免费文献传递   相关文献

Progress on Disease-resistant Breeding of Major Diseases in Sugarcane

甘蔗主要病害抗病遗传育种研究进展



全 文 :·综述与专论· 2014年第2期
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
收稿日期 :2013-09-06
基金项目 :贵州省科学技术基金项目[黔科合 J 字(2012)2253 号]
作者简介 :付瑜华,女,博士,助理研究员,研究方向 :甘蔗基因工程和分子遗传育种 ;E-mail :fufu6699@aliyun.com
甘蔗是我国乃至世界重要的糖料作物和理想的
能源植物,甘蔗产业的稳定发展对蔗农增收和国家
能源安全保障具有重要意义。然而,在甘蔗生长过
程中会遭遇甘蔗花叶病、黑穗病、宿根矮化病和梢
腐病等病害的侵染,不仅甘蔗品质和产量受到严重
影响,还缩短宿根年限,甚至造成品种种性退化,
甘蔗病害已经成为制约我国甘蔗生产的一个重要因
素。因此,提高甘蔗的抗病性是甘蔗育种的重要目
标之一,选育抗病杂交种,对于保证甘蔗高产、优
质有着现实意义,现对甘蔗 4 种主要病害在抗病育
种研究方面的工作进展进行概述。
1 花叶病
甘蔗花叶病在世界几大蔗区均有发生[1],我国
台、闽、粤、桂、浙、滇等蔗区的花叶病发生较为
甘蔗主要病害抗病遗传育种研究进展
付瑜华  卢加举  李向勇
(贵州省亚热带作物研究所,兴义 562400)
摘 要 : 甘蔗生产长期受到病害的严重影响,这些病害不仅降低蔗茎产量和糖分,还影响宿根性,甚至造成品种种性退化,
而抗病品种的选育是保证甘蔗生产的有效途径。概述了甘蔗花叶病、黑穗病、宿根矮化病和梢腐病 4 种主要甘蔗病害在病原物检测、
种质筛选和基因工程技术等抗病育种工作方面的研究进展。
关键词 : 抗病育种 花叶病 黑穗病 宿根矮化病 梢腐病
Progress on Disease-resistant Breeding of Major
Diseases in Sugarcane
Fu Yuhua Lu Jiaju Li Xiangyong
(Guizhou Institute of Subtropics Crops,Xingyi 562400)
Abstract:  Sugarcane production has been severely affected by diseases, which not only cause losses of yield and sugar content but
also affect perennial root and even cause variety degeneration. Cultivating disease-resistant variety is the economic and effective way to ensure
sugarcane production. The progress on disease-resistant breeding including pathogen detection, germplasm screening and genetic engineering of
sugarcane mosaic disease, sugarcane smut, ratoon stunting disease and pokkah boeng disease were discussed.
Key words:  Sugarcane disease-resistant breeding Sugarcane mosaic disease Sugarcane smut Ratoon stunting disease Pokkah
boeng disease
普遍和严重[2]。该病为传播性的病毒病,对甘蔗、
玉米、高粱、小麦和大麦等农作物危害严重,病原
物为甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)、
高 粱 花 叶 病 毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)、
