全 文 ：
综述与专论

生物技术通报
BIOTECHNOLOGY
BULLETIN 2010年第 11期
核桃分子生物学研究进展
田荣欢 刘迪秋 陈朝银 葛锋 方松刚 王光勇
(昆明理工大学生命科学与技术学院,昆明 650224 )


摘
要:
核桃与扁桃、腰果、榛子并列为世界四大干果, 具有重要的经济价值和基础研究价值。分子生物学及基因工程
技术的发展为核桃基础理论研究提供了新的技术手段。从分子水平综述了核桃过敏原和其引发过敏症的机理、再生长期糖
运输和叶片水分运输的调控、组织培养技术的发展和利用转基因技术来培育核桃新材料的现状、核桃种质资源的遗传分析研
究进展, 并对核桃的研究前景进行了展望。
关键词:
核桃 过敏原 生长发育 组织培养 转基因 种质资源
Research onMolecular B iology ofWalnuts(Jug lans)
T ian Ronghuan L iu D iqiu Chen Chaoyin Ge Feng F ang Songgang W angGuangyong
(Faculty of Life Science and T echnology, K unming University of Science and T echnology, Kunm ing 650224)


Abstrac:t
W alnut, a lm ond, cashew, and haze lnu t be long to the fourm a in dried fru its. Thew a lnu ts have im po rtant econom ic va lue
and g reat potentia l fo r research ing fundam enta l concepts. W ith the deve lopm ent ofm o lecu lar biology and genetic eng ineer ing, new tech

n iques can be used in the theoretica l researches on w alnuts. In this paper, the food a llergen of w alnuts and them echan ism of wa lnut a l

lergy, the regu lation of long
distance transportation of carbohydrate and thew ate r transpo rtation in leaves, the deve lopm en t o f tissue cu l

tu re techn iques and new w a lnuts m ate rials by m eans o f the transgenic techno logy, and the gene tic ana ly sis of wa lnut germ plasm re

sources w ere rev iew ed a t them o lecular leve.l In add ition, the future prospect of sc ientific resea rches on w alnut w as v iew ed.
Key words:
W alnu t
Allergen
G row th and development
T issue cu lture
T ransgene
Germ plasm resources
收稿日期: 2010
05
17
基金项目:云南省科技攻关项目 ( 2009EB081) ,昆明理工大学研究生创新基金
作者简介:田荣欢,男,在读硕士研究生,研究方向:分子生物学; E
m ai:l 2266600ronghuan@ 163. com
通讯作者:刘迪秋,副教授,研究方向:分子生物学; E
ma i:l d iq iu liu@ gma i.l com
核桃 (Jug lans)又名胡桃,系胡桃科 ( Jug landace

ae)核桃属植物。核桃广泛分布于亚洲、欧洲和美
洲,共有 23个种, 分为核桃组 ( Sec.t Jug lans)、核桃
楸组 ( Sec.t Card iocaryon )、黑核桃组 ( Sec.t Rhyso

caryon )和灰核桃组 ( Sec.t T rachy cary on )。核桃包括
果用、材用、果材兼用等多个重要的树种, 还是重要
的木本油料树种。核桃核仁含有多种植物脂肪、蛋
白质、碳水化合物以及多种矿物元素和维生素,还含
有促进人体健康的

3脂肪酸、褪黑激素、生育酚和
抗氧化剂等化合物,具有很高的营养和药用价值,能
有效减缓和预防心脏病、癌症、动脉疾病、糖尿病、高
血压、肥胖症和抑郁症的发生 [ 1]。随着分子生物
学、遗传学的发展和组织培养技术、转基因技术的广
泛应用,核桃分子生物学相关领域的研究取得了很
大进展。就核桃过敏原及其引发过敏的机理、核桃
的生长发育、核桃的组织培养、转基因核桃以及核桃
种质资源遗传学研究进展进行概述。
1 核桃过敏原及其诱发过敏的机理
核桃过敏症是高发性的过敏性疾病。现已发现
核桃具有几种不同的主要过敏原蛋白, 包括 2S白蛋
白 ( Jur 1)、7S豌豆球蛋白类似蛋白 ( Jur 2)、脂质转
运蛋白 ( Jur 3)、11S豆球蛋白类似蛋白 ( Jur 4)和脯
氨酸 ( Jur 5) [ 2- 6]。而其中 Jur 1和 Jur 2是研究较多
的过敏原蛋白。
2S白蛋白是富含精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸和半
胱氨酸的小球蛋白,由巨型亚单位和小型亚单位通
过二硫键连接成异二聚体的种子储存蛋白 [ 7]。 2S
白蛋白可溶于水和低浓度盐溶液。在 2S白蛋白 Jug
生物技术通报 B iotechnology
Bulletin 2010年第 11期
r 1分子表面主要有 4个 IgE的结合域, 分别为# 1
6 IDNPRR11、# 2 42YDEDNQRQH50、# 3 72QVVR

RQQQQ 80、# 4 102CG ISSQRCE IRR113[ 8 ]。核桃 2S
白蛋白能与过敏症病人的 IgE结合, 并引起过敏症。
临床研究发现对一种核桃发生过敏反应的病人,往
往对其它几种核桃也会发生过敏反应。分子水平上
对此现象的解释是储存蛋白的表位存在同源性,因
此特定 IgE能结合不同来源的同种核桃过敏原 [ 2 ]。
此外, 37
、60
以及 90
加热均未能改变 Jug r 1
的

