全 文 ：［收稿日期］ 20131025(019)
［基金项目］ 国家科技部“十一五”支撑计划项目(2007BAI30B02-2)
［第一作者］ 王晓梅，在读博士，从事天然药物活性成分的研究，Tel:13999884368，E-mail:forever． wxm@ 163. com
［通讯作者］ * 热娜·卡斯木，教授，博士生导师，E-mail:renakasimu@ vip． sina． com
新疆鼠尾草总酚酸的体外抗氧化活性
王晓梅1，王小青1，王新玲1，胡君萍1，热娜·卡斯木1* ，樊珍珍1，王慧1
( 新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830011)
［摘要］ 目的:研究新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物的体外抗氧化活性。方法:以 40%乙醇提取和大孔吸附树脂纯化
分别制备得到新疆鼠尾草总酚酸的提取物和纯化物，以维生素 C(VC)为对照，通过体外化学模拟方法测定新疆鼠尾草总酚酸
提取物和纯化物的还原能力、对·DPPH自由基、羟基自由基(·OH)和超氧自由基(O －2·)的清除能力，研究新疆鼠尾草总酚酸
的抗氧化活性。结果:新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物清除·DPPH自由基的作用50%清除浓度(IC50，分别为 0. 029，0. 039
g·L －1)弱于 VC(IC500. 018 g·L
－1) ;对羟基自由基(·OH)的清除作用(IC50分别为 0. 212，0. 165 g·L
－1)强于 VC(IC500. 356 g·
L －1);对超氧自由基(O －2·)的清除能力(IC50分别为 3. 735，1. 913 g·L
－1)弱于 VC(IC500. 390 g·L
－1)，其纯化物还具有一定的
还原能力。结论:新疆鼠尾草总酚酸具有较强的抗氧化作用。
［关键词］ 新疆鼠尾草;总酚酸;抗氧化
［中图分类号］ Ｒ285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)09-0162-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfix． 2014090162
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /doi /10． 13422 / j． cnki． syfjx． 000057． html
［网络出版时间］ 2014-02-25 13:37
Antioxidant Activities of Total Salvianolic Acid from Salvia deserta in vitro
WANG Xiao-mei1，WANG Xiao-qing1，WANG Xin-lin1，HU Jun-ping1，
ＲENA·kasimu1* ，FAN Zhen-zhen1，WANG Hui1
(Pharmacy College，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China)
［Abstract］ Objective:To determine the antioxidant activity of the total salvianolic acid from Salvia
deserta Schang． Method:The extraction and purification of the salvianolic acid were prepared by using 40%
ethanol extracted and macroporous adsorption resin purified respectively． The antioxidant activities of the extraction
and purification of the total salvianolic acid were determined by·DPPH，·OH，O －2 ·scavenging experiments and
