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HPLC法测定不同采收期香青兰中黄酮和酚酸类的含量



全 文 : Journal of Pharmaceutical Analysis 药物分析杂志
·991· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(6)
Chinese
  *  国家“重大新药创制”科技重大专项(2012ZX09102201-009);国家自然科学基金资助项目(81260681)
  **  通信作者 Tel:(0991)2300682;E-mail:xjguodd@163.com
第一作者 Tel:(0991)2318172;E-mail:ynjy798@163.com
成分分析
HPLC法测定不同采收期香青兰中黄酮和酚酸类的含量 *
于宁 1,姜雯 2,谭梅娥 1,何承辉 1,邢建国 1**
(1.新疆维吾尔自治区药物研究所,乌鲁木齐 830004;2.新疆医科大学第六附属医院药剂科,乌鲁木齐 830002)
摘要 目的:测定不同时期采收的香青兰药材中黄酮类成分(木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹
菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷)和酚酸类成分(迷迭
香酸)的含量,确定最佳采收期。方法:采用 Purospher® STAR LP RP-18 endcapped(4.6 mm×250 mm,
5 μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~30 min,17%A;30~60 min,
17%A→ 28%A;60~75 min,28%A),流速 1.0 mL·min-1,检测波长 330 nm,柱温 35 ℃。结果:木犀草
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄
糖醛酸苷、田蓟苷 5种化学成分的分离效果良好,质量浓度在相应的范围内与峰面积有良好的线性关系,相
关系数均大于 0.999 5;平均加样回收率(n=6)为 98.4%~99.5%(RSD<1.9%,n=6)。该方法应用于研究新疆
吉木萨尔县产区不同采收期对香青兰药材中 5种化学成分含量的影响,本试验在 6月 13日(种植后 213 d)
至 8月 6日(种植后 270 d)内设置了 8个采收期,发现木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷等上述 5种化学
成分的含量与采收期(种植后天数)均呈二次或三次函数关系,随着采收期的推迟,含量先增后减。结论:该
含量测定方法操作简单,重复性好,为确定香青兰药材适宜采收期提供依据。香青兰药材中木犀草素 -7-O-
β-D-葡萄糖醛酸苷等 5种化学成分含量随采收期不同而异,其总量最大值出现在 7月中上旬。
关键词:香青兰;木犀草素葡萄糖醛酸苷;芹菜素葡萄糖醛酸苷;迷迭香酸;香叶木素 -葡萄糖醛酸苷;田蓟
苷;黄酮类;酚酸类;最佳采收期;高效液相色谱法
中图分类号:R 917   文献标识码:A   文章编号:0254-1793(2016)06-0991-07
doi:10.16155/j.0254-1793.2016.06.08
Quantitative determination of flavonoids and phenyl propanoids of Dracocephalum moldavica L. in different harvest periods by HPLC*
YU Ning1,JIANG Wen2,TAN Mei-e1,HE Cheng-hui1,XING Jian-guo1**
(1. Xinjiang Institute of Meteria Medica,Urumqi 830004,China;2. Department of Pharmacy,the Sixth Affiliated
Hospital of Xinjiang Medical University,Urumqi 830002,China)
Abstract Objective:To simultaneously determine the contents of luteolin-7-O-β-D-glucuronide,
apigenin-7-O-β-D-glucuronide,diosmetin-7-O-β-D-glucuronide,and tilianin(flavonoids)and
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rosmarinincacid(phenyl phenyl propanoids)of Dracocephalum moldavica L.,so as to find out the best harvest
time.Methods:HPLC was performed on a Purospher® STAR LP RP-18 endcapped column(4.6 mm×250
mm,5 μm)at 35 ℃ with acetonitrile(A)-0.5% formic acid aqueous solution(B)as the mobile phase
by gradient elution(0-30 min,17%A;30-60 min,17%A→ 28% A;60-75 min,28% A).The detection
wavelength was 330 nm,and the flow rate was 1 mL·min-1.Results:The baseline separation of these 5
components was achieved.The calibration curve was linear(r≥ 0.999 5)over the tested ranges.The average
recovery was 98.4%-99.5%(RSD<1.9%,n=6).The method has been successfully applied to the analysis
of Dracocephalum moldavica in different harvest periods.In this paper,single-factor randomized block design
was applied to study the 5 components content of Dracocephalum moldavica on eight collecting stages.For
the Dracocephalum moldavica L.collected from June 13 to August 6,the contents of 5 ingredients increased
primarily,and then decreased.Conclusion:The established method is proved to be simple and repeatable,
which can provides the basis for the suitable harvest time of Dracocephalum moldavica .The contents of the 5
components are different in different harvest time.The maximum contents appear in the early of July.
