全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2017 年
第 55 卷第 8 期
2016 年 4 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 55 No.7
Apr.，2016
2
1
1
Jan
6
7
6 2
7
收稿日期：2016－05－30
基金项目：贵州省中药现代化专项项目［黔科合 ZY 字（2012）3010 号］；贵州省联合基金项目［黔科合 LH字（2014）7091 号］；贵州省社发攻关
项目［黔科合 SY 字（2015）3032 号］
作者简介：刘开萍（1993－），女，贵州岑巩人，在读硕士研究生，研究方向为中药新剂型，（电话）0851－88416164（电子信箱）857568047＠qq．com；
通信作者，罗喜荣，女，教授，硕士研究生导师，主要从事药物新剂型及天然药物化学研究，（电话）0851－88416164（电子信箱）
1341323603＠qq．com。
蜘蛛香又名马蹄香、老虎七、心叶缬草等，系败
酱科（Valerianaceae）缬草属（Valeriana L．）植物蜘蛛
香（Valeriana jatamansi Jones）的干燥根茎及根，在
中医里具有理气止痛、消食止泻、祛风除湿、镇静安
神等功效，主治脘腹胀痛、食积不化、腹泻痢疾、风湿
痹痛、腰膝酸软、失眠等症，主要含有挥发油、缬草三
酯类、黄酮类、多酚类等成分［1－8］。 蜘蛛香药材的质量
控制目前尚不完善，为此，试验分别采用高效液相色
谱法（HPLC）和紫外－可见分光光度法（UV），首次测
定了蜘蛛香植株中绿原酸及总酚酸的含量， 旨在为
蜘蛛香中绿原酸及总酚酸的含量测定
刘开萍 1，杨 军 2，罗喜荣 1，赵开坤 1，尹 航 1，刘兴赋 1
（1．贵州医科大学药学院，贵阳 550025；2．中国科学院地球化学研究所，贵阳 550009）
摘要：试验建立了蜘蛛香（Valeriana jatamansi Jones）中绿原酸和总酚酸的含量测定方法。 利用高效液相
色谱法（HPLC）测定蜘蛛香中绿原酸的含量，色谱柱为 Dikma C18（4．6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙
腈－0．4％磷酸水溶液（12∶88），流速 1．0 mL ／ min，检测波长 327 nm，柱温 30 ℃；以绿原酸为对照品，采用紫
外－可见分光光度法（UV）在 327 nm 波长处测定蜘蛛香中总酚酸的含量。结果表明，绿原酸在 2～20 μg ／ mL
范围内浓度与峰面积线性关系良好，r＝0．999 6，加样回收率为 97．95％，RSD为 1．37％；总酚酸在 5～20 μg ／mL
范围内浓度与吸光度线性关系良好，r＝0．999 8， 加样回收率为 100．31％，RSD 为 1．34％。 该方法简便、快
速、准确、重复性好，可用于蜘蛛香中绿原酸和总酚酸的含量测定。
关键词：蜘蛛香（Valeriana jatamansi Jones）；绿原酸；总酚酸
中图分类号：Q949．781．4＋7 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2017）02－0288-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.02.021
Determination of Chlorogenic Acid and Total Phenolic Acid Content
in Valeriana jatamansi
LIU Kai－ping1，YANG Jun2，LUO Xi－rong1，ZHAO Kai－kun1，YIN Hang1，LIU Xing－fu1
（1． Pharmacy College， Guizhou Medical University， Guiyang 550025， China；
2．Institute of Geochemistry， Chinese Academy of Sciences， Guiyang 550009，China）
Abstract： To establish a method for determining chlorogenic acid and total phenolic acid in Valeriana jatamansi Jones．
Chlorogenic acid content in V． jatamansi was determined by high performance liquid chromatography， as the Dikma ODS （4．6
mm×250 mm， 5 μm） column was adopted， the mobile phase was acetonitrile－0．4％ phosphoric acid（12∶88） at the flow rate of
