全 文 ：
技术与方法

生物技术通报
BIOTECHNOLOGY
BULLETIN 2011年第 2期
PCR
SSCP技术在微生物检测中的应用
顾真庆1, 2
冯志新 1
王占伟 1, 3
刘茂军1
王海燕1
白昀 1, 3
邵国青 1
( 1江苏省农业科学院兽医研究所 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京 210014;
2南京农业大学动物医学院,南京 210095; 3南京天邦生物科技有限公司,南京 211102 )


摘
要:
聚合酶链式反应 -单链构象多态性 ( PCR
SSCP )是一种能够检测 DNA突变的分子生物学分析技术,具有快速、
简便、灵敏与适于大样本筛选的特点, 近年来被广泛应用于生命科学领域的研究。对 PCR
SSCP技术在微生物检测研究领域
的应用和发展作简要的介绍。
关键词:
PCR
SSCP
微生物
检测
The Application of PCR
SSCP Technique inM icrobe Detection
Gu Zhenqing
1, 2
Feng Zh ix in1
W ang Zhanw ei1, 3
L iuM ao jun1
W ang Ha iyan1
BaiYun1, 3
ShaoGuoqing1
(
1
Institute of VeterinaryM edicine, J iangsu A cademy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of A nimal D iseasesD iagnostic and Immuno logy,
M inistry of Agriculture, National Center forEngineering Research of Veterinary B io
p roducts, N anjing 210014; 2College of Veterinary
M edicine, N anjing Agricultural University, N anjing 210095;
3
Nanjing T ianbang Bio
Industry CO
, LTD
,N anjing 211102)


Abstrac:t
Po lym erase cha in reaction
sing le strand conform ation po lymo rph ism ( PCR
SSCP) , aDNA mu tations detec tion techno l

ogy, has the charac teristics o f rapid, sim ple, sensitive and su itab le for screening large sam ple. PCR
SSCP technique has been w ide ly
used in the life sc ience field. The app lication and deve lopm ent o f PCR
SSCP technique in the m icrobe detection fie ld w as rev iew ed.
Key words:
PCR
SSCP
M icroorgan ism
Detection
收稿日期: 2010
08
19
基金项目:江苏省自然科学基金
企业博士创新项目 ( BK2009498)
作者简介:顾真庆,男,硕士研究生,研究方向:动物传染病与免疫学; E
m ai:l gzq
101@ 163. com
通讯作者:邵国青,男,博士,研究员,研究方向:动物重大疫病防控; E
m ai:l 84391973@ 163. com
基因的单核苷酸多态性 ( SNP)是指基因组中单
个核苷酸变异引起的 DNA序列多态性,包括单碱基
的转换、颠换、插入及缺失等形式。DNA个体间核酸
序列的变异是分子遗传标记的基础,在分子遗传标记
中,单链构象多态性 ( sing le
strand conformation poly

morph ism, SSCP)分析技术是常用方法之一。聚合酶
链反应- 单链构象多态性 ( PCR
SSCP)是基于 PCR
的以 DNA构象为基础的检测基因组中单核苷酸变异
( SNP)的技术 [ 1]。该技术经不断发展, 因其高度的灵
敏性、操作简便,被广泛应用于生命科学研究领域中。
目前也在致病性微生物的快速检测、种属鉴定以及基
因分型研究等方面得到了一定的应用。
1
PCR
SSCP技术的基本原理与发展历程
单链 DNA有一定的空间构象, 若发生碱基突
变,其构象会发生相应改变,在非变性聚丙烯酰胺凝
胶电泳中,迁移率会随之发生变化。通过显色或显
影后在凝胶上就会出现带型的差别, 呈现多态性。
根据等长变性 PCR产物在中性聚丙烯酰胺凝胶中
泳动的位置差异, 可以检验出小至单个碱基差
异 [ 2]。该方法具有敏感、简便、快速和廉价等特点,
适合大样本基因突变的筛选。
1984年, 日本学者 Noum i[ 3]在研究大肠杆菌正
常和突变的 F1
ATPase基因时发现 DNA单链构象
存在多态性。1989年 O rita等 [ 1]将 DNA单链凝胶
电泳技术成功用于检测复杂基因组中单拷贝 DNA
多态现象, 并提出 SSCP的概念。 1992年, Hoshino
等采用敏感的银染法对电泳后的凝胶进行染色, 使
SSCP技术更安全、方便而快捷。
PCR
SSCP一般适合于小于 400 bp碱基序列突
变的测定, 随着 DNA片段长度的增加, 突变检出率
2011年第 2期 顾真庆等: PCR
SSCP技术在微生物检测中的应用
随之降低。为了提高 PCR
SSCP检测适用范围,
Sommer等 [ 4]在 1995年对大片段 DNA采用限制性
内切酶 ( RE )酶解后再进行 SSCP分析,延长了 SSCP
对 DNA片段的检测长度,提高了突变的检出率。该
技术被命名为限制性内切酶指纹 SSCP ( restr ict ion
endonuclease fingerprinting
SSCP, REF
SSCP )。由于
PCR
SSCP分析结果易受电泳温度的影响, Iw ahana
等 [ 5]建立了保持恒温电泳与自动化测序的荧光标
记 PCR
SSCP ( F luo rescnce
based
PCR
SSCP, F
SS