Fe3 + reduction capacity experiments in vitro． Ｒesults were compared with that of positive control vitamin C (VC)．
Ｒesult:The·DPPH scavenging assay of the extraction and purification of the total salvianolic acid(IC50 0. 029，
0. 039 g·L －1)were weaker than VC (IC50 0. 018 g·L
－1)． The ·OH scavenging assay(IC50 0. 212，0. 165 g·L
－1)
were higer than VC (IC50 0. 356 g·L
－1)． The O －2 ·scavenging assay(IC50 3. 735，1. 913 g·L
－1)were weaker
than VC (IC50 0. 390 g·L
－1)． The purificiation also has a certain reduction capacity． Conclusion:The total
salvianolic acid from S． deserta possessed high antioxidant activity．
［Key words］ Salvia deserta;the total salvianolic acid;antioxidant activity
新疆鼠尾草为唇形科植物，因分布在新疆戈壁
荒原而得名，亦称新疆丹参(Salvia deserta Shang 的
根或根茎) ，是我国鼠尾草属植物中独特的品种，在
我国新疆天山山脉和中亚诸国有广泛的分布［1］。
·261·
第 20 卷第 9 期
2014 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 9
May，2014
新疆鼠尾草为多年生草本植物。虽该属植物大多以
根入药，而新疆鼠尾草在民间以全草用药，用于清热
解毒、止咳祛痰、消肿利尿。文献报道，新疆鼠尾草
中的化学成分主要是:酚酸类、二萜醌类、黄酮类、三
萜类［2-4］等。其中酚酸类成分是人们一直关注的天
然自由基清除剂，它们结构中大多具有数目不等的
酚羟基，具有较强的氧化作用，因此在医药、食品领
域具有广阔的应用前景［5-7］。在前期研究中，笔者
采用正交实验及大孔吸附树脂纯化法优化了新疆鼠
尾草总酚酸的最佳提取和纯化工艺，制备得到总酚
酸的提取物和纯化物［8-9］。因此为全面考察新疆鼠
尾草的体外抗氧化活性，本文采用体外化学模拟的
方法研究新疆鼠尾草总酚酸提取物及大孔吸附树脂
纯化物的抗氧化活性，为进一步开发新疆鼠尾草药
材提供一定的理论依据。
1 材料
1. 1 药材 新疆鼠尾草药材 (Salvia deserta
Schang)于 2010 年采收于新疆乌鲁木齐仓房沟，品
种由新疆医科大学药学院热娜·卡斯木教授鉴定。
1. 2 试药 DPPH(Sigma，批号 20070811)，抗坏血
酸(VC，南京化学试剂有限公司，批号 20080317)，
甲醇 (天津市致远化学试剂有限公司，批号
20100706)，铁氰化钾(郑州市德众化学试剂厂，批
号 20080507)，邻苯三酚(郑州市德众化学试剂厂，
批号 20060221)，过氧化氢(郑州市德众化学试剂
厂，批号 20090714)，硫酸亚铁(郑州市德众化学试
剂厂，批号 20040420)，邻菲啰啉(郑州市德众化学
试剂厂，批号 20030629)。上述试剂均为分析纯。
1. 3 仪器 T6 型新世纪紫外-可见分光光度计(北
京普析通用仪器有限责任公司)，AB104-N 型电子
分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，
TDL-5A 型离心机(上海菲恰尔分析仪器有限公
司)。
2 方法
2. 1 样品的制备
2. 1. 1 新疆鼠尾草总酚酸提取物的制备［8］ 称取
一定量的新疆鼠尾草药材，以 25 倍量的 40%乙醇
回流提取 3 次，每次 1 h，合并提取液，浓缩得 40%
乙醇提取物。测定时，取 0. 5 g 提取物浸膏加甲醇
定容置 25 mL量瓶中，得 5 g·L －1样品溶液。
2. 1. 2 新疆鼠尾草总酚酸纯化物的制备［9］ 将
40%乙醇提取物按文献方法，制备得到总酚酸大孔