约 翰 逊 草 花 叶 病 毒(Johnsongrass mosaic virus,
JGMV)、玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic virus,
MDMV)、玉米花叶病毒(Maize mosaic virus,MMV)
和甘蔗线条花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,
SCSMV),除 SCSMV 为马铃薯 Y 病毒科的一个新属
代表外,其他均为马铃薯 Y 病毒属成员[3-8]。甘蔗
花叶病病毒粒体呈线状或杆状,基因组为单链正义
RNA,大小约 10 kb。病毒粒子通过破坏甘蔗叶片细
胞内叶绿体,使叶组织发生透绿现象,阻碍了光合
作用,造成病株节间变短,品质变差,若感病植株
作为蔗种,则萌芽率降低。
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第2期2
甘蔗存在天然的 SCMV 抗性品种,通过采用抗
病性强的品种作为亲本育种或生产,可有效控制花
叶病对甘蔗产业的危害,因此各国科学家对花叶病
抗性材料的获得进行了大量的研究。李文凤等[9]采
用甘蔗生长期切茎接种法对国家甘蔗种质资源圃保
存的 32 份优良品种材料进行抗花叶病鉴定,获得
11 个免疫材料和 7 个抗性材料。Li 等[10]利用 RT-
PCR 技术对云南甘蔗种质资源圃中的 70 个甘蔗野生
种质进行抗 SrMV 种质的鉴定,获得 39 个对 SrMV
具 有 高 抗 或 中 抗 的 种 质。Zambrano 等[11] 通 过 对
易感品种 B6749 进行辐射诱变,不仅获得了 15 个
抗 SCMV 甘蔗材料,还得到一条与 SCMV 抗性相关
的 854 bp 大小的条带。目前的研究表明,我国高抗
SCMV 的糖蔗品种主要为桂糖 11、闽糖 70-611 和
福引 79-9,而生产上推广的果蔗品种则多数为不抗
SCMV。
1994 年,澳大利亚科学家 Smith 等[12]首次采
用基因枪轰击的方法将甘蔗花叶病毒外壳蛋白基因
转化到甘蔗的茎分生组织,试图通过基因工程的手
段获得抗病植株。随后,Ivan 等[13]将高粱花叶病
毒 CP 基 因 分 别 转 入 甘 蔗 CP65-357 和 CP72-1210,
筛选出的转基因植株在大田中出现感病、恢复型
和免疫型 3 种表型。姚伟等[14] 将甘蔗花叶病毒
SCMV-D 株系的外壳蛋白基因通过基因枪轰击导入
果蔗 Badila 中,获得 53 株抗性转化苗,在转基因材
料中间试验和环境释放试验中,转 CP 基因的甘蔗
表现出较强的抗病能力,同时甘蔗的产量和糖分也
得到了提高。郭莺等[15]将甘蔗花叶病病毒 E 株系
的外壳蛋白基因 CP 转入果蔗 Badila 后出现类似的
结果。RNAi 是双链 RNA 介导的特异性基因沉默现
象,利用较小的片段(60-200 bp)即可诱导,不仅
便于植物表达载体的构建,而且使创造多病毒的抗
性成为可能。肖淑惠等[16]利用 RNAi 策略,构建了
可同时诱导 SCMV、SrMV 和 SCYLV 三种病毒基因
沉默的多价抗病毒基因,通过农杆菌介导转化甘蔗
胚性愈伤组织,以期获得具有广谱抗病性的转基因
甘蔗植株。福建农林大学甘蔗研究所进一步对抗花
叶病转基因甘蔗的食品安全、土壤生态安全、基因
飘移、病毒的异源包装和重组、转基因杂草化等方
面做了详细的调查研究[17]。虽然我国在甘蔗抗花叶
病种质选育和分子育种方面取得了一定的成绩,但
由于花叶病毒不同株系高频率的复合侵染、新病毒
株系的出现,病毒株系间遗传重组等情况的发生,
使花叶病毒仍严重威胁着甘蔗产业[18]。
2 宿根矮化病
甘蔗宿根矮化病(Ratoon stunting disease,RSD)
是甘蔗主要病害之一,严重影响甘蔗种植。RSD 主
要通过阻碍木质部输导组织对水肥的运输,造成甘
蔗水肥不足,植株矮化、生长缓慢。RSD 的病原
菌为一种寄居木质部的细菌 Leifsonia xyli subsp.xyli
(Lxx)[19],该病首先在澳大利亚昆士兰州甘蔗品种
Q28 中发现,现已广泛发生于世界各植蔗国和地区,