CP) ,提高了 PCR
SSCP的分辨效果与测序自动化程
度。M aruya等 [ 6]在传统 PCR
SSCP基础上建立了低
离子强度 PCR
SSCP技术 ( PCR
LIS
SSCP), 该技术
提高了变性 DNA的单链生成率, 从而大大提高了
SSCP的灵敏度。 PCR
SSCP与 Sanger双脱氧测序
相结合的双脱氧指纹 ( dideoxy fingerprinting, ddF)技
术可将突变精确定位于 10 bp之内, 假阳性率低于
5%
[ 7]。此外, PCR
rSSCP分析提高了 PCR
SSCP检
测结果的多态性及灵敏度。毛细管电泳技术 ( CE )
与 SSCP的结合, 实现了高速度、高效率和自动化
分析。
2
PCR
SSCP技术的操作步骤
PCR
SSCP技术的基本过程: ( 1 ) PCR扩增靶
DNA; ( 2)将 PCR扩增的待测片段与去离子甲酰胺
混合后于 95
变性解链,冰中骤冷快速复性, 使之
成为具有一定空间结构的单链 DNA分子; ( 3)将适
量的单链 DNA进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;
( 4)通过放射性自显影、银染或溴化乙锭显色分析
结果。若发现单链 DNA带迁移率与正常对照的相
比发生改变,可以判定该链构象发生改变,进而推断
该 DNA片段中有碱基突变。
3
PCR
SSCP技术在微生物检测领域中的
应用
PCR
SSCP技术作为一种日渐完善的分子生物
学技术,具有快速、简便、灵敏与适于大样本筛选的
特点。在人类肿瘤疾病的基因筛选, 遗传性疾病的
基因定位,动植物遗传育种等研究中得到了广泛应
用。PCR
SSCP技术在微生物检测研究方面主要包
括临床致病微生物的快速鉴定,微生物的分型研究,
跟踪微生物的变异情况及检测微生物群落构成等。
3. 1
PCR
SSCP技术在病原微生物鉴别诊断中的
应用
按常规的病原微生物分离鉴定方法, 需要准备
适合不同的病原生长的培养基和使用不同的鉴别方
法, 且费时费力; 常规 PCR技术采用针对特定病原
的特异性引物,但往往由于临床病原不明,需用多种
引物和扩增程序进行 PCR扩增,不同病原多重感染
亦加大了常规 PCR实现快速诊断的难度; 通过形态
学观察易造成误诊。PCR
SSCP技术能克服常规病
原分离与常规 PCR技术的缺点, 能够快速、简便地
检测出临床病原微生物。
运用 PCR
SSCP能快速诊断临床致病菌, Oh[ 8]、
王永 [ 9]根据常见病原菌保守的 16S rRNA设计通用
引物对临床常见细菌进行 PCR
SSCP分析, 快速鉴
定了多种不同种属的细菌。此项技术也可以检测同
属不同种的细菌 [ 10]。覃志坚 [ 11]、胡玉山 [ 12]和彭宣
宪 [ 13]对比了 PCR
SSCP技术和 PCR
RFLP技术在检
测致病性细菌时的应用, 他们认为 PCR
SSCP技术
能快速简便地检测、鉴别相关病原菌。
PCR
SSCP用于寄生虫诊断, Huby
Chilton等 [ 14]
对感染公牛包皮冲洗液涂片镜检时, 根据虫体形态
学特征判定公牛疑似 Tritrichomonas foetus感染, 但
用 PCR
SSCP分析发现, 包皮冲洗液样品带型与对
照 Tritrichomonas foetus的带型不一致, 即公牛可能
不是感染了 Tritrichomonas foetus。由于样品的图谱
与 T etratrichom onas的图谱完全一致, 几乎可以确诊
公牛感染了 Tetratrichomonas。Huby
Ch ilton等 [ 15]以
rDNA的 pITS
1作为遗传标记对 6种不同的鹿圆属
线虫第一阶段幼虫进行 PCR
SSCP分析, 成功地鉴
别了这 6种幼虫, 为当地鹿群感染鹿圆属线虫的诊
断与流行病学研究带来便利。陈虹虹等 [ 16 ]对来自
青海湖的鲁道夫对盲囊线虫核糖体 DNA的 ITS
1、
ITS
2进行 PCR
SSCP分析及序列分析, 并与来自欧
洲的两个姊妹种鲁道夫对盲囊线虫进行比较。结果
显示,我国青海湖的鲁道夫对盲囊线虫与来自意大
利的 C. rudolphiiB具有相同的 SSCP带型及 ITS序
列, 但不同于 C. rudolphiiA, 因此我国青海湖的鲁道
夫对盲囊线虫属于 C. rudolphiiB。证实采用 PCR