树脂纯化物浸膏。测定时，取 0. 05 g 纯化物浸膏加
甲醇定容置 10 mL量瓶中，得 5 g·L －1样品溶液。
2. 1. 3 VC 储备液的制备 精密称取 5. 08 mg 的
VC对照品，置于 10 mL 的量瓶，并用甲醇定容至
刻度。
系列浓度的制备 分别吸取 0. 1，0. 2，0. ，0. 4，
0. 6，0. 8，0. 9 mL的 VC 储备液至 10 mL 量瓶，分别
配成 0. 005，0. 010，0. 015，0. 020，0. 030，0. 040，
0. 045 g·L －1的系列浓度。
2. 2 对·DPPH的清除作用［10-11］
2. 2. 1 DPPH溶液的配制 称取 4. 06 mg 的 DPPH
到 100 mL 的量瓶中，用甲醇溶解并定容，配成
0. 004%的溶液，避光保存(0 ～ 4 ℃)。
2. 2. 2 清除 DPPH 自由基能力的测定 用 UV 法
在 200 ～ 800 nm处扫描，得到 DPPH 原液的最大吸
收波长在 517 nm。分别吸取 0. 004% DPPH 甲醇溶
液 4 mL各加 VC系列溶液 1 mL，30 ℃水浴 30 min，
在 517 nm 处测定吸光度(Ai);以 1 mL 甲醇代替
1 mL样品溶液则测得吸光度(A0);以 4 mL 甲醇代
替 4 mL DPPH 则测得吸光度值(Aj)，每组测定 3
次。按照公式计算清除率，然后按照上述方法测定
样品。清除率公式如下:
清除率 =(1 －
Ai － Aj
A0
)× 100%
2. 3 对羟基自由基(·OH)的清除作用［12］ 取1 mL
浓度为 0. 75 mmol·L －1的邻二氮菲无水乙醇(邻菲啰
啉)溶液于试管中，依次加入 2 mL浓度为 0. 2 mol·L －1
的 pH 7. 40 的磷酸盐缓冲溶液和 1 mL蒸馏水，充分
混匀后，加入 1 mL浓度为 0. 75 mmol·L －1的硫酸亚
铁溶液(FeSO4)混匀，再加入 1 mL 0. 01%的双氧水
(H2O2)，于 37 ℃水浴 60 min，在 510 nm 处测其吸
光值，所测得的数据为损伤管的吸光值 A损;以 1 mL
样品液代替 1 mL蒸馏水则测得样品的吸光值 A样;
用 1 mL蒸馏水代替 1 mL 双氧水测得的吸光值为
A未，重复 3 次，计算清除率，清除率公式如下:
清除率 =(A样 － A损)/(A末 － A损)× 100%
2. 4 清除超氧自由基(O －2·，邻苯三酚法)
［13］ 取 9
mL 0. 01 mol·L －1磷酸盐缓冲液(pH 8. 2)与 1 mL供
试品溶液混合，25 ℃恒温水浴 15 min。取 3 mL 混
合液，加入 0. 1 mL 45 mmol·L －1邻苯三酚，摇匀，在
第 4 分钟加入 10 mol·L －1盐酸 1 滴终止反应，于
325 nm处测定样品吸光值 A1，同时分别测定不加邻
苯三酚的样品液和磷酸盐混合液的吸光值 A2 和以
1 mL溶剂代替供试品液的磷酸盐和邻苯三酚混合
液的 A3，重复 3 次，O
－
2·清除率按以下公式计算:
清除率 =［1 －(A1 － A2)/A3］× 100%
·361·
王晓梅，等:新疆鼠尾草总酚酸的体外抗氧化活性
2. 5 还原能力的测定［14］ 取 2. 5 mL 样品于试管
中，依次加入 2. 5 mL 0. 2 mol·L －1磷酸盐缓冲溶液
(PBS，pH 6. 6)和 2. 5 mL 1%六氰合铁酸钾溶液
［K3Fe(CN)6］，于 50 ℃水浴中保温 20 min 后快速
冷却，再加入 2. 5 mL 10% 醋酸溶液，以 3 000 r·
min －1的转速离心 10 min，取上清液 2. 5 mL，依次加
入 2. 5 mL 蒸馏水，0. 5 mL 0. 1% 三氯化铁溶液
(FeCl3)，充分混匀，静置 10 min 后，在 700 nm 下测
定其 A(以蒸馏水作参比溶液)，A越高还原力越强。
3 结果
3. 1 新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物清除
·DPPH的能力 在·DPPH 的反应体系中，各样品对
·DPPH 的清除能力如图1所示。可以看出，新疆鼠
尾草总酚酸提取物、纯化物和 VC在实验浓度范围内
对·DPPH的清除能力呈良好的量效关系，即随着浓
度的增加，清除率也逐渐增加，而新疆鼠尾草总酚酸