Keywords:Dracocephalum moldavica L.;luteolin-glucuronide;apigenin-glucuronide;rosmarinic acid;
diosmetin--glucuronide;tilianin;flavonoids;phenylpropanoids; best harvest time;HPLC
香青兰为唇形科植物香青兰 Dracocephalum
moldevica L.的干燥地上部分,以全草入药,在维吾尔
医学和民间用于治疗冠心病及血液质旺盛、寒性神经
性头疼、寒性感冒、气管炎等疾病[1]。香青兰生长于
海拔 220~1 600 m的干燥山地、山谷、河滩多石处,分
布于新疆、吉林、辽宁、甘肃、青海及黑龙江等地。通
常 1年采收 1次,一般在 7月花盛开,植株生长旺盛
时收割,全草产量高;种子采收在 8月中旬植株大部
分果实成熟时,在花序中下部的花曹变枯黄时进行,
将果序剪下,将种子晒干[2]。香青兰主要药效成分
包括黄酮、苯丙素、三萜、甾体和多糖等物质[3-4]。现
代药理学研究表明,黄酮类成分是香青兰中扩张冠
脉,降低冠脉血管阻力的主要活性成分[5-8];同时,酚
酸类化合物迷迭香酸在香青兰中含量较高,且文献报
道迷迭香酸具有抗血栓、抗血小板凝集、抗炎、抗氧
化、抗菌、抗病毒和免疫调节的作用[9]。
目前香青兰的质量评价主要以《中华人民共和
国卫生部药品标准维吾尔药分册》1998年版的质量
规范为标准,仅对香青兰性状、鉴别做了相关规定,未
对其药效成分进行评价[1]。不同的采收期对香青兰
的品质影响较大,王亚俊等[10]对香青兰的采收期有
过研究,但其涉及的采收期较少,且只测定田蓟苷和
藿香苷 2个指标的含量,不足以筛选香青兰的最适采
收期。中药材成分较复杂,只是少数成分的定量测
定,不利于对香青兰药材品质的综合评价,因此,系统
研究香青兰采收期可为香青兰的生产提供理论依据。
本试验在前期基础研究上,分析不同生长期香
青兰中木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、田蓟苷 5种化学成
分含量的变化,为确定香青兰药材适宜采收期提供基
础资料,这对香青兰的优质高产栽培有重要意义,同
时也为香青兰质量的综合评价提供新的方法参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-20AB型高效液相色谱仪(日本岛津
制造所),包括 LC-20AB并联双柱塞泵、SPD-20A紫
外可见双波长检测器、SIL-20A自动进样器、CTO-
20A柱温箱、CBM-20A系统控制器、LC solution工
作站;AB135-S梅特勒 -托利多电子天平(梅特勒 -
托利多国际股份有限公司);JM-B2003电子天平(余
姚市纪铭称重校验设备有限公司);WP-UP-IV-10
型Water Purifier实验室专用超纯水机(四川沃特尔
科技发展有限公司);KQ-100 DE型数控超声波清洗
器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2 试药 香青兰采自新疆吉木萨尔县,经新疆药
物研究所何江副研究员鉴定为唇形科植物香青兰
Dracocephalum moldevica L.的干燥地上部分。试验设
置 8个采收期,分别为 2014年 6月 13日,2014年 6
月 20日,2014年 6月 27日,2014年 7月 4日,2014
年 7月 12日,2014年 7月 19日,2014年 7月 30日,
Journal of Pharmaceutical Analysis 药物分析杂志
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2014年 8月 6日。
对照品木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷
和芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷购自上海一林
生物科技有限公司(纯度大于 98%);对照品田蓟苷
和香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷为实验室自
制,其结构通过 1H-NMR和 13C-NMR数据与文献报
道的数据[13]比对而确定,含量经 HPLC归一法测定
纯度在 98%以上;对照品迷迭香酸(批号 111871-
201001)购自中国食品药品检定研究院(含量以
98.8%计);乙腈为色谱纯,甲酸为优级纯,双蒸水,其
余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 混合对照品储备液制备 精密称取木犀草
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品 3.74 mg,芹菜
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品 2.33 mg,迷迭
香酸对照品 5.184 mg,香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖
醛酸苷对照品 3.48 mg,田蓟苷对照品 9.88 mg,置同一
25 mL量瓶中,用 70%乙醇水溶液稀释至刻度,摇匀,
即得上述 5种化合物质量浓度分别为 149.6、93.2、
207.36、139.2、395.2 μg·mL-1的混合溶液,即得。
2.2 供试品溶液制备 根据本课题组前期研究“香青
兰滴丸的药剂学研究”中香青兰药材的测定方法[11],
称取香青兰药材 1.0 g(过 40目筛),精密称定,置
100 mL具塞锥形瓶中,精密加入 40%乙醇水溶液 60
mL,称量,加热回流提取 6 h,放冷,再称量,用 40%
乙醇水溶液补足减失的量,摇匀,静置。取上清液,经
0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
2.3 色谱条件 色谱柱:Purospher® STAR LP RP-18
endcapped(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈
(A)-0.5%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(见表 1);流
速:1.0 mL·min-1;检测波长:330 nm;柱温:35 ℃;
进样量:10 μL。在上述色谱条件下,各检测成分均
达到基线分离,理论塔板数均大于 2 000。对照品与
样品的色谱图见图 1。
表 1 梯度洗脱程序
Tab. 1 Gradient elution procedures
时间
(time)/min
乙腈
(acetonitrile)/%
0.5%甲酸水溶液
