全 文 ： ·602· Chin J Mod Appl Pharm, 2016 May, Vol.33 No.5 中国现代应用药学 2016 年 5 月第 33 卷第 5 期
毛连菜总酚含量测定和纯化工艺研究

郭娜 1，韩伟健 1，周翎 2，林晓彤 1，许枬 1*(1.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600；2.大连海港医院，辽宁 大连 116101)

摘要：目的 建立毛连菜总酚的含量测定方法，并优选其大孔吸附树脂纯化工艺。方法 采用紫外-可见分光光度法测
定毛连菜总酚的含量，以吸附量、解吸率、解吸量等指标优选毛连菜总酚的大孔吸附树脂富集纯化工艺。结果 所建立
的质量控制方法的精密度、重复性和稳定性良好，其 RSD 均<3.0%。优选出了 HP-20 树脂对毛连菜总酚有较好的吸附、
解吸性能，最佳工艺：上样的毛连菜水溶液总酚浓度为 8.54 mg·mL1，上样体积为 1 BV，控制流速为 2 BV·h-1。先用水
和 10%乙醇洗去杂质，用量各 4 BV，收集 4 BV 的 30%乙醇和 3 BV 的 50%乙醇洗脱液，浓缩，即得。结论 本实验建
立的质量控制方法简单、准确，经 HP-20 树脂分离纯化，毛连菜总酚的纯度可达 87%以上，且工艺稳定。
关键词：毛连菜；大孔吸附树脂；总酚；含量测定；纯化工艺
中图分类号：R284.2；R917.101 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2016)05-0602-04
DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2016.05.019

Determination and Purification Technology of Total Phenols from Picris Japonica Thunb.

GUO Na1, HAN Weijian1, ZHOU Ling2, LIN Xiaotong1, XU Nan1*(1.School of Pharmacy, Liaoning University of
Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China; 2.Dalian Harbour Hospital, Dalian 116101, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish a method for the content determination and purification technology of total phenols
from Picris japonica Thunb. METHODS The content of total phenols was determined by UV-visible spectrophotometry and
the purification technology of total phenols by macroporous resin was optimized with extent of adsorption, adsorption rate,
desorption amount and desorption rate as index. RESULTS The RSD of precision, reproducibility and stability of the
quality control method were <3.0%. HPD-20 macroporous resin showed good purified capability to total phenols from Picris
japonica Thunb.. Optimum technology conditions were determined as follow: 1 BV of sample solution (the content of total
phenols was 8.54 mg·mL1) was passed through microporous resin with elution rate of 2 BV·h1, after eluted with 4 BV of water
and 4 BV of 10% ethanol, then collected 4 BV of 30% ethanol eluent and 3 BV of 50% ethanol eluent, and concentrated the
combined eluent under vacuum to yield the purified total phenols. CONCLUSION The method established for determined the