提取物、纯化物对·DPPH 的清除能力(IC50分别为
0. 029，0. 039 g·L －1)均弱于 VC(IC500. 018 g·L
－1)，但
都表现出一定的清除作用，总酚酸提取物对 DPPH
自由基的清除能力强于总酚酸的纯化物。
图 1 总酚酸提取物和纯化物对·DPPH的清除能力
3. 2 新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物清除·OH
的能力 新疆鼠尾草总酚酸提取物、纯化物和 VC
对羟基自由基·OH 的清除作用见图2。可以看出，
新疆鼠尾草总酚酸提取物、纯化物和 VC 在实验浓
度范围内对·OH 的清除能力呈良好的量效关系，即
随着浓度的增加，清除率也逐渐增加，而新疆鼠尾草
总酚酸提取物、纯化物对·OH 的清除能力(IC50分别
为 0. 212，0. 165 g·L －1)均强于 VC(IC50 0. 356 g·
L －1)，尤其是纯化物，其清除作用较强。
3. 3 新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物清除超氧
自由基(O －2·)的能力 新疆鼠尾草总酚酸提取物、
纯化物和 VC对超氧自由基(O －2·)的清除作用见图
图 2 总酚酸提取物和纯化物对·OH的清除能力
3。可以看出，新疆鼠尾草总酚酸提取物、纯化物和
VC在实验浓度范围内对超氧自由基(O －2·)的清除
能力呈良好的量效关系，即随着浓度的增加，清除率
也逐渐增加，而新疆鼠尾草总酚酸提取物、纯化物对
超氧自由基(O －2·)的清除能力(IC50分别为 3. 735，
1. 913 g·L －1)均弱于 VC(IC500. 390 g·L
－1)，但比较
提取物和纯化物可以看出，纯化物的清除作用较强，
说明当总酚酸纯化后，其对超氧自由基(O －2·)的清
除能力增强。
图 3 总酚酸提取物和纯化物对 O －2·的清除能力
3. 4 新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物还原能力
的测定 新疆鼠尾草总酚酸提取物、纯化物和 VC
的还原能力见图 4。可以看出，新疆鼠尾草总酚酸
纯化物和 VC在试验浓度范围的还原能力呈良好的
量-效关系，即随着浓度的增加，还原能力也逐渐增
加，但其作用弱于 VC，而新疆鼠尾草总酚酸提取物
的还原能力比较弱，说明当总酚酸纯化后，其还原能
力增强。
4 结论
自由基产生过多或者清除过慢，就会开始攻击生
命大分子物质及细胞器，在分子水平、细胞水平乃至
组织器官水平上造成种种损坏，加速衰老并可诱发多
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 9
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图 4 总酚酸提取物和纯化物的还原能力
种疾病［15］。·DPPH，·OH，O －2·即为常见的几种自由
基。·DPPH是一种很稳定的以氮为中心的自由基，常
用来评估抗氧化物的供氢能力;·OH是目前所知活性
氧自由基中对生物体毒性最强、危害最大的一种自由
基，减少此自由基，可以预防心血管疾病及癌症的发
生;O －2·为人体产生的活性氧自由基，能引发体内脂
质过氧化，加快机体的衰老过程。要降低自由基对机
体的损伤，除了依靠体内清除系统外，寻找与开发外
源性自由基清除剂十分必要。酚酸类化合物结构上
含有多个游离酚羟基，具有很强的提供氢质子的能
力，从而阻断自由基链式反应，并能通过清除体系中
产生的自由基消除对 DNA的破坏作用。而笔者通过
体外实验发现，新疆鼠尾草总酚酸提取物、纯化物均
具有较强清除·DPPH，·OH，O －2·等自由基的能力，而
且纯化之后还具有一定的还原能力，说明新疆鼠尾草
总酚酸具有较强的抗氧化作用，尤其是纯化物的作用
明显强于提取物，从而可以推断当新疆鼠尾草的酚酸
类成分含量增高，则其抗氧化活性也就较强。目前，
新疆鼠尾草总酚酸的抗氧化作用的研究还不够深入，
其抗氧化作用的机制还不明确，因此还有待于进一步
深入的研究。
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［责任编辑 聂淑琴］
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