该病也是导致我国甘蔗宿根蔗产量低、品质差的主
要原因之一。目前主要采用将蔗种浸泡于 50℃热水
中 2 h 的方法来控制 RSD 的发病率,该方法不仅可
以消除 90% 的 RSD 病原菌,同时也有利于芽点的萌
发和产量的提高[20-22]。对 RSD 常用的检测手段主
要为酶免疫方法和 PCR 技术[23,24]。Liu 等[25]研发
出了利用环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal
amplification,LAMP)技术对甘蔗 RSD 检测的手段,
不需要 PCR 和电泳检测,通过观测即可快速灵敏的
检测甘蔗 Lxx,将针对 Lxx 特异片段设计的 4 对引物
(各 0.2 μmol/L F3 和 B3,各 0.8 μ mol/L FIP 和 BIP)、
8 U Bst DNA 聚 合 酶、1.4 mmol/L dNTP、10 mmol/L
KCl、20 mmol/L Tris-HCl(pH 8.8)、10 mmol/L(NH4)
2SO4、5.57 mmol/L MgSO4、0.1%Triton X-100 和 蔗 汁
DNA 混合成 25 μL 体系,65℃水域 60 min 后 80℃水
域 2 min 终止反应,加入适量 SYBR Green I,扩增体
系颜色变为黄绿色表示蔗汁 DNA 含有 Lxx,橙色表
示蔗汁 DNA 未感病。
甘蔗宿根矮化病的抗病育种研究进展缓慢,主
要在筛选抗甘蔗 RSD 的种质资源方面做了较多的研
究。Roach 和 Jackson[26]通过对甘蔗人工接种 RSD
病菌,观察 18 个甘蔗品系连续 4 年对 RSD 的抗性
表现,结果表明,L6025 的抗性最好。同时,Roach
又对 325 份甘蔗材料进行了 RSD 抗性调查发现,大
茎野生种和热带种有相似的 RSD 发病率,而印度种、
中国种和甘蔗属近缘植物斑茅则具有较高的 RSD 发
病率[26,27]。Comstock 等[28]通过组织印记免疫法对
2014年第2期 3付瑜华等 :甘蔗主要病害抗病遗传育种研究进展
美国弗罗里达州的甘蔗材料进行抗 RSD 种质扫描发
现,1989 年后培育的 CP 系列抗性表现良好,而我
国张妍等[29]采用浸蔗种法对 6 个系列 100 份甘蔗
品种进行侵染,计算各品种 RSD 发病率,对甘蔗种
质资源进行抗性评价,结果表明 CP 系列的抗性较强,
可作为抗 RSD 的育种材料。目前,甘蔗宿根矮化病
CTCB07 株系的全基因组测序已经完成[30],为揭示
Lxx 的致病机理提供了新的机遇,对利用基因工程
手段进行甘蔗 RSD 的防治具有重要意义。
3 黑穗病
甘 蔗 黑 穗 病(Sugarcane smut) 是 一 种 真 菌 型
甘蔗病害,病原甘蔗鞭黑粉菌(Ustilago scitaminea
Syd.)有多个生理小种分化现象,通常采用鉴别寄主
的方法对甘蔗黑穗病菌生理小种进行划分,我国目
前发现两个小种,即小种 1 和小种 2[31,32]。在世界
各地蔗区均有发生,不仅造成甘蔗产量损失,还使
蔗糖糖分降低,影响品质。世界几个主产蔗国和地
区把甘蔗无性系对黑穗病的抗性作为品种选择的一
个主要目标,在育种的不同生理时期,分别采用自
然侵染法和人工接种法来淘汰感病株。澳大利亚采
用丙环唑和三唑酮处理甘蔗种茎来有效预防黑穗病
的发生,Bharathi 和 Shamsul 等[33,34]检测了 9 种杀
菌剂对黑穗病孢子萌芽抑制情况,并将接种了黑穗
病病原菌的蔗种浸泡在杀菌剂悬浮液中后种植于大
田发现,植后 6 个月或 9 个月的甘蔗出现感染黑穗
病现象。随着分子生物学技术的发展,应用 PCR 方
法检测甘蔗黑穗病菌存在与否的研究也有报道[35]。
Shen 等[36]开发了一种巢式 PCR 技术,能够灵敏可
靠检测至 200 fg 的真菌基因组 DNA,为甘蔗黑穗病
病菌的检疫和无毒种茎生产提供了分子检测手段。
通过了解不同蔗区黑穗病病原分离物的遗传分
化情况,可以为黑穗病抗性鉴定中病原菌的选择提
供理论依据。Luzaran 等[37]对菲律宾 17 个蔗区的
96 个甘蔗黑穗病病原菌进行多态性分析,结果显示
