全 文 ：第 32 卷 第 6 期
2 0 1 4 年 6 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 6
Jun． 2 0 1 4
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DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 06． 007
蜘蛛香总环烯醚萜类成分纯化工艺优选
张瑞桐，兰明，林玉，李少华，陈朝勇，陈冲，闫智勇
(西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031)
摘 要:目的:优选大孔树脂分离纯化蜘蛛香总环烯醚萜类成分的工艺方法。方法:以 Chlorovaltrate 为对照
品，采用紫外分光光度法测定蜘蛛香总环烯醚萜类成分的含量，动态吸附 －解吸法筛选大孔树脂型号，并优选其
纯化工艺条件。结果:D －101 大孔树脂最适合蜘蛛香总环烯醚萜成分的分离纯化，最佳工艺为:上样液浓度为 20
g·L －1，用 6 BV(Bed Volume)的水和 4 BV的 60%乙醇洗脱除杂，4 BV的 95%乙醇洗脱，洗脱流速 2 BV·h －1，收
集 95%乙醇洗脱液。洗脱液减压回收至干，在此工艺下所提取的蜘蛛香环烯醚萜类成分的纯度达 66． 3%。结
论:D －101 大孔树脂能有效提高蜘蛛香中总环烯醚萜类成分的纯度，工艺简单可行，较适宜应用于大生产。
关键词:蜘蛛香;总环烯醚萜类成分;大孔树脂;D101;纯化
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)06-1276-04
Study on Optimal Purification Process of Total Iridoid Constituents from Valeriana
Jatamansi Jones
ZHANG Ｒuitong，LAN Ming，LIN Yu，LI Shaohua，CHEN Chaoyong，CHEN Chong，YAN Zhiyong
(School of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，Sichuan，China)
Abstract:Objective:The aim of this study was to optimize the purification technology of total iridoid constituents from
Valeriana jatamansi Jones． Method:The optimal macroporous resin was selected by dynamic adsorption － desorption，and
then the purification technology of total iridoid constituents from Valeriana jatamansi Jones was optimized with the iridoids
content of Chlorovaltrate as index，which was determined by ultraviolet spectrophotometry． Ｒesult:The D － 101 macro-
porous resin was the most suitable for purification of total iridoid constituents from Valeriana jatamansi Jones． The optimal
purification conditions were:the mass concentration of sample liquid 20 g·L －1;the adsorption time 30 min，eluted by 6
BV water and 4 BV 60% ethanol to impurity;4 BV 95% ethanol，elution flow rate 2 BV·h －1;collected 95% ethanol
eluent，and evaporated to dry． Under these technology conditions，the total iridoida constituent was up to 66． 3 % ． Con-
