全 文 ： Journal of Pharmaceutical Analysiswww.ywfxzz.cn 药物分析杂志
·805· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(5)
Chinese
* 新疆地方病分子生物学实验室开放课题（项目编号：XJDX0208-2013-06)
** 通信作者 Tel：13325560220； E-mail：renakasimu@vip.sina.com
第一作者 Tel：13999884368； E-mail：forever.wxm@163.com
HPLC 法同时测定新疆鼠尾草中 5个酚酸类成分的含量 *
王晓梅 1，余妍 2，王新玲 1，胡君萍 1，王小青 1，李敏 1，热娜·卡斯木 1**
（1. 新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830011；2. 69079 部队卫生室，乌鲁木齐 830013）
摘要 目的：建立HPLC 同时测定新疆鼠尾草中原儿茶醛、丹参素钠、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸的含量。
方法：采用 Phenomennex Luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以甲醇（A）-0.5%甲酸水溶液（B）
为流动相，梯度洗脱（0~10 min，20%A→ 30%A；10~20 min，30%A→ 35%A；20~30 min，35%A→ 36%A；
30~35 min，36%A→ 47%A），流速1 mL·min-1，检测波长为285 nm，柱温 40 ℃，进样量20 μL。结果：新疆
鼠尾草5个成分在各自的线性范围内（原儿茶醛0.080 96~4.048 0 μg·mL-1，丹参素钠0.803 2~40.16 μg·mL-1，
原儿茶酸 0.172 8~8.640 μg·mL-1，咖啡酸 0.166 4~8.320 μg·mL-1，迷迭香酸 0.800 8~40.40 μg·mL-1）均
呈良好的线性关系（r=0.999 8），平均加样回收率、精密度、重现性和稳定性均符合有关规定。10批样品
中 5种酚酸类成分的含量分别为原儿茶醛 0.024~0.140 mg·g-1，丹参素钠 0.676~1.940 mg·g-1，原儿茶酸
0.017~0.276 mg·g-1，咖啡酸0.032~0.264 mg·g-1，迷迭香酸0.199~6.319 mg·g-1。结论：该方法经方法学验
证，可用于新疆鼠尾草药材的质量评价。
关键词：新疆鼠尾草；新疆丹参；酚酸类成分；原儿茶醛；丹参素钠；原儿茶酸；咖啡酸；迷迭香酸；天然药
物多组分含量测定；高效液相色谱
中图分类号：R 917 文献标识码：A 文章编号：0254-1793（2016）05-0805-06
doi：10.16155/j.0254-1793.2016.05.08
Simultaneous determination of 5 salvianolic acid constituents in the
roots and rhizomes of Salvia deserta Schang by HPLC*
WANG Xiao-mei1，YU Yan2，WANG Xin-ling1，HU Jun-ping1，
WANG Xiao-qing1，LI Min1，RENA Kasimu1**
（1. College of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China；2. 69079 Force Medical Team，Urumqi 830013，China）
Abstract Objective：To establish an HPLC method for the simultaneous determination of 5 salvianolic
acid constituents，including protocatechuic aldehyde，Danshensu sodium，protocatechuic acid，caffeic
acid，and rosmarinic acid，in the roots and rhizomes of Salvia deserta Schang．Methods：Phenomennex Luna C18
column（4.6 mm×250 mm，5 μm）was adopted．The mobile phase was composed of methanol（A）and 0.5%
formic acid aqueous（B）with a gradient elution（0-10 min，20%A→ 30%A；10-20 min，30%A→ 35%A；20-
30 min，35%A→36%A；30-35 min，36%A→47%A）at the flow rate of 1.0 mL·min-1．The detection wavelength
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was 285 nm，the column temperature was 40 ℃，and the injection volume was 20 μL．Results：The standard curve
revealed a good linear relationship（r=0.999 8）over the range of 0.080 96-4.048 0 μg·mL-1 for protocatechuic
aldehyde，0.803 2-40.16 μg·mL-1 for Danshensu sodium，0.172 8-8.640 μg·mL-1 for protocatechuic acid，
0.166 4-8.320 μg·mL-1 for caffeic acid，0.800 8-40.40 μg·mL-1 for rosmarinic acid，respectively．The contents
