全 文 ：第 5 2卷 第 6期
23 0 0年 1 2月
三峡大学学报 (自然科学版 )
J
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fC hi na T he e rGo rg e s U ni v
.
( Na tu a r lS e i e ne e s )
V
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5 2 N
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6
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,
2 0 0 3
开 口箭中凿体皂贰元含量的测定
黄 丽 廖全斌 邹 冲 阮 浩 聂丹丹 胡超林 胡燕亮
(三峡 大学 化学与生命科学学院 , 湖北 宜 昌 4 4 3 0 0 3)
摘要 : 利用香草醛一高氯酸作为显色剂 ,使用可见分光光度法测定 了神农架民间习用 药物开 口 箭中
凿体皂式元 的含量 .
关键词 : 开 口 箭 ; 皂式元 ; 比色法
中图分类号 : R 2 8 4 文献标识码 : A 文章编号 : 1 0 0 7一 70 8 1 ( 2 0 0 3 ) 0 6一 0 5 6 2一 0 3
D e t e r m i n a t i o n o f S t e
r o i d a l
H u a n g L i L i
a o Q u a n b i n Z o u K u n
( C o l l e g e o f C h e m i s t r y a n d L i f e S e i e n e e s
S a P o g e n i n C o n t e n t i n T
.
C h i n e n s i s B a k
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a n H u C h a o l i n H u Y a n li a n g
C h i n a T h r e e G o r g e s U n iv e r s it y
, Y i e h a n g 4 4 3 0 0 3
,
C h i n a )
A b s t r a e t T h i s p a p e r d e s e
r i b e s t h e e o n t e n t d e t e r m i n a t i o n o f t h e s t e r o id a l s a p o g e n i n i n T
.
C h i n e n s i s B a k
.
,
w h ie h 15 h a b i t u a l l y u s e d a s a n a t i v e f o l k m e d ie i n e i n s h e n n o n gj i a D i s t r i e t o f H u b e i P r o v i n e e
.
V a n i l l ie a ld e h y d e
-
p e r e h l o r i e 15 u s e d a s a e h r o m o g e n i e a g e n t ; a n d v i s ib l e s P e e t r o p h o t o m e t r y 15 u s e d f o r e o n t e n t d e t e r m i n a t i o n
.
K e y w o r d s T
.
C h i n
e n s i s B a k
.
; s t e r o id a l s a p o g e n i n ; e o l o r im e t r y
开 口箭 ( T u p i s r r a 。 h i n e n s i 、 B a k ) 为百合科开 口
箭属植物 l[ 一 4」 ,开 口 箭属植物在《拉汉药用植物名称
和检索手册 》中记载有 12 种 ,绝大多数在 民间作为习
用药使用 . 开 口箭原植物又名万年青 、 开喉箭 , 为多
年生常绿草本 ,其根茎圆柱形 、 节明显 , 以其根状茎人
药 ,作为药用又名岩七 、 竹根七 、 竹根参 、 竹节七 、 牛尾
七等 . 医学古籍记载 ,开 口箭味甘微苦 ,性寒 , 主治劳
热咳嗽 、 跌打损伤 、 风湿痹痛 、 月经不调等症 .
咽喉炎症由许多综合因素所引起 , 各种咽喉炎症
在我国为常见病 、 高发病 , 目前 医药市场上常见 的各
种天然清咽利喉制剂均存在一个较大的缺点 , 即作用
时间短 、 见效慢 . 开 口 箭作为神农架林 区 民间药 , 用
于清咽利喉在湖北西部民间已有几百年历史 , 其显著
特点是见效快 ,作用时间较长 ,药效稳定 , 在该地区享
有极高声誉 , 因此对开 口箭的药学基础进行研究具有
重大的经济和社会价值〔`〕 .
