全 文 ：Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2012 May，Vol．23 No．3
质干扰，故选定 283 nm为检测波长。
橙皮苷在芸香科植物如柠檬、柑桔的果皮中广
泛存在，文献测定橙皮苷的 HPLC方法也较多，《中国
药典》2010年版中陈皮采用索氏提取法提取，操作繁
琐，耗时长 [4]；亦有文献采用加热回流提取测定 [5]。
本实验比较了回流、超声、静置等提取方法，以超
声提取法较简便快捷，提取效果好，故选用。另文
献 [4-6]大多采用甲醇-醋酸-水三相系统作为流动相，
而本法为不含酸的两相系统，配制简便，能更好地
保护色谱柱。
本实验对广西本地自采和药市购买的药材分别
进行了测定，药材含量差异较大，但尚未发现明显
规律。本测定方法简便、快速、准确、稳定性良好，
可为鹰不泊的质量控制提供依据。
参考文献：
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会. 中华本草（第 4册）[M]. 上
海：上海科学技术出版社，1999：974-975.
[2] 广东省药品监督管理局. 广东省中药材标准（第 1册）[M]. 广东：
广东科技出版社，2004：220.
[3] 唐弟光. 广西特色中草药[M]. 广西：广西科学技术出版社，2009：
264.
[4] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（1部）[M]. 北京：中国医
药科技出版社，2010：176.
[5] 叶鹏. HPLC 法测定健胃消食片中橙皮苷的含量[J]. 当代医学，
2010，16（26）：154.
[6] 汪金玉，陈康，徐小飞，等. 高效液相色谱法测定橘核中橙皮苷
的含量[J]. 广东药学院学报，2010，26（5）：501.
（编辑：宋威）
320.19
212.62
105.05
-2.53
0.00 3.62 7.25 10.07 14.49 10.12 21.74 25.36
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
图 2 不同来源药材 HPLC色谱图
Figure 2 HPLC Chromatograms of the different samples
收稿日期：2012- 01- 04
作者简介：刘英慧，女，硕士研究生，主要从事中药制剂及质量控制的研究。Email：12liuhui@163.com。通讯作者：雷鹏，副教授，研究方向：
中药新药研发及中药质量控制。Email：lp7222003@163.com。
基金项目：湖南省中医药管理局科研计划项目（2010036）。
RP- HPLC法同时测定甘松中绿原酸和蒙花苷的含量
刘英慧 1，2，雷 鹏 1，2，朱 露 1，2，胡随瑜 3，邹 玉 1（1. 中南大学湘雅医院药剂科，长沙 410008；2. 中南大
学药学院，长沙 410013； 3. 中南大学湘雅医院中西医结合研究所，长沙 410008）
摘要：目的 建立同时测定甘松中绿原酸和蒙花苷含量的方法。方法 采用反相高效液相色谱法，以 Promosil
C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）为色谱柱；以乙腈为流动相 A，以水（含 0.1 %磷酸）为流动相 B，梯度洗脱；
流速为 1 mL·min-1；柱温 30 ℃；进样量 20 μL；检测波长为 327 nm。结果 绿原酸和蒙花苷的浓度与峰面积
呈良好的线性关系，其线性范围分别是 0.082 1～1.641 6 μg （r = 0.999 5，n = 6），0.043 1～0.862 4 μg（r =
0.999 8，n=6），平均回收率分别为 100.69 %，100.50 %，RSD分别为 2.56 %，0.94 %。结论 该方法简便、
快速、精密度好，可用于测定甘松中绿原酸和蒙花苷的含量。
关键词：甘松；绿原酸；蒙花苷；反相高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1003- 9783（2012）03-0318-04
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2012.03.021
Determination of Chlorogenic Acid and Linarin in Nardostachys Jatamansi by RP-HPLC
LIU Yinghui1，2，LEI Peng1，2，ZHU Lu1，2，HU Suiyu3，ZOU Yu1（1. Department of Pharmacy，Xiangya Hospital，
318· ·
中药新药与临床药理 2012年 5月第 23卷第 3期
甘松为败酱科（Valerianaceae） 甘松属（Nar－
dostachys DC.）植物甘松（N.Chinesis Batal.）的干燥根
及根茎，为《中国药典》2010年版收载品种[1]。主产于