of 5 salvianolic acid constituents were 0.024-0.140 mg·g-1 for protocatechuic aldehyde，0.676-1.940 mg·g-1
for Danshensu sodium，0.017-0.276 mg·g-1 for protocatechuic acid，0.032-0.264 mg·g-1 for caffeic acid，
0.199-6.319 mg·g-1 for rosmarinic acid，respectively．Conclusion：The established determination method，
which is rapid，sensitive，reproducible and stable，can be used for qualitative evaluation of Salvia deserta
Schang．
Keywords：Salvia deserta Schang；Xinjiangdanshen；salvianolic acid constituents；protocatechuic aldehyde；
Danshensu sodium；protocatechuic acid；caffeic acid；rosmarinic acid；multicomponent content determination of
natural medicine；HPLC
（上海）有限公司，产品标准号：JB/T 5374—1991）；
ST-02A 型粉碎机（永康市帅通工具有限公司）；KQ-
200VDB 型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有
限公司）；HH-S4 数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器
厂），离心机（上海菲恰尔分析仪器有限公司）。
1.2 试药 新疆鼠尾草药材采自新疆北疆各地，由
新疆医科大学药学院热娜·卡斯木教授鉴定为新疆
鼠尾草的根及根茎。将药材粉碎，过 40目筛。对照
品丹参素钠（批号 110855-201311）、原儿茶醛（批号
110810-200506）、原儿茶酸（批号110809-201205）、
咖啡酸（批号 110885-200102）和迷迭香酸（批号
111871-201203）购自中国食品药品检定研究院；甲
醇（美国 Fisher 公司）为色谱纯，甲酸（天津市光复
精细化工研究所）、无水乙醇（天津永成精细化工有
限公司）、甲醇（天津永成精细化工有限公司）均为分
析纯，纯净水（屈臣氏集团有限公司）。
2 方法与结果
2.1 混合对照品溶液的配制 精密称定对照品原儿
茶醛0.011 0 g，原儿茶酸0.010 8 g，咖啡酸0.010 4 g，
分别加甲醇溶解并定容至 10 mL 量瓶中，摇匀，
即得 3个成分的母液；再精密吸取原儿茶醛母液
0.23 mL，原儿茶酸母液 0.5 mL、咖啡酸溶液 0.5 mL，
分别加甲醇定容至 10 mL 量瓶中，即得原儿茶醛、原
儿茶酸、咖啡酸的对照品储备液。另精密称定对照品
丹参素钠 0.010 0 g，迷迭香酸 0.010 1 g，加甲醇溶解
并定容至 10 mL 量瓶中，摇匀，即得丹参素钠、迷迭
香酸的对照品储备液。分别吸取各储备液原儿茶醛
1.6 mL，丹参素钠 0.4 mL，咖啡酸 1.6 mL、原儿茶酸
新疆鼠尾草（Salvia deserta Schang）为唇形科
（Labiatae）鼠尾草属（Salvia L.）植物新疆鼠尾草的
根或根茎，亦称新疆丹参。新疆鼠尾草是我国鼠尾草
属植物中独特的品种，主产于我国新疆北部的荒地、
草地及林下，海拔 270~1 850 m。哈萨克斯坦、吉尔
吉斯斯坦、俄罗斯也有分布，主要为野生［1］。它在民
间主要用于清热解毒、止咳祛痰、消肿利尿等。有研
究表明，新疆鼠尾草中主要含有酚酸类、二萜醌类、
三萜类、黄酮类等多种活性成分［2-5］，而其中酚酸类
是其主要的水溶性活性成分，这类成分具有抗氧化，
抑制醛糖还原酶，抑制血管内皮细胞黏附等生物功
效［6-9］。目前，在中国药典及其他标准中并未收录此
药材，但有学者对其药材性状、显微组织及理化鉴别
做了部分研究［10-11］，也有学者对新疆鼠尾草中所含
的二萜醌类成分 6，7- 去氢罗列酮、三萜类成分熊果
酸及酚酸类成分丹酚酸 K的含量进行了研究［12-14］，
但应用HPLC 法对其中所含的多种酚酸类成分进行
同时测定还未见报道。因此，为控制药材质量，保证
用药安全，本研究以新疆鼠尾草药材中所含的酚酸类
化学成分的特性，以HPLC 分析技术对采自不同产地
的 10批新疆鼠尾草药材中原儿茶醛、丹参素钠、原儿
茶酸、咖啡酸、迷迭香酸 5种酚酸类成分的含量进行
测定，对新疆鼠尾草药材的质量进行评价，为建立科
学、完整的新疆鼠尾草药材质量标准提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相色谱仪（美国Waters 2695，Waters
2998 PDA 二极管阵列检测器）；旋转蒸发仪（上海爱
朗仪器有限公司）；电子天平（梅特勒 -托利多仪器
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1.6 mL，迷迭香酸 0.4 mL，置同一 10 mL量瓶中，加甲
醇定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备［15］ 精密称取新疆鼠尾草
药材粉末适量，加入 25倍体积的 40%乙醇溶液，
回流提取 3次，每次 1 h，过滤，合并滤液，浓缩至干，
用80%甲醇定容于10 mL量瓶中，摇匀，离心（3 000
r·min-1）2 min后，用0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤
液即得供试品溶液。
2.3 色谱条件 色谱柱：Phenomennex Luna C18
