全 文 ：研究报告
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2010年第 10期
H5N1禽流感病毒 HA和 NA基因重组腺病毒
共表达载体的构建
王青 胡建和 郑素玲
(河南科技学院动物科学学院,新乡 453003)
摘 要: 利用口蹄疫病毒 ( FMDV) 2A蛋白具有自我裂解的功能,将其作为连接肽构建携带有 H 5N1亚型 AIV HA和 NA
基因的重组腺病毒表达载体, 进而为 A IV基因工程疫苗的开发以及相关诊断试剂的开发提供依据。采用融合 PCR的方法扩
增出含有 H 5N1 AIV HA2ANA的基因, 定向插入 pAdtrackCMV 腺病毒穿梭质粒中, 含有目的基因的腺病毒穿梭质粒
pAdtrackHA2ANA与腺病毒骨架质粒 pAdeasy1在基因工程菌 BJ5183中进行同源重组, 获得腺病毒质粒 pAdeasyHA2A
NA, 将 pAdeasydH 5经 Pac I线性化后转染 HEK293细胞株包装出含有 HA2ANA基因的腺病毒 pAdHA2ANA。结果表明,
构建的含有目的基因的腺病毒穿梭质粒 pAdtrackHA2ANA和含有目的基因的腺病毒质粒 pAdeasyHA2ANA经 PCR、双酶
切及核苷酸测序测定无误。线性化后的 pAdeasyHA2ANA转染 HEK293细胞包装成功获得腺病毒 pAdHA2ANA载体,经
绿色荧光蛋白和 RTPCR分析证实, 目的基因在该细胞中成功表达。本试验构建的含有 A IV H 5N1亚型 HA2ANA基因的重
组腺病毒表达载体, 将为进一步研究开发基因工程疫苗提供病毒模型。
关键词: 腺病毒载体 AIV H 5N1亚型 HA和 NA基因 载体构建
Construction of Recombinant Adenovirus CoExpression Vector
ContainingHA and NA Gene ofH5N1 Avian Influenza V irus
W ang Q ing Hu Jianhe Zheng Suling
(H enan Institute of Science and T echnology, X inxiang 453003)
Abstrac:t FMDV 2A peptidew as introduced as a linker to construct a recom b inant adenov irus coexpression vecto r con tainedHA
and NA genes o f av ian in fluenza v irus stra in H5N1. This vector could be used to study the ro les o fHA and NA gene in A IV pathopo iesis
and acqu ired HA and NA pro teins. U sing over lapp ing PCR to am plify HA2AN1, wh ich w as further cloned in to shuttle plasm id
pAdT rackCMV. The shuttle p lasm id was transformed into B J5183 wh ich had already conta ined adenov irus backbone vector pAdEasy1
to ob tain the hom o logous recom bina tion and recom binant adenov irus g enom e p lasm id nam ed pAdeasyHA2ANA. Then the pAdeasy
HA2ANA was subsequently linea rlized w ith Pac I and transfected into HEK293 ce lls to form pAdHA2ANA. pAdtrackHA2ANA
and pAdeasyH5 w ere iden tified by PCR, doubledig estion and sequenc ing. GFP and RTPCR w ere used to iden tify whethe r theHA2A
NA genew as expressed. The results show ed that, pAd trackHA2ANA and pAdeasyHA2ANA w ere correct, and theHA and NA gene
w as expressed in HEK293 ce lls. Through this study the pAdeasyHA2ANA w as constructed, w hich could be used as an exce llent too l
to product HA prote in and fo rm am ode l v irus to research HA gene s ro les.
