全 文 ：［7］ 刘树民，卢芳，董培良，等．基于代谢组学整体表征中药药性
及性效关系［J］．云南中医学院学报，2009(1) :1 － 5．
［8］ 王振国，王鹏，欧阳兵．关于中药四性物质基础研究技术路线
的讨论［J］．浙江中医药大学学报，2006，30(2) :143 － 146．
［9］ 李石生，谭宁华．中药现代化研究的关键在于建立科学的现
代中药理论体系—分子药性假说的提出［J］．中国中西医结
合杂志，2000，20(2) :83 － 84．
［10］ 张冰，林志健，翟华强，等．基于“三要素”假说研究中药药性
的设想［J］．中国中药杂志，2008，33(2) :221 － 223．
［11］ 金锐，张冰，刘小青，等．基于药性构成“三要素”数理分析模
式的中药寒热药性生物学表征差异研究［J］．中西医结合学
报，2011，9(7) :715 － 724．
［12］ 王普霞，周春祥．基于“证 －药效 －药性”观念及“药性本质
多元”假说探讨中药药性本质［J］． 辽宁中医杂志，2006
(2) :217 － 218．
［13］ 欧阳兵，王振国，王鹏，等．“组群中药四性组合性效谱”假说
及其论证［J］．山东中医杂志，2006，25(3) :154 － 156．
［14］ 李爱秀． 中药“药效团药性假说”的提出［J］． 天津药学，
2007，19(2) :41 － 44．
［15］ 盛良． 论中药四气五味与电子得失吸推偏移能级升降说
［J］．上海中医药杂志，2008，42(2) :4 － 8．
［16］ 杨宏博，赵艳玲，李宝才．基于冷热板示差法的小鼠胃寒 /胃
热证病理模型寒热属性研究［J］．辽宁中医杂志，2010:241．
［17］ 刘毅，王允，唐坤．中药四气理论的特性研究［J］． 现代医药
卫生，2006，22(15) :2362 － 2363．
［18］ 周祯祥． 中药五味实质探讨［J］． 湖北中医杂志，1999，21
(5) :232 － 234．
［19］ 黄璐明，唐仕欢．中药归经理论的概念渊源和内涵分析［J］．
辽宁中医杂志，2009(5) :680 － 682．
［20］ 韩金祥．中药药性的科学内涵［J］．中华中医药学刊，2011，
29(9) :1937 － 1939．
［21］ 韩金祥，韩奕．论中医气的物质基础是机体辐射电磁(量子)
场［J］．山东中医药大学学报，2010(4) :474 － 476．
第 33 卷 第 2 期
2 0 1 5 年 2 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 33 No． 2
Feb． 2 0 1 5
中
华
中
医
药
293
学
刊
DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2015． 02． 011
蜘蛛香提取物对人结肠癌 SW480细胞增殖抑制及抗转移作用
兰明，张占平，林玉，张瑞桐，许科科，闫智勇
(西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031)
摘 要:目的:观察蜘蛛香提取物对体外培养人结肠癌 SW480 细胞增殖抑制及抗转移作用。方法:观察蜘蛛
香提取物(400 μg /mL)及 80 μg /mL的 5 － FU(阳性对照组)对 SW480 细胞的影响;通过 MTT法、细胞脱落实验、
病理观察、流式细胞仪检测观察蜘蛛香提取物对结肠癌 SW480 细胞的增殖抑制、促进凋亡等作用;通过划痕和同
质性黏附实验观察其抗结肠癌 SW480 细胞转移作用。结果:MTT 法检测显示蜘蛛香提取物及 5 － FU 均能对
SW480 细胞产生明显的抑制作用;病理观察发现，经蜘蛛香提取物及 5 － FU作用后的 SW480 细胞，呈明显的凋亡
状态;流式细胞仪检测发现，蜘蛛香提取物能使 S期和 G2 /M期细胞百分比增加;细胞脱落实验进一步表明，与空
白对照组相比，各药物组均能增强细胞的脱落率，抑制细胞的增殖，具有极显著性差异(P ＜ 0． 01) ;划痕和同质
性黏附实验表明，蜘蛛香提取物能显著降低结肠癌 SW480 细胞的移动能力(P ＜ 0． 05)。结论:蜘蛛香提取物对
人结肠癌 SW480 细胞有明显的增殖抑制和抗转移作用。
关键词:蜘蛛香;人结肠癌 SW480 细胞;抑制增殖;抗转移
中图分类号:Ｒ735． 35 文献标志码:A 文献标志码 1673-7717(2015)02-0293-03