（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流 动 相：甲 醇（A）
-0.5%甲 酸 水 溶 液（B），梯 度 洗 脱（0~10 min，
20%A → 30%A；10~20 min，30%A → 35%A；20~
30 min，35%A→ 36%A；30~35 min，36%A→47%A）；
流速：1 mL·min-1；检测波长：285 nm；柱温：40 ℃；
进样量：20 μL。
2.4 系统适用性试验考察 分别精密吸取混合对
照品溶液、供试品溶液各 20 μL，按“2.3”项下色谱
条件测定，记录色谱图，结果见图 1。丹参素钠、原
儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸和迷迭香酸 5个化学成
分的保留时间分别为 5.498、6.833、8.606、11.854 和
32.196 min，本实验条件下所测的 5个成分与其相邻
色谱峰的分离度均大于 1.5，与其他组分分离完全，拖
尾因子在 0.95~1.05 之间，理论塔板数大于 3 000，色
谱系统适用性试验符合含量测定要求。
1.丹参素钠（Danshensu sodium） 2.原儿茶酸（protocatechuic acid） 3.原儿茶醛（protocatechuic aldehyde） 4.咖啡酸（caffeic acid） 5.迷迭香酸
（rosmarinic acid）
图 1 混合对照品（A）、20101030 号新疆鼠尾草提取物（B）的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixture reference substances（A）and the extract of lot No.20101030 Salvia deserta Schang（B）
2.5 线性关系考察 精密吸取的丹参素钠、原儿茶
醛、原儿茶酸、咖啡酸和迷迭香酸混合对照品溶液
0.10、0.30、0.60、1.2、2.5 和 5 mL，分别置于 5 mL 量
瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，配成不同浓度的混合
对照品溶液；按“2.3”项下色谱条件进行测定。分别
以原儿茶醛、丹参素钠、原儿茶酸、咖啡酸和迷迭香酸
的质量浓度 X（μg·mL-1）为横坐标，对应色谱峰面
积 Y为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程，见表 1。
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表 2 5个成分的加样回收率实验结果（n=3）
Tab. 2 Results of recovery test of five constituents
成分
（Component）
原有量
（original）/μg
加入量
（added）/μg
测得量
（detected）/μg
回收率
（recovery）/%
RSD/%
原儿茶醛（protocatechuic aldehyde） 1.65 1.26 2.90 99.21 2.70
1.65 1.64 3.28 99.39 3.69
1.65 1.98 3.60 98.48 1.40
丹参素钠（Danshensu sodium）
27.2 21.8 49.1 100.5 1.76
27.2 27.0 53.6 97.78 1.96
27.2 32.6 58.9 97.24 1.07
原儿茶酸（protocatechuic acid）
4.20 3.24 7.58 104.3 3.31
4.20 4.32 8.56 100.9 2.42
4.20 5.40 9.41 96.48 2.27
咖啡酸（caffeic acid）
13.2 10.4 23.7 100.1 1.91
13.2 13.0 26.6 103.1 1.66
13.2 15.6 28.2 96.15 0.93
迷迭香酸（rosmarinic acid）
307.7 252.5 567.8 103.0 1.30
307.7 303.0 607.7 99.01 1.35
307.7 363.6 664.0 97.99 0.78
2.10 样品含量测定 分别取不同产地新疆鼠尾草
药材，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3”
项下色谱条件下进行测定，根据回归方程计算样品含
量。结果见表 3。
表 1 5个成分的线性关系
Tab. 1 Results of linear equations of 5 constituents
成分（component） 标准曲线（regression equation） r 范围（linear range）/（μg·mL-1）
原儿茶醛（protocatechuic aldehyde） Y=7.85×104X-8.74×103 0.999 8 0.080 96~4.048
丹参素钠（Danshensu sodium） Y=1.12×104X-7.13×103 0.999 8 0.803 2~40.16
原儿茶酸（protocatechuic acid） Y=4.73×104X + 2.99×102 0.999 8 0.172 8~8.640
咖啡酸（caffeic acid） Y=8.73×104X-2.82×103 0.999 8 0.166 4~8.320
迷迭香酸（rosmarinic acid） Y=4.51×104X-4.92×104 0.999 8 0.800 8~40.40
2.6 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，按
“2.3”项下色谱条件连续测定 6次，结果原儿茶醛、丹
参素钠、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸峰面积的 RSD
（n=6）分别为0.58%、1.2%、0.45%、0.50%和 0.27%，
表明精密度良好。