1．0 mL ／ min， the detection wavelength was 327 nm， and the column temperature was 30 ℃． Total phenolic acid content in V．
jatamansi was determined by ultraviolet－visible spectrophotometry spectrophotometer with chlorogenic acid as standard reference
at the detection wavelength of 327 nm． Chlorogenic acid showed good linearity in the range of 2 to 20 μg ／ mL（r＝0．999 6）； the
recovery was 97．95％（RSD＝1．37％）． Total phenolic acid had good linear relationship within the range of 5 to 20 μg ／ mL （r＝
0．999 8）； the recovery was 100．31％（RSD＝1．34％）． The method is simple， rapid， accurate， reproducible and could be used
for measuring the chlorogenic acid and total phenolic acid content in V． jatamansi．
Key words：Valeriana jatamansi Jones； chlorogenic acid； total phenolic
第 2 期
蜘蛛香药材资源的合理开发利用以及质量控制提供
理论依据。
1 材料与方法
1．1 材料与仪器
1．1．1 材料 蜘蛛香植株分别采自贵州省贵阳市、
江口县、松桃苗族自治县、岑巩县、石阡县，自然阴干
后，粉碎过 60目筛，备用。绿原酸对照品来自中国食
品药品检定研究院，批号 110753－201314；乙腈为色
谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。
1．1．2 仪器 主要有 Agilent 1100 DAD 高效液相
色谱仪（美国 Agilent 公司）；UV－1750 紫外－可见分
光光度计（日本岛津公司）；EL204 电子天平（梅特
勒－托利仪器上海有限公司）；KQ5200 超声波清洗
器（昆山市超声仪器公司）。
1．2 溶液的配制
1．2．1 对照品溶液 精密称取适量绿原酸对照品，
用 50％甲醇配成 200 μg ／ mL的贮备液。 分别取不同
体积的绿原酸标准贮备液于 10 mL 容量瓶中，用
50％甲醇定容至刻度，摇匀，配制成系列浓度的标准
工作溶液。
1．2．2 供试品溶液 准确称取各地 0．5 g 蜘蛛香样
品，用石油醚回流脱脂至提取液无色，残渣挥干石油
醚后置具塞锥形瓶中，加入 50％甲醇 50 mL，密塞，
摇匀，称定质量；超声提取 40 min，放冷，用 50％甲
醇补足减失的质量；过滤，取续滤液 0．2 mL，加 50％
甲醇稀释、定容至 10 mL，即得。
1．3 绿原酸的测定
色谱柱为 Dikma C18（4．6 mm×250 mm，5 μm），
流动相为乙腈－0．4％磷酸水溶液（12∶88），流速 1．0
mL ／ min，检测波长 327 nm，柱温 30 ℃，进样量 20
μL。 以标准品的保留时间和峰面积定性、定量测定
样品中的绿原酸含量。
1．4 总酚酸的测定
以 50％甲醇作空白， 在紫外－可见分光光度计
的最大吸收波长处测定标准工作溶液的吸光度，绘
制工作曲线，以相同条件测定样品液的吸光度，计算
样品中的总酚酸含量。
2 结果与分析
2．1 绿原酸测定
2．1．1 色谱分析 绿原酸对照品和供试品色谱结果
见图 1。 从图 1 可见，在上述色谱条件下，绿原酸可
有效分离，峰型对称，无杂峰干扰。
2．1．2 标准曲线 精密移取绿原酸标准贮备液
0．10、0．25、0．50、0．75、1．00 mL，分别置于 10 mL 容量
瓶中，加 50％甲醇至刻度，按上述色谱条件依次进
样，测定峰面积。 以绿原酸浓度为横坐标（x），峰面
积为纵坐标（y）进行线性回归拟合，得回归方程 y＝
9．513 4x－0．380 5，r＝0．999 6， 表明绿原酸在 2～20
μg ／ mL范围内与峰面积线性关系良好。
2．1．3 精密度试验 取同一供试品溶液， 按上述色
谱条件连续进样 6 次， 测得绿原酸峰面积 RSD 为
0．92％，表明仪器精密度良好。
2．1．4 稳定性试验 取同一供试品溶液， 按上述色
谱条件分别于 0、2、4、6、8、12、24 h 进样， 测得绿原
酸峰面积 RSD为 1．43％，表明供试品溶液在 24 h 内
稳定性良好。
2．1．5 重复性试验 取同一批（贵阳市样品）蜘蛛香
样品 6份，先按上述方法制备供试品溶液，再按上述
色谱条件测定，测得绿原酸平均含量为 20．53 mg ／ g，
RSD为 1．26％，表明该方法重复性良好。
2．1．6 加样回收率试验 精密称取已知绿原酸含量
