全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第12期
收稿日期 ： 2013-06-25
基金项目 ：国家自然科学基金项目（41240041），广东省科技厅国际合作项目（2012B050600029）
作者简介 ：黄瑜，男，硕士，研究方向 ：水产动物病害防治 ；E-mail ：472604742@qq.com
通讯作者 ：鲁义善，男，博士，硕士生导师，研究方向 ：水产动物免疫学及病害控制 ；E-mail ：fishdis@163.com
红笛鲷 T 淋巴细胞酪氨酸激酶的原核表达及
多克隆抗体制备
黄瑜1，2  张雪利1，2  蔡佳1，2  简纪常1，2  吴灶和2，3  
鲁义善1，2  樊云霞1，2 
（1. 广东海洋大学水产学院，湛江 524088 ；2. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 广东省教育厅水产经济动物病害控制
重点实验室，湛江 524088 ；3. 仲恺农业工程学院，广州 510225）
摘 要 ： 为研究红笛鲷（Lutjanus sanguineus）T 淋巴细胞酪氨酸激酶（Lymphocyte cell kinase，LCK）蛋白在机体中的组织分
布情况，克隆出红笛鲷 lck（LS-lck）基因序列，经酶切、连接等步骤，构建重组质粒 pET-28a-LS-LCK，再将其转入大肠杆菌 BL21
（DE3）菌株后进行 IPTG 诱导表达。通过表达条件的优化，重组蛋白在 37℃、0.03 mmol/L IPTG 条件下诱导 4 h 后获得最大表达量，
且主要以包涵体形式存在。Western blot 检测重组蛋白可与鼠抗 His-tag 单克隆抗体发生特异性结合，表明为目的蛋白。利用纯化
后的 rLS-LCK 重组蛋白免疫小鼠，获得了 1∶40 000 高效价的抗血清，Western blot 分析显示，融合蛋白能被小鼠的阳性血清识别，
说明 rLS-LCK 融合蛋白具有较好的免疫反应性和免疫原性。
关键词 ： 红笛鲷 lck 基因 原核表达 Western blot 分析 抗原性分析
Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of
Lymphocyte Cell Kinase in Red Snapper（Lutjanus sanguineus）
Huang Yu1，2 Zhang Xueli1，2 Cai Jia1，2 Jian Jichang1，2 Wu Zaohe2，3
Lu Yishan1，2 Fan Yunxia1，2
（1. Fisheries College of Guangdong Ocean University，Zhanjiang 524088 ；2. Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology
and Epidemiology for Aquatic Economic Animals，Key Laboratory of Diseases Controlling for Aquatic Economic Animals of Guangdong
Higher Education Institutions，Zhanjiang 524088 ；3. Zhongkai University of Agriculture and Engineering，Guangzhou 510225）
Abstract:  To investigate the distribution of Lymphocyte cell kinase（LCK）protein in the Lutjanus sanguineus tissues, the red snapper
lck（LS-lck）gene sequences was cloned, and the recombinant plasmid pET-28a-LS-LCK was constructed, which was transferred into E. coli
BL21（DE3）strain for translation into protein by IPTG induction. Through the optimization of expression conditions, the recombinant protein
obtains the maximum expression level when the cells were induced at 37℃ in 0.1 mol/L of IPTG for 4 hours. The expected protein was mainly
detected in the insoluble fraction of E. coli cell lysates. Western blot analysis showed that the recombinant protein could be combined with mouse
anti-His-Tag Mab, so the expression protein was definitely confirmed as the target protein. Mice were immunized with rLS-LCK recombinant
protein to produce antiserum whose titer is 1∶40 000. Western blot analysis showed that the fusion protein can be recognized by the positive
serum of mice. The result illustrated that the rLS-LCK fusion protein has good immunoreactivity and immunogenicity.