Key words: Recom binant adenov irus vector Avian in fluenza v irus stra in H 5N1 HA and NA gene Vecto r construction
收稿日期: 20100307
基金项目:河南省高校杰出科研人才创新工程项目 ( 2006KYCX020 )
作者简介:王青,女,助理实验师,硕士,主要从事分子病原学与免疫学研究; Em ai:l 35675562@ qq. com
通讯作者:胡建和,男,副教授,博士,主要从事动物微生物学、免疫学和分子病毒学研究; Em ai:l 344641772@ qq. com
禽流感 ( av ian inf luenza, A I)是由 A型流感病毒
引起的一种禽类的急性、烈性、接触性呼吸道传染
病,被世界动物卫生组织 ( O IE )列为法定必须上报
的传染病之一 [ 1, 2]。该病不仅可以感染禽类, 也可
以感染人类及其他的哺乳动物,因此对 A I的防制具
有公共卫生学意义 [ 3, 4]。
2010年第 10期 王青等 : H 5N1禽流感病毒 HA和 NA基因重组腺病毒共表达载体的构建
A I根据 AIV血凝素 ( hemagg lutinin, HA )和神经
氨酸酶 ( neuram inidase, NA ) 的不同可分为 15个 HA
亚型, 9个 NA亚型, 目前我国主要流行 H5和 H9亚
型 [ 6]。A IV中 HA基因是主要保护性抗原基因,其表
达的 HA糖蛋白是 A IV最主要的表面抗原, 可刺激机
体产生细胞免疫和体液免疫,同时在病毒吸附、穿膜
及决定病毒的宿主特异性和致病力方面均起着关键
作用 [ 5, 6]。NA也是 A IV的主要表面抗原之一, 又是
体液免疫的靶抗原,可诱导机体产生特异性抗体, 抑
制病毒从感染的细胞释放再感染其他细胞, 从而减少
病毒的增殖,常被作为构建基因工程疫苗的候选蛋
白 [ 7, 8]。因此,针对 HA和 NA基因开展基因工程活
载体疫苗的研究具有很好的应用前景。
腺病毒表达系统具有安全、高效、不整合到宿主
基因组中、易于大量制备等优点。本试验选用的新
一代的人源非复制型腺病毒 AdEasy1系统, 比传统
的复制性腺病毒表达载体更安全,同时含有 CMV强
启动子可以使目的基因得到高效的表达, 因此更能
刺激机体产生良好的免疫反应 [ 9, 10 ]。
为此本试验构建了含有 A IV HA2ANA基因的
重组腺病毒表达载体, 并经过初步鉴定 HA和 NA
基因都得到成功表达, 为进一步开展基因工程疫苗
研究及探明 HA和 NA基因在 A IV致病过程中的作
用提供材料。
1 材料和方法
1. 1 材料
1. 1. 1 载体、菌株及工具酶 腺病毒穿梭质粒
pA dtrackCMV、腺病毒骨架质粒 pAdeasy1、基因工
程菌 BJ5183, 由河南科技学院实验中心实验室保
存;含目的基因的质粒 pMD19TH 5和 pMD19T