我国四川，云南等地。其性辛、甘、温，归脾、胃
经，具有理气止痛，开郁醒脾之功效，用于治疗脚
气肿毒、脘腹胀痛、霍乱转筋、牙痛等多种病症。
近年来的研究多集中于其挥发性成分上，侧重其开
郁醒脾功效的研究 [2-4]，而同样具有很强药理活性的
非挥发性成分少见报道。现代临床研究表明甘松可
用于治疗胃溃疡，慢性胃炎，脚气，胆结石等 [5]，而
甘松中绿原酸等有机酸类和蒙花苷等黄酮类具有良
好的解毒作用，是甘松发挥此功效的物质基础[6-8]。鉴
于目前尚缺乏相关成分含量的规定，本文结合前期
对非挥发性成分的研究基础，首次建立了同时测定
绿原酸和蒙花苷含量的方法，旨在为甘松资源的合
理利用与药材的质量控制提供更为科学和全面的参
考依据。
1 仪器和试药
Agilent 1100高效液相色谱仪（配 G1311A四元梯
度泵、G1313A 自动进样器、G1315A 二极管阵列检
测器、Agilent化学工作站，美国安捷伦科技有限公
司）；AG285分析天平（瑞士 Mettler公司）；KS-600D
超声清洗仪（宁波科生仪器厂）；TDZ 4-WS低速台式
离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。绿原酸对
照品（供含量测定用，成都曼斯特生物科技有限公
司，批号：MUST-11042802）；蒙花苷（供含量测定
用，成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-
11082801）；甘松药材（购自药材市场及药房，经中南
大学湘雅医院药剂科刘韶副教授鉴定为败酱科植物
甘松 N.Chinesis Batal.）；乙腈（色谱纯，美国天地有限
公司），水为纯净水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Promosil C18色谱柱（250 mm
× 4.6 mm，5 μm，天津博纳艾杰尔科技有限公司），
流动相：A相为乙腈，B相为 0.1 %磷酸溶液，梯度洗
脱，0 ~ 9 min，A 13 %；9 ~ 15 min，A 13 % ~ 35 %；
15 ~ 22 min，A 35%。柱温：30℃；检测波长：327 nm；
流速：1.0 mL·min-1。理论塔板数按绿原酸峰、蒙花
苷计算均不低于 5000，且二者分离度大于 1.5。对照
品及样品色谱图见图 1。
1.绿原酸；2.蒙花苷
图 1 对照品和供试品 HPLC图
Figure 1 HPLC chromatogram of reference substance and sample
Central South University，Changsha 410008，China；2. College of Pharmacy，Central South University，Changsha
410013，China；3. Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Xiangya Hospital，Central
South University，ChangSha 410008，China）
Abstract：Objective To establish a RP-HPLC method for the simultaneous determination of chlorogenic acid and
linarin in Nardostachys jatamansi DC.. Methods Samples were analyzed by a Promosil C18 column（250 mm×4.6 mm，
5 μm） with acetonitrile-water（0.1 % phosphonic acid）as mobile phase in gradient elution at 30 ℃. The volume of
sample injection was 20 μL，and the detection wavelength was 327 nm. Results Chlorogenic acid and linarin showed
good linearity in the range of 0.082 1～1.641 6 μg（r=0.999 5，n=6），0.043 1～0.862 4 μg（r=0.999 8，n=6），re－
spectively. The average recovery of chlorogenic acid and linarin was 100.69 %（RSD=2.56 %），100.50 %（RSD=0.94
%）respectively. Conclusion The method is simple，accurate and reproducible，which is suitable for the determina－
tion of chlorogenic acid and linarin in Nardostachys jatamansi DC..