(0.5% formic acid aqueous solution)/%
0 17 83
30 17 83
60 28 72
75 28 72
1.木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(luteolin-7-O-β-D-glucuronide)
2.芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸(apigenin-7-O-β-D-glucuronide)
3.迷迭香酸(rosmarinic acid) 4.香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷
(diosmetin-7-O-β-D-glucuronide) 5.田蓟苷(tilianin)
图 1 混合对照品(A)和 236~251 d采收的样品(B)HPLC色谱图
Fig.1 HPLC of mixed reference substances(A)and sample which
was collected from 236-251 d(B)
2.4 线性关系考察 分别精密吸取“2.1”项下的混
合对照品储备液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL,分别置 10
mL量瓶中,加入 70%乙醇水溶液稀释至刻度,摇匀,
即得到含木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷质
量浓度分别为 7.48、14.96、29.92、44.88、59.84 μg·
mL-1,芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷质量浓度分
别为 5.825、11.65、23.3、34.95、46.6 μg·mL-1,迷迭
香酸质量浓度分别为 10.368、20.736、41.472、62.208、
82.944 μg·mL-1,香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛
酸苷质量浓度分别为 6.96、13.92、27.84、41.76、55.68
μg·mL-1,田蓟苷质量浓度分别为 19.75、39.5、79、
118.5、158 μg·mL-1的系列混合对照品溶液。精密
吸取上述系列混合对照品溶液 10 μL,照“2.3”项下
色谱条件进样测定,记录峰面积;以对照品的质量浓
度(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标,绘制标准曲
线并进行回归计算,分别得木犀草素 -7-O-β-D-
葡萄糖醛酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、
迷迭香酸、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和
田蓟苷的回归方程:
Y=14 784X+4 201.2 r=0.999 7
Y=14 709X-156.34 r=0.999 7
Y=36 953X+651.62 r=0.999 6
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·994· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(6)
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Y=12 574X-2 545.9 r=0.999 6
Y=30 882X-6 629.5 r=0.999 5
质 量 浓 度 分 别 在 7.48~59.84、5.825~46.6、
10.368~82.944、6.96~55.68和 19.75~158 μg·mL-1
范围内与峰面积呈良好线性关系。
采用信噪比(S/N)法测定 5个成分的检测限
和定量限。取“2.1”项下各对照品储备液,分别用
70%乙醇水溶液稀释成不同浓度的系列对照品溶
液,按“2.3”项下色谱条件进行分析,以各物质峰高
约为噪音峰高的 2~3倍时的质量浓度为最低检测
限,以 10倍信噪比时的质量浓度为定量限,结果见
表 2。
表 2 香青兰药材中 5种成分检测限、定量限
Tab. 2 LOD and LOQ of determination of 5
ingredients of Dracocephalum moldevica
成分
(component)
LOD/
(μg·mL-1)
LOQ/
(μg·mL-1)
木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷
(luteolin-7-O-β-D-glucuronide)
0.106 1 0.382 3
芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷
(apigenin-7-O-β-D-glucuronide)
0.116 5 0.283 0
迷迭香酸(rosmarinic acid) 0.109 2 0.349 4
香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷
(diosmetin-7-O-β-D-glucuronide) 0.139 2 0.378 4
田蓟苷(tilianin) 0.190 0 0.632 0
2.5 精密度、重复性、稳定性试验 精密吸取同一混
合对照品溶液,照“2.3”项下色谱条件,1 d内连续进
样 8次,记录 5种待测物的峰面积,并计算峰面积的
RSD;结果木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹
菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷 RSD(n=8)
分别为 1.22%、0.92%、0.68%、0.70%和 1.07%,表明
本法的精密度较好 。
取同一批香青兰药材约 1.0 g,精密称定,按
“2.2”项下方法,平行制备 6份供试品溶液,照“2.3”
项下色谱条件,分别进样,记录各成分峰面积,计算
含量;结果木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、
芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶
木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷的平均含
量(n=6)分别为 1.898、0.703、2.190、1.800和 4.002
mg·g-1,RSD分别为 1.01%、0.76%、0.71%、0.60%和