N 1由青岛动检所惠赠; 大肠杆菌 DH 5感受态
细胞由河南科技学院预防兽医学实验室自制; 质
粒 DNA小量提取试剂盒购自北京赛百盛公司;
胶回收试剂盒购自上海生工生物工程技术服务
有限公司; E coR V和 Xho!限制性内切酶、Taq
DNA聚合酶、T 4 DNA连接酶、DNA M arker均购
自 T aK aRa宝生物工程 (大连 )有限公司; 限制性
内切酶 Pm e I和 Pac I购自 NEB公司; 其它试剂
均为分析纯。
1. 1. 2 血清、细胞培养基及 Lipo fectam ineTM 2000
胎牛血清购自杭州四季青公司, 高糖的 DMEM干
粉购自 G ibco公司; L ipofectam ineTM 2000购自 Invitro
gen公司。
1. 2 方法
1. 2. 1 A IV H 5N1亚型 HA和 NA基因引物的设计
与合成 根据 GenBank中公布的 A IV H5N 1亚型
HA和 NA基因序列, 利用 Primer 5. 0引物分析软
件, 设计两对引物 P1 /P2, P3 /P4 (表 1, P1 /P4中的
划线部分分别为 Xho I、E coR V酶切位点序列, P2 /
P3中斜体的部分为融合 PCR所用的口蹄疫病毒
( FMDV ) 2A蛋白的部分序列 )。引物由上海生工生
物工程技术服务有限公司合成。
表 1 PCR引物序列
引物 核苷酸序列 ( 5∀- 3∀)
P1 GGA GATATCATGGAGAAAATAGTGCTTCTTCT
P2 AACGTCTCCTGCTAACTTCAAAAGATCAAAGTTCGTAATGCAAATTCT
P3 TTAGCAGGAGACGTTGAGTCCAACCCCGGACCCATGAATCCAAATCAG
P4 TAA CTCGAGCTTGTCAACGGTGAATGGCAACTCAG
1. 2. 2 A IV H 5N1亚型 HA 2ANA基因序列的
PCR扩增 首先以 pMD19TH5和 pMD19TN1为模
板, 分别以 P1 /P2, P3 /P4为引物, 扩增 HA2A (部
分 )和 2A(部分 ) NA基因序列。其次,用胶回收试
剂盒分别回收 HA2A (部分 )和 2A (部分 ) NA基因
片段。最后,以回收的 HA2A (部分 )和 2A (部分 )
NA基因片段为模板, 以 P1 /P4为引物扩增。扩增
HA2A (部分 )和 2A(部分 ) NA基因序列的 PCR反
应体系:模板 1 L, 上、下游引物 ( 25 mo l/L )各 1
L, dNTP( 10 mmo l/L ) 1 L, 10 # Buffer 2 L, Taq
酶 ( 2 U /L) 1 L,灭菌双蒸水 13 L。PCR反应程
序: 94∃ 3m in; 94∃ 30 s, 62∃ 60 s, 72∃ 1. 5m in,
循环 35次;最后于 72∃ 延伸 10 m in, 4∃ 保存;扩增
HA2ANA基因序列的 PCR反应程序: 94∃ 3m in;