Key words:  Lutjanus sanguineus Lck gene Prokaryotic expression Western blot analysis Antigenicity analysis
红笛鲷是一种名贵的海水鱼类，具有重要的经
济价值和食用价值。然而，由病毒、细菌和寄生虫
引起的疾病爆发，给水产养殖业带来了严重的经济
损失。目前，对于鱼病防治的方式主要有以下几种：
一是通过改善水质等环境因素来减少鱼病发生的概
率 ；二是通过改善鱼体自身的免疫力来抵御病原菌
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第12期114
侵袭。对鱼类免疫因子的研究可为全面理解鱼类免
疫系统组成及机制提供关键依据，而这方面的相关
报道主要见于河豚［1］、大西洋鲑［2］、红鳍东方鲀［3］
及斑马鱼［4］等物种，对红笛鲷免疫系统的研究非常
少，因此红笛鲷相关的免疫学研究意义重大。
T 淋巴细胞酪氨酸激酶（Lymphocyte cell kinase，
LCK）在介导 T 细胞免疫反应中起着关键性作用［5］，
它是非受体酪氨酸激酶 Src 家族成员之一［1，6］。当
机体受到外源物质侵染后，LCK 是 T 淋巴细胞受体
（TCR）下游首个被激活的信号分子［7］，LCK 会使在
T 细胞受体复合体 CD3 和 TCRζ 链的尾巴处的基于
免疫受体酪氨酸活化基序（ITAMs）磷酸化，这些
磷酸化的 ITAMs 对其它激酶有高亲和力的位点，从
而激活各种激酶参与信号转递过程。LCK 也能与白
细胞介素 2 受体（IL-2R）结合，参与 T 淋巴细胞抗
原 - 受体信号传递过程［8］，LCK 在整个 T 细胞发育、
分化、存活、增殖和发挥效应的过程中也发挥重要
的生物学作用［9-13］。
本研究通过红笛鲷 lck 基因的原核表达、条件
优化、产物纯化和多克隆抗体制备等，旨为深入研
究 LCK 蛋白在机体免疫反应中的功能奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验用鱼、质粒和菌种 试验用红笛鲷采集
自湛江港某鱼排，克隆载体 pMD-18T Vector 购自
TaKaRa 公 司，Eschericia coli DH5α 和 BL21（DE3）
菌株、原核表达载体 pET-28a（+）Vector 由本实验
室保存。
1.1.2 主要试剂 UNIQ-10 柱式 Trizol 总 RNA 抽提
试剂盒购自上海生工生物技术有限公司 ；Reverse
Transcriptase M-MLV 购 自 TaKaRa 公 司 ；DNA 胶 回
收 试 剂 盒 购 自 Thermo 公 司 ；限 制 性 核 酸 内 切 酶
Nhe Ⅰ和 EcoR I、T4 DNA 连接酶购自 NEB 公司 ；Ex
Taq DNA 聚合酶、低分子蛋白 Marker 购自 TaKaRa
公司 ；醋酸纤维素（NC）膜购自 PALL 公司 ；辣根
过氧化物酶标记的山羊抗鼠 IgG、鼠抗 His-tag 单抗
及 DAB 显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公
司 ；PCR 引物均由上海生工生物技术有限公司合成 ；
其他试剂均为国产分析纯。
1.1.3 主要仪器 台式高速低温离心机（Eppendorf
公司）、HZQ-F160 全温振荡培养箱（哈尔滨东联电
子技术开发有限公司）、恒温摇床（上海博迅实业
有限公司医疗设备厂）、JY92-2D 超声波细胞粉碎机
（宁波新芝生物科技股份有限公司）、GDS-8000 凝胶
图象分析仪（美国 Gene 公司）、小垂直板电泳槽及
Trans-Blot 转印槽（美国 Bio-Rad）等。
1.2 方法
1.2.1 红笛鲷 LS-lck 基因重组表达质粒 pET-28a-LS-
LCK 的构建 按照 UNIQ-10 柱式 Trizol 总 RNA 抽提
试剂盒的方法，从红笛鲷胸腺组织中提取总 RNA，