该 96 个病原菌可聚为 A、B、C 三类。阙友雄等[38]
对我国 6 个重要甘蔗生产区的甘蔗黑穗病菌进行了
RAPD 和 SRAP 分析,聚类结果表明甘蔗黑穗病菌
分子多样性同地理来源有一定的相关性,但与寄主
来源无关[38,39]。为了发掘与黑穗病抗性相关的分子
标记,许莉萍等[40]将抗病品种 Co1001 和感病品种
Ya71-374 杂交构建抗病性分离群体,借助 RAPD 和
集群分离分析法获得了一个与抗病基因连锁的 520
bp 片段。另外,Meredith 等[41]将与甘蔗黑穗病连
锁的 3 个 AFLP 标记通过染色体步移和测序的方法
将其分别转化成了酶切扩增多态性标记(CAPS)、
SCAR 标 记 和 SNP 标 记。Que 等[42] 用 cDNA-AFLP
的方法检测抗病甘蔗基因型在黑穗病病菌侵染后的
表达基因,获得 40 个 TDFs,推测其中 28 个 TDFs
在甘蔗抵御黑穗病病菌侵染过程中起作用。Chen
等[43]克隆了甘蔗 NPR1 基因(ScNPR1)并发现其
在黑穗病菌侵染后的甘蔗叶片和叶鞘中表达量升高,
因此认为 ScNPR1 基因在甘蔗抵御黑穗病菌侵染的
过程中起作用。Dalvi 等[44]将 CoC671 愈伤组织进
行 EMS 诱变并对 310 个体细胞无性系进行温室和大
田筛选,不仅获得抗甘蔗黑穗病的 TC906 和 TC922,
且二者在单茎重、产量和茎径粗方面均优于 CoC
671。
4 梢腐病
甘 蔗 梢 腐 病(Pokkah boeng disease,PBD) 是
由镰刀菌(Fusarium moniliformae)引起的一种真菌
型甘蔗病害,1921 年在爪哇首次发现,至今该病在
所有甘蔗生产国均有发生[45]。我国广西甘蔗梢腐病
的发病率近年来有所增加,尤其对新台糖系列品种
的危害严重[46]。甘蔗伸长期是梢腐病的主要发生时
期,Debahuti 等[47]研究表明,鼠李糖脂表面活性剂
可有效防治 Fusarium sacchari 的致病性。Lin 等[48]
将 G.fujikuroi 接种到果蔗福安,分别在 0 h 和 48 h 提
取叶片蛋白,确定了 24 个差异蛋白点,其中 10 个
蛋白与抗病性相关,进一步的生理生化和实时荧光
定量 PCR 分析,初步揭示了果蔗与梢腐病病原菌
G.fujikuroi 之间互作的分子机制,为果蔗的抗病育种
奠定了理论基础。
危害甘蔗的主要病害除以上描述的 4 种外,还
有黄叶病、斐济病、凤梨病、褐条病和赤腐病等,
其中黄叶病是新发生的一种世界性病毒病,甘蔗属
中的割手密和印度种对黄叶病有一定的抗性[49]。不
同类型病害对甘蔗蔗茎蔗糖分的影响程度主要取决
于甘蔗品种和环境条件,药剂防治虽然可以有效控
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第2期4
制多数病害、保证作物高产稳产,但防治病害最为
经济有效的措施是抗病品种的选育。
5 结语
分子生物学和基因工程技术的发展,为培育抗
性持久稳定的甘蔗品种提供了分子育种手段和巨大
的发展空间。植物抗细菌和真菌病害基因工程的育
种策略分别是基于寄主-病原菌相互识别及信号转导
体系的基因工程和基于抗菌蛋白的基因工程。利用
外壳蛋白基因、复制酶基因等病毒来源基因介导植
物产生抗病性是植物抗病毒基因工程应用较多的一
种策略,但存在一定的局限性[50,51]。RNA 干扰介
导的植物抗病毒技术可强化植物体内天然的 RNA 沉
默抗病毒能力,具有高效和特异性,在植物抗病毒
研究中表现出极大潜力[52]。除甘蔗抗花叶病基因工
程研究较多之外,其他 3 种甘蔗病害的抗病基因工
程研究还处于起步阶段,但随着植物与病原物相互
作用机制研究的深入和 RNA 干扰技术的日趋完善,
必将推进甘蔗抗病育种的进程。同时,应建立转基
因抗病甘蔗安全性评价技术体系,构建严谨的风险
评估试验设计,为抗病转基因甘蔗商业化种植提供
科学的生态风险评估体系,从而进一步促进糖料事
业的发展。
参 考 文 献
[1] 许东林 , 周国辉 , 沈万宽 , 等 . 侵染甘蔗的高粱花叶病毒遗传多
样性分析[J]. 作物学报 , 2008, 34(11):1916-1920.
