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香果健消片质控方法研究Ⅰ:蜘蛛香主要成分的鉴别和含量测定



全 文 :〔11〕徐立,杨永寿,赵媛,等.葛根不同部位中葛根素含量研
究〔J〕.大理学院学报,2009,8(10):3-6.
[基金项目]大理学院大学生科研基金资助项目
(2009DXSKY26)
[收稿日期]2010-06-12
[作者简介]雷爱梅,主要从事临床药学研究.
(责任编辑 蒋 康)
香果健消片是由蜘蛛香、木香、草果等药材经
提取制成的中药制剂,具有健胃消食之功效,用于
消化不良、气胀饱闷、食积腹痛、胸满腹胀。现行质
量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂〔1〕,
该质量标准中,只用香草醛进行显色鉴别,无专属
性较强的薄层色谱鉴别和含量测定方法。为了保证
本品的用药安全,更好地控制药品质量,本实验对
方中主药蜘蛛香进行薄层色谱法(TLC)鉴别,并采
用高效液相色谱法(HPLC)测定其主要化学成分橙
皮苷的含量〔2〕。
1 仪器与材料
1.1 仪器 Agilent1200高效液相色谱仪(包括
G1311A四元泵、G1314B可变波长、G1316A柱温箱、
G1329A自动控温进样器、G1322A真空脱气机);Ag-
ilentXBP-C18(4.6×250mm,5μm)分析柱;电子分析天
平(瑞士梅特勒AL204-IC);薄层色谱成像仪(武汉
药科新技术开发有限公司YOKO-ZS);超纯水机(台
湾艾柯纯水设备厂KL-UP-UV-20);超声波清洗器
香果健消片质控方法研究I:蜘蛛香主要成分的
鉴别和含量测定
肖雨婷,赵明芬,彭 芳,肖培云*
(大理学院药学院,云南大理 671000)
[摘要]目的:建立香果健消片中橙皮苷的鉴别和含量测定方法。方法:采用薄层色谱法对橙皮苷进行鉴别;采用高效液相色谱
法(HPLC)测定橙皮苷的含量,以Agilent XBP-C18(4.6mm×250mm,5μm)为分析柱,流动相为甲醇-5%冰醋酸(35∶65),检测波长
283nm。结果:薄层鉴别结果显示,橙皮苷在相应的色谱条件下分离效果良好;HPLC结果显示,橙皮苷在0.202~4.040μg之间线性
关系良好(r=0.999 9),平均回收率为100.3%(n=6),RSD为1.28%。结论:此方法简便、稳定,重现性好,可用于本品中橙皮苷的鉴
别和含量测定。
[关键词]香果健消片;蜘蛛香;橙皮苷
[中图分类号]R975+.1 [文献标志码]A [文章编号]1672-2345(2010)08-0009-03
Research of the Quality Control Method of the Xiangguojianxiao Tablets Ⅰ:
Indentification and Determination of the Major Components of Valeriana Jatamansi Jones
XIAO Yuting, ZHAO Mingfen, PENG Fang, XIAO Peiyun*
(College of Pharmacy, Dali University,Dali,Yunnan 671000,China)
〔Abstract〕Objective: To establish a method for the identification and determination of hesperidin in Xiangguojianxiao tablets.
Methods: Hesperidin in Xiangguojianxiao tablets was identified by TLC , and the contents was determined by HPLC. Agilent XBP-
C18(4.6mm×250mm, 5μm)was used as analytical column. The ana-lytical mobile phase was composed of methanol -5% and glacial
acetic acid(35:65 V/V). The determination wave-length was 283 nm. Results: Hesperidin in Xiangguojianxiao tablets was separated
very well under the corresponding chromatographic condition. The calibration curve of hesperidin was linear in the range of 0.202~
4.040μg(r=0.999 9);recovery rate was 100.3% (n=6), and RSD was 1.28% . Conclusion:This method is simple, stable and
reproducible, and can be used for identification and determination of hesperidin in Xiangguojianxiao tablets.