94∃ 30 s, 60∃ 60 s, 72∃ 3m in,循环 35次;最后于
72∃ 延伸 10 m in, 4∃ 保存。
1. 2. 3 含有目的基因的腺病毒穿梭质粒 pAdtrack
HA2ANA的构建 取上述 HA2ANA的 PCR产
物于 10 g /L琼脂糖凝胶中进行电泳鉴定, 并纯化回
收。将回收后的 HA2ANA基因序列, 进行双酶切
173
生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2010年第 10期
纯化回收目的片段。用 T4连接酶将回收的目片段
分别和经同样双酶切处理的 pAdtrackCMV载体连
接,转化感受态大肠杆菌 DH5。Kan抗性筛选后
提取质粒,对提取后的质粒用 Xho I、E coR V进行双
酶切鉴定和以 P1 /P4为引物的 PCR鉴定,并将初步
鉴定为阳性的质粒送往上海生工生物工程技术服务
有限公司测序。鉴定为阳性的质粒分别命名为
pA dtrackHA2ANA。
1. 2. 4 含有目的基因的腺病毒骨架质粒 pAdeasy
HA2ANA的构建 将 pAdtrackHA2ANA质粒用
限制性内切酶 Pme I线性化、纯化回收后, 转化含有
腺病毒骨架质粒 pAdeasy1的 B J5183感受态细胞
进行同源重组,同时设 pAdtrackCMV空载体同源重
组后作为阴性对照。 kan抗性筛选后提取质粒, 对
提取后的质粒用 Pac!进行酶切鉴定和以 P1 /P4为
引物的 PCR 鉴定。鉴定为阳性的质粒命名为
pA deasyHA2ANA, 阴性组命名为 pAdeasyy。为
了获得大量高质量的重组质粒,将筛选的阳性重组
腺病毒质粒转化于宿主菌 DH 5扩增。
1. 2. 5 含有目的基因的重组腺病毒 pAdHA2ANA
的获得 将 HEK293细胞培养于含体积分数 10% 胎
牛血清的 DMEM完全培养液中,转染前 1 d均匀铺于
6孔板,每孔约 5 # 105。用核酸内切酶 Pac I将从宿
主菌 DH5大量扩增的腺病毒骨架质粒 pAdeasy
HA2ANA和 pAdeasyy(对照 )线性化、纯化回收。
细胞传代 24 h后 (细胞铺满皿底约 70% ), 按
照 Lipofectam ineTM 2000试剂盒说明书分别将上述纯
化回收得到的线性 DNA和脂质体分别加入无抗生
素、无血清 (双无 ) DMEM 培养液中混匀, 静置
10 m in。然后将两溶液混匀,室温静置 30 m in。用
双无 DMEM培养液将培养板中的培养孔清洗 2次,
加入 800 L的双无 DMEM培养液。将脂质体 /DNA
混悬液逐滴加入培养板, 轻轻混匀, 置于体积分数
5% CO2、37∃ 条件孵育 6 h后加入含 100mL /L血清
DMEM 1 mL,继续培养 7- 10 d,每 2- 3 d更换一次
培养液,并在荧光显微镜下观察 GFP表达状况,了解
腺病毒包装过程, 待有较明显的荧光或蚀斑形成后
(转染后约 10- 12 d),于 - 70∃ /37∃ 反复冻融 3次,
收集冻融液于 10mL离心管中,以 12 000 r /m in离心
10m in,收集上清即为收获的病毒液, 阳性组命名为
pAdHA2ANA,阴性组命名为 pAdy, 置于 - 70∃ 冻
存备用。
1. 2. 6 重组腺病毒 pAdH5的初步鉴定 通过检
测 GFP的表达情况确认重组腺病毒 pA dH5是否包
装成功,提取转录后细胞中的总 RNA, 并以此为模
板进行 RTPCR鉴定, 确定目的基因是否被成功
转录。
2 结果
2. 1 A IV H5N 1亚型 HA2ANA基因的获得
以融合 PCR的产物为模板, P1 /P2为引物扩增
得到 HA基因约 1 700 bp的核苷酸序列,以 P3 /P4为
引物扩增得到 NA基因约 1 400 bp的核苷酸序列,
P1/P4为引物扩增得到 HA2ANA基因约 3 100 bp
的核苷酸序列, 表明 HA、2A、NA 基因融合成功
(图 1)。
M. DNA标准 DL 2000; 1. HA基因的 PCR扩增; 2. NA
基因的 PCR扩增; 3. HA2ANA基因的 PCR扩增
图 1 HA2ANA基因的 PCR扩增
2. 2 含有目的基因的腺病毒穿梭质粒 pAdtrack
HA2ANA的构建
取重组的腺病毒穿梭质粒 pAdtrackHA2ANA
用 Xho I、E coR V进行双酶切鉴定, 得到约 3 100 bp
的目的条带和约 9 000 bp的载体条带,以 P1 /P4为
引物对 pAdtrackHA2ANA进行 PCR扩增也得到
了 3 100 bp的目的条带;阴性组的双酶切仅得到约