Study of Extract of Valeriana Jatamansi Jones Inhibiting Human Colon
Cancer SW480 Cells Proliferation and Metastasis
LAN Ming，ZHANG Zhanping，LIN Yu，ZHANG Ｒuitong，XU Keke，YAN Zhiyong
(Life Science and Engineering School，Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，Sichuan，China)
Abstract:Objective:To investigate the effect of the extract of Valeriana jatamansi Jones inhibiting human colon
cancer SW480 cells proliferation and metastasis． Methods:To observe apoptosis induction and proliferation inhibition
effects of the extract (400 μg /mL)and 5 － FU (80 μg /mL)on human colon cancer cells SW480 by MTT assay，cell
收稿日期:2014 － 10 － 20
基金项目:国家“十一五”科技重大专项项目(2009ZX09103 － 370) ;四川省科学技术厅公益项目(2007SGY002)
作者简介:兰明(1980 －) ，男，四川德阳人，硕士研究生，研究方向:中药药理。
通讯作者:闫智勇(1971 －) ，男，河北人，教授，博士，研究方向:神经及肿瘤药理。
第 33 卷 第 2 期
2 0 1 5 年 2 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 33 No． 2
Feb． 2 0 1 5
中
华
中
医
药
294
学
刊
detachment test，light microscope and flow cytometry test． To observe anti － metastasis effect on colon cancer cells
SW480 by scratch test． Ｒesults:MTT and cell detachment experiments showed that the extract of Valeriana jatamansi
Jones and 5 － FU can effectively inhibit the proliferation of SW480． With the light microscope and flow cytometry test ，we
detected the extract of Valeriana jatamansi Jones can induce the cell apoptosis of SW480 and increase in S phase and G2 /
M phase cells percentage，at the same time the extract of Valeriana jatamansi Jones could significantly reduce the mobility
of SW480 colon cancer cells in the scratch test． Conclusion:The extract of Valeriana jatamansi Jones has obvious effect of
proliferation inhibition and anti － metastasis on human SW480 colon cancer cells．
Key words:Valeriana jatamansi Jones;human SW480 colon cancer cells;proliferation inhibition;anti － metastasis
蜘蛛香为败酱科(Valerianaceae)缬草属(Valeriana
Linn)植物蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones) ，其主要化学