的蜘蛛香样品 6份，准确加入等量的对照品，按上述
方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件测定，结果
平均回收率为 97．95％，RSD 为 1．37％， 表明该方法
准确度良好。
2．2 总酚酸测定
2．2．1 测定波长的选择 分别取对照品溶液和供试
品溶液在紫外－可见分光光度计的 200～400 nm 范
围内进行扫描，结果见图 2。 图 2 表明，对照品溶液
及供试品溶液均在 327 nm处有最大吸收，故选择总
图 1 对照品（A）和蜘蛛香（B）的 HPLC
0 5 10 15 20 25
t//min
A
0 5 10 15 20 25
t//min
B
刘开萍等：蜘蛛香中绿原酸及总酚酸的含量测定 289
湖 北 农 业 科 学 2017 年
酚酸测定波长为 327 nm。
2．2．2 工作曲线 精密移取总酚酸标准贮备液
0．25、0．40、0．55、0．70、0．85、1．00 mL 分别置于 10 mL
容量瓶中，加 50％甲醇至刻度，在 327 nm 处测定吸
光度。 以总酚酸浓度为横坐标（x），吸光度为纵坐
标 （y）绘制标准曲线 ，得回归方程为 y＝41．867x－
0．020 8，r＝0．999 8，表明在 5～20 μg ／ mL 范围内总酚
酸浓度与吸光度具有良好的线性关系。
2．2．3 精密度试验 取同一供试品溶液在 327 nm
处测定吸光度，重复测定 6 次，结果 RSD 为 0．85％，
表明仪器精密度良好。
2．2．4 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0、
2、4、6、8、12、24 h在 327 nm处测定吸光度，结果RSD
为 1．04％，表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2．2．5 重复性试验 取同一批（贵阳市样品）蜘蛛香
样品 6份，按上述方法制备供试品溶液，在 327 nm处
测定吸光度， 测得总酚酸平均含量为 37．12 mg ／ g，
RSD为 1．15％，表明方法重复性良好。
2．2．6 加样回收率试验 精密称取已知总酚酸含量
的蜘蛛香样品 6份，准确加入等量的对照品，按上述
方法制备供试品溶液，在 327 nm处测定吸光度，结果
平均回收率为 100．31％，RSD 为 1．34％，表明方法准
确度良好。
2．3 样品测定
取不同产地的蜘蛛香样品， 按上述方法制备供
试品溶液，再按上述色谱条件测定，计算样品中的绿
原酸含量； 在紫外－可见分光光度计的 327 nm处测
定吸光度，计算样品中的总酚酸含量，结果见表 1。
3 讨论
蜘蛛香是惟一被 2015 年版《中国药典》收录的
缬草类生药， 是一味中医临床长期应用疗效较好的
中药，具有抗肿瘤、保护神经、保肝、抗氧化、抗菌、抗
病毒等药理作用［9］。 试验建立了蜘蛛香中绿原酸及
总酚酸含量的检测方法，该方法简单、快捷、重现性
好、准确可靠，可用于蜘蛛香药材的质量控制及定量
分析，为蜘蛛香药材质量标准的提升打下了基础。
绿原酸广泛分布于植物中， 但含量较高的植物
不多。 试验测定了黔产蜘蛛香中绿原酸及总酚酸的
含量。结果表明，酚酸类化合物是蜘蛛香中含量较高
的一类物质，是其发挥临床疗效的重要物质基础，具
有较高的研究和开发利用价值。
参考文献：
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药科技出版社，2015．368－369．
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行时间质谱分析［J］．时珍国医国药，2012，23（4）：924－926．
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酯的工艺研究［J］．广东农业科学，2012（16）：119－121．
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艺优化［J］．湖北农业科学，2013，52（8）：1901－1902，1912．
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［8］ 傅 亮，楚清脆，黄宝康，等．毛细管电泳－电化学检测法测定蜘
蛛香中多元酚类化合物［J］．分析化学，2005，33（2）：161－164．
［9］ 陈 畅，李韶菁，唐仕欢，等．蜘蛛香药理研究进展［J］．中国中药
杂志，2012，37（14）：2174－2177．
表 1 蜘蛛香中绿原酸及总酚酸的测定
编号
1
2
3
4
5
产地
贵阳市
江口县
松桃苗族自治县
岑巩县
石阡县
绿原酸//%
2.05
1.63
2.58
1.37
1.16
总酚酸//%
3.71
3.29
4.11
2.84
2.75
200 250 300 350 400
λ//nm
1.5
1.0
0.5
0.0
Ab
s
图 2 蜘蛛香（a）及对照品（b）的紫外光谱
a
b
290