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IM M O BL I I TY I ND U CED BY E E L CTR I CS I TM ULA TIO NO FM I CE
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D e P a rt me n t— A N ove lA n i ma lM ode l of ofP h a r mae ol ogy L UJ n uh a UD e P e rs s i on K u Ba osh an
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K e y w o r d s A n im a l m o d e l o f d e P r e s s i o n ; Im m o b i l i t y , M E S A n t i d e P
r e s s a n t s ; O P e n f i e l d
含有蓖麻毒素和阿霉素的双弹头
免疫毒素的强杀伤作用
北京医科大学免疫学教研室 谢 蜀生 赵 钟 句 爱林 龙振 洲
F o d s t a p 等发现 , 蓖寐毒素 ( R i o i n )与阿霉素 ( A d r -
ia m cy in )对小鼠白血病细胞有 2 0 0 0 倍 的 协 同杀伤作
用 。 我们曾分别用柔红霉素 、 阿霉素 、 苯 丁酸氮芥 ,
以及蓖麻毒素与单克隆抗体偶联 , 构建了多 种具有高
度特异的免疫毒素 。 在这些研究的基 础上 , 我们最近
又成功地将 iR ic n 与 A dr ia m cy in 偶联到同一个抗人膀
胧癌单克隆杭体分子上 , 构建了第一个具 有 “ 双弹头 ”
的抗肿瘤导向药物 。 整个构建过程的主要步 骤如下 :
( l) 将 iR ic n 与异型双功能交 联剂 sP D P 反应 ,
生成 R ie i n 一 p D P ; ( 2 ) 将 A d r i a m y e i n 与顺 乌头酸醉
( ic s A )反应 , 生成 A dr 一 iC s A , ( 3 ) 将人磅胧癌单克
隆抗 体 ( M e A b )与 s p D p 反 应 , 生 成 M e A b 一 P D P ,
( 4 ) 将 R i e i n 一 p D p 与 A d r一 C I S A在交 联剂 E D C 作用
下 , 生成 A d r 一 C IS A 一 R IC i n 一 P D P ; ( 5 ) A b 一 P D P 在 D
T T 作用下 , 生成 M e A b 一 S H ; ( 6 ) 将 M e A b 一 SH 与
A d r 一 C IS A
一
R ie i n
一 P D P 混合 , 室温反 应 17 小时后 , 用
se p ha eP
x G 15 。凝胶过滤 , 获得 纯化的 琢弹头免疫毒
素 M e A b 一 R i e i n 一 A d r 。
经间接免疫萤光 , 流式细 胞仪 ( F A C s) 检 测 , 以
及放射竟争结合试验证明 , 这个免疫毒 素保持了原抗
体活性的 70 % ; 对这个分子 中 ` ’ “ I一 iR ic n 放 射活性测
定的结果进行测算表明 , M c A b 与 iR ic n 的 分子比为
l : 卜 用 O D ,7 。 光吸收值在标准曲 线上查得 A dr 的含
量 , 经侧算 , 每 个 R iic n 分子上 联有 2 . 5 个 A dr 。 因
此 ,在这个免疫毒素中 , M c A b : iR ic :n A dr 为 1 : 1 : 2 . 5。
体外杀伤试验的结果表明 , 这个双弹头免 疫毒素 , 在
0
.
l m ol / L半乳糖存在的条件下 ,对无关癌细胞 (人直肠
癌 L 。 V 。细胞 )无杀伤作用 ; 但对人膀胧癌细胞 B IL 卜 87
及 E 一 J 细胞的杀伤作 用 比 M c A b 一 iR c in 强 10 倍 ; 比
M
c A b 一 A d r i a m y e i n强约 3 0 0 0 0 倍 。这种双弹头导向药
物中的 iR ic n B 链具有细胞结合活性 , 因此不适合于体
内应用 。 但在体外 , 用 。 . l m ol / L 的 半乳糖 封闭其 B
键的细胞结合点后 , 具有高度特异的强靶细胞杀伤 活
性 , 因此在异基因骨髓移植净化骨髓 中 T 细胞 , 以及
自身骨髓移植中用于净化骨髓中的白血病细胞 方面有
更大的优越 性 。
许多研究表明 , 用 iR ic n A 链与单 克隆抗体偶联
可以避免免疫毒素分子的非特异杀伤 活性 , 但免疫毒
素的杀伤靶细胞的活性也常常大 大下 降 。 用 iR ic n A
链与其他抗肿瘤药物与单抗偶联制备的 双弹头免疫毒
素有可能避免这 个问题 。
一个导向载体与三种具有协同作用 的杀伤分子构
建的免疫毒素显然比目前所报告的单杀 伤分子免疫毒
素有明显的优越性 。 本文报告的第一个 双弹头免疫毒
素证明 , 这种免疫毒素确实具有更强的 杀伤活性 。 进
一步的研究正在 进行中 。