成分有挥发油、环烯醚萜类和黄酮类等［1 － 5］。研究证
明［6 － 7］，蜘蛛香提取物对多种肿瘤细胞有抑制作用。本研
究首次探讨了蜘蛛香提取物对人结肠癌细胞 SW480 的抑
制作用及其机制，为蜘蛛香防治结肠癌提供依据。
1 材料和方法
1． 1 材料
人结肠癌细胞株 SW480 由成都中医药大学基础医学
院赠送;5 －氟尿嘧啶(5 － FU)购自天津金耀氨基酸有限公
司;ＲPMI1640 培养基购自赛默飞世尔生物化学制品有限公
司;小牛血清购自中美合资兰州民海生物工程有限公司;胰
酶购自成都溶海(GIBCO分装) ;二甲亚砜购自广东光华化
学厂有限公司。
1． 2 蜘蛛香提取物准备
蜘蛛香提取物采用 65% 乙醇、20 倍量超声提取 20
min、提取 3 次。经大孔吸附树脂处理后得试验用浸膏。
1． 3 方法
1． 3． 1 MTT检测细胞增殖 实验分为蜘蛛香提取物(400
μg /mL)组、空白对照组(小于 1% DMSO 培养基)、阳性对
照组(80 μg /mL5 － FU) ，用MTT发检测各组作用 48 h后的
细胞增殖抑制率。细胞增殖抑制率(%)=(对照组 OD 值
－实验组 OD均值 /对照组 OD均值)× 100%。
1． 3． 2 细胞脱落实验 将细胞以 1 × 105个 /mL 分别接种
于 96 孔板中，每孔 100 μL，细胞贴壁后(约 4 h 后)加入各
组药物:蜘蛛香提取物(400 μg /mL)、空白对照组(小于
1%DMSO培养基)、阳性对照组(80 μg /mL5 － FU)。24 h
后室温水平摇床 40 r /min，摇动 30 min，收集脱落细胞计
数。未脱落细胞用 0． 25%胰酶和 0． 02% EDTA 消化计数。
细胞脱落率公式为:细胞脱落率 =脱落细胞数 /细胞总数 ×
100%。
1． 3． 3 病理学观察 取对数生长期细胞接种于内置盖玻
片的 6 孔板中培养。贴壁后加入各组药物:蜘蛛香提取物
(400μg /mL)、空白对照组(小于 1% DMSO 培养基)、阳性
对照组(80 μg /mL5 － FU)。24 h 后，取出盖玻片。75%酒
精固定，Giemsa染液染色 10 min，光镜下观察细胞凋亡情
况。
1． 3． 4 流式细胞仪检测细胞周期 蜘蛛香提取物(400
μg /mL)、空白对照组(小于 1% DMSO 培养基)、阳性对照
组(80 μg /mL5 － FU)作用 24 h后离心收集细胞，用 PBS洗
1 次后，75%乙醇固定并制成单细胞悬液，固定好的细胞用
Ｒnase酶消化，碘化丙啶(PI)单染，制成严格的单细胞悬液
上流式细胞仪对细胞进行 DNA含量测定和细胞周期分析。
1． 3． 5 划痕实验 取对数生长期的 SW480 细胞悬液加入
6 孔培养板，待细胞生长贴壁、完全融合后，吸弃原培养基，
用 10 μL枪头在培养孔中垂直划出一条无细胞细痕，用
PBS轻洗细胞 3 次，去除划下的细胞，而后分别加入各组药
物:蜘蛛香提取物(400 μg /mL)、空白对照组(小于 1% DM-
SO培养基)、阳性对照组(80 μg /mL5 － FU) ，测量 0 和 24 h
两个时间点的划痕两侧细胞间的距离。
1． 3． 6 同质性黏附实验 将细胞消化为单个细胞接种
于 96 孔板中，使其长满单层，不留空隙，以 1 × 105个 /孔
再次接种同种细胞，加入各组药物: :蜘蛛香提取物
(400μg /mL)、空白对照组(小于 1% DMSO 培养基)、阳
性对照组(80 μg /mL5 － FU) ，置 37℃、5% CO2孵箱中培
养，每组做 6 个复孔的平行对照。24 h 后吸出含有未黏
附细胞的培养液，加入 5 mg /mL 的 MTT10ul /孔，继续培
养 4 h，吸出 MTT，加入二甲基亚砜 100 μL /孔，室温振
荡，孵育 10 min，用酶联免疫检测仪在 490 nm 测光密度
值，得出细胞黏附率。黏附率 = 黏附细胞 A(OD)/空白
A(OD)× 100%。
1． 4 统计学处理
用 SPSS 13． 0 统计软件进行数据处理，两组间均数比
较用 t检验，多组间均数比较用单因素方差分析，P ＜ 0． 05
为有显著性差异，P ＜ 0． 01 为有极显著性差异。
2 结果
2． 1 蜘蛛香提取物对 SW480 细胞的增殖的影响
蜘蛛香提取物与 5 － FU 均能对 SW480 细胞产生明显
的抑制作用。抑制率分别为 46． 00%、47． 34%，见表 1。
