全 文 ：［收稿日期］ 20130110(005)
［基金项目］ 湖北省自然科学基金重点项目(2010CDA047)
［第一作者］ 郜红利，副教授，从事民族药物的开发与利用研
究，Tel:0718-8439504，E-mail:349523825@ qq． com
［通讯作者］ * 谭玉柱，硕士，助教，从事中药有效成分及质量
标准化研究，Tel:028-61800033，E-mail:365762996
@ qq． com
蜘蛛香总缬草三酯提取物的纯化工艺优选
郜红利1，谭玉柱2*
( 1. 湖北民族学院，湖北 恩施 445000; 2. 成都中医药大学，成都 611137)
［摘要］ 目的:优选蜘蛛香总缬草三酯提取物的纯化工艺。方法:采用动态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号，通过单因
素试验考察上样量、洗脱流速、洗脱溶剂及其用量对总缬草三酯富集纯化工艺的效果。结果:采用 ADS-8 型大孔吸附树脂，优
选的纯化工艺为上样量 42. 3 mg·g －1，上样液质量浓度 1. 692 g·L －1，用 30%乙醇除杂，用 95%乙醇 6 BV洗脱，洗脱流速 2 mL·
min －1，总缬草三酯纯度 51%，出膏率 26%。结论:优选的纯化工艺稳定可靠、重复性好。
［关键词］ 蜘蛛香;总缬草三酯;纯化工艺
［中图分类号］ Ｒ283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)12-0037-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013120037
Optimization of Purification Technology of Total Valepotriates
from Extract of Valeriana jatamansi
GAO Hong-li1，TAN Yu-zhu2*
(1. Hubei University for Nationalities，Enshi 445000，China;
2. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)
［Abstract］ Objective:To optimize purification process of total valepotriates from extract of Valeriana
jatamansi． Method:Models of macroporous resin was screened by dynamic adsorption-elution test，effect of
sample volume，elution flow rate，elution solvent and its amount on purification process of total valepotriates was
investigated by single factor test． Ｒesult:ADS-8 macroporous resin was adopted， optimized purification
technology was as following:the concentration of sample solution 1. 692 g·L －1，elution flow rate of 2 mL·min －1，
sample capacity 42. 3 mg·g －1，after eluted with 30% ethanol and 6 BV of 95% ethanol， yield of total
valepotriates was 26% and purity was 51% ． Conclusion:Optimized purification technology was stable，reliable
and reproducible．
［Key words］ Valeriana jatamansi;total valepotriates;purification technology
蜘蛛香主要分布在我国西南少数民族地区［1］，
以根茎及根入药，用于治疗脘腹胀痛、呕吐泄泻、小
儿疳积等［2-3］。其主要化学成分为环烯醚萜类、黄
酮类、生物碱类［4］，环烯醚萜成分中缬草三酯类化
合物是抗肿瘤、镇静催眠、抗焦虑、解痉等药效成分
之一［5-6］。在提取工艺研究基础上，本实验通过动