clusion:D －101 type macroporous resin could effectively enhance purity of total iridoid constituents from Valeriana jata-
mansi Jones． This optimal technology was simple and feasible，which could meet the industrial requirements．
Key words:Valeriana jatamansi Jones;total iridoid constituents;macroporous resin;D101;purification
收稿日期:2014 － 02 － 03
基金项目:国家科技重大专项“十一五”计划项目(2009ZX09103 －
370) ;教育部中央高校基本科研业务费专项资金项目
(WJTU09CX063)
作者简介:张瑞桐(1990 －) ，女(傣族) ，云南丽江人，硕士，研究方
向:中药药理。
通讯作者:闫智勇(1971 －) ，男，河北人，教授，博士，研究方向:神
经及肿瘤药理。E-mail:yzhiy@ swjtu． edu． cn。
蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)为败酱科(Valeri-
anaceae)缬草属植物，别名马蹄香、鬼见愁、老虎七、印度缬
草，药用部位为根和根茎部位，分布于我国四川、贵州、云南
等地，在多版《中华人民共和国药典》中均有收载，其药性微
苦、辛、温，归心、脾、胃经，功能理气止痛、消食止泻、祛风除
湿、镇静安神［1］。蜘蛛香主要含有环烯醚萜类、挥发油类和
黄酮类等成分［2 －4］，具有广泛的生物学活性。现代研究发
现，蜘蛛香具有镇静催眠、抗肿瘤、抗焦虑等多种药理作
用［5 －6］，其中，蜘蛛香总环烯醚萜类成分具有明显的镇静催
眠活性以及抗焦虑作用［7 －9］。近年来大孔树脂运用于环烯
醚萜类成分的纯化工艺取得了良好的效果［10 －12］。本研究以
蜘蛛香为研究对象，探讨大孔树脂对其总环烯醚萜类成分的
纯化工艺，为蜘蛛香资源的开发利用做一些前期基础工作。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
HK －08B型流水式中药粉碎机(广州市旭朗机械设备
有限公司) ;SB － 3 型三用紫外分析仪(天津市分析仪器
厂) ;TU － 1901 型双光束紫外可见分光光度计(北京普析
通用仪器有限责任公司) ;BSA224S 型精密天平(220 g·
0． 1 mg) (赛多利斯科学仪器(北京)有限公司) ;旋转蒸发
器 ＲE － 5205(上海亚荣生化仪器厂) ;双频数控超声波清
洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;DHG － 9240A 型电热恒
温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司) ;真空干燥箱
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(太仓精宏仪器设备有限公司)。
1． 2 材料
蜘蛛香，药材购于贵州遵义药材市场，经西南交通大学
生命学院宋良科副教授鉴定为败酱科(Valerianaceae)缬草
属植物蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)的根及根茎，冷冻
后粉碎。
对照品 Chlorovaltrate(实验室自制，纯度≥98%) ;色谱
甲醇、色谱乙睛(美国 Fisher公司) ;哇哈哈纯净水;GF254薄
层板(青岛海洋化工厂分厂) ;D － 101(生产批号:110901)
大孔树脂和 AB － 8(生产批号:100801)大孔树脂(沧州宝
恩化工有限公司) ;95%乙醇、丙酮、石油醚等试剂(成都恒
信化学试剂有限公司)均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 蜘蛛香提取物的制备
经前期研究，优选出蜘蛛香环烯醚萜类成分提取工艺
为:蜘蛛香药材粗粉，经 70%乙醇浸渍提取 2 次，第 1 次 8
倍量浸提 24 h，第 2 次 6 倍量浸提 12 h，抽滤，合并滤液，减
压浓缩至膏状，得膏率为 21． 6%，环烯醚萜类成分含量为
7． 51%。
2． 2 供试品溶液的制备