SSCP分析 ITS片段可作为遗传标记用于鉴别鲁道
夫对盲囊线虫的姊妹种, 从而为鲁道夫对盲囊线虫
71
生物技术通报 B iotechnology
Bulletin 2011年第 2期
的进一步研究奠定了基础。
3. 2
PCR
SSCP技术在病原微生物分型中的应用
病原微生物基因分型的研究对由病原微生物引
起的疾病的防制有重要意义。 Zhou等 [ 17]以结节双
螯菌 fimA基因设计引物, 用 PCR检测 11例疑似结
节双螯菌感染的病料, 将阳性结节双螯菌的扩增产
物进行 SSCP分析, 发现有 3种 SSCP带型。结合
DNA序列分析结果证实发现两种新的结节双螯菌
菌株, 为当前结节双螯菌的疫苗防制提供参考。
刘运喜等 [ 18]把分离自辽宁、吉林地区的 6株恙
虫病东方体目的基因进行 PCR
SSCP检测, 并与国
际参考株进行比较,呈现出两种不同的 DNA单链构
象图谱,得出辽宁、吉林地区恙虫病东方体分离株至
少存在两种型别。姜鹏等 [ 19]根据旋毛虫 m tDNA

COX
序列设计引物,应用 PCR
SSCP技术对我国 7
个猪源旋毛虫地理株与 1个波兰猪源旋毛虫地理株
进行 COX
基因片段多态性进行分析。结果表明,
我国 7个猪源旋毛虫地理株与波兰地理株存在 3种
基因型。
L i等 [ 20]运用 PCR
SSCP成功对汉坦病毒进行
分型, 他们对流行区汉坦病毒阳性血清进行 PCR