态吸附-洗脱试验筛选大孔吸附树脂型号，并通过单
因素试验优选其纯化工艺。制备的缬草三酯提取
物，较文献报道的缬草三酯类提取物纯度高，且操作
简便［7］，可作为抗肿瘤药、抗抑郁药研发的医药中
间体，同时为蜘蛛香资源的开发提供实验依据。
1 材料
UV 1100 型紫外分光光度计(上海天美科学仪
器有限公司) ，UPT-I-10T 型优谱超纯水器(成都超
纯科技有限公司) ，BS124S 型电子天平(赛多利斯
科学仪器有限公司)。HPD-600，AB-8，HPD300，S-
8，ADS-8 型大孔树脂(成都亚荣生化设备有限公
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中国实验方剂学杂志
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Vol． 19，No． 12
Jun．，2013
司) ，缬草三酯对照品(成都植标化纯生物有限公
司，批号 110756-200110，纯度 ＞ 98%) ，蜘蛛香(采
自湖北省恩施州利川市福宝山，经湖北民族学院中
药鉴定教研室朱敏英教授鉴定为败酱科植物蜘蛛香
Valeriana jatamansi Jones的干燥根茎和根) ，试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 标准曲线的绘制 精密称取适量缬草三酯，用
无水乙醇溶解配制成 0. 109 6 g·L －1的对照品贮备
液。分别吸取该贮备液 0. 5，1，1. 5，2，2. 5 mL 置于
10 mL 量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，配制
成系列对照品溶液。以无水乙醇作空白，于 256 nm
处测吸光度(A)。以 A 为纵坐标，缬草三酯质量浓
度为横坐标，得回归方程 Y = 31. 427X + 0. 037 2(r =
0. 999 2) ，线性范围 0. 005 48 ～ 0. 027 4 g·L －1。
2. 2 供试品溶液的制备 称取蜘蛛香粉末 5 g，置
具塞锥形瓶中，加 50 mL无水乙醇浸泡 1 h，超声提
取 3 次，每次 30 min，合并提取液，过滤，用无水乙醇
定容至 50 mL，摇匀，即得。
2. 3 大孔树脂的预处理［8］ 大孔树脂用 95%乙醇
浸泡 24 h，湿法装柱。用 95%乙醇冲至洗脱液澄
清，用水冲洗至洗脱液无醇味;用 2 BV 5%HCl浸泡
3 h左右，按 4 ～ 6 mL·min －1流速冲洗，用水冲洗至
中性;用 2 BV 2%NaOH浸泡 3 h，以 4 ～ 6 mL·min －1
流速洗柱，用水冲洗至中性，备用。
2. 4 动态吸附-洗脱试验 称取预处理好的 5 种大
孔吸附树脂(HPD-600，AB-8，HPD-300，S-8，ADS-8)
各 15 g，湿法装柱，分别吸取等量蜘蛛香提取液过
柱，进行动态吸附。至吸附均匀时，停止上样，记录
上样液体积。用水冲洗树脂柱，收集所有冲洗液，定
容，计算蜘蛛香总缬草三酯吸附量依次为 7. 19，
7. 83，7. 63，6. 28，7. 50 mg·g －1;吸附率分别为
89. 10%，97. 02%，94. 50%，77. 8%，92. 90%。用
95%乙醇 100 mL洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液
并定容至 100 mL。各精密量取 0. 2 mL，挥干溶剂，
用无水乙醇定容至 10 mL，测定蜘蛛香总缬草三酯
洗脱量分别为 7. 10，5. 10，6. 31，5. 74，7. 16 mg·g －1;
洗脱率依次为 98. 7%，65. 1%，82. 7%，91. 4%，
95. 5%。综合考虑，ADS-8 型大孔树脂对蜘蛛香总
缬草三酯的吸附和解吸能力相对较好。
吸附量 =(母液质量浓度 － 滤液质量浓度)× 溶液体
积 /干树脂质量;
吸附率 =(母液质量浓度 －滤液质量浓度)/母液质量
浓度 × 100%;
洗脱量 =洗脱液质量浓度 ×洗脱液体积 /干树脂质量;
洗脱率 =解吸量 /吸附量 × 100%
2. 5 单因素试验考察［9-10］
2. 5. 1 上样量 称取 ADS-8 型大孔树脂 10 g，湿法
装柱，加蜘蛛香提取液(4. 23 g·L －1)上柱，流速 1
mL·min －1，收集流出液，每 10 mL收集 1 份，共收集
12 份，测定 A，吸附曲线见图 1，故确定最大上样量
42. 3 mg·g －1。