利 用 Reverse Transcriptase M-MLV 反 转 录 成 cDNA，
以此 cDNA 为模板，根据 LS-lck 基因的核苷酸序列
（GenBank 登 录 号 ：JX898866）， 结 合 含 6×His-tag
的载体 pET-28a（+）多克隆位点和 LS-lck 基因的限
制性内切酶位点，利用 Primer Premier 5.0 及 Oligo 6.0
软件设计扩增 LS-lck 基因 ORF 的上游引物 P1 ：（5-
CTAGCTAGCATGGGATGTAACTGCAGTTCG-3 下 划
线为 Nhe Ⅰ酶切位点）和下游引物 P2 ：（5-CCGGA
ATTCCTATTCCTGGTATTGCCTCTCTG-3 下 划 线 为
EcoR Ⅰ酶切位点）进行 PCR 反应。
扩增 LS-lck 基因开放阅读框（ORF）序列的反
应 体 系 为 50 μL， 包 括 Ex Taq 酶 缓 冲 液 5 μL，2.5
mmol/L dNTP 混合液 4 μL，上游引物 1 μL，下游引
物 1 μL， 模 板 1 μL，Ex Taq 酶 0.5 μL， 灭 菌 去 离
子水 37.5 μL。反应条件为 ：94℃下预变性 5 min ；
94℃ 45 s，60℃ 45 s，72℃ 60 s，共 35 个循环 ；再
于 72℃条件下继续延伸 10 min。PCR 产物经琼脂
糖凝胶电泳检测后，回收目的片段。将产物连接
到 pMD18-T 载 体 上， 用 Nhe Ⅰ 和 EcoR Ⅰ 两 种 内
切酶对 pMD18-LCK 重组质粒与 pET-28a 载体同时
进行双酶切，酶切体系为 50 μL ：包括底物 20 μL，
反 应 缓 冲 液 5 μL，Nhe Ⅰ 1.5 μL，EcoR Ⅰ 1.5 μL，
100×BSA 0.5 μL，去离子水 21.5 μL。然后回收酶切
产物，在 16℃下用 T4 DNA 连接酶连接 8-12 h，连
接产物转化至大肠杆菌 BL21 感受态，在卡那霉素
（Kana+）抗性 LB 平板上挑取单克隆并于 37℃振荡
培养数小时。菌落 PCR 筛选阳性克隆，并进一步通
过双酶切检测和选择阳性克隆测序。
2013年第12期 115黄瑜等 ：红笛鲷 T 淋巴细胞酪氨酸激酶的原核表达及多克隆抗体制备
1.2.2 重组菌的诱导表达 将鉴定正确的菌液接种
于 含 50 μg/mL Kana+/LB 液 体 培 养 基 中， 于 37 ℃、
200 r/ min 振荡培养 8 h，取一部分加终浓度为 20%
的甘油后保存于 -80℃冰箱中作为种子菌，另取一部
分按 1∶100 的比例接种到新鲜的含 50 μg/mL Kana+/
LB 液体培养基中，于 37℃ 培养至 OD600 为 0.4-0.6
时，加 IPTG 至终浓度为 1 mmol/L，于 37℃ 继续震
摇培养，6 h 后取 1 mL 菌液 12 000 r/min 离心 1 min
收集沉淀，SDS-PAGE 电泳分析表达情况。
1.2.3 重组菌表达条件的优化 按照 1.2.2 诱导步
骤，对重组菌的表达条件进行优化 ：（1）在 IPTG 浓
度为 0 、 0.01 、 0.03、 0.07、 0.1 、 0.3 和 0.7 mmol/L 条
件下于 37℃ 诱导 6 h 后离心收集菌体，进行 SDS-
PAGE 分 析 ；（2） 在 IPTG 浓 度 为 0.03 mmol/L 时，
37℃ 条件下诱导 1、2、3、4 及 5 h 时离心收集菌体
进行 SDS-PAGE 分析 ；（3）在 18℃、28℃、37℃ 条
件下（IPTG 浓度为 0.03 mmol/L）诱导 4 h，离心收
集菌体并超声破碎。超声程序为 ：200 w 的功率超声
6 s，间隔 8 s，直至菌液澄清，离心后收集上清液和
沉淀，SDS-PAGE 电泳分析表达情况。
1.2.4 目的蛋白的纯化 经 1.2.3 优化诱导条件后，
按照优化条件和 1.2.2 诱导步骤进行诱导表达，然
后离心收集菌体，按照 HisTrap HP 亲和柱说明书纯
化目的蛋白，用含不同浓度咪唑（50、100、150、