SSCP分析, 根据 SSCP图谱的不同,区别出汉城病毒
阳性血清与汉坦病毒阳性血清。 Szew czyk等 [ 21 ]利
用杆状病毒群的通用引物, 采用 PCR
SSCP技术成
功区分出杆状病毒群所属各型病毒。
3. 3
PCR
SSCP技术在监测微生物基因变异中的
应用
PCR
SSCP可以用于监测细菌变异, Zhou等 [ 22]
收集了患腐蹄病动物的病患组织样品,用 PCR
SSCP
分析法比较了坏死梭杆菌的 lktA基因,得到了 4种
截然不同的 SSCP图谱, 得出引起动物腐蹄病的坏
死梭杆菌很容易发生变异的结论。
董世娟等 [ 23]对引物进行标记, 对来自国内不同
地区不同宿主的片形吸虫 (Fasciola )的线粒体基因
组细胞色素氧化酶亚基
基因 ( pcox1)部分序列进
行 PCR
SSCP分析,结果 76个虫体均成功地扩增出
约 450 bp的基因片段; SSCP分析显示,不同地区或
同一地区的不同样品在 pcox1的 SSCP带型上存在
多态性;代表性样品的测序结果表明,其碱基序列存
在差异。试验结果显示, 我国片形吸虫 pcox1序列
种内变异不明显,种间变异显著。
王永山等 [ 24]根据传染性法氏囊病病毒 ( IBDV )
cDNA序列, 在病毒 VP2区域设计 1对引物, 应用
RT /PCR
SSCP方法, 对 4个不同时间及不同地域从
传染性法氏囊病 ( IBD )病鸡法氏囊组织中分离的
IBDV分离物进行了分析,发现 4个 IBDV分离物的
SSCP图谱均存在明显差异。试验表明, IBDV变异
在我国普遍存在, SSCP方法可用于 IBDV的变异性
分析。Pawe lcyzk等 [ 25]也运用 PCR
SSCP检测出乙
肝病毒在复制时的变异。
3. 4
PCR
SSCP技术在微生物群落研究中的应用
在环境科学与食品科学等研究领域中,对微生
物群落分布、种类及功能的分析是目前微生物群落
研究中的热点。Korthals等 [ 26]以不同农场的粉尘为
研究对象, 用细菌 16S rRNA为分子标记位点, 用
PCR
SSCP技术分析了农场粉尘中的菌落构成, 为
研究农场环境中粉尘的分子流行病学提供了思路。
W ery等 [ 27]利用 PCR
SSCP分析了污水处理厂流出
残渣的细菌群落, 有望得出评价污水处理厂人源排
泄物污染的新指标。PCR
SSCP技术也可以应用于
食品安全与食品微生物群落之间的关系, Saubusse
等 [ 28]以细菌 16S rRNA V2区为靶对象, 采用 PCR

SSCP有效鉴定了能够抑制单核细胞增生利斯特菌
的细菌群落结构。
4
展望
在兽医临床诊断中多种病原菌的混合感染比较
普遍,这使得病原菌的检测更加复杂和费时。按常
规的病原分离方法,需要准备适合不同病原生长的
培养基并使用不同的鉴别方法, 且费时费力; 常规
PCR技术采用针对特定病原菌的特异性引物进行
病原的检测,但往往由于临床病原菌不明,需用多种
不同引物和扩增程序,不同病原菌多重感染亦加大
了常规 PCR实现快速检测的难度。然而, 以细菌
16S rRNA为标记位点,设计引物进行 PCR
SSCP分
析能够克服常规方法的缺点, 具有简单、快速、廉价
的优点,有较好的应用前景。
不可否认,合理地使用抗生素能够治疗、预防一
些传染性疾病,但由滥用抗生素而衍生出的某些病
原微生物的耐药性越来越引起人们的重视。 Sheen
等 [ 29]与 Jiang等 [ 30]采用 PCR
SSCP定位结核分枝杆
72
2011年第 2期 顾真庆等: PCR
SSCP技术在微生物检测中的应用
菌对一线抗结核药物吡嗪酰胺或利福平抗药基因,
为阐述结核分枝杆菌耐药性产生机制奠定基础。由
此可以预知, PCR
SSCP技术可被用于易产生耐药
性微生物的研究中。
近年来, 一些重大动物疫病的流行特点发生了
很大的变化,呈非典型化态势。以猪瘟与新城疫为
例,临床上主要表现为隐性带毒和慢性感染,严重影
响了养殖业的健康发展。猪瘟兔化弱毒疫苗与新城
疫弱毒疫苗的广泛使用, 对控制以上两种重大疫病
起到了重要的作用, 但同时也给猪瘟与新城疫野毒
感染动物与疫苗接种动物的鉴别诊断带来困难。现
在单纯针对 CSFV与 NDV的检测已经不能满足生
产的需求,亟需建立一种方便、快捷的方法, 区分强
毒株与疫苗株,以便有针对性地采取相应的防控措
施。病原强弱毒株的差异往往源于基因的差异,在
选择合适的标记位点后运用 PCR
SSCP技术可以检
测出基因的差异, 即 PCR
SSCP技术可以用于探索
快速区别临床常见病原微生物的弱毒疫苗免疫与野
毒感染。
综上所述, PCR
SSCP技术从问世至今已在微
生物检测领域得到了广泛的应用, 相信随着新技术
的发展,如 2D
PCR
SSCP,将大大改进 PCR
SSCP分
析方法,使其灵敏度加强, 适用范围进一步拓展。
参 考 文 献
[ 1] O rita M, Suzuk iY, S ekiya T, et a.l Rap id and sensit ive detect ion
of poin t m utations and DNA polym orph ism s u sing the po lym erase
ch ain reaction. Genom ics, 1989, 5( 4 ) : 874
879.
[ 2] H ein I, Mach RL, Farn leitner AH, et a.l App lication of s ingle

