全 文 ：药学学报 A eta p ha r ma e eu t iea s i n iea9 9 1组; 29 ( 2 1): 5 5 1~5 5 5
九里香中香豆精的反相高效液相色谱法测定
徐 慧 周志华
(中国医学科学院 、 中国协和医科大学药物研究所 ,北京 1 0 0 0 50)
提要 报道了九里香中 6种香豆精— 九里香 乙素 ( m ur p an id h) ,九里香丙素 (m ur pan ic n) ,海南九里香内酷 ( h a in a n m u r pa n i n ) , m u r r a g a t主n , m e r a z i n h y d r a t e , m u r r a l o s i n 的反相高效液相色谱法测定 。 用
N cu k os l
一
c
l:键合相柱 、 乙睛一水一甲醇 ( 30 : 1 0 : 10) 为流动相 ,异补骨脂素为内标 , 32 0 n m 为检测波
长 。 方法简便易行 。
关键词 九里香 ; 高效液 相色谱法 ; 九里香 乙 素 ; 九里香丙素 ; 海 南九里香 内酷 ; M盯 r ag at in ;
M e r a z i n h y d r a t e ; M u r r a l o g i n
九里香 (加。 ay 那戚刃勿勿 ( )L aJ ck )为芸香科九里香属植物 。是一种 民间用药“ , ” 。用于治疗跌打肿痛 、风湿 、 骨痛 、 牙痛 、 破伤风 、 流行性乙型脑炎 、 虫 、 蛇咬伤等 ,并有局部麻醉 ` 3 ,和抗水肿
作用 “ ’ 。是南方制药厂生产的 “ 三九胃泰 ” 的一味主药 。
九里香中香豆精的分析测定未见报道 。 本文用 N cu kos l 一 lC :键合相 ,流动相 : 乙睛一水一甲
醇 ( 3 0 , 1 0 , 1 0 ) ,使九里香中的 6种香豆精得到 良好分离 ,方法简便易行 , 可用于生药与制剂 的
分析 。
实 验 部 分
仪器与药品
高效液相色谱仪 L c 一 3 A (岛津 , 日本 ) , 二极管阵列检测器 H P 1 Og o M (美国 ) 。色谱柱 。 4 . 6
m m 火 2 5 0 m m 不锈钢柱 ,固定相 N u e l e o s i l一 C ; 。 ( 1 0 排m , M a e e r e y 一 N a g e l ) ,高压匀浆充填 。
乙腊 (色谱纯 , 浙江黄岩化学实验厂 ) ;其余试剂 ,均为分析纯 。
九里香 乙素 、 九里香丙素 、 海南九里香内醋 、 m u r r a g a t i n , m e r a z i n h y d r a t e 和 m u r r a lo g in 由本
所植化室杨峻山提供 。 生药样品 由本所植物室陈毓亨协助收集并鉴定 。
实验条件
分离条件 用 N uc le os l 一 c , ,柱 比较了多种甲醇一水的溶剂 系统 ,效果不好 。 为改善峰形 以
增加分离度 , 曾采用离子抑制的方法 , 但对分离 改善不明显 。 经加入乙腊后 , 6种香豆精的分离
得到明显改善 。实验证 明甲醇对分离极性差别较大的化合物作用明显 ,而乙睛对异构体的分离
有较大的影响 。 因此 ,试用了各种配 比的乙腊一甲醇一水 。 结果表明 , 乙睛一水一甲醇 ( 30 : 1 0 :
1 0 )对六种香豆精及存在杂质分离满意 ,容量因子适宜 。流速为 1 . 0 m l · m i n 一 ` 。
内标选择 内标物在 3 20 n m 应有较强的吸收 ,且保 留时间不与样品组分和杂质峰重叠 ,
保留时间要适当 ,通过对 40 多种化合物进行测试 ,证实异补骨脂素符合上述要求 。分离结果见
图 l 。
本文于 1 9 9 4年 l月 2月日收到 。
DOI : 10. 16438 /j . 0513 -4870. 1994. 11. 010
药学学报 A er aP hr a ma e e ut, e a s i n i e a 1 9 9 4 ; 2 9 ( 1 1 ) : 8 5 1一 8 5 5
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1
.
M u r P a n id i n ;
2
.
M u r r a g a ti n ; 3
.
M e r a z i n h y d r a t e ; 4
.
M u r r a l og in ; 5
.
M u r Pa n i e i n ; 6
.
I n r e r n a l
s ta n d a r d ; 7
.
H a i n a n m u r P a n i n
.