[2] 许莉萍 , 陈如凯 , 李跃平 . 利用愈伤组织培养和茎尖培养去除
甘蔗花叶病毒[J]. 福建农业大学学报:自然科学版 , 1994, 3:
253-256.
[3] Ward CW, Shukla DD. Taxonomy of potyviruses :current problems
and some solutions[J]. Intervirology, 1991, 32 :269-296.
[4] Marie-Jeanne V, Loos R, Peyre J, et al. Differentiation of poaceae
potyviruses by reverse transcription polymerase chain reaction and
restriction analysis[J]. Journal of Phytopathology, 2000, 148(3):
141-151.
[5] Jeffrey SH, Byron A, Thomas JP, et al. Molecular cloning,
sequencing, and phylogenetic relationships of a new potyvirus :
sugarcane streak mosaic virus, and a reevaluation of the classification
of the potyviridae[J]. Molecular Phylogenetics and Evolution,
1998, 10(3):323-332.
[6] Frank R, Dallas LS, Jorg S, et al. Phylogenetic relationships, strain
diversity and biogeography of tritimoviruses[J]. Journal of General
Virology, 2002, 83(4):895-906.
[7] Xu DL, Zhou GH, Xie YJ, et al. Complete nucleotide sequence and
taxonomy of sugarcane streak mosaic virus, member of a novel genus
in the family Potyviridae[J]. Virus Genes, 2010, 40(3):432-
439.
[8] Li W, He Z, Li S, et al. Molecular characterization of a new strain
of sugarcane streak mosaic virus(SCSMV)[J]. Archives of
Virology, 2011, 156(11):2101-2104.
[9] 李文凤 , 黄应昆 , 罗志明 , 等 . 甘蔗优良品种材料对花叶病的抗
性鉴定与评价[J]. 云南农业学报 , 2009, 22(1):92-94.
[10] Li WF, Wang XY, Huang YK, et al. Screening sugarcane germplasm
resistant to sorghum mosaic virus[J]. Crop Protection, 2013,
43 :27-30.
[11] Zambrano AY, Demey JR, Fuchs M, et al. Selection of sugarcane
plants resistant to SCMV[J]. Plant Science, 2003, 165(1):
221-225.
[12] Smith GR, Gambly RZ, Egan BT. Progress in development of
a sugarcane meristem transformation system and production of
SCMV-resistant transgenics[J]. Proceedings of the Australia
Society of Sugar Cane Technologists, 1994, 15 :237-243.
[13] Ivan LI, James EI, Erik M. Posttranscriptional gene silencing in
transgenic sugarcane.dissection of homology-dependent virus
resistancein a monocot that has a complex polyploidy genome[J].
Plant Physiol, 1999, 119 :1187-1198.
[14] 姚伟 , 余爱丽 , 徐景升 , 等 . 转 ScMV-CP 基因甘蔗的分子生物
学分析与鉴定[J]. 分子植物育种 , 2004, 2(1):13-18.
[15] 郭莺 , 阮妙鸿 , 姚伟 , 等 . CP 基因遗传转化甘蔗品种 Badila 与
福农 91-4621 的抗病性差异分析[J]. 福建农林大学学报 :
自然科学版 , 2008, 37(1):7-12.
[16] 肖淑慧 , 周国辉 . 基于基因沉默的甘蔗三种主要病毒复合抗病
基因构建及其转基因甘蔗研究[G]. 全国甘蔗植保技术研讨
会 , 2010.
[17] 张铃 , 杨川毓 , 郭莺 , 等 . 抗花叶病转基因甘蔗安全性评价[J].
中国糖料 , 2011, 3 :50-54.
[18] Abinash P, Karri R. Genomic evidence of intraspecif ic
recombination in sugarcane mosaic virus[J]. Virus Genes, 2011,
42(2):282-285.