200、 250 mmol/L） 的 洗 脱 缓 冲 液（50 mmol/L Tris，
500 mmol/L NaCl，8 mol/L 尿素，pH 8.0）梯度洗脱，
进行 SDS-PAGE 分析。确定最佳洗脱浓度，收集纯
化蛋白，按照 Bradford 蛋白质定量测定试剂盒（天
根生化科技有限公司，北京）说明书进行浓度测定。
1.2.5 Western blot 分析 将纯化 rLS-LCK 重组蛋白
经 SDS-PAGE 电泳分离后，电转移至 NC 膜上，然
后浸泡于含 5 % 脱脂奶粉的封闭液中，4℃冰箱放置
过夜（6-8 h）封闭 NC 膜 ；加入鼠抗 His-Tag 单克
隆抗体（1∶2 000 稀释）与之反应，室温孵育 2 h ；
二抗为 HRP 标记的山羊抗鼠 IgG（1∶2 000 稀释），
室温孵育 1 h，各步骤之间洗膜 4 次，每次 10 min ；
滴加 DAB 显色液显色，用 ddH2O 终止反应，观察结
果并拍照。
1.2.6 鼠抗 rLS-LCK 多克隆抗体的制备及鉴定
1.2.6.1 免疫方案与操作 将 2 mL 的佐剂与 2 mL
纯化的 rLS-LCK 融合蛋白一起加入到无菌管中，用
移液枪进行吹打至乳化完全。取 20 只鼠平分为两组
进行注射，采用腹部皮下多点注射法注射 0.2 mL，
一组采用抗原加佐剂免疫，每只老鼠每次免疫约 50
μg 重组蛋白 ；另一组作为对照，采用同样方法注射
无菌 PBS，两组老鼠的免疫日程如下表 1。
表 1 两组小鼠的免疫日程
免疫时间（d） 免疫方式、剂量等
1 抗原与弗氏完全佐剂皮下多点注射
13 抗原与弗氏不完全佐剂皮下多点注射
20 抗原与弗氏不完全佐剂皮下多点注射
27 抗原与弗氏不完全佐剂皮下多点注射
1.2.6.2 鼠抗 rLS-LCK 融合蛋白血清的制备 第 4
次免疫后第 5 天停止喂食（只喂水），12 h 后通过眼
球采血获取血清。一只手抓住老鼠背部的皮毛及其
耳朵，使其头部不得动弹，无菌 EP 管收集血液后
45 度角室温放置 2 h，待其凝固后 4℃过夜（8 h）；
次日 4℃ 4 500 r/min 离心 10 min，无菌操作细心吸
出血清，分装后置 -80℃保存备用。
1.2.6.3 血清效价的测定、重组蛋白的免疫反应
性 采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清效价。
用纯化的重组蛋白为抗原包被 96 孔板（每孔 10
μg），用含 5 % 的脱脂奶粉溶液封闭各孔，加入不同
稀释比例的免疫血清，阴性对照孔加入免疫前血清，
空白对照孔加入 PBS，二抗 HRP 标记的羊抗鼠 IgG
按照 1∶8 000 稀释，显色。然后按照 1.2.5 的步骤，
用制备的血清作为一抗，进行 Western blot 分析重组
蛋白的免疫反应性。
2 结果
2.1 LS-lck基因原核表达载体的构建与鉴定
将 PCR 扩增出的带酶切位点的 LS-lck 序列与
pMD-18T 载体连接，筛选阳性克隆，酶切回收目的
片段（图 1-a），目的片段与 pET-28a（+）载体连接
后转化 E.coli DH5α 细胞。菌落 PCR（图 1-b）鉴定、
双酶切（图 1-c）鉴定及测序验证 pET28-LS-LCK 重
组表达质粒构建成功。
2.2 pET28-LS-LCK在大肠杆菌中的表达分析
将 pET28-LS-LCK 质粒转化至 BL21 感受态细胞
后，经 1 mmol/L IPTG 诱导，可以表达分子质量约
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第12期116
2000
1506
bp
M 1 2
bp
1000
750
500
250
100
2000
1506
bp
M 1 2 3 4
bp
1000
750
500
250
100
10000
8000
6000
5000
4000
1506
bp M 1
bp
3000
2000
1000
a b c
