.41 0.88±0.60＊ 0.82±0.63＊ 0.69±0.58
病毒对照 - 8 1.11±0.25 1.07±0.25 1.01±0.28 0.76±0.39＊
Ⅱ 叶下珠水提复方 10g/ kg 6 1.33±0.39 1.37±0.34 0.68±0.63 0.63±0.54＊
ACV 200mg/ kg 7 0.86±0.39 0.08±0.04＊＊■ 0.05±0.02＊＊■ 0.29±0.09＊＊
病毒对照 - 7 1.52±0.45 1.57±0.17 1.30±0.29 1.29±0.20
Ⅲ 叶下珠水提复方 10g/ kg 9 1.46±0.22 1.12±0.62 0.80±0.59＊＊ 0.53±0.46＊＊
叶下珠水提复方 5g/ kg 9 1.09±0.38 0.74±0.41 0.25±0.29＊＊ 0.28±0.42＊■
叶下珠水提复方 2.5g/ kg 9 0.96±0.43 0.77±0.32 0.29±0.32＊＊■ 0.64±0.53
ACV 200mg/ kg 7 0.95±0.24 0.26±0.13＊＊ 0.08±0.07＊＊ 0.63±0.19＊
病毒对照 - 7 1.12±0.34 0.88±0.40 0.84±0.56 0.80±0.49
　　给药后不同时间(T7T14P3)OD 值与同组给药前(T0)OD值比较(配对 t 检验)＊P<0.05 ＊＊P<0.01;给药后不同时间(T7T14P3)OD 值与对照
组比较(配对 t检验)■P<0.05 , ■■P<0.01
3　讨论　目前有关叶下珠的研究报道较多 ,我们的实验结果与之相
一致。实验表明:1.叶下珠水提复方 , 醇提复方均有显著的抑制
DHBV-DNA 作用 ,表明叶下珠复方中抗乙肝病毒作用的物质成份既
能溶于水又能溶于醇。 2.叶下珠水提复方 10g/kg 组 、5g/kg 组和
2.5g/kg组于给药第 14d和停药 3d时有显著抗乙肝病毒作用 ,且有下
降趋势。说明叶下珠水提复方抗乙肝病毒作用较慢。3.与阳性对照
药(ACV)比较,中药复方叶下珠 3个剂量组停药后有下降趋势 ,说明
中药复方中叶下珠可能为一作用较持久的抗乙肝病毒中药。两者联
合能否有增强抗鸭乙肝病毒 ,延缓ACV反跳作用 ,需在今后工作中加
以研究。由于叶下珠不同品种 , 产地对疗效影响较大[ 1] 需进一步加
强对有效部位的研究 ,以期阐明叶下珠抗乙肝病毒的物质基础。
　　参考文献
1　刘庄 ,等.中华实验和临床病毒学杂志 1997;11(3):282
(修回:2001-05-09)
·374· 　　　　　　　　中国中医药科技 2001 年第 8卷第 6 期