2014年第2期 5付瑜华等 :甘蔗主要病害抗病遗传育种研究进展
[19] Evtushenko LI, Dorofeeva LV, Subbotin SA, et al. Leifsonia poae,
gen.nov., sp.nov., isolated from nematode galls on Poa annua, and
reclassification of ‘Corynebacterium aquaticum’ Leifson 1962 as
Leifsonia aquatica(ex Leifson 1962)gen. nov., nom. rev., comb.
Nov. and Clavibacter xyli Davis et al. 1984 with two subspecies as
Leifsonia xyli(Davis et al. 1984)gen. nov., comb. Nov.[J].
Intern J Syst Evolut Microbiol, 2000, 50 :371-380.
[20] Li W, Huang Y, Fan Y, et al. Study on Bacteria-free test of
sugarcane ratoon stunting disease by hot-water[J]. Southwest
China Journal of Agricultural Sciences, 2009, 22(2):343-347.
[21] Johnson SS, Tyagi AP. Effect of ratoon stunting disease(RSD)on
sugarcane yield in Fiji[J]. The South Pacific Journal of Natural
and Applied Sciences, 2011, 28(1):69-73.
[22] Alredo SU, Nathalia GG. Detection method for Leifsonia xyli subsp.
xyli and effect of thermotherapy on bud germination in sugarcane
varieties[J]. Trop Plant Pathol, 2012, 37, 1 http ://dx.doi.
org/10.1590/S1982-56762012000100007.
[23] 李文凤 , 黄应昆 , 卢文洁 , 等 . 甘蔗宿根矮化病的 I-ELISA 快
速检测[J]. 中国糖料 , 2008, (1):33-34.
[24] Dan M, Li S, Yu K, et al. Detection of ratoon stunting disease
in virus-free seedcane via real-time fluorescence quantitative
PCR[J]. Agricultural Biotecchnology, 2012, 1(5):24-26.
[25] Liu J, Xu L, Guo J, et al. Development of Loop-mediated
isothermal amplification for detection of Leifsonia xyli subsp.
xyli in sugarcane[J]. Biomed Res Int, 2013, http ://dx.doi.
org/10.1155/2013/357692.
[26] Roach BT, Jackson PA. Screening sugarcane clones for resistance
to ratoon stunting disease[J]. Sugar Cane, 1992, 2 :2-10.
[27] Roach BT. Susceptibility to ratoon stunting disease in the
Saccharum complex and feasibility of breeding for resistance[J].
Sugar Cane, 1992, 3 :1-11.
[28] Comstock JC, Shine Jr JM, Tai PYP, et al. Bredding for ratoon
stunting disease resistance :Is it both possible and effective[J].
Proc Int Soc Sugar Cane Technol, 2001, 24 :371-476.
[29] 张妍 , 范业赓 , 莫璋红 , 等 . 甘蔗种质资源抗宿根矮化病特性
鉴定[J]. 南方农业学报 , 2012, 43(12):1963-1967.
[30] Monteiro-Vitorello CB, Camargo LE, Van Sluys MA, et al. The
genome sequence of the gram-positive sugarcane pathogen Leifsonia
xyli subsp.xyli[J]. Mol Plant Microbe Interact, 2004, 17(8):
827-836.
[31] Leu LS, Teng W. Culmicolous smut of sugarcane in Taiwan(V)
Two pathogenic strains of Ustilago scitaminea Sydow[J]. Plant
Pathol, 1998, 275-279.
[32] Borie B, Jacquiot L, Jamaux-Dexpréaux I, et al. Genetic diversity
in populations of the fungi Phaeomoniella chlamydospora and
Phaeoacremonium alcophilum on grapevine in France[J]. Plant
Pathol, 2002, 51 :85-96.
[33] Bharathi V. Chemical control of sugarcane smut through sett
treatment with fungicide[J]. International Journal of Plant
Protection, 2009/2010, 2(2):151-153.
[34] Shamsul AB, Barry KC, Rebecca SJ, et al. Laboratory and field
evaluation of fungicides for the management of sugarcane smut
caused by Sporisorium scitamineum in seedcane[J]. Australasian
Plant Pathology, 2012, 41(6):591-599.