content of total phenols from Picris japonica Thunb. is convenient and accurate. After used HP-20 resin and the optimized
technology, the purity of total phenols from Picris japonica Thunb. is >87%, and the process is stable.
KEY WORDS: Picris japonica Thunb.; macroporous resin; total phenols; content determination; purification technology


作者简介：郭娜，女，硕士生 Tel: (0411)85890191 E-mail: guona1991@foxmail.com *通信作者：许枬，女，博士，教授 Tel:
(0411)85890191 E-mail: xudanbs@163.com
毛连菜(Picris japonica Thunb.)为菊科毛连菜
属植物，主要生长于我国的东北、华北等地，在
日本、蒙古等国也有分布。药用全草或地上部分，
药品名称为毛连菜，在我国主要做蒙药用。蒙医
认为毛连菜具有杀黏、止痛、清热、消肿、解毒
的功效，临床用于治瘟疫、流感、阵刺痛、发症、
乳痈[1]。现代药理学研究还揭示了毛连菜具有降血
糖、调血脂等作用[2-3]。蒙医中该药常入散剂，多
用水煎，民间也有鲜品食用或直接捣碎敷于患处
的用法。
强水溶性的酚性成分广泛存在于药用植物
中，随着学者们对酚类成分药用价值的认识和肯
定。毛莲菜水提成分的降血糖等作用已被证实[2-7]。
本课题组在前期研究毛连菜化学成分时首次从中
发现多酚类成分，并发现多酚类成分有较好的抗
炎和抗菌作用。由于目前尚未见对毛连菜总酚含
量测定方法及纯化工艺的报道，为深入揭示毛连
菜总酚的成分组成与药效作用，方便规模化生产，
防止药物的浪费，本试验建立了毛连菜的总酚含
量测定方法，并选取工业上应用广泛有较好吸附
性能的材料——大孔吸附树脂，优选富集纯化工艺。
1 仪器与试药
FA1004B 型十万分之一分析天平(上海精密科
学仪器有限公司)；UV1750 型紫外-可见分光光度
计(日本岛津公司)；移液器(德国 Eppendorf 公司)；
HP-20 型树脂(日本三菱公司)；D101 型树脂(天津
欧瑞生物科技有限公司)。
儿茶素对照品(中国药品生物制品鉴定所，批
中国现代应用药学 2016 年 5 月第 33 卷第 5 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2016 May, Vol.33 No.5 ·603·
号：877-200001，供含量测定用)；毛连菜饮片购
自安国药材市场(批号：14060708)，经辽宁中医药
大学王冰教授鉴定为毛连菜 (Picris japonica
Thunb.)；HPD-600、HPD-450、HPD-417、DM-130
型树脂(沧州宝恩化工有限公司)；水为自制双蒸
水；其他试剂均为分析纯，购自天津科密欧化学
试剂有限公司。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 毛连菜提取液的制备 取毛连菜粗粉 20 g，
精密称定，加 20 倍体积分数的 60%乙醇，超声提
取 2 次，每次 0.5 h，滤过，合并滤液，蒸干，残
渣加水溶解，转移至 100 mL 量瓶，加水至刻度，
摇匀，即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 精密吸取“2.1.1”项
下的毛连菜提取液 2.5 mL，置 50 mL 量瓶中，加
95%乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.1.3 对照品溶液的制备 精密称取儿茶素对照
品，置 50 mL 量瓶中，加乙醇定容，摇匀，制成
0.1 mg·mL1 的储备液。精密吸取上述储备液
15 mL，置 25 mL 量瓶中，加乙醇定容，制成
0.06 mg·mL1 的溶液，作为对照品溶液。
2.1.4 显色反应试液的制备 ①十二烷基硫酸钠
试液：精密称取十二烷基硫酸钠 0.3 g，加水 100 mL
使溶解，制得 0.3%的十二烷基硫酸钠试液；②铁
氰化钾试液：精密称取铁氰化钾 0.45 g，加水 50 mL
使溶解，制得 0.9%的铁氰化钾试液；③三氯化铁
试液：精密称取三氯化铁化合物 0.15 g，加水 50 mL
使溶解，制得 0.3%的三氯化铁试液；④三氯化铁-
铁氰化钾混合溶液：取上述三氯化铁和铁氰化钾
溶液，按 2∶1 的比例混合，即得(临用现配)。
2.2 测定波长的选定
精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液各
0.1 mL，分别置于 10 mL 量瓶中，加乙醇至 4 mL，
摇匀，加 0.3%的十二烷基硫酸钠溶液 0.8 mL、三
氯化铁-铁氰化钾混合溶液 0.6 mL，摇匀，暗处放
置 5 min，加 0.1 mol 的盐酸溶液至刻度，摇匀，