精密称量适量供试品，用色谱甲醇溶解定容于 25 mL
容量瓶中，摇匀;用量程为 5 mL的移液管取 5 mL样品溶液
于 25 mL的容量瓶，用色谱甲醇定容于刻度，摇匀，即得。
2． 3 对照品溶液的制备
精密称取对照品 Chlorovaltrate 适量，加色谱甲醇溶解
后定容至 25 mL，摇匀，得浓度为 628 μg·mL －1对照品母
液，备用。
2． 4 检测波长的选择
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 1 mL，各自用色
谱甲醇稀释适宜浓度。400 nm ～ 190 nm 波段中速扫描，先
用色谱甲醇进行 400 nm ～ 190 nm的基线扫描调零，再依次
扫描对照品溶液和供试品溶液，结果发现对照品与供试品
在 253 nm处有最大吸收，因此选取测定波长为 253 nm。
2． 5 方法学考察
2． 5． 1 线性关系考察 精密吸取 Chlorovaltrate 对照品母
液 2 mL，加色谱甲醇依次稀释成 78． 5、52． 3、34． 9、23． 3、
15． 5 μg·mL －1浓度梯度。按 2． 4 项下操作，于 253 nm 波
长处测定吸光度(A) ，以对照品 Chlorovaltrat 浓度为横坐
标，A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程式 Y = 0． 0101X
+ 0． 0296(Ｒ2 = 1) (n = 5) ，表明对照品 Chlorovaltrate 线性
关系良好。
2． 5． 2 精密度试验 取同一份对照品溶液，按 2． 4 项下操
作，于 253 nm波长处测定吸光度(A) ，重复测定 5 次，结果
ＲSD为 0． 00013%，表明精密度良好。
2． 5． 3 重复性试验 精密称取供试品 5 份，按 2． 4 项下操
作，于 253 nm波长处测定吸光度(A) ，根据标准曲线计算
每份含量，结果 ＲSD为 0． 043%，表明供试品重现性良好。
2． 5． 4 稳定性试验 取同一份供试液溶液，按 2． 4 项下操
作，253 nm波长处分别于 0 h、2 h、4 h、6 h、12 h，24 h 测定
吸光度(A) ，结果平均值为 0． 421，ＲSD 为 0． 0059%，表明
本品在 24 h内具有良好的稳定性。
2． 6 蜘蛛香环烯醚萜类有效成分的纯化工艺优化
2． 6． 1 树脂的预处理 试验中所用的 D － 101 和 AB － 8
大孔树脂均为净品型，处理方法为:在容器中用 95%乙醇
将大孔树脂浸泡 24 h，并用玻璃棒搅拌，以除去气泡;静置
后倒出上层漂浮杂质及破碎树脂，再用 95%乙醇洗至洗脱
液澄清且与水混和后不出现白色混浊;最后用大量水洗去
乙醇至无醇味后，备用。
2． 6． 2 树脂型号筛选 关于中药的环烯醚萜类成分的富
集纯化多采用非极性的大孔树脂 D － 101 和弱极性的大孔
树脂 AB － 8［13 － 15］，故选择大孔树脂 D － 101 和 AB － 8 进行
筛选。取 2 根同规格的树脂柱(内径:3 cm，柱长:25 cm，1
BV约为 60 mL) ，分别取处理好的树脂 D － 101 和 AB － 8
各约 50 g(纱布过滤除水后湿重) ，水装柱。取 10 g浸膏用
500 mL水超声分散均匀，制成 20 g·L －1的上样液，以 1
BV·h －1吸附流速分别上样，流出液每 10 mL 收集，TLC 追
踪泄露点(石油醚∶ 丙酮 = 5 ∶ 1 展开，254 nm 下检视，10%
硫酸 －乙醇溶液显色) ，计算浸膏最大吸附量。随后分别
用大量水洗除杂至洗脱液澄清(约 6 BV) ，再用 70%乙醇
洗脱 4 BV，收集洗脱液，减压蒸干，称重，计算浸膏解析率。
以 Chlorovaltrate为对照品，按 2． 4 项下操作，紫外分光光度
法测定总环烯醚萜纯度，结果见表 1。
表 1 树脂 D －101 和 AB － 8 的动态吸附率和解吸率比较
树脂编号
浸膏吸附量
(g·50 g － 1)
浸膏解析量
(g·50 g － 1)
浸膏解析率
(%)
总环烯醚萜类
成分纯度(%)
D101 3． 6 3． 0 83． 3 43． 5
AB －8 3． 3 2． 8 84． 8 39． 2
结果表明，D － 101 比 AB － 8 对蜘蛛香环烯醚萜类的
吸附量略高解析率略低，但 D － 101 洗脱的总环烯醚萜纯
度要高，故采用 D － 101 进行蜘蛛香总环烯醚萜类成分的
纯化研究。