在我们的预实验过程 中发现它含有相 当量的街
体皂贰 , 而许多街体皂贰及其代谢产物在体内具有较
强的抗炎活性和其他生理 、 药理活性 . 由于幽体抗炎
药在临床上具有广泛的应用 , 对相关种类的街体皂贰
及幽体皂贰元已 有大量研究 , 如替告 、 薯预 、 万年青
等 ,但对开 口箭 中所含街体皂贰及皂贰元 , 以及所含
成分与活性相关性的研究均未见报道圈 .
本课题 旨在利用现代物理化学手段分离提纯开
口箭化学成分并研究这些成分的结构特性 ,评价其药
理活性和安全性 , 为将开 口箭开发为临床新药打下基
础 . 本实验通过重量法 、 比色法测定 了开 口箭皂贰元
的含量 , 为进一步开发开 口箭皂贰及皂贰元提供科学
依据 ,
1 材 料
1
.
1 样品
开 口箭根茎于 2 0 0 2 年夏 、 秋两季采挖 自湖北西
部神农架林区 , 除去须根 , 洗净晒干 , 塑料袋封装 , 药
物粉碎机将其粉碎备用 . 开口箭原植 物标本于 2 0 0 2
收稿 日期 ; 2 0 0 2一 1 2一 10
基金项 目 : 神农架林 区政府合作项 目 (合同 号 S H D Zo 02 2”
作者简介 : 黄 丽 ( 19 8 2一 ) , 女 ,生物工程专业 2 0。。 级本科生 .
第 2 5卷 第 6 期 黄 丽等 开 口箭中幽体皂贰元含量的测定 6 5 3
年 7月采 自同一地区 , 经三峡大学化学与生命科学学
院陈发菊副教授鉴定为 T . C hi 二 sn i 、 B a k . , 植物标
本现保存于三峡大学化学与生命科学学院植物标本
室 (编号 : 2 0 0 2 Z W O7 4 0 8 ) .
1
.
2 试剂及材料
乙醚 、 甲醇 、 95 % 乙 醇 、 石油 醚 、 碳酸钠 、 香草醛 、
高氯 酸等从本地化 学试 剂公 司购得 , 均 为分 析纯 ,
A挂8 树脂为天津南开大学化工厂产品 .
1
.
3 显色剂的配制
5 0 0 m g 香草醛溶于 10 m L 冰醋酸配制成 5%香
草醛溶液 ,使用前新鲜配置〔71 .
1
.
4 仪器
日本岛津 U V 一 2 2 1 0 型可见分光光度计 .
2 实验方法
2
.
1 开口箭皂贰的制备 [’]
取干燥开 口箭粉末 2 0 . 0 9 , 置于 1 0 0 0 m L 三颈
瓶中 , 3 0 m L 乙醚 38 ℃水浴 回流 Z h , 残渣分 3 次用
3 0 0 m L 甲醇 70 ℃水浴 回流提取 2 h . 回流液 趁热抽
滤 ,滤液合并 ,减压浓缩至小体积 . 以一倍量蒸馏水
稀释 ,用 甲醇定容至 1 0 . 0 m L ,取 30 . 0 m L稀释液进
行大孔吸附树脂柱层分离 , 先以 30 0 m L 蒸馏水洗脱 ,
1 5 0 m L Z。% 乙醇洗脱 , 70 % 乙醇洗脱 ,分别收集洗脱
液 . 减压浓缩 70 % 乙醇洗脱液至干 , 甲醇溶解 , 以约
1 ` 15 体积 比逐滴加人乙醚 中 , 边加边搅拌 , 静置 , 抽
滤 , 乙醚洗涤滤渣 , 滤渣再用 甲醇溶解 , 乙 醚沉淀 , 如
此反复 3 次 , 干燥沉淀物得 总皂 贰 7 . 32 9 (含量 12 .
2% )
,
M o l i s h 反应及 L i e b e r m a n B u e h a r d 反应显示产
品呈街体皂贰阳性反应 .
2
.