表 1 各组药物处理 SW480 细胞的抑制率(珋x ± s)
药物组 抑制率(%)
阳性组(5 － FU) 47． 34 ± 8． 57
蜘蛛香提取物 46． 00 ± 9． 49
2． 2 蜘蛛香提取物对 SW480 细胞的脱落的影响
结果表明:与空白对照组相比，各组均能增强细胞的脱
落能力，并且具有极显著性差异(P ＜ 0． 01) ，见表 2。
表 2 细胞脱落率
药物
脱落细胞数
(个 /mL)
未脱落细胞数
(个 /mL)
脱落率(%)
空白 0． 11 × 105 3． 50 × 105 3
阳性组(5 － FU) 1． 75 × 105 1． 40 × 105 56＊＊
蜘蛛香提取物 1． 13 × 105 2． 90 × 105 28＊＊
注:与空白对照组比较，＊＊ P ＜ 0． 01。
第 33 卷 第 2 期
2 0 1 5 年 2 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 33 No． 2
Feb． 2 0 1 5
中
华
中
医
药
295
学
刊
2． 3 蜘蛛香提取物对 SW480 细胞形态的影响
病理观察显示，光镜下各组细胞均表现出肿瘤细胞的
特征，如细胞形状不规则、核大、核浆比例大、多核仁等。其
中空白对照组少见有凋亡形态的细胞出现，见插页Ⅲ图 1;
而各用药组均可见有细胞凋亡的典型形态学变化出现，如
细胞体积缩小、变圆，细胞膜完整，细胞核固缩、染色质凝聚
深染，见插页Ⅲ图 2 ～图 3。
2． 4 蜘蛛香提取物对 SW480 细胞细胞凋亡和周期的作用
流式细胞仪检测结果显示，空白对照组肿瘤细胞凋亡
率为 0． 85%，见插页Ⅱ图 4;给药 24 h 后，5 － FU 与蜘蛛香
提取物组的凋亡率分别为 5． 56%、1． 96%，见插页Ⅲ图 5 ～
图 6，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P ＜ 0． 01) ;
蜘蛛香提取物组 G0 /G1期细胞数明显降低，而 S期和 G2 /M
期细胞百分比与空白对照组相比均有明显增加，见表 3。
表 3 蜘蛛香提取物对 SW480 细胞凋亡率
与周期的影响(%)
组 别 凋亡率
各期细胞
G0 /G1 S G2 /M
空白对照组 0． 85 55． 42 16． 26 19． 45
5 － FU组 5． 56＊＊ 52． 12 19． 67 9． 24
蜘蛛香提取物组 1． 96＊＊ 48． 13 19． 54 24． 29
2． 5 划痕实验结果
结果表明:与空白对照组相比，蜘蛛香提取物、5 － FU
均能显著降低结肠癌 SW480 细胞的移动能力(P ＜ 0． 05) ，
见表 4。
表 4 划痕实验数据(珋x ± s)
药物组 相对移动距离
空白 1816． 667 ± 132． 2876
阳性组(5 － FU) 1036． 667 ± 149． 7776*
蜘蛛香提取物 1166． 667 ± 175． 5942*
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05。
2． 6 同质性黏附实验结果
通过细胞同质性黏附实验来观察各药物组对同质黏附
性的影响，结果表明:蜘蛛香提取物、5 － FU 对细胞同质黏
附性的影响没有明显区别，见表 5。
表 5 同质性黏附实验(珋x ± s)
药物组 黏附率(%)
阳性组(5 － FU) 92． 63 ± 8． 87
蜘蛛香提取物 93． 48 ± 2． 70
3 讨论
结肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一［8］，仅 2000 年
全球就有 945 000 新发病例，每年新发病例和死亡病例分
别达到 102 万和 53 万［9］。仅次于肺癌、乳腺癌居恶性肿瘤
发病率的第三位。在我国，近些年由于人们饮食结构的改
变，食用脂肪类食物增多、粗纤维减少，结肠癌的发病率一
直呈现上升趋势，目前已成为我国肿瘤发病率的第 4 位，发
病年龄也逐渐年轻化。
已有研究表明蜘蛛香具有细胞毒性，其环烯醚萜类成
分对多种肿瘤细胞都具有抑制作用［10 － 12］。本研究首次探
讨了蜘蛛香提取物对人结肠癌细胞 SW480 的抑制作用及
其机制;笔者首先通过 MTT法和细胞脱落试验证实了蜘蛛
香提取物能明显抑制人结肠癌 SW480 细胞的增殖，同时光
镜检查发现蜘蛛香提取物能提高人结肠癌 SW480 细胞的