2． 6． 3 上样量考察 通过表 1 显示结果可知，50 g湿重 D
－101 树脂对浸膏最大动态吸附量为 3． 6 g，即比吸附量为
72 mg·g －1(树脂湿重)。
2． 6． 4 洗脱剂浓度的选择 取 2 根同规格的树脂柱(内
径:5 cm，柱长:50 cm，1 BV约 500 mL) ，分别取处理好的树
脂 D －101 约 400 g，水装柱，记为柱 A、柱 B。取 60 g 浸膏
用 3 L 水超声分散均匀，制成 20 g·L －1的上样液，以 1
BV·h －1吸附流速分别上样 1． 5 L，再分别用 6 BV 的水洗
脱除杂。水洗除杂后分别进行一下操作:
柱 A 依次用 2BV 的 30%、50%、70%、90%乙醇和 1
BV丙酮洗脱;
柱 B 依次用 2BV 的 30%、40%、50%、60%、70%、
80%、90%乙醇和 1 BV 丙酮洗脱。分别收集各浓度洗脱
液，分别收集洗脱液，TLC 鉴别(石油醚∶丙酮 = 5 ∶ 1 展开，
254 nm处检视，再 10%硫酸 －乙醇溶液显色) ，UV 下有暗
斑，浸润显色剂后开始显绿色、烘干后显黑色的斑点即为环
烯醚萜类成分，见插页Ⅳ图 1。
由插页Ⅳ图 1 可知，当乙醇洗脱浓度达到 60%时，
没有环烯醚萜类成分洗脱下来;到 70%乙醇洗脱，开始
有环烯醚萜类成分被洗脱下来，且 90%乙醇和丙酮洗脱
环烯醚萜类成分最多。故以 Chlorovaltrate 为对照，UV
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法测定 90%乙醇和丙酮合并部位的环烯醚萜类含量，结
果见表 2。
表 2 90%乙醇和丙酮合并洗脱部位的环烯醚萜类含量
编号 浸膏量(g) 总环烯醚萜类成分含量(%)
柱 A 2． 82 65． 2
柱 B 2． 09 67． 1
由以上试验可知，先用 6 BV 水除去水溶性杂质，然后
用 60%乙醇再次除杂，最后用 95%乙醇洗脱可得到纯度较
高的环烯醚萜类成分。
2． 6． 5 洗脱剂用量考察 取树脂柱(内径:5 cm，柱长:50
cm，1 BV约 500 mL) ，用处理好的树脂 D －101 约 400 g，水
装柱。取 30 g 浸膏用 1500 mL 水超声分散均匀，制成 20
g·L －1的上样液，以 1 BV·h －1吸附流速上样。用水洗脱 6
BV后，再用 60%乙醇洗脱除杂，洗脱 2 BV 后，每 100 mL
收集洗脱液，TLC 鉴别(石油醚 ∶ 丙酮 = 5 ∶ 1 展开，253 nm
处检视，10%硫酸 －乙醇溶液显色) ，直到第 9 个点杂质除
去较完全，故 60%乙醇除杂的洗脱用量约为 4 BV。最后用
95%乙醇洗脱，每 100 mL 收集洗脱液，TLC 鉴别(石油醚∶
丙酮 = 5 ∶ 1 展开，253 nm 处检视，10%硫酸 －乙醇溶液显
色) ，直到第 19 个点洗脱较完全，故 95%乙醇洗脱有效部
位的用量约为 4 BV，结果见插页Ⅳ图 2。
2． 6． 6 洗脱流速考察 装等规格树脂柱 4 根(内径:3 cm，
柱长:50 cm，1 BV约 60 mL) ，各取 20 g·L －1的上样液 200
mL上样;以确定的洗脱液分别以流速 1 BV·h －1、2 BV·
h －1、3 BV·h －1、4 BV·h －1洗脱 250 mL，收集 95%乙醇洗
脱液。以 Chlorovaltrate为对照，UV法测定各洗脱液中环烯
醚萜类含量，结果洗脱流速 2 BV·h －1总环烯醚萜类含量
较高，见表 3。
表 3 各流速洗脱后 95%乙醇洗脱液中环烯醚萜类含量
洗脱流速
(BV·h －1)
1 2 3 4
总环烯醚萜类
成分含量(%)
65． 1 66． 7 64． 4 62． 4
2． 7 工艺验证试验
取树脂柱(内径:5 cm，柱长:50 cm，1 BV 约 500 mL) ，
用处理好的树脂 D101 约 400g，水装柱。取 30 g 浸膏用
1500 mL水超声分散均匀，制成 20 g·L －1的上样液，以 1
BV·h －1吸附流速上样，2 BV·h －1流速洗脱。用水洗脱 6
BV后，再用 4 BV 的 60%乙醇洗脱除杂，最后用 4 BV 的
95%乙醇洗脱得环烯醚萜类有效部位。分别收集 60%乙
醇、95%乙醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至干，称重。对
Chlorovaltrate对照品，60%乙醇部位、95%乙醇部位浸膏的
甲醇溶液分别进行 400 ～ 190 nm 光谱扫描，并测定其总环