Keywords：Nardostachys jatamansi DC.；Chlorogenic acid；linarin；RP-HPLC
B. 供试品
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 min
mAU
80
60
40
20
0
-20
1
2
mAU
80
60
40
20
0
-20
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 min
A. 对照品
2
1
319· ·
Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2012 May，Vol．23 No．3
2.2 对照品溶液的制备 精密称取真空干燥至恒重的
绿原酸对照品 10.26 mg，蒙花苷对照品 5.39 mg，分
别配制成浓度为 410.4 μg·mL-1和 107.8 μg·mL-1的对
照品甲醇储备液。分别精密移取绿原酸对照品储备
液 5 mL，蒙花苷对照品储备液 10 mL置于 25 mL容
量瓶内，加甲醇稀释至刻度，配制成浓度分别为
82.08 μg·mL-1和 43.12 μg·mL-1的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取甘松药材粉末（过 3号筛）
约 0.2 g，精密称定，置于 10 mL玻璃离心管内。精
密加入甲醇 10 mL，超声提取 1 h，取出后置于离心
机内离心 3 min（3000 r/min），移出上清液后，精密
加入 70 %甲醇 10 mL，摇匀后超声提取 30 min，合
并两次提取液后定容至 25 mL容量瓶内，过滤，取
续滤液，即得供试品溶液。
2.4 线性范围考察 分别精密移取混合对照品溶液
1，4，8，12，16，20 μL，注入高效液相色谱仪，
按 2.1 项下色谱条件测定，记录色谱图。以峰面积
（Y）为纵坐标，进样体积（X）为横坐标，进行线性回
归，得到回归方程。绿原酸：Y = 175.1X+218.16，r =
0.999 5（n = 6）；蒙花苷：Y = 28.121X-1.9278，r =
0.999 8（n = 6）；结果表明绿原酸进样量在 0.082 1～
1.641 6 μg，蒙花苷进样量在 0.043 1～0.862 4 μg 之
间具有良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 10 μL，
按 2.1项下色谱条件连续进样 6次，测定峰面积值，
计算仪器精密度的 RSD 值。绿原酸平均峰面积为
1972.61，RSD 为 0.14 %。蒙花苷的平均峰面积
278.98，RSD为 1.08 %。结果表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，于室温
下放置，分别于 0，2，4，6，8，10，12，18，24 h
进样，记录绿原酸和蒙花苷的峰面积，结果绿原酸
的平均峰面积 570.80，RSD为 1.74 %，蒙花苷的平
均峰面积 106.78，RSD为 2.32 %，表明供试品溶液
在 24 h内稳定。
2.7 重复性试验 精密称取同一样品 6份，按 2.3项
下方法平行制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，
依 2.1项下色谱条件进行含量测定。结果绿原酸、蒙
花苷平均含量分别为 0.256 %和 0.155 %，RSD分别
为 1.48 %和 1.04 %，结果表明本方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验 称取已知含量的同一批甘松样
品 6份，每份约 0.1 g，精密称定，分别精密加入混
合对照品溶液（3.4 mL），按照 2.3项下方法制备供试
品溶液，按 2.1项下色谱条件测定，计算回收率。结
果见表1。
表 1 加样回收率试验结果（n=6）
Table 1 Recovery of chlorogenic acid and acaciin
2.9 样品含量测定 分别取不同批次的甘松药材，按
2.3项下平行制备 3份供试品溶液，按 2.1项下色谱
条件进样，以外标法计算各批的含量，结果见表 2
表 2 不同来源药材中绿原酸和蒙花苷的含量测定（n=3）
Table 2 Content determination of chlorogenic acid and acaciin
3 讨论
本实验采用了提取完全且耗时短的超声提取法，
考察了提取溶剂体积分数分别为 60 %，85 %和
100 %的甲醇及乙醇对 2种成分提取效率的影响，结
果表明以 100 %的甲醇为提取溶剂时对蒙花苷的提取
效率最高，而 60 %的甲醇对绿原酸的提取效率最高。
在此基础上进行了两次组合提取考察，最终确定了
本实验的供试品制备方法。结果表明此法提取效率
高且操作相对简便，重现性好。
采用 DAD检测器在 200 ~ 400 nm 比较各波长下
两组分吸收光谱的差异，经过紫外吸收光谱图显示：
成 分
绿原酸
蒙花苷
序号
1
2
3
4
5
6
1
2
3
4
5
6
样品含量 /μg
260.61
260.35
258.82
259.33
258.30
259.07
157.79
157.64
156.71
157.02
156.40
156.86
加入量 /μg
279.07
279.07
279.07
279.07
279.07
279.07
146.61
146.61
146.61
146.61
146.61
146.61
测得量 /μg
537.91
555.36
537.76
538.40
539.33
533.68
304.55
306.15
302.96
303.28
305.99
303.60
回收率 /%
99.36
105.71
99.95
100.00
100.70
98.40
100.10
101.30
99.75
99.76
102.03
100.09
平均回收率 /%
100.69
100.50
RSD /%
2.56
0.94
批号
110526
110811
20110517
110302
201005087
110816
20110427
201108487
产地
四川
四川
四川
安徽