暗处放置 20 min。以相应试剂为空白溶液，在
400~900 nm 内测定吸收曲线。结果，供试品溶液
和对照品溶液吸收曲线相近，且均在 750 nm 处有
最大吸收。故确定测定波长为 750 nm。
2.3 总酚的含量测定
2.3.1 标准曲线的建立 精密吸取儿茶素对照品
溶液 0.6，1.0，1.4，1.8，2.2 mL，分别置 10 mL
量瓶中，按“2.2”项下的方法，自“加乙醇至 4 mL”
起，依法于 750 nm 处测定吸光度。以吸光度(A)
为纵坐标，质量(x)为横坐标，绘制标准曲线，得
回归方程为 A=5.849x+0.0042，r=0.999 1。结果表
明，毛连菜总酚在0.036~0.132 mg内线性关系良好。
2.3.2 仪器精密度考察 取供试品溶液 0.1 mL，
共 6 份，按“2.2”项下的方法，自“加乙醇至 4 mL”
起，依法平行测定其吸光度，6 次测定结果的 RSD
为 0.56%，表明仪器的精密度良好。
2.3.3 重复性试验 按“2.1.2”项下供试品溶液
的制备方法，平行制备供试品溶液 6 份，按“2.2”
项下的方法，自“加乙醇至 4 mL”起，依法测定
其吸光度，结果 6 份样品吸光度的 RSD 为 0.13%，
表明方法重复性良好。
2.3.4 稳定性考察 按“2.1.2”项下方法制备供
试品溶液，分别于 0，20，40，60，90，120 min，
按“2.2”项下方法，自“加乙醇至 4 mL”起，依
法测定吸光度，结果显示样品在 0~120 min 内吸光
度较稳定，RSD 为 0.93%(n=6)。故确定供试品溶
液制备后在 120 min 内基本稳定。
2.3.5 加样回收率试验 取按“2.1.2”项下方法
制备的供试品溶液 0.05 mL，共 6 份，分别精密加
入儿茶素对照品溶液 0.7 mL，按“2.2”项下方法，
自“加乙醇至 4 mL”起，依法测定吸光度，计算
6 份样品的平均回收率为 100.4%(RSD=1.4%)，表
明所建立的方法回收率良好。
2.3.6 毛连菜总酚的含量测定 精密吸取“2.1.2”
项下方法制备供试品溶液 0.1 mL(n=3)，测定方法
同 上 ， 计 算 供 试 品 溶 液 中 总 酚 含 量 为
8.54%(RSD=1.4%)。
2.4 不同型号树脂的筛选
2.4.1 样品溶液的制备 取毛连菜药材 40 g，按
“2.1.1”项下方法制备毛连菜提取溶液 200 mL(总
酚含量为 17.08 mg·mL1)，供后续的树脂纯化实验
使用。
2.4.2 树脂的预处理 取不同型号的大孔吸附树
脂，分别用 95%乙醇浸泡 24 h，充分溶胀，装入
色谱柱，用乙醇冲洗，至洗脱液加水不产生浑浊
为止，用蒸馏水洗至无醇味，取出，用滤纸吸干，
备用。
2.4.3 静态吸附量的测定 上述 6 种大孔树脂皆
按如下操作，准确称取预处理好的湿树脂 2.0 g，
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装入 50 mL 具塞三角瓶中，精密加入“2.4.1”项
下毛连菜提取溶液 2 mL(总酚含量 34.16 mg)，加 2
倍蒸馏水稀释，室温下放置 12 h(时时振摇)，待充
分吸附后，滤过，测定滤液(吸附液)中总酚含量，
计算静态吸附量和吸附率。结果表明，其中
HPD-600 和 DM-130 吸附量相对较小，其他 4 种
树脂的吸附量相近，结果见表 1。
2.4.4 静态解吸率的测定 将上述静态条件下吸
附毛连菜总酚达饱和的树脂，置于 50 mL 具塞磨
口三角瓶中，分别精密加入 95%乙醇溶液 30 mL，
于室温时时振摇 12 h，充分解吸后，测定解吸液
中的总酚含量，计算其解吸率和解吸量。结果表
明(见表 1)，HP-20 型树脂的吸附解吸性能最好。
综合考虑其吸附和解吸性能，确定 HP-20 型树脂
为纯化毛连菜总酚的最佳树脂。
吸附率=(吸附前质量浓度吸附后质量浓度)/
吸附前质量浓度；吸附量=(吸附前质量浓度－吸附
后质量浓度)；解吸率=解吸液中总酚/实际吸附总
酚；解吸量=解吸液中总酚。
表 1 6 种大孔树脂对毛连菜总酚的吸附及解吸参数
Tab. 1 Absorption and desorption parameters of 6 types of
macroporous resins for total phenols
树脂型号 树脂类型 吸附量/mg 吸附率/% 解吸量/mg 解吸率/%
D101 非极性 32.05 93.82 24.83 77.47
HP-20 32.10 93.97 29.55 92.06
DM-130 中极性 27.70 81.09 23.85 86.10
HPD-450 32.28 94.50 23.62 73.17
HPD-600 极性 28.91 84.63 19.32 66.83
HPD-417 氢键 31.26 91.51 21.78 69.67
2.5 HP-20 型树脂吸附毛连菜总酚工艺优化研究
2.5.1 流速的考察 取预处理好的 HP-20 型树脂
3 份，每份 10 mL(树脂柱床体积即 BV：10 mL，
柱体积：5.2 mL，干树脂重约 2 g)，分别装入 3 根