9 000 bp的载体条带,以 P1 /P4为引物对 pAdtrack
HA2ANA进行 PCR扩增未出现目的条带; 与预期
结果一致,表明载体构建成功 (图 2)。阳性质粒的
测序结果与公布的序列拼接后的序列一致。
174
2010年第 10期 王青等 : H 5N1禽流感病毒 HA和 NA基因重组腺病毒共表达载体的构建
M. DNA标准 DL15000; 1. pAdtrackCMV的 EcoR % /X ho!
双酶切鉴定; 2. pAd trackHA2ANA的 E coR V /Xho I双
酶切鉴定; 3. pAd trackHA2AN的 PCR鉴定
图 2 pAdtrackHA2ANA腺病毒穿梭质粒
的双酶切和 PCR鉴定
2. 3 含有目的基因的腺病毒骨架质粒 pAdeasyHA
2ANA的构建
用限制性内切酶 Pme!分别将 pAdtrackHA2A
NA和 pAdtracky线性化后,分别转化含有腺病毒骨
架质粒的 BJ5183感受态细胞进行同源重组,即获得
重组的腺病毒骨架 pAdE asyHA2ANA和 pAdEasy
y,经 Pac I酶切后在电泳图上显示为一条大小为
4. 5 kb的小片段和一条大小约 30 kb的大片段。以
P1 /P4为引物对 pAdEasyHA2ANA进行 PCR鉴定,
结果显示以 pAdEasyHA2ANA为模板,扩增出了与
预期片段 ( 3 100 bp)大小相符的片段 (图 3)。
M. DNA标准 DL15000; 1. pAdeasyHA2ANA的 Pac I酶
切鉴定; 2. pAd easyHA2ANA的 PCR鉴定
图 3 腺病毒骨架质粒 pAdeasyHA2ANA
酶切和 PCR鉴定
2. 4 含有目的基因的重组腺病毒 pAdHA2ANA的
获得
将线性化的重组腺病毒骨架 pAdE asyHA2A
NA和 pAdE asyy转入 293细胞进行腺病毒的包装,
第 5- 7 d, 即可以在荧光显微镜下观察到个别细胞
发 GFP荧光,转染后第 11- 15 d, 293细胞出现典型
的病变如:固缩成团、脱落、肿胀等明显的病理现象。
此时将成功包装的重组腺病毒命名为 pAdHA2A
NA,正常的 293细胞见图 4, pAdHA2ANA在 293
细胞中的包装过程中 293细胞的荧光表达情况见图
5,图 6。腺病毒空载体阴性对照命名为 pAdy。
图 4 正常的 293细胞
图 5 包装 pAdHA2ANA第 7天的 293细胞
图 6 包装 pA dHA2ANA第 14天的 293细胞
2. 5 重组腺病毒 pAdHA2ANA的初步鉴定
重组腺病毒再次感染 293细胞 48 h后, 倒
置荧光显微镜下可见 GFP表达, 证明重组腺病毒
基因组中有 GFP基因,符合预期结果 (图 7 )。对
pA dHA 2ANA和 pA dy病毒感染后 293细胞的
RTPCR鉴定结果显示 pAdHA 2ANA病毒液中
175
生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2010年第 10期
可以扩增出约 3. 1 kb的目的条带,阴性病毒液中
不能扩增出目的条带, 证明目的基因被成功转录
(图 8)。
图 7 重组腺病毒 pAdHA2ANA再次感染 293细胞 24 h后
M. DNA标准 DL2000; 1. pAdHA2ANA的 RTPCR鉴
定; 2. pAdy的 RTPCR鉴定
图 8 pAdHA2ANA和 pAdy的 RTPCR鉴定
3 讨论
由 H5亚型禽流感病毒引起的高致病性禽流感
( high ly pathogen ic av ian influenza v irus, HPA IV ), 给
世界养殖业带来了严重的经济损失。对高致病禽流
感的防控,所采取生物安全措施如划定封锁疫点疫
区、扑杀疫点和疫区内家禽,这有效地控制了我国禽
流感的疫情,但从长远及我国的国情出发,疫苗免疫
仍是禽流感防控的首要措施 [ 11]。
研究表明,基于禽流感 HA基因所研制的基因
工程病毒活载体疫苗、亚单位疫苗或核酸疫苗均可
对同一 HA亚型病毒的攻击产生近 100%的保护,而
对异源病毒的攻击保护性较差。鉴于禽流感病毒的
抗原性是不断变化的, 理想的禽流感疫苗需要考虑
到它对不同亚型病毒的保护性如何, NA作为 A IV
的重要的结构蛋白恰好具有弥补基于 HA基因免疫
的缺陷的某些优点,可以诱导机体产生特异中和抗
体 [ 12, 13]。因此, 可以利用其这一特性联合 HA、NA
基因开展疫苗研究将成为新型疫苗研究的热点。为
此, 本试验选用非复制的腺病毒载体研制联合 HA、