线性关系 精密称取每种香豆精各 1 m g ,分别置于 l ml 量瓶中 ,用甲醇溶解并定容 。精密
称取内标物 5 m g 于 5 m l 量瓶中 , 用甲醇溶解并定容 。精密吸取上述标准溶液 1 5 , 2 0 , 3 0 , 5 0 , 6 0 ,
70 口于 l ml 量瓶中 ,分别加入内标溶液 1 0 时 , 加甲醇定容 ,混匀 。得 6个标准品 6种不同浓度的
含内标物的混合液 。在上述色谱条件下进行色谱分析 ,用数据处理机测量峰面积在。 . 24 ~ 1 . 23
阳 间各香豆精量与峰面积均呈 良好线性关系 。 标准品进样相对标准偏差均在 2 . 8%以 内
( n = 1 0 )
。
提取方法 以云南景洪九里香为样品 , 比较了多种单一溶剂和混合溶剂 。结果以甲醇一乙
酸乙醋一氯仿 ( 1 , 1 : l) 提取效率最高 ,且提取完全 。
由于香豆精在加热时易升华 ,而且其异构体多 ,采用加热提取会使其异构化和样品损失 ,
因而采用冷提法 。 比较了冷浸过夜 、 超声 30 m in ;冷浸 30 m in ; 超声 30 m in ;冷浸过夜 。在进样量
相同的情况下 ,各香豆精以峰面积为标准 ,冷浸过夜超声 30 m in 方法的提取效率最高 。
再进一步试验适宜的超声时间 :精密称取 5份 50 m g 样品 ,加提取液 l ml 。浸泡过夜 。分别超
声 O , 2 0 , 3 0 , 40 和 50 m jn 。进样量相同 , 以峰面积为标准 ,超声 40 m in 和 50 m in 各香豆精的峰面
积相同 ,说明超声 40 m in 已提取完全 。
回收率及精密度 以云南景洪九里香为样品 ,精密称取样品粉末 0 . 1 9 于 10 ml 具塞刻度
试管中 ,共 6份 , 4份中加入混合标准品溶液和内标 ,另两份只加内标溶液 。分别精密加入甲醇一
乙酸乙醋一氯仿 ( 1 : l : l) 混合液 3 ml 。浸泡过夜 ,超声 40 m in ,离心 。精密吸取上清液 l ml 于试
管中 , 氮气吹干 , 用甲醇溶解残渣并定量转移到 l ml 量瓶中 , 定容至刻度 。在上述分离条件下
进行分离 ,进样 6 川 ,记录峰面积 ,平均 回收率在 97 . 4一 1 03 . 8% 。标准品各组分相对标准偏差在
1
.
0一 2 . 7%之间 , 见表 1 。
拟定方法 根据以上试验结果拟出测定方法如下 : 精密称取生药粉末 ( 40 目) 0 . 1 9 ,置 10
m l带塞试管中 , 精密加氯仿一 乙酸乙醋一甲醇 ( l : l : l) 混合液 3 ml ,冷浸过夜 ,超声处理 40
m in ,离心 ,精密吸取上清液 l ml ,用氮气将溶液吹干 , 用甲醇溶解残渣 ,并定量转移至 l ml 量瓶
中 ,加内标液 10 口 ,用甲醇稀释至刻度 。取 5一 1 0 以进样 ,用内标法计算各香豆精的含量 。
药学学报 ^e a tp幻 ar ma ce utie as i nie a1 9 9 4, 2 9 ( 1 1 ) :名5 1~ 8 5 5 8 5 3
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样品分析 对不同产地 、 不同品种九里香样品按上述方法提取后 ,用二极管阵列检测器进
行定性鉴别 , 样品进样后 ,分别调出与纯品保留时间一致的色谱峰 的吸收光谱图 ,并与相应纯
品的光谱图相比较 ,结果完全一致 。
按拟定方法测定了广东 、 广西 、 海南和北京所产九里香及大叶和翼叶九里香共 n 种样品 ,
结果见表 2及图2 , 3 , 4 。
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药学学报 A e tah pa rma e eu tieas un ia e1 9 9 4;9 2(1 1 ): 8 51 ~ 8 5 5
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结 果 与 讨 论
同种不同产地的九里香中上述 6种香豆精含量有较大差异 。 北京西北旺温室中栽培的样品
和南方产的样品中这 6种香豆精含量差别更大 。 说明生态环境对九里香化学成分有显著影响 。
同一产地 ,市购九里香和采集到的九里香上述 6种香豆精含量显著不同 , 说明储存时间 、 条
件 、 方法等外界条件对该药的内在质量影响较大 。
药学学报 Aeta p ha r ma u e eti ea s i n i ea 14 99;2 9( 1 1 ) :8 51~ 8 55
本实验的提取溶剂 ,在本实验的色谱条件下 ,出现溶剂峰的倒峰 , 且保留时间和样品峰接
近 ,使测定受到影响 ,用氮气将溶剂吹干 ,用甲醇溶解残渣 ,可消除溶剂峰对测定的干扰。
应用二极管阵列检测器 ,不仅能比较各组分的保留时间值 ,而且在保留时间相同的基础上
可进一步比较其吸收光谱 ,更增加了定性的可靠性 。
参 考 文 献
1 中药分册编辑委员会. 中医大辞典中药分册 . 上海科学技术出版社 , 198 2 : n .
2 侯宽昭编 . 中国种子植物科属词典 . 修订本. 北京 : 科学出版社 , 1982 , 3 19 .
3 《全国中草药汇编》编写组 . 全国中草药汇编. 上册. 北京: 人民出版社 , 1 97 5 : 18 .
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