0.91%,表明本法的重复性较好。
取同一份香青兰供试品溶液,室温下放置,在上
述色谱条件下,分别于 0、2、4、6、8和 12 h进样,测
定各成分峰面积的 RSD;结果木犀草素 -7-O-β-D-
葡萄糖醛酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、
迷迭香酸、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和
田蓟苷的 RSD(n=6)分别为 0.81%、0.65%、0.79%、
0.89%和 1.20%,表明该方法供试品溶液在 12 h稳定
性良好。
2.6 加样回收率试验 取已知含量的香青兰药材
粉末约 0.5 g,精密称定,平行 6份,分别置 100 mL具
塞锥形瓶中,并分别精密加入“2.1”项下含木犀草
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-
葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木素 -7-O-β-D-葡
萄糖醛酸苷、田蓟苷质量浓度分别为 149.6、93.2、
207.36、139.2和 395.2 μg·mL-1的混合照品储备液
7.0 mL,按“2.2”项下方法制备供试溶液,照“2.3”项
下色谱条件,进样测定并计算各成分的平均加样回收
率及 RSD,结果见表 3,表明该方法准确度良好。
2.7 耐用性试验[12] 取同一批香青兰药材粉末约
1.0 g,精密称定,按“2.2”项下方法制备供试溶液,
分 别 用 Purospher® STAR LP RP-18 endcapped(250
mm×4.6 mm,5 μm)、Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) 和 Shim-pack ODS(250 mm×4.6 mm,
5 μm)3种品牌的色谱柱,按“2.3”项色谱条件测定
各成分的峰面积,并分别计算峰面积的 RSD;结果木
犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素 -7-O-
β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木素 -7-O-
β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷 RSD分别为 1.9%、
2.0%、1.6%、1.8%和 1.7%,表明采用上述 3种品牌的
色谱柱测得的结果无明显差别。
2.8 样品测定及结果 分别取 8个不同采收期的
香青兰药材,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,照
“2.3”项下色谱条件测定,采用外标法计算不同采收
期的香青兰药材中木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛
酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香
酸、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷
的含量,结果见图 2。
香青兰药材中木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖
醛酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香
酸、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷
这 5种化学成分的含量与采收期均呈三次或二次函
数关系,建立相关的数学模型,可知 236~251 d期间
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·995· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(6)
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采收香青兰药材的木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛
酸苷、迷迭香酸、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸
苷和田蓟苷的含量均较高,244~262 d期间采收香青
兰药材的芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量
较高。综合上述,从 5种主要化学成分含量和实际生
产情况的角度来分析,236~251 d为最佳采收时期,
此时香青兰生长最旺盛,随后开始逐渐衰老,化学成
分的含量慢慢降低。
表 3 香青兰药材中 5种化学成分回收率(n=6)
Tab. 3 Recoveries of 5 ingredients of Dracocephalum moldevica
成分
(components)
样品含量
(sample content)/
mg
加入量
(addition)/
mg
测得量
(measure
content)/mg
回收量
(found)/
mg
回收率
(recovery)/%
RSD/
%
木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖
醛酸苷(luteolin-7-O-β-D-
glucuronide)
0.948 7 1.047 2 1.993 5 1.044 8 99.3 0.72
0.948 8 1.047 2 1.984 8 1.036 0
0.948 8 1.047 2 1.990 2 1.041 4
0.948 7 1.047 2 1.987 8 1.039 1
0.948 5 1.047 2 1.998 3 1.049 8
0.948 6 1.047 2 1.976 5 1.027 9
芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖
醛酸苷(apigenin-7-O-β-D-
glucuronide)
0.356 7 0.652 4 1.011 2 0.654 5 98.4 1.14
0.356 3 0.652 4 0.987 8 0.631 5
0.356 1 0.652 4 0.990 2 0.634 1
0.356 9 0.652 4 1.008 2 0.651 3
0.356 6 0.652 4 0.997 7 0.641 1
0.357 8 0.652 4 0.996 9 0.639 1
迷迭香酸
(rosmarinic acid)