2 皂贰元标准品制备
取约 2 9 皂贰用 70 % 乙 醇溶解 , 加人 6 . 0 m ol / L
H C I
, 圆底烧瓶内回流加热 Z h , 饱和 N a Z C O 3 溶液调
p H 值至中性 ,减压回收乙醇 , 石油醚萃取 中性溶液 ,
S X 2 0 m L
,合并萃取液 , 回收溶剂得皂贰元 .
2
.
3 比色法测定开口箭中皂贰元的含量
2
.
3
.
1 样品溶液制备
取上述稀释溶液 2 . 0 0 m L 置 圆底 烧瓶中 , 加 3
m ol / L 盐酸溶液至 20 m L ,加热回流水解 Z h ,冷却后
以饱和 N a Z CO 3 溶液中和 , 石油醚萃取 5 次 , 每次 20
m L
, 合并石油醚液 , 水洗 3 次 , 回收石油醚至干 , 加氯
仿适量溶解 ,定量转移至 1 0 . 0 0 m L 棕色容量瓶中 , 用
氯仿定容至 1 0 . 0 m L ,摇匀 , 备用 .
2
.
3
.
2 皂贰元标准溶液制备
精确称取 124 . 0 m g 皂贰元用氯仿定容至 10 . 0
m L
,浓度为 1 2 . 4 m g / m .-l
2
.
3
.
3 吸收波长
取 0 . 20 m L 皂贰元标准溶液 , 置 10 . 0 m L 容量
瓶 中 ,挥干溶剂 ,准确加人 0 . 20 m L S%香草醛溶液和
0
.
8 0 m L 高氯酸溶液 , 70 OC 水浴保温 20 m in , 并不断
振荡 , 迅 速冷却后 , 用 冰 H A C 稀释到刻 度 , 摇匀 备
用 ,另配试剂空白液备用 . 在 2 0 0一 6 5 0 n m 波长间测
定 U V 吸收谱 ,其最大吸收波长为 5 4 7 n m 、 4 5 5 n m .
2
.
3
.
4 标准曲线
精密吸取 开 口 箭皂贰元 标准溶 液 0 . 20 , 0 . 40 ,
0
·
6 0
,
0
·
8 0
,
1
.
0 0 m L
,置 1 0 . 0 0 m L 容量瓶 中 ,挥尽溶
剂 ,分别精密加人 5肠香草醛溶液 0 . 20 m L 和高氯酸
0
.
80 m L
, 置 70 ℃水浴上不断振荡保温 20 m in , 迅速
冷却 , 加冰 H A C 稀释至刻度 , 摇均备用 . 以 显色剂
加冰 H A C 至刻度的溶液为空 白 , 在 2 个 久m 。 、处分别
测定吸收度 ,在 5 4 7 n m 处所得标准曲线较好 , 故选择
5 4 7 n m 处测定样品吸光度 , 其标准曲线见图 1 .
4
.
0 0 0 0
3
.
5 0 0 0
3
.
0 0 0 0
2
.
5 0 0 0
2
一
0 0 0 0
1
.
5 0 0 0
1
,
00 0 0
0
.
5 00 0
0
.
0 00 0
皂贰元在 5 4 7 m m处的
标准曲线
0
.
0 0
.
2 0
.
4 0
.
6 0
.
8 1
`
D 1
.
2 1
.
4
株了m L
皂试元在4 5 m m处的4
.
0 0 0 0
3
.
50 0 0
3 0 0 0 0
2 50 0 0
2
.
00 0 0
1
.
5 0 0 0
1
.
0 0 0 0
0
一
5 0 0 0
0
.
0 0 0 0
一
2 1
.
4
毛怡了m L
图 1 开 口箭菌体皂贰元标准曲线
2
.
3
.