〔Key words〕Xiangguojianxiao tablets; valeriana jatamansi jones; hesperidin
大理学院学报
JOURNALOF DALI UNIVERSITY
第9卷 第8期 2010年8月
Vol.9 No.8 Aug. 2010
9
(宁波新芝生物科技股份有限公司SB5200DT)。
1.2 材料 香果健消片(云南云河药业有限公司生
产,批号:090603,090706,090802,081201);橙皮苷
对照品(批号:110721-200613,中国药品生物制品
鉴定所提供);硅胶G(青岛海洋化工有限公司生
产);甲醇为色谱纯(美国Fisher公司);水为超纯水;
其它试剂均为分析纯。
2 鉴别
2.1 橙皮苷对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷
对照品5.050mg,置10mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至
刻度,摇匀,制成0.505mg/mL的对照品贮备液〔3〕。精
密移出上述溶液400μL,用甲醇稀释至1.0mL,即得
对照品溶液(含橙皮苷0.202mg/mL)。
2.2 供试品溶液的制备 称取不同批号(090603、
090706、081201)各10片,去糖衣,精密称定,研细,
各取约1.0g,精密称定,加入20mL甲醇,称定重量,
25℃超声提取30min,放冷,滤过,滤液置水浴上挥
干,残渣各加入2.0mL甲醇,溶解,即得供试品溶液〔3〕
1,2,3(批号分别为090603、090706、081201)。
2.3 蜘蛛香对照药材溶液的制备 按处方制备蜘
蛛香对照药材,再按“2.2”项制备,即得蜘蛛香对照
药材溶液。
2.4 阴性对照品溶液的制备 按处方制备缺蜘蛛
香的阴性对照品,再按“2.2”项制备,即得阴性对照
品溶液。
2.5 薄层色谱条件及结果 参照TLC试验〔4〕,用毛
细吸管吸取上述供试品、对照品、对照药材、阴性对
照溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙
酯-甲醇-水(100∶17∶15)的上层溶液为展开剂,进行
一次展开,展至约6cm,取出,晾干。再以甲苯-乙酸
乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶3)为展开剂,进行二次展开,
展开至16cm,取出,晾干,喷以3%AlCl3溶液,在
110℃下加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(365nm)
下检视〔5〕。供试品色谱中,在与对照品、对照药材色
谱相应的位置上,分别显相同颜色的荧光斑点,阴
性对照无相应的荧光斑点。见图1。
3 含量测定
3.1 系统适用性试验 色谱柱:Agilent XBP-C18分
析柱(4.6×250mm,5μm);流动相:甲醇-5%冰醋酸
溶液(35 ∶65);检测波长 283nm;柱温 35℃;流速
1.0mL/min。理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于
2 500〔5〕。
3.2 供试品溶液的制备 取本品20片,去糖衣,精
密称定,研细,取约0.5g粉末,精密称定,加入20mL
甲醇,称定重量,25℃下超声提取30min,放冷后,补
重,摇匀,用微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
3.3 阴性对照品溶液的制备 取缺蜘蛛香的阴性
对照样品0.5g,按“3.2”项供试品溶液的制备方法制
备,即得。
3.4 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶
液和阴性对照溶液各5μL,分别注入液相色谱仪,结
果供试品色谱中呈现与对照品保留时间相同的色
谱峰,阴性对照品在橙皮苷对照品相同保留时间处
未显色谱峰,故认为无干扰。见图2。
注:A.对照品(1橙皮苷);B.供试品;C.阴性对照。
图2 HPLC色谱图
3.5 标准曲线的制作 按“3.1”项色谱条件,取
0.202mg/mL的对照品溶液,分别以1,2,5,8,15,20μL
进样测定,以橙皮苷的峰面积峰值为纵坐标,进样
量为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程为:y=
2 036.6X+10.554(r=0.999 9)。结果表明,橙皮苷在