烯醚萜类含量，结果见表 4 和插页Ⅳ图 3 ～ 5。
表 4 各洗脱部位的浸膏量及环烯醚萜类含量
乙醇浓度
(%)
洗脱用量
(BV)
浸膏量
(g)
总环烯醚萜类
成分含量(%)
浸膏性状
60 4 15． 0 9． 9
黑色小块，黏手，
可溶于水
95 4 2． 7 66． 3
黄色油状物，溶于
甲醇、丙酮和氯仿
验证试验结果表明，在该纯化工艺下，蜘蛛香环烯醚萜
类成分具有很好的纯化效果且工艺重复可靠，其总环烯醚
萜类纯度可达 65%以上。
3 总结与讨论
大孔树脂富集纯化中药中总环烯醚萜类成分具有可行
性［16］，考虑到中药蜘蛛香总环烯醚萜类成分的化学特
性［17］，非极性的 D －101 和弱极性的 AB － 8 大孔树脂富集
效果较于其他树脂良好，本课题对这两种树脂进行筛选，实
验结果发现，D － 101 比 AB － 8 对蜘蛛香总环烯醚萜类的
吸附量略高解析率略低，但 D － 101 洗脱的总环烯醚萜类
成分纯度要高。考察多种实验影响因素，进行多种单因素
对比实验，优选出以 D － 101 大孔树脂来纯化蜘蛛香环烯
醚萜类成分的工艺条件。由于对照品 Chlorovaltrate 量有
限，除 UV法定量测定总环烯醚萜类含量为指标外，还结合
本课题组对蜘蛛香环烯醚萜类成分前期基础研究和 TLC
定性鉴别手段来优选纯化工艺条件［9，18 － 19］。经纯化得到
的总环烯醚萜类成分浸膏为黄色油状物、溶于甲醇、丙酮和
氯仿。蜘蛛香醇提物中总环烯醚萜类成分含量为 7． 51%，
经 D － 101 大孔树脂纯化后，总环烯醚萜类成分含量为
66． 3%，纯化倍数达 8． 8。
经验证试验，证明此纯化工艺效果良好，所需材料经济
易得，重复性良好，可以为蜘蛛香总环烯醚萜类成分的批量
制备提供方法依据。
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收稿日期:2014 － 02 － 13
基金项目:国家自然科学基金面上项目(81273698) ;辽宁省中医药
临床学(专)科能力建设项目(2012 － lnzyxzk － 01) ;沈阳
市科技计划项目(F12 － 155 － 9 － 00) ;辽宁中医药大学
青蓝学者工程基金项目
作者简介:李京(1986 －) ，女，辽宁鞍山人，主治医师，博士研究生，
专业方向:中医药防治心血管疾病临床与实验研究。
通讯作者:张明雪(1962 －) ，女，辽宁沈阳人，教授、主任医师，博士
研究生导师，博士，中、西医学两站博士后，研究方向:中
医药防治心血管疾病临床与实验研究。 E-mail:
zhmx6228@ 163． com。
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Vol． 32 No． 6
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刊
DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 06． 008
张明雪教授辨证治疗冠心病 120 例临床回顾性分析
李京，张明雪，金跟海，刘日，张琳婷
(辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110847)
摘 要:目的:评价传统中药汤剂辨证加减治疗气阴两虚证、心脾两虚证、肝阳上亢证、痰热扰心证冠心病的
临床疗效，从而为中医药治疗冠心病提供临床依据。方法:回顾性分析张明雪教授在辽宁中医药大学附属医院心
血管内科门诊及住院诊治的 120 例冠心病患者，统计分析生脉饮、归脾汤、天麻钩藤饮和温胆汤分别治疗气阴两
虚证、心脾两虚证、肝阳上亢证和痰热扰心证冠心病的临床疗效。结果:总有效率为 80． 83%，气阴两虚、心脾两
虚、肝阳上亢、痰热扰心各证型有效率分别为 73． 34%、80%、76． 66%、93． 33%，各证型间两两比较均无显著性差
异(P ＞ 0． 05) ，且未出现任何不良反应和不良反应。胸痛、胸闷、气短、心悸等主要伴随症状治疗后指标有显著性
差异(P ＜ 0． 05)。结论:临床辨证采用生脉饮、归脾汤、天麻钩藤饮和温胆汤加减治疗冠心病，可有效提高患者临
床疗效，改善生存质量，具有安全性。
关键词:冠心病;辨证论治
中图分类号:Ｒ541． 4 文献标志码:B 文章编号:1673-7717(2014)06-1279-04
Ｒetrospective Analysis of Professor ZHANG Mingxue Treating 120