5 样品的测定
吸取上述供试液 0 . 50 m L , 置 10 . 0 m L 容量瓶
中 ,挥尽溶剂 , 分别精密加人显 色剂 (用 量同上 ) , 置
70 ℃水浴上不断振摇 ,保温 20 m in ,迅速冷却 , 加冰醋
酸稀释至刻度 ,摇均备用 . 在 漏 a 、 ~ 5 4 7 n m 处测定 吸
收度 .
3 结 果
3
.
1 标准曲线
使用 5%香草醛溶液和高氯酸溶液作为比色剂
6 5 4三 峡 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 )2 3 0 0年 2 1月
分光光度法测定开 口箭皂贰元的含量 ,标准曲线的线
形关系良好 .
在 4 5 5 n m 处测定时 , 得到的线性 回归方程 为 :
y 一 3 . 7 17 l x 一 0 . 0 8 0 4 ,式中 y 为吸收度 , x 代表样品
中开 口箭皂贰元的含量 ,其相关系数 r 一 0 . 9 4 6 .
在 5 4 7 n m 处测定时 , 得到的线性 回归方程为 :
夕= 2 . 6 1 2 2 x + 0 . 0 5 7 1 ,相关 系数 r = 0 . 9 9 9 8 ,其线
性关系明显好于在 4 5 5 n m 处测定的结果 .
表 1 标准溶液和样品溶液吸光度
标准溶液体积
/m L
5 4 7 n m 处 4 5 5 n m 处
0
.
2 0
0
.
4 0
0
.
6 0
0
.
8 0
1
.
0 0
样品
样 品中皂贰元含量
/ ( m g
·
m L 一 ` )
3
.
2 样品测定结果值
开 口 箭 样 品溶液 在 5 4 7
1
.
2 5 0 4 ,其含量为 0 . 5 6 6% .
吸光度
0
.
5 9 8 1
1
.
0 8 5 1
1
.
6 1 9 7
2
.
1 3 1 7
2
.
6 8 7 0
1
.
2 5 0 4
吸光度
0
.
7 4 7 0
1
.
3 8 7 0
2
.
0 7 6 2
2
.
7 6 3 4
3
.
7 7 5 9
1 5 5 1 2
作为街体抗炎药原料的黄姜干燥根茎中皂素含量一
般也不超过 10 % , 通过进一步研究两者结构和功能
的相关性 ,可为开 口箭的深度开发提供科学依据 . 另
外 ,一般含街体皂贰类的中药对咽炎的治疗作用并不
突出 ,而开 口箭对于咽喉炎的治疗作用已经大量民间
临床应用所证实 , 这说明开 口箭皂贰中有部分成分结
构特殊 , 或含有其他抗炎成分 , 本实验室正在对开 口
箭皂贰结构与治疗咽喉炎的相关性进行研究 .
(致谢 : 本课题是在神农架林 区科技局横向课题 、
三峡大 学团委和三峡大 学化学与 生命科学学院 大学
生科技创新基金资助 下完成的 , 实验过程 中得到了化
生学院 实验 中心 老师 的大力 支持 ,在此一并致谢 ! )
参考文献 :
刁J」1,自一.L厂
5
.
6 6 4 5
.
4 4 3
, .fJ lJ一IJ,口山任亡érL一I11.J
n m 处 测 得 吸光 度 为
4 讨 论
本实验利用比色法测定 了开 口箭根茎中山体皂
贰元的含量 ,但在制备开 口箭皂贰过程中发现 , 其皂
贰含量较高 , 约为 12 . 2% , 目前测得其皂贰元含量仅
为其理论量的 1%一 6%左右 , 表 明开 口 箭皂贰贰元
的结构多样性 ,或 /和开 口箭皂贰水解的难度 6j[ .
本实验初步表明开 口箭皂贰含量较高 , 而广泛用
瞿士辉 . 土家族药开 口箭漱 口 液临床应用 治疗咽 喉炎
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〔责任编辑 周文凯〕
刁J,J Iōb行Ir.Le