NA基因的 A IV重组活载体疫苗, 为禽流感疫苗的
研究提供新的思路。
本试验采用具有自我裂解功能的口蹄疫病毒
( FMDV ) 2A蛋白连接 HA、NA基因。FMDV 2A具
有剪切效率高,上下游基因表达平衡性好,以及结构
短小等优点。克服了使用 IRES多顺反子系统, 上
下游基因的选择和顺序往往能够显著影响多基因的
共表达,通常下游基因的表达量仅是上游的 20% -
50% ,并且 IRES多顺反子系统具有明显的组织特
异性的缺点。使 2A蛋白成为构建串联表达多蛋白
的理想工具 [ 14]。
同时,本试验构建含有 A IV HA、NA基因的腺病
毒载体可以作为病毒模型用于研究 HA、NA基因在
A IV病毒吸附、穿膜及其在病毒的宿主特异性和致病
力方面所发挥的作用等方面的研究,从而克服了因没
有生物安全三级实验室而无法进行 A IV研究的限制,
使更多的科研工作人员参与到 A IV的研究。
本试验构建的重组腺病毒载体经初步鉴定目的
基因得到成功表达,但是重组病毒的滴度、其作为活
载体疫苗的有效性以及安全性评价等方面的研究还
需要做大量的工作。
参 考 文 献
[ 1] Su arez DL, Schu ltzC herry S. Imm unology of avian in fluenza v iru s: a
review. Dev Com p Imm uno,l 2000, 24 ( 23 ) : 269283.
[ 2] 甘孟侯.禽流感 [M ] .北京:北京农业大学出版社, 1995: 1112.
[ 3] G illimRoss L, Subbarao K. Em erging resp iratory v iruses: cha llenges
and vaccine strategies. C l inM icrob iol Rev, 2006, 19( 4 ): 614636.
[ 4] YuH, Shu Y, H u S, et a.l Th e first conf irm ed hum an case of avian
inf luenza A ( H5N1) inM ain land Ch ina. Lancet, 2006, 367( 9504 ):
84.
[ 5] 孔娜,田夫林,兰邹然,等. H 5亚型 A IV HA 1基因与 IL18基因
共表达载体的构建及其表达. 中国兽医学报, 2009, 29 ( 8 ):
986991.
[ 6] 贾红玲,苏艳,吴润.禽流感病毒血凝素保守氨基酸对其受体结
合位点的影响.中国预防兽医学报, 2008, 30 ( 7 ): 500504.
[ 7] 胡潇,高轩,王明杰,等.表达 H 5N1亚型禽流感病毒 HA和 NA
基因的重组鸭瘟病毒的构建. 中国动物检疫, 2008, 25 ( 5 ):
176
2010年第 10期 王青等 : H 5N1禽流感病毒 HA和 NA基因重组腺病毒共表达载体的构建
2225.
[ 8] 殷震, 刘景华.动物病毒学 (第 2版 ) [M ] . 北京: 科学出版社,
1997: 708709.
[ 9] GaoW, SoloffAC, Lu X, et a.l Protection of m ice and pou ltry from
lethalH 5N1 av ian inf luenza virus th rough aden ovirusb ased imm un i
zation. J V iro,l 2006, 80 ( 4) : 19591964.
[ 10 ] 孙永科.表达猪瘟病毒石门株 E0 /E2基因重组腺病毒的构建
及其免疫效果研究 [ D] .杨凌:西北农林科技大学, 2007.
[ 11 ] 乔传玲,姜永萍,于康震,等.共表达禽流感病毒 HA和 NA基因
的重组禽痘病毒在 SPF鸡的免疫效力试验. 中国农业科学,
2004, 37( 4 ): 605608.
[ 12] ToroH, T ang DC, Su arezDL, et a.l Protect ive av ian inf luenza in ovo
vaccinat ion w ith non repl icat ing hum an adenoviru s vector. V accine,
2007, 25( 15) : 28862891.
[ 13] S tephenson I, Gust I, K ieny MP, et a.l Developm en t and evaluation
of inf luen za pandem ic vaccin es. Lancet Infect D is, 2006, 6 ( 2 ):
7172.