a ：重组质粒 pMD18-LS-LCK 双酶切鉴定 ；b ：重组质粒 pET28-LS-LCK 菌液 PCR 鉴定 ；c ：重组质粒 pET28-LS-LCK 双酶切鉴定
图 1 LS-lck 基因原核表达载体的鉴定
59.7 kD（图 2 第 2 泳道所示）的融合蛋白，pET-28a
表达的融合标签约为 2.3 kD，LS-LCK 蛋白的预测分
子量为 57.4 kD，说明目的蛋白成功表达。
130
LCK
kD
M 1 2 3 4
100
70
55
40
35
25
M ：蛋白分子量标准 ；1，2 ：pET28-LS-LCK 诱导前后 ；3，4 ：pET28a 诱导前后
图 2 pET28-LS-LCK 在大肠杆菌 BL21 中表达的 SDS-
PAGE 分析
2.3 pET28-LS-LCK在大肠杆菌中表达条件的优化
2.3.1 最佳诱导浓度 在其它条件不变的情况下，
随着 IPTG 浓度（0.01-0.7 mmol/L）的增大，融合蛋
白的表达在 0.03 mmol/L 时达到最大，随后表达量几
乎不再变化（图 3），考虑到 IPTG 对细胞有一定的
毒性，确定融合蛋白的 IPTG 最佳诱导浓度是 0.03
mmol/L。
2.3.2 最佳诱导时间 在其它条件不变的情况下，
融合蛋白表达量分析结果（图 4）表明，诱导时间
在 4 h 以内，随诱导时间的增长，目的蛋白的表达
量增高，诱导时间在 4 h 以上，表达量呈下降趋势。
因此最佳诱导时间为 4 h。
2.3.3 最佳诱导温度 在 0.03 mmol/L 的 IPTG 下，
经不同温度诱导 4 h 后蛋白的表达量及其可溶性分
LCK
kD
M 1 2 3 4 5 6 7
100
70
55
40
35
M ：蛋白分子量标准 ；1-7 ：分别为 0、0.01、0.03、0.07、0.1、0.3、
0.7 mmol/LIPTG 诱导的全菌蛋白
图 3 pET28-LS-LCK 在不同 IPTG 浓度诱导表达的 SDS-
PAGE 分析
LCK
kD
M 1 2 3 4 5 6
100
70
55
40
35
M ：蛋白分子量标准 ；1-6 ：分别为诱导 0、1、2、3、4 及 5 h 后的全菌蛋白
图 4 pET28-LCK 经不同时间诱导表达的 SDS-PAGE 分析
析结果（图 5）表明，37℃条件下 rLS-LCK 全菌蛋
白表达量明显高于在 28℃和 18℃下的表达量。但是
不管在哪种条件下，融合蛋白都主要存在于沉淀中，
上清中较少，所以 37℃是该融合蛋白的最佳诱导温
度，并且主要以包涵体形式表达。
2.4 rLS-LCK重组蛋白的纯化、定量及鉴定
采用优化后的条件进行 rLS-LCK 重组蛋白表
达，即 0.03 mmol/L 的 IPTG 在 37℃下培养 4 h，纯
化重组蛋白采用 HisTrapTM HP 亲和层析柱法，最后
2013年第12期 117黄瑜等 ：红笛鲷 T 淋巴细胞酪氨酸激酶的原核表达及多克隆抗体制备
确定 200 mmol/L 的咪唑浓度纯化效果最佳（图 6）。
收集纯化蛋白后用 K4000 Bradford 蛋白质定量试剂
盒测定其浓度，约为 1 000 μg/mL。Western blot 分析
（图 7-a）显示，rLS-LCK 与 His-Tag 单克隆抗体结合，
条带大小与融合蛋白一致，结合测序结果可推断，
已成功表达红笛鲷 rLS-LCK。
白表达常用载体［14］，效果得到广泛认可。在合适的
条件下，诱导表达仅几个小时，目的蛋白通常可占
细胞总蛋白的 50 % 以上［15］，因此很多外源基因在
该套系统中实现表达。本研究选用表达宿主菌 BL21
（DE3）和表达载体 pET-28a（+），构建了红笛鲷 LS-
LCK 蛋 白 表 达 系 统， 通 过 IPTG 诱 导 以 后 Western
blot 分析，发现表达产物稳定，相对分子质量与预
期相符，说明原核表达系统构建成功。
对目的蛋白的诱导表达条件进行了优化，可以
提高原核表达效率，增加目的蛋白得率。首先 IPTG
浓度过高会毒害大肠杆菌的生长繁殖 ；浓度过低又
达不到理想的蛋白表达量。在本试验中，IPTG 浓度