凋亡率，有诱导人结肠癌 SW480 细胞凋亡的作用，我们使
用流式细胞仪发现蜘蛛香提取物组细胞 S期和 G2 /M期细
胞百分比明显增加，细胞增殖周期发生明显的 S 期和 G2 /
M期阻滞，提示可能是通过干扰 DNA合成阻滞细胞周期于
S期和 G2 /M期，发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用，进而诱导
细胞凋亡。这与一般抗肿瘤药多使细胞停留在 G0 /G1 期
不再分裂增殖的结果不同。细胞周期一旦产生 G2 /M期阻
滞，细胞就不能进入 G1 期进行 ＲNA和蛋白质合成，而一些
主要蛋白质和 ＲNA的缺失使细胞不能进入 S 期启动 DNA
复制，从而使肿瘤细胞的生长受到抑制［12］。在划痕试验和
同质性黏附实验中中我们发现蜘蛛香提取物显著降低结肠
癌 SW480 细胞的移动能力，具有抑制肿瘤细胞迁移的作
用。
综上所述，表明物蜘蛛香提取物对人结肠癌 SW480 细
胞有明显的增殖抑制和抗转移作用，具有良好的临床应用
前景;但其抑制增殖和诱导凋亡的机制还不十分清楚，有待
于进一步研究。
参考文献
［1］ 石晋丽，刘勇，肖培根．缬草属植物化学成分与药理作用［J］．
国外医药·植物药分册，2003，18(6) :231 － 239．
［2］ Mathela CS，Chanotiya CS，Sammal SS，et al． Compositional di-
versity of terpenoids in the Himalayan Valeriana genera［J］．
Chemisty＆Biodiversity，2005，2:1174 － 1182．
［3］ 明东升，郭济贤，顺庆生，等．四种缬草生药挥发油化学成分
的气相分析:质谱联用鉴定［J］． 中成药，1994，16(1) :41 －
42．
［4］ Marayanan CS． Terpenoids － XLLVI． Components of Indian va-
lerian port oil［J］． Tetrahedron，1964，20(4) :963．
［5］ Kulkarni KS． Terpenoids － XLVIII，Structure and stereo chemis-
try of hydroxy valeranone and acetyl hydrovaleranone［J］． Tetra-
hedron，1964，20(5) :1289．
［6］ Bornthang C，Bergmann C，Beck JP，et al． Valepotriates，a
NEW Class of Cytotoxic and Antitumar Agents［J］． Planta Med，
1981，41(1) :21 － 28．
［7］ 张人伟，吴华欣，李勤华，等．马蹄香环稀醚萜成分的分离鉴
定［J］．云南植物研究，1986，8(1) :107．
［8］ Garcia M，Jemal A，Ward EM，et al． Global cancer facts and
figures 2007． Atlanta，GA:American Cancer society，2007．
［9］ Center MM，Jemal A，Smith ＲA，Ward E． Worldwide variations
in colorectal cancer［J］． CA Cancer J Clin，2009，59(6) :366 －
378．
［10］ Lin S，Chen T，Liu X H，et al． Iridoids and lignans from Vale-
riana jatamansi［J］． J Nat Prod，2010，73(4) :632．
［11］ Lin S，Shen Y H，Li H L，et al． Acylated iridoids with cytotox-
icity from Valeriana jatamansi［J］． J Nat Prod，2009，72(4) :
650 － 655．
［12］ Zhang HY，Gu YY，Li ZG，et al． Exposure of human lung cancer
cells to 8 － chloro － adenosine induces G2 /M arrest and mitotic
catas trophe［J］． Neoplasia，2004，6(6) :802 － 812．