[ 14] 云涛,倪征,余斌,等.表达猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5和 M
融合蛋白的重组腺病毒的构建及其对小鼠的免疫原性. 生物
工程学报, 2009, 25 ( 4) : 488495.
(上接第 155页 )
[ 15 ] H aim an CA, R iley SE, Freedm anML, et a.l Comm on genet ic varia
t ion in the sex steroid horm oneb ind ing glogu lin ( SHBG ) gene and
circu lat ing shbg levels among postm enopausalw om en: the Mu lt ieth
n ic C ohort. JC lin EndocrinolM etab, 2005, 90( 4) : 21982204.
[ 16 ] C ous in P, Dchaud H, GrenotC, et a.l H um an varian t sex horm one
b ind ing globu lin ( SH BG) w ith an add it ional carbohydrate chain has
a reduced clearan ce rate in rabb it. J C lin EndocrinolM etab, 1998,
83( 1 ): 235240.
[ 17 ] X ita N, T satsou lisA, C hatzikyriak idou, Georg iou I. A ssociat ion of the
( TAAAA) n repeat polym orph ism in th e sex horm oneb ind ing g lob
u lin( SHBG ) gene w ith polycyst ic ovary syndrom e and relat ion to
SH BG serum levels. J C lin Endocrin ol M etab, 2003, 88 ( 12 ):
59765980.
[ 18 ] Cou sin P, C alem ardM L, Lemne H, et a.l In flu ence of SHBG gene
pen tanu cleot ide TAAAA repeat andD327N polym orph ism on serum
sex horm on eb ind ing globu lin con cent ration in h irsute w om en. J C lm
E ndocrinolM etab, 2004, 89 ( 2) : 917924.
[ 19 ] 赵君丽, 陈子江, 赵跃然, 等. 性激素结合球蛋白基因启动子
( TAAAA ) n重复多态及其血清水平与多囊卵巢综合征糖代谢
的关联性.中华医学遗传学杂志, 2005, 22 ( 6) : 644647.
&生物医学工程与临床 ∋征订启事
&生物医学工程与临床 ∋是一本连接临床与生物医学工程的综合性刊物。是中国科技论文统计源期刊
(中国科技核心期刊 ) ,并已被美国&化学文摘∋ ( Chem Abstract)、俄罗斯 &文摘杂志 ∋ (A J o fV IN IT I)、英国 &国
际农业与生物科学研究中心∋ ( CAB I)等国际检索系统收录。本刊宗旨是以生物医学工程和临床的理论与实
践相结合,涵盖生物医学工程学及其相关的临床医学各学科,注重生物医学工程学在临床医学中的应用研究
和新技术、新经验、新成果的推广。以生物医学工程高起点为目标,以突出临床医学为特色,内容涉及医疗仪
器、生物力学、生物材料、人工器官、生物控制、生物医学信息测量与处理等领域的研究, 以及临床工程等方
面。临床内容包括影像、超声、介入医学、心电生理、骨科、腔镜、临床检验、放射 (射频 )治疗、人工器官和血
液净化、医疗器械及普外、神经微创、干细胞治疗等。 &生物医学工程与临床 ∋在 &中国生物医学文献数据
库 ∋、&中文生物医学期刊文献数据库 ∋、&中文科技期刊数据库 ∋中可以检索到, 在 &万方数据 ( ( ( 数字化期
刊群∋、&中国知网 ∋、&维普资讯网 ∋等网上都能搜索到。
杂志为大 16开, 96页,双月刊 (单月 25日出版 ) ,国内外公开发行。中国标准刊号: ISSN 10097090, CN
121329 /R,可在全国各地邮局订购,邮发代号: 6147。也可直接向编辑部邮购。本刊每期定价 10元, 全年
60元。
编辑部地址:天津市第三中心医院院内 (天津市河东区津塘路 83号 ) &生物医学工程与临床 ∋编辑部
电话: 022- 24382234, 84112394, 84112147 传真: 02224382234
Emai:l SGLC@ china journa.l ne.t cn, S- GLC@ 163. com
177