[35] Wu Z, Zan F, Wu C, et al. Rapid detection method for sugarcane
smut pathogen[J]. Southwest China Journal of Agricultural
Sciences, 2010, 23(5):1548-1550.
[36] Shen W, Xi P, Li M, et al. Development of a sensitive nested-
polymerase chain reaction(PCR)assay for the detection of
Ustilago scitaminea[J]. African Journal of Biotechnology, 2012,
11(46):10541-10547.
[37] Luzaran RT, Cueva FM, Cumagun CJR, et al. Variability of sugar-
cane smut pathogen, Ustilago scitaminea Sydow in the Philippines
[J]. Philippine Journal of Crop Science, 2012, 37(2):38-51.
[38] 阙 友 雄 , 许 莉 萍 , 邹 添 堂 , 等 . 甘 蔗 黑 穗 病 菌(Ustilago
scitaminea Syd.)分子多样性初步分析[J]. 农业生物技术学报 ,
2004, 12, 6 :685-689.
[39] Que Y, Xu L, Lin J, et al. Molecular variation of Sporisorium scitami-
neum in Mainland China revealed by RAPD and SRAP markers
[J]. Plant Disease, 2012, 96(10):1519-1525.
[40] Xu L, Chen R. Identification of RAPD marker linked to smut
reisistance gene in sugarcane[J]. Chin J Appl Environ Biol,
2004, 10(3):263-267.
[41] Meredith DM, Scott H, Phillip AJ, et al. Conversion of AFLP
markers to high-throughput markers in a complex polyploidy
sugarcane[J]. Molecular Breeding, 2011, 27(3):395-407.
[42] Que Y, Lin J, Song X, et al. Differential gene expression in
sugarcane in response to challenge by fungal pathogen ustilago
scitaminea revealed by cDNA-AFLP[J]. Journal of Biomedicine
and Biotechnology, 2011, 10 :1155-1165.
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第2期6
[43] Chen J, Kuang J, Peng G, et al. Molecular cloning and expression
analysis of a NPR1 gene from sugarcane[J]. Pak J Bot, 2012, 44
(1):193-200.
[44] Dalvi SG, Vasekar VC, Amit Y, et al. Screening of promising
sugarcane somaclones for agronomic traits and smut resistance
using PCR amplification of inter transcribed region(ITS)of
Sporisorium scitaminae[J]. Sugar Tech, 2012, 14(1):68-75.
[45] Vishwakarma SK, Kumar P, Nigam A, et al. Pokkah boeng :an
emerging disease of sugarcane[J]. J Plant Pathol Microb, 2013, 4:
170 doi :10.4172/2157-7471.1000170.
[46] 吴伟怀 , 李锐 , 郑服从 . 甘蔗梢腐病原菌的鉴定及其室内毒力
测定[J]. 甘蔗糖业 , 2006, 2 :10-14.
[47] Debahuti G, Pratap JH, Suresh D. Rhamnolipid biosurfactant
against Fusarium sacchari-the causal organism of pokkah boeng
disease of sugarcane[J]. Journal of Basic Microbiology, 2013,
doi :10.1002.
[48] Lin S, Zhou Y, Chen G, et al. Molecular responses to the fungal
pathogen Gibberella fujikuroi in the leaves of chewing cane
(Saccharum officinarum L.)[J]. Sugar Tech, 2010, 12(1):
36-46.
[49] 高三基 , 林艺华 , 陈如凯 . 甘蔗黄叶病及其病原分子生物学研
究进展[J]. 植物保护学报 , 2012, 39(2):177-184.
[50] Register JC, Beachy RN. Resistance to TMV in transgenic plants
results from interference with an early event in infection[J].
Virology, 1988, 166 :524-532.
[51] Malysheko SI, Kondakova OA, Nazarova JV, et al. Reduction of
tobacco mosaic virus accumulation in transgenic plants producing
non-functional viral transport proteins[J]. J Gen Virol, 1993,
74 :1149-1156.
[52] Sharma VK, Gulzar SS, Prem LK, et al. RNA interference :A
novel tool for plant disease management[J]. African Journal of
Biotechnology, 2013, 12(18):2303-2312.
(责任编辑 狄艳红)