图 1 ADS-8 型大孔树脂对蜘蛛香总缬草
三酯成分的动态吸附曲线
2. 5. 2 上样流速 称取已吸干表面水分的 ADS-8
型树脂 4 份，每份 10 g，准确加入蜘蛛香提取液 20
mL，用等量水洗脱，考察流速为 1，2，4，8 mL·min －1
对蜘蛛香总缬草三酯纯化工艺的影响，收集流出液，
测定 A，测定总缬草三酯含量。结果总缬草三酯吸
附量分别为 7. 25，8. 29，8. 02，6. 59 mg·g －1，吸附率
依次为 85. 7%，97. 9%，94. 8%，77. 9%，故选择上
样流速 2 mL·min －1。
2. 5. 3 上样液质量浓度 精密量取蜘蛛香提取液
5，10，15，20 mL，分别稀释定容至 50 mL。称取已吸
干表面水分的 ADS-8 型树脂 4 份，每份 5 g，分别浸
泡于上述 4 份提取液中，置于 20 ℃恒温水浴箱，每
间隔 30 min振荡 1 min(60 次 /min) ，1 h 后抽滤，制
成总缬草三酯制备液，测定 A，计算总缬草三酯含
量。结果发现，随上样液质量浓度的提高，吸附率上
升，当上样质量浓度为 1. 692 g·L －1时，吸附率最高，
随后上样质量浓度上升吸附率反而下降，故确定上
样质量浓度 1. 692 g·L －1(生药质量浓度 0. 035 g·
mL －1)。
2. 5. 4 洗脱溶剂 取已处理备用的 ADS-8 型树脂
20 g，湿法装柱，吸取蜘蛛香提取液 20 mL 上柱，分
别用体积分数为 10%，20%，30%，50%，70%，
80%，95%的乙醇溶液 50 mL以 2. 0 mL·min －1的流
速洗脱，收集洗脱液，测得总缬草三酯质量分别为
0. 134，1. 025，2. 013，19. 458，8. 469，2. 468，0. 092
mg;得率依次为 0. 40%，3. 05%，5. 98%，57. 81%，
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Vol． 19，No． 12
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25. 16%，7. 33%，0. 27%。结果显示，30%乙醇洗脱
液中总缬草三酯含量较低，70%乙醇洗液不能完全
洗脱总缬草三酯成分，而 95%乙醇洗脱时，其含量
显著减少。因此，洗脱溶剂确定为先用 30%乙醇洗
脱除杂，后用 95%乙醇溶液洗脱。
2. 5. 5 洗脱剂用量 称取 ADS-8 型树脂 20 g 装
柱，加 1. 692 g·L －1蜘蛛香提取液 20 mL 上柱，待吸
附均匀，用适量水和 30%乙醇 100 mL 冲洗至流出
液近无色，用 95%乙醇洗脱至洗脱液无色，收集洗
脱液，每 20 mL为 1 个流份，共收集 10 份，挥干，制
成总缬草三酯供试品溶液，测定 A，结果见图 2。
图 2 蜘蛛香总缬草三酯洗脱曲线
由图 2 可知，当收集至第 6 份时，洗脱液中总缬
草三酯含量已降至较低水平，故认为此洗脱剂 120
mL(6 BV)即可将总缬草三酯洗脱完全。
2. 6 验证试验 称取蜘蛛香药材粉末 3 份，每份
20 g，超声提取，得蜘蛛香提取液。按优选的纯化工
艺富集总缬草三酯，进行 3 次验证试验，结果总缬草
三酯平均收率 26. 12%(ＲSD 2. 56%) ，平均质量分
数 51. 38%(ＲSD 3. 12%)。
3 讨论
考察上样流速时，随流速的升高，其吸附率降
低，可能是由于缬草三酯分子扩散速率较慢，与树脂
接触不充分，使大量缬草三酯类来不及与 ADS-8 型
树脂交换吸附而发生泄漏。缬草三酯类成分极性较
小，脂溶性较强，因此用 30%乙醇洗脱，可在保证不
洗脱目标成分的前提下将水溶性杂质尽可能除去，
从而最大限度富集目标成分。
缬草三酯属环烯醚萜类成分，遇酸碱易分解，对
热不稳定［11］，同时在无水三氯甲烷和无水乙醇中较
稳定［12］，故应控制提取纯化温度(＜ 37 ℃)并选择
合适的提取溶剂(无水乙醇)。本实验采用超声快
速提取，避光放置树脂柱，避免了因药材提取温度过
高、接触溶剂过久、见光易分解而导致的缬草三酯类
成分变化。大孔树脂吸附总缬草三酯后可采用溶解
度较高的溶剂如甲醇、乙醇作洗脱剂，但考虑工业生
产中甲醇毒性较大、污染严重，故选用乙醇为洗
脱剂。
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［责任编辑 仝燕］
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