s trand con form ation polym orph ism and d enatu ring gradient gel elec

trophores is for f la sequence typing of Campyloba cter jejun i. Jou rnal
ofM icrob iologicalM ethods, 2003, 52( 3) : 305
313.
[ 3] Noum iT, M osh erME, Natori S, et a.l A phenylalanine for serine
subst itu tion in the beta subun it ofE scherich ia coli F1
ATPase affects
dep end ence of its act ivity on d ivalen t cations. Jou rn al of B iological
C hem istry, 1984, 259( 16 ) : 10071
10075.
[ 4] Liu Q, Somm er SS. Restrict ion endonuclease fingerprinting( REF) : a
sen sitive m ethod for screening mu tation s in long, con tiguous seg

m ents ofDNA. B iotechn iques, 1995, 18( 3 ): 470
477.
[ 5] Iw ahana H, Y osh im oto K, M izu sawa N, et a.l Mu lt ip le fluores

cence
based PCR
SSCP analysis. B iotechn iqu es, 1994, 16 ( 2 ) :
296
300.
[ 6] M aruya E, Sa ji H, Yokoyam a S, et a.l PCR _SSCP ( low ion ic
strength s ingle
strand ed con form ation polym orph ism ) a s im ple
m ethod for h igh reso lut ion allele typing ofH LA
DRB1,
DQB1 and

DPB1. Genom e Research, 1996, 6 ( 1) : 51
57.
[ 7] L iuQ, Somm ers SS. Param eters affecting th e sen sit ivities of d id eoxy
f ingerprin t ing and SSCP. PCR M ethod s and App lications, 1994, 4
( 2) : 97
108.
[ 8] OH MH, Park YS, Paek SH, et a.l A rap id and sen sit ive m ethod
for d etect ing foodborne pathogens by cap illary electrophores is
b ased
single
strand conform at ion po lym orph ism. Food C on tro,l 2008, 19
( 11) : 1100
1104.
[ 9] 王永,赵新,兰青阔,等. 4种食源性致病菌的 PCR
SSCP检测技
术研究.天津农业科学, 2009, 15 ( 1) : 13
15.
[ 10] A l
Adham iBH, H uby
C h ilton F, B lais BW, et a.l Rap id discrim

inat ion of Salm onella iso lates by s ingle
strand conform at ion poly

m orph ism analys is. Jou rnal of Food Protect ion, 2008, 71 ( 10 ):
1960
1966.
[ 11] 覃志坚,卢冬常,何正义, 等. PCR
SSCP法快速检测鉴定临床
病原菌的探讨.广西医科大学学报, 2003, 20( 3 ): 341
343.
[ 12] 胡玉山,王鸣,杜琳,等. PCR
RFLP和 PCR
SSCP技术在肠杆菌
科食源性感染致病菌鉴定中的应用. 实用预防学, 2005, ( 6 ):
1263
1265.
[ 13] 彭宣宪,高华, 王三英, 等.采用通用引物 PCR配合 SSCP和
RFLP技术检测鱼病病原菌.水产学报, 2000, 24( 4 ) : 345
348.
[ 14] H uby
C h ilton F, Scandrett BW, C h ilton NB, et a.l Detect ion and
iden t if icat ion ofT etratrich omona s in a p reput ialw ash from a bu ll by
PCR and SSCP. Veterin ary Parasitology, 2009, 166 ( 3
4 ) : 199

204.