四川
四川
四川
四川
部位
根及根茎，
混有地上部分
全草
根及根茎，
混有地上部分
全草
根及根茎，
混有地上部分
根及根茎
根及根茎
根及根茎
绿原酸 / %
0.199
0.559
0.276
0.378
0.232
0.071
0.256
0.283
RSD /%
1.56
0.24
1.29
0.62
0.25
0.61
1.48
1.04
蒙花苷 / %
0.127
0.146
0.147
0.253
0.202
0.103
0.155
0.119
RSD /%
2.14
2.51
1.45
0.56
1.05
2.24
1.04
1.22
320· ·
中药新药与临床药理 2012年 5月第 23卷第 3期
蒙花苷在 327 nm 处有最大吸收，绿原酸在 320 nm
处有最大吸收，因此，本实验选定 327 nm为检测波
长。
考察流动相时，以甲醇-水为流动相，峰形宽，
且存在拖尾。因此，加入磷酸以改善拖尾现象。在
此基础上对甲醇-0.1 %磷酸溶液、乙腈-0.1 %磷酸溶
液进行考察，结果表明采用乙腈-0.1 %磷酸流动相系
统所得色谱峰峰形尖锐，主成分色谱分离度好，见
图 1。因此，确定含量测定的流动相为：A相为乙腈，
B相为 0.1 %磷酸溶液，梯度洗脱，0 ~ 9 min，A 13
%；9 ~ 15 min，A 13 % ~ 35 %；15 ~ 22 min，A 35
%。
《中国药典》规定甘松的入药部位为根及根茎，
但目前市面上流通的药材入药部位较为混乱，少见
净制过的根及根茎，多混有地上部分，甚至为全草。
本实验药材购自不同的药房及药材市场，表 2的结
果显示不同批号、不同部位的绿原酸和蒙花苷含量
差异较大，可能是由生态环境、采收时间以及不同
部位导致了这种差异。但结果并未显示出根部和全
草二者含量孰高孰低，但这仍不能完全说明全草可
以代替根部入药，仍需要更多的化学、药理研究来
提供理论支持。本实验旨在通过建立同时测定两成
分的方法，为进一步评价甘松药材质量及制剂研究
提供新的参考依据。
参考文献：
[1] 国家药典委员会. 中华人面共和国药典（1部）[M]. 北京：化学工
业出版社，2010：80.
[2] Wang JH，Zhao JL，Liu H，et al. Chemical Analysis and Biological
Activity of the Essential Oils of Two Valerianaceous Species from
China: Nardostachys chinensis and Valeriana officinalis [J]. Molecules，
2010，15：6411-6422.
[3] Tanaka K，Komatsu K. Comparative study on volatile components of
Nardostachys Rhizome[J]. J Nat Med，2008，62：112-116.
[4] Takemoto H，Ito M，Shiraki T，et al. Sedative effects of vapor in－
halation of agarwood oil and spikenard extract and identification of
their active components[J]. J Nat Med，2008，62：41-46.
[5] 黄伯舜. 甘松的临床应用心得[J]. 中国中药杂志，2004，29（4）：
377-383.
[6] 万新，石晋丽，刘勇，等. 甘松属植物化学成分与药理作用[J]. 国
外医药·植物药分册，2007，22（1）：1-6.
[7] Shang XF，Pan H，Li MX，et al. Lonicera japonica Thunb: Ethnophar－
macology， phytochemistry and pharmacology of an important tradi－
tional Chinese medicine [J]. Journal of Ethnopharmacology， 2011，
138：1-21.
[8] 殷忠东，陈慕媛，魏刚. HPLC法测定双柏散中蒙花苷的含量[J].
中药新药与临床药理，2010，21（3）：291-293.
（编辑：宋威）
收稿日期：2011- 12- 28
作者简介：严小红，女，副主任药师，研究方向：药物分析。Email：yanxh73@hotmail.com。
基金项目：国家科技支撑计划药品安全关键技术研究（2006BAI14B00）资助课题-常见与重要药品安全标准研究（2006BAI14B01）；广州市食品药品
监督管理局科技计划项目生狼毒特征图谱和岩大戟内酯 B的药代动力学研究（2010GZFDA015）。
狼毒质量标准改进研究
严小红，王灿坚，毕福钧，顾利红，江英桥（广州市药品检验所，广州 510160）
摘要：目的 研究和完善狼毒药材的质量标准。方法 采用薄层色谱法对狼毒药材中的 24-次甲基环木菠萝烷
醇和岩大戟内酯 B进行了鉴别；采用高效液相色谱（HPLC） 法对狼毒乙素和岩大戟内酯 B进行了含量测定。
结果 狼毒薄层鉴别专属性强，方法可行；狼毒乙素线性范围为 0.013～0.863 μg（r=0.9999），平均回收率为
96.4 %（RSD=1.4 %，n=6）；岩大戟内酯 B 线性范围为 0.007～0.496 μg（r=0.9999），平均回收率为 96.0 %
（RSD=2.1 %，n=6）。结论 此方法准确、可靠，为狼毒药材的质量评价提供了依据。
关键词：狼毒；质量标准；狼毒乙素；岩大戟内酯 B
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2012）03-0321-04
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2012.03.022
Improvement of Quality Standard of Radix Euphorbiae Fischerianae
YAN Xiaohong，WANG Canjian，BI Fujun，GU Lihong，JIANG Yingqiao（Guangzhou Institute for Drug Control，
321· ·