规格相同的玻璃层析柱中(1.5 cm×20 cm)，水洗平
衡。取“2.4.1”项下毛连菜提取液，用蒸馏水稀
释成总酚浓度分别为 8.54 mg·mL1的溶液 8 mL加
载于树脂柱顶端，分别控制流速为 4，2，1 BV·h1。
收集流出液，测定吸光度并算出吸附率分别为
84.09%，94.07%，94.32%，综合时间因素等选取
流速为 2 BV·h1。
2.5.2 上样方式的考察 取预处理好的 HP-20 型
树脂 4 份，每份 10 mL，分别装入 4 根规格相同的
玻璃层析柱中，水洗平衡。取“2.4.1”项下毛连
菜提取液 20 mL，共 4 份，用蒸馏水稀释成总酚浓
度分别为 17.08，12.81，8.54，4.27 mg·mL1 的溶
液，分别加载于大孔吸附树脂柱顶端，以 2 BV·h1
的流速进行吸附，弃去初流份(2 mL)后，以 1 mL
为 1 个流份，收集流出液，测定总酚含量，结果
表明，以总酚浓度为 8.54，4.27 mg·mL1 的溶液上
样时，上样量较大 (总酚含量为 85.4 mg)。
8.54 mg·mL1 浓度样品的上样量为 1.5 BV 时泄露
率达 20.13%，上样量为 1 BV 时泄露率<10%，总
吸附率为 90.16%，故选定最佳上样浓度为含总酚
浓度为 8.54 mg·mL1，最大上样量为 1 BV。
2.5.3 洗脱溶剂的筛选及除杂溶剂的用量 取预
处理好的 HP-20 型树脂 10 mL，湿法装柱，水洗
平衡，以上述确定总酚浓度的毛连菜提取液上样，
控制流速为 2 BV·h1，依次用 5 BV 的水、10%，
30%，50%，70%，90%乙醇，以每 1 BV 为 1 个
流份，收集洗脱液，测定总酚含量，分别计算洗
脱率。结果可见，水和 10%乙醇的洗脱部分的总
酚洗脱率仅为 2.03%和 2.05%。30%和 50%乙醇的
洗脱部分的总酚洗脱率则分别为 52.31% 和
35.59%，总量达 87.9%。70%和 90%乙醇的洗脱部
分总酚含量分别只有 5.60%和 2.42%。且 30%乙醇
的第 5 个柱床体积洗脱率只有 0.57%，50%乙醇的
第 5 柱床体积的洗脱率也只达到 0.40%。由此可
见，4 BV 的 30%和 50%乙醇可洗脱大部分总酚(洗
脱率=洗脱液中酚类含量/最大吸附量×100%)。
综上考察结果，确定以 HP-20 型大孔树脂纯化
毛连菜提取液总酚的最佳工艺条件为：以含总酚
浓度为 8.54 mg·mL1 的毛连菜提取液上样，最大
上样量为 1 BV，控制流速为 2 BV·h1，先用 4 BV
的水和 10%的醇分别洗去杂质，收集 4 BV 的 30%
乙醇和 3 BV 的 50%乙醇洗脱液。将所得洗脱液合
并，减压浓缩即得。所得浸膏中总酚含量为 88.5%。
2.5.4 工艺验证实验 取已处理好的 HP-20 型大
孔树脂 3 份，每份 10 mL，湿法装柱，水洗平衡。
分别上样 1 BV含总酚为 8.54 mg·mL1的毛连菜提
取液，控制流速为 2 BV·h1，先用水和 10%乙醇
各 4 BV 去杂质，收集 4 BV 的 30%乙醇和 3 BV
的 50%洗脱液，浓缩。结果浸膏中总酚含量分别
为 87.3%，88.7%，88.1%，由此说明该优化工艺
条件稳定可行。
(下转第 664 页)
·664· Chin J Mod Appl Pharm, 2016 May, Vol.33 No.5 中国现代应用药学 2016 年 5 月第 33 卷第 5 期
现或预测医嘱中存在或潜在的药物相互作用而导
致药物不良反应的可能，并提醒临床调整药物治
疗方案，以减少或避免药物不良反应的发生，最
终保障了患者治疗的安全、有效及合理，同时也
使临床药师的自身工作价值得到了体现。
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收稿日期：2015-10-24


(上接第 604 页)
3 讨论
实验中暗处放置时间、光线、瓶中残留物对试
验结果都有一定影响，为避免以上因素产生干扰，
应严格控制反应条件，以确保测试结果真实可靠。
反应时间加长会使测得的吸光度加大，测得结果比
实际高。在浓度本身过高或放置时间过久的情况
下，测试液中络合物不断聚集形成沉淀，还可能造
成测得结果较实际偏小，因此妥善计算好测定的时
间及反应时间，尽可能避免测试时间对药品的影响。
本试验采用三氯化铁-铁氰化钾为显色剂，确
定以二者比例为 2∶1的混合液共 0.6 mL作为显色
剂，显色灵敏。各类试剂与用药现用现配，所加
显色试剂也应准确测量确保用量一致。
大孔吸附树脂作为高吸附性能聚合材料在工
业生产中应用广泛，尤其是对水溶性成分的富集和
纯化效果较好，不但操作简单，而且可以再生使用
以降低成本[8]。本试验显示，HP-20 型大孔吸附树
脂对毛连菜中总酚成分有较好的富集纯化能力，其
所得总酚纯度可达 87%以上，且操作简单，稳定可
行，适合富集毛连菜中总酚成分及工业化生产。
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收稿日期：2015-09-19