[ 15] H uby
C h ilton F, Ch ilton NB, Lank esterMW, et a.l S ing le
strand
con form at ion polym orph ism ( SSCP) analysis as a n ew d iagnostic
tool to d ist ingu ish dorsal
sp ined larvae of th e E laphostrongylinae
( Nem atoda: Protos trongy lidae) from cervid s. Veterin ary Paras itolo

gy, 2006, 135( 2) : 153
162.
[ 16] 陈虹虹,陈晓梅,杨廷宝, 等. PCR
SSCP对我国鲁道夫对盲囊
线虫的分子鉴定.中国兽医学报, 2006, 26( 1 ): 35
38.
[ 17 ] Zhou H, Lottner S, Gan ter M, et a.l Iden tification of tw o new
Dicheloba cter nod osu s s trains in Germ any. V eterinary Journ a,l
2010, 184 ( 1) : 115
117.
[ 18] 刘运喜,赵仲堂,高媛,等. PCR
SSCP在恙虫病东方体基因分
型中的应用.中国公共卫生, 2004, 20( 4 ) : 400
402.
[ 19] 姜鹏,毛福荣,崔晶,等.不同地理株旋毛虫细胞色素氧化酶

基因多态性的 PCR
单链构象多态性分析.郑州大学学报:医学
版, 2009, 44 ( 3) : 506
509.
[ 20] L i J, L iu YX, Zhao ZT, et a.l G enotyping of h antav iru ses occur

ring in L iny,i Ch ina, by n ested RT
PCR com bined w ith sing le

strand con form ation polym orph ism analysis. ActaV irologica, 2009,
53( 2 ) : 121
124.
[ 21] S zew czyk B, Barsk iP, S ih lerW, et a.l D etect ion and ident ifica

73
生物技术通报 B iotechnology
Bulletin 2011年第 2期
t ion ofb acu lovirus pes ticides by mu lt item perature single
strand con

form at ional polymorph ism. Journal of Environm en tal S cien ce and
H ealth, 2008, 43 ( 7) : 539
545.
[ 22 ] Zhou H, B enn et tG, H ick ford JGH, et a.l V ariation inF usobac te

rium necrophorum strains p resen t on the h ooves of footrot in fected
sh eep, goats and catt le. Veterinary M icrob io logy, 2009, 135 ( 3

4 ) : 363
367.
[ 23 ] 董世娟,黄维义,林瑞庆,等.我国片形吸虫 (F asciola )线粒体细
胞色素 c氧化酶亚基
基因 ( cox1 )部分序列的多态性. 中国兽
医学报, 2005, 25( 4 ): 378
381.
[ 24 ] 王永山,周宗安,高健,等.应用 RT /PCR
SSCP法分析传染性法
氏囊病病毒的变异性.中国兽医学报, 2001, 21( 4) : 321
323.
[ 25 ] Paw elczykA, Pola
skaM, K is ielE, et a.l Rep lication ofHCV in
bone m arrow of pat ien tsw ith haem atolog ica l disord ers. Przeg lE pi

dem io,l 2009, 63 ( 1) : 29
33.
[ 26 ] KorthalsM, EgeM J, T ebbe CC, et a.l App licat ion of PCR
SSCP
form olecu lar ep id em io log ica l studies on th e exposure of farm ch il

dren to bacteria in env ironm en tal du st. Jou rnal ofM icrob iological
M ethod s, 2008, 73( 1 ): 49
56.
[ 27] W
ry N, M on teil C, Pourcher AM, et a.l H uman
specific fecal
bacteria in wastew ater treatm ent plan t eff luen ts. W ater Rsearch,
2010, 44 ( 6) : 1873
1883.
[ 28] Saubusse M, M illet L, Delb
s C, et a.l Appl icat ion of s ingle
strand con form ation polym orph ism
pcr m ethod for d istingu ishing
ch eese bacterial comm un ities that inh ib it L i steria m onocytogenes.
Internat ion al Journal of Food M icrob iology, 2007, 116 ( 1 ) : 126

135.

[ 29] Sh een P, M endez M, G ilm an RH, et a.l Sputum PCR
sing le

strand con form ational polymorph ism test for sam e
day detection of
pyrazinam id e resistance in tubercu losis patients. Jou rnal ofC lin ical
M icrobiology, 2009, 47( 9 ): 2937
2943.
[ 30 ] J iang X, Lu C, X iao F, et a.l A rap id and sim p le m ethod for iden

tify ingMycoba cterium tubercu losisW
B eijing st rains based on detec

tion of a un ique mu tat ion in Rv0927 c by PCR
SSCP. M icrobes and
Infect ion, 2009, 11 ( 3) : 419
23.
(责任编辑
狄艳红 )
74