0.202~4.040μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
3.6 精密度试验 按“3.1”项色谱条件,取0.202mg/
mL的对照品溶液连续6次进样,峰面积的RSD为
0.83%。结果表明,仪器精密度良好。
注:1~3.不同批号的供试品;4.橙皮苷对照品;5.蜘蛛香对照
药材;6.阴性对照。
图1 蜘蛛香的TLC图谱
大理学院学报总第 80期 医 学
10
3.7 稳定性试验 按“3.1”项色谱条件,按“3.2”项
制备供试品溶液,在0,2,4,6,8,10,12h各进样1次,
测定供试品溶液中橙皮苷峰面积值,所得橙皮苷的
峰面积RSD为2.75%。结果表明:供试品溶液中橙皮
苷12h内稳定。
3.8 重现性试验 取同一批号(090603)样品6份,
按“3.2”项制备各供试品溶液,并按“3.1”项色谱条
件进行测定,橙皮苷的含量为0.85mg/片,RSD为
2.43%。
3.9 加样回收率试验 取已知含量的同一批号
(090603)样品6份,每份约0.45g,精密称定,各加入
橙皮苷贮备溶液(0.505mg/mL)1mL,按“3.2”项供试
品溶液制备方法制备,按“3.1”项色谱条件测定,计
算回收率。见表1。
表1 回收率测定结果
3.10 样品含量测定 取4个不同批号的药品,按
“3.2”项供试品溶液制备方法制备,按“3.1”项色谱
条件测定,计算。结果见表2。
表2 含量测定结果
4 讨论
橙皮苷在甲醇中易溶解,故在薄层色谱鉴别、
HPLC测定橙皮苷时选用甲醇作溶剂〔6〕。
原质量标准中“鉴别”属化学鉴别,由于其专属
性不强,故本实验采用TLC对香果健消片中蜘蛛香
主要化学成分橙皮苷进行了薄层鉴别。对薄层条件
进行优化:考察了不同比例的展开剂(乙酸乙酯-甲
醇-水、甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水)系统,结果采用乙
酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶15)、甲苯-乙酸乙酯-甲
酸-水(20∶10∶1∶3)为展开剂。供试品色谱中,在与对
照品相应的位置上显相同颜色的荧光斑点,有5个
斑点与对照药材相对应,阴性对照无相应的荧光斑
点。试验结果表明阴性对照溶液对供试品均无干
扰,专属性强、斑点清晰,特征斑点分离效果良好,
斑点无拖尾现象,故此方法可用作香果健消片中橙
皮苷的鉴别。
对制剂中橙皮苷进行含量测定研究,为了在短
时间内获得好的分离效果,对色谱条件进行了优
化:首先,考察了不同组成和比例的流动相〔5,7-8〕(乙
腈-水、甲醇-水)系统,酸主要比较了冰醋酸和磷
酸。结果乙腈-水系统分离效果不如甲醇-水系统,
且在甲醇-水系统中加入5%的冰醋酸可提高分离效
果。综合考虑各因素后确定采用甲醇-5%冰醋酸溶
液(35∶65)为流动相进行洗脱。其次,考察了不同的
波长〔5,9〕(280、283nm)、不同的柱温(25、30、35℃),
最后确定波长为283nm、柱温为35℃。在上述条件
下,能够在15min之内测定橙皮苷峰,且橙皮苷峰达
到基线分离。此方法简便、快速、可靠,适用于香果
健消片中橙皮苷的含量测定。
[参考文献]
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北京:人民卫生出版社,1990:120.
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[基金项目]大理学院大学生科研基金资助项目(2009DXSY01)
[收稿日期]2010-06-12
[作者简介]肖雨婷,主要从事药学研究.
*通信作者:肖培云,副教授,电话:15808729786
(责任编辑 蒋 康)
RSD/%
1.28
样号
1
2
3
4
5
6
样品中橙
皮苷含量/mg
2.16
2.16
2.15
2.16
2.16
2.16
加入橙皮
苷量/mg
0.505 0
0.505 0
0.505 0
0.505 0
0.505 0
0.505 0
测得橙皮
苷量/mg
2.677
2.655
2.656
2.662
2.672
2.675
回收率/%
101.8
98.8
99.3
99.7
100.8
101.7
平均回收
率/%
100.3
RSD/%
0.85
1.33
1.07
1.10
批号
090603
090706
090802
081201
含量(mg/片)
0.87
0.61
0.76
0.16
肖雨婷,赵明芬,彭 芳,等 香果健消片质控方法研究I:蜘蛛香主要成分的鉴别和含量测定 第 9卷总第 80期
11