Cases of Coronary Heart Disease Based on Syndrome Differentiation
LI Jing，ZHANG Mingxue，JIN Genhai，LIU Ｒi，ZHANG Linting
(Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，Liaoning，China)
Abstract:Objective:To evaluate the effects of traditional Chinese medicine decoctions on qi and Yin deficiency syn-
drome，heart and spleen both deficiency，liver Yang hyperactivity syndrome，phlegm heat disturbing heart syndrome of cor-
onary heart disease (CHD)so as to provide the clinical basis for traditional Chinese medicine treatment of coronary
CHD． Methods:The retrospective analysis was about professor ZHANG Mingxue in Cardiovascular Internal Medicine Out-
patient in Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine treating 120 patients with CHD． The
statistical analysis of Shengmai Decoction，Guipi Decoction，Tianma Gouteng Drink and Wendan Decoction of qi and Yin
deficiency syndrome，heart and spleen both deficiency，liver Yang hyperactivity syndrome，phlegm heat disturbing heart
syndrome of CHD was carried out． Ｒesults:The total effective rate was 80． 83% ． The effective rate order of qi and Yin
deficiency syndrome，heart and spleen both deficiency，liver Yang hyperactivity syndrome，phlegm heat disturbing heart
syndrome were respectively 73． 34%，80%，76． 66%，93． 33% and either two syndrome types had no significant difference
(P ＞ 0． 05)． There were no adverse reactions or side effects． Chest pain，chest tightness，shortness of breath，palpitations
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第 32 卷 第 6 期
2 0 1 4 年 6 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 6
Jun． 2 0 1 4
中
华
中
医
药
学
刊
蜘蛛香总环烯醚萜类成分纯化工艺优选
(正文见 1276 － 1279 页)
点样顺序:1 － 5:柱 A—90% +丙酮、70%、50%、30%乙醇和水;
6 － 13:柱 B—90% +丙酮、80%、70%、60%、50%、40%、30%乙醇
和水
图 1 蜘蛛香环烯醚萜类薄层色谱 GF254鉴别图 图 2 95%乙醇洗脱液薄层 GF254鉴别图
图 3 Chlorovaltrate对照品光谱扫描图(浓度:30． 81 μg /mL) 图 4 60%乙醇部位光谱扫描图(浓度:33． 2 μg /mL)
图 5 95%乙醇部位光谱扫描图(浓度:33． 3 μg /mL)
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