1.109 3 1.451 5 2.550 8 1.441 5 99.5 0.99
1.108 9 1.451 5 2.529 1 1.420 2
1.109 1 1.451 5 2.551 0 1.441 9
1.109 4 1.451 5 2.552 3 1.442 9
1.109 2 1.451 5 2.569 4 1.460 2
1.109 6 1.451 5 2.567 4 1.457 8
香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖
醛酸苷(diosmetin-7-O-β-D-
glucuronide)
0.897 1 0.974 4 1.847 4 0.950 3 98.4 1.9
0.897 3 0.974 4 1.885 4 0.988 1
0.897 6 0.974 4 1.873 1 0.975 5
0.896 6 0.974 4 1.842 3 0.945 7
0.897 3 0.974 4 1.842 5 0.945 2
0.896 7 0.974 4 1.844 4 0.947 7
田蓟苷(tilianin) 2.015 5 2.766 4 4.777 0 2.761 5 99.1 0.92
2.015 1 2.766 4 4.797 4 2.782 3
2.015 6 2.766 4 4.747 3 2.731 7
2.015 2 2.766 4 4.747 8 2.732 6
2.014 9 2.766 4 4.736 8 2.721 9
2.015 8 2.766 4 4.733 3 2.717 5
Journal of Pharmaceutical Analysis药物分析杂志
·996· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(6)
Chinese
A.木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(luteolin-7-O-β-D-glucuronide) B.芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸(apigenin-7-O-β-D-glucuronide)
C.迷迭香酸(rosmarinic acid) D.香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(diosmetin-7-O-β-D-glucuronide) E.田蓟苷(tilianin)
图 2 采收期对香青兰药材 5种化学成分含量的影响
Fig.2 Effect of time on content of 5 ingredients of Dracocephalum moldevica
3 讨论
3.1 测定指标的选择 本课题组在前期对香青兰化
学成分的研究[13]中发现,迷迭香酸、田蓟苷、木犀草
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-
葡萄糖醛酸苷、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸
苷是香青兰药材中含量较高的化学成分,这些化合
物均属酚酸和黄酮类化合物,并且文献报道,黄酮类
及酚酸类化合物均具有扩张冠脉、抗血栓、抗血小板
凝集的作用[5-9]。因此,本研究选择田蓟苷、木犀草
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-
葡萄糖醛酸苷、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸
苷、迷迭香酸 5种化学成分作为测定指标。
3.2 色谱分析条件的优化 根据前期的研究基础,
流动相首先选择乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B),
梯度洗脱条件为 0~30 min时为 18%A,30~60 min
时 为 18%A→ 30%A,60~75 min时 为 30%A,进 行
实验的结果表明供试品溶液的色谱峰中迷迭香酸
峰、田蓟苷峰均有干扰,分离效果不理想,调整流动
相梯度条件为 0~30 min时为 17%A,30~60 min时
为 17%A→ 28%A,60~75 min时为 28%A,则供试品
溶液中 5种化学成分均得到较好的分离。因此,流
动相确定为乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B),梯度
洗脱条件为 0~30 min时为 17%A,30~60 min时为
17%A→ 28%A,60~75 min时为 28%A。
3.3 采收期对香青兰中 5种化学成分含量的影响 采
用单因素随机区组试验方法,从 6月 13日(种植
后 215 d)至 8月 6日(种 植 后 270 d)止,共 8个
采收期,采用上述建立的分析方法,分析了新疆吉
木萨尔县产区每个采收期香青兰药材中的木犀草
素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-
葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木素 -7-O-β-D-葡
萄糖醛酸苷和田蓟苷 5种化学成分的含量,并建立了
含量与采收期的回归关系,发现采收期对这 5种成分
均有显著影响,随着采收期的推迟,5种化学成分的
含量均呈现先增后减的趋势,采收过早过晚都会降低
各药效成分的含量,综合考虑木犀草素 -7-O-β-D-
葡萄糖醛酸苷、芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、
迷迭香酸、香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和
田蓟苷的含量,确定最佳采收期为 7月 4日(种植后
236 d)至 7月 19日(种植后 251 d)。
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4 小结
本试验考察了新疆吉木萨尔县产区不同生长期
香青兰药材中木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸
苷、芹菜素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、
香叶木素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷的含
量的变化,从而为研究探讨香青兰药材的品质及确定
其药材适宜采收期提供基础资料。
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(本文于 2015年 9月 6日收到)