2.7 稳定性试验 取按“2.2”项下方法制备的供试
品溶液，分别于配制后的 0、2、4、6、8、10、12、24 h
按“2.3”项下色谱条件测定原儿茶醛、丹参素钠、原
儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸的峰面积，结果相应 5个成
分峰面积的RSD（n=8）分别为 1.3%、0.71%、0.31%、
0.32%和 0.25%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.8 重复性试验 按“2.2”项下方法制备 6份供试
品溶液，按“2.3”项下色谱条件进行测定，结果样品
中原儿茶醛、丹参素钠、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸
的含量（n=6）分别为 0.027、0.774、0.054、0.177 和
3.328 mg·g-1，RSD 分别为 1.7%、2.5%、1.2%、2.3%
和 2.0%，表明本定量测定方法重复性较好。
2.9 加样回收试验 精密称定 9份新疆鼠尾适量，
分别精密加入对照品溶液适量，按“2.2”项下方法制
备 9份供试溶液，再按“2.3”项下色谱条件进行测
定，计算原儿茶醛、丹参素钠、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭
香酸的平均回收率和 RSD，结果见表 2。
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表 3 新疆不同产地药材中 5种酚酸类成分的含量测定结果（n=3）
Tab. 3 Contents of five salvianolic acids in crude drugs from different origins of Xinjiang
批号
（lot No.）
产地
（origin）
丹参素钠
（Danshensu
sodium）
原儿茶酸
（protocatechuic acid）
原儿茶醛
（protocatechuic
aldehyde）
咖啡酸
（caffeic acid）
迷迭香酸
（rosmarinic acid）
含量
（content）/
（mg·g-1）
RSD/
%
含量
（content）/
（mg·g-1）
RSD/
%
含量
（content）/
（mg·g-1）
RSD/
%
含量
（content）/
（mg·g-1）
RSD/
%
含量
（content）/
（mg·g-1）
RSD/
%
20110705 伊宁县（Yining county） 0.676 1.14 0.094 2.43 0.140 1.45 0.184 1.55 3.696 0.10
20111110 石人沟（Shirengou） 0.544 3.01 0.084 4.89 0.033 3.24 0.264 3.47 6.154 4.80
20101030 石人沟（Shirengou） 1.182 1.72 0.276 1.67 0.094 3.28 0.178 1.21 1.828 1.41
20120725 新源县（Xinyuan county） 0.689 4.61 0.503 1.53 0.051 3.24 0.032 3.73 0.199 4.50
20120727 特克斯县（Tekesi county） 1.940 3.26 0.222 4.80 0.065 1.69 0.246 1.34 2.968 1.64
20120716 霍城县（Huocheng county） 1.224 0.12 0.195 0.68 0.038 2.11 0.169 1.73 2.160 0.49
20110715 木垒县（Mulei county） 0.743 2.23 0.017 4.55 0.053 2.33 0.223 1.42 6.319 1.32
20120727 巩留县（Gongliu county） 0.756 9 2.17 0.072 0.41 0.037 3.49 0.225 0.80 5.505 0.24
20101022 仓房沟（Cangfanggou） 1.050 2.81 0.186 4.06 0.024 1.24 0.145 0.76 2.307 0.14
20120727 艾维尔沟（Aiweiergou） 0.788 2.83 0.094 2.77 0.029 1.64 0.160 3.91 3.626 0.21
3 讨论
3.1 含量测定条件的选择 本研究采用 PDA检测
器进行全波长扫描（190~450 nm），结果285 nm时 5
个酚酸类成分均有较大吸收，且杂质成分干扰少，故
选择 285 nm作为检测波长。流动相优选时分别考察
了甲醇 -水溶液、甲醇 - 磷酸水溶液、乙腈 -甲酸水
溶液、甲醇 -甲酸水溶液等流动相系统，最终选用甲
醇 -0.5%甲酸水溶液为流动相。样品峰分离度好，
故最终确定此流动相。
3.2 含量测定结果分析 在进行化学成分含量测定
时，原儿茶醛、丹参素钠、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸
5种酚酸类成分在药材中的含量表现出了较大的差
异。从样品的测定结果来看，这 5种成分中，新疆鼠
尾草药材中迷迭香酸和咖啡酸的含量较高，其他 3种
成分的含量甚微；另外，从 10批药材测定结果也可
以看出不同产地的药材中这几种成分的含量相差较
大，其中新疆木垒县和乌鲁木齐县石人沟的 5种酚酸
类成分总含量相对较高，说明不同的采集地对新疆鼠
尾草中酚酸类成分含量影响较大，造成差异性的原因
可能是产地不同，但其是否具有规律性有待进一步深
入研究。
3.3 小结 本研究建立的方法可同时测定 5种酚酸
类成分，不仅简单、快速，而且适用面广泛，可用于新
疆鼠尾草药材中酚酸类成分的含量测定，为新疆鼠尾
草药材质量综合评价提供了准确、快速的定量分析方
法，为新疆鼠尾草药材的质量控制提供依据。
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（本文于 2015 年 4月 7日收到）