为 0.03 mmol/L 时 rLS-LCK 表达量最大，IPTG 浓度
再增加表达量反而降低，验证了高浓度 IPTG 诱导
会阻碍蛋白的表达［16］。诱导时间的不同也会导致表
达量的差异，本试验中，当诱导时间在 4 h 以下时，
目的蛋白表达量会随时间延长而增加，4 h 以上时，
情况就会相反，说明长时间的诱导并不能进一步提
高蛋白的表达量。温度在诱导过程中可能会影响到
大肠杆菌机体各种生长代谢相关酶的活性，在本试
验中 37℃的诱导表达量明显高于其他温度，推测可
能与大肠杆菌在 37℃时体内酶的活性最大以及Ｔ 7
启动子活性最强有关。通过最佳诱导条件的表达得
到了大量 rLS-LCK 融合蛋白，纯化后测定其浓度，
发现产物约为 1 000 μg/mL。
通过原核表达重组蛋白可以很快得到大量的抗
原蛋白，纯化以后用来制备高效价的多克隆抗体是
蛋白生物学特性研究所使用的一种非常普遍的方法，
因为它操作简便，成本低廉，实验仪器要求不高。
LCK
kD
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9
100
70
55
40
35
M ：蛋白分子量标准 ；1 ：18℃ 诱导全菌蛋白 ；2 ：28℃诱导全菌蛋白 ；3 ：
37℃ 诱导全菌蛋白 ；4 ：18℃诱导沉淀 ；5 ：28℃诱导沉淀 ；6 ：37℃诱导沉
淀 ；7 ：18℃诱导上清 ；8 ：28℃诱导上清 ；9 ：37℃诱导上清
图 5 pET28-LS-LCK 在不同温度条件下诱导表达的 SDS-
PAGE 分析
2.5 抗体效价测定和特异性检测
在第 4 次免疫后的第 5 天，通过眼球采血，每
只鼠获得血液约 1.5 mL，最后得到血清约为 4 mL。
ELISA 检 测 效 价 发 现，rLS-LCK 融 合 蛋 白 产 生 约
1∶40 000 的高效价抗体。Western blot 分析（图 7-b）
发现，rLS-LCK 抗血清能与诱导表达的 rLS-LCK 融
合蛋白发生特异性反应，只在 59.7 kD 左右出现印
记带，而对照组的抗血清不能与该融合蛋白反应。
3 讨论
pET 作为在大肠杆菌（E. coli）中表达重组蛋白
的载体，N、C 端带有 6×His-Tag，有利于表达蛋白
纯化，且不影响重组蛋白的结构和功能，是外源蛋
LCK
kD M 1 2 3 4 5
95
72
55
43
34
25
17
M ：蛋白分子量标准 ；1-5 ：不同咪唑浓度的洗脱液洗脱效果
图 6 rLS-LCK 融合蛋白的纯化分析
LCK
kD
M 1
95
72
55
43
34
25
LCK
kD
M 2 3
95
72
55
43
34
25
a b
M：蛋白分子量标准；1：His-Tag 单克隆抗体与 rLS-LCK 融合蛋白反应结果 . 2：
试验组抗血清与融合蛋白反应结果 ；3 ：对照组抗血清与融合蛋白反应结果 .
图 7 纯化后的 rLS-LCK 融合蛋白 Western blot 分析
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第12期118
到目前为止，利用这种方法已经获得许多抗体［17-19］，
但是关于 LCK 蛋白在鱼类当中还未见报道。本试验
通过纯化的红笛鲷 rLS-LCK 融合蛋白免疫小鼠，获
得了鼠抗 rLS-LCK 多克隆抗体，抗体效价通过间接
ELISA 检测，达到了 1∶40 000 以上，说明融合蛋白
具有很好的免疫原性，通过 Western blot 分析融合蛋
白能与制备的抗血清发生特异性反应，因此证明蛋
白具有较好的免疫反应性。
4 结论
成功构建了红笛鲷 LS-lck 的原核表达载体 pET-
28a-LS-LCK。通过优化表达条件，获得大量的 rLS-
LCK 融合蛋白。将纯化后的 rLS-LCK 重组蛋白免疫
小鼠，获得了高效价的抗血清。
参 考 文 献
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（责任编辑 李楠）