螺旋, 这表明 Jug r 1对热变性有很强的抗性;
Jug r 1不能被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶水解, 但在
体内的酸性环境 ( pH1. 5)中 Jug r 1很容易被胃蛋
白酶水解,并产生过敏原性 [ 8]。
与白蛋白不同, 豆科植物的球蛋白可溶于高浓
度盐溶液。豆科植物的 7S球蛋白也称为豌豆球蛋
白,是一种重要的种子储存蛋白 [ 9]。在种子蛋白质
体中, 7S球蛋白以三聚体低聚物形式存在, 通常大
小为 40- 70 kD。在一些物种中, 单个基因就可以
编码 7S球蛋白亚单位;其它物种中则需要基因家族
来编码这种亚单位 [ 10]。非豆科植物种子球蛋白与
豆科植物 7S球蛋白具有显著地序列同源性,核桃中
存在一种豌豆球蛋白类似的种子储存前体蛋白 ( Jug
r 2)。从核桃体细胞胚 cDNA文库中筛选出 2 060
bp的基因片段, 其编码含有 593个氨基酸的蛋白,
命名为 Jug r 2[ 11]。 Jug r 2经过翻译后修饰主要形
成一种 47 kD蛋白, 并且相似于可可豆和棉花种子
中的豌豆球蛋白类似蛋白。15个对核桃有系统性
过敏反应病人的血清样本中, 有 9个样本的 IgE能
与核桃蛋白 Jug r 2发生结合,因此认为 Jug r 2是一
种主要的核桃过敏原蛋白。 IgE结合抑制试验发现
Jug r 2与豌豆球蛋白、花生球蛋白、可可蛋白之间发
生微量的交叉反应或不发生交叉反应。
2
核桃的生长发育
2. 1
再生长期糖的运输
在木本植物中, 芽的萌发标志着营养生长的开
始,与此同时产生了对可溶性糖的大量需求。在秋
冬季, 糖转运子能调节糖释放到木质部汁液的液流
中,而液流经过木质部薄壁组织、导管运输到营养器
官。导管相连细胞 ( vessel
assoc iat ied ce lls, VAC s)位
于核桃木质部薄壁组织和导管之间, 在营养物质运
输中起重要作用。PM
H +
ATP酶也主要存在于导
管相连细胞中,能激活运输营养物质的转运子。因
此导管相连细胞质膜的有效转运是营养物质从储存
器官到营养器官的关键。核桃木质部中生长素的增
加诱导 PM
H+
ATP酶含量的增加 [ 12]。芽萌发过程
中, PM
H +
ATP酶在木质部的糖运输中扮演重要的
角色。核桃树体生长恢复期间,核桃木质部组织中,
PM
H +
ATP酶作为一个报告子可进行季节性调
节 [ 13]。冬季时, PM
H+
ATP酶的活性和酶含量均
较低并保持不变,芽处于休眠状态。四、五月期间,
茎基部 PM
H +
ATP酶的活性和酶含量均比较低,
在生长条件适宜时仍不能萌芽; 而茎上部, PM
H+

ATP酶的活性和含量均较高, 在生长条件适宜时开
始萌芽。在营养生长早期, 淀粉水解的可溶性糖增
加并消耗质膜中的 H +
ATP 酶使糖转运子大量集
中。同时, PM
H +
ATP酶为植物细胞糖运输提供了
电子梯度。核桃树体通过 H + /糖转运子从木质部
吸收糖,促进早期的芽萌发。
JrSUT1是由 JrSUT1基因编码的蔗糖转运子,可
调节核桃木质部中蔗糖的转运; 而 JrHT1和 JrHT2
是分别由 JrHT1和 JrHT2基因编码的己糖转运子,
可调节核桃木质部中的己糖转运。四月底, 在核桃
枝条萌芽之前上部木质部薄壁组织细胞富集了大量
JrSUT1, 而基部 JrSUT1的含量很少 [ 14, 15]。与此对
应, 顶端薄壁组织细胞高速吸收并聚集蔗糖,同时积
累了大量的 JrSUT1基因转录物和蛋白。可见 Jr

SUT1能调节蔗糖吸收活性以及从木质部薄壁组织
到芽的蔗糖运输, 为顶端芽的萌发提供了碳源。与
JrSUT1不同, JrHT1和 JrHT2己糖转运子并不能提
供芽萌发时所需的碳源, 在五月份检测到大量
JrHT1和 JrHT2基因的转录物和蛋白, 表明 JrHT1和
JrHT2与茎生长的碳源供给有关 [ 16]。
2. 2
叶片水分运输
陆生植物光合作用需要最大化的吸收二氧化
碳,同时避免损失大量的水分。植物通过各器官动
态调节水分传导力, 其中叶片为整株植物提供了
30%的流体阻力。在叶片中, 水分沿着质外体路径
或细胞间路径移动。在拟南芥中, 对水通道蛋白
( aquaporin) PIP1和 PIP2的表达进行反义抑制, 但
并不能影响叶片质外体的水传导性 [ 17]。这说明随
20
2010年第 11期 田荣欢等:核桃分子生物学研究进展
着蒸腾作用的进行, 组织内的液体沿着质外体途径
高速流动,而质外体途径的水分运输并不通过质膜
水通道蛋白。生理学研究发现核桃质膜水通道蛋白
促进叶片水传导性的提高。核桃叶片中的水传导性
是可调的,并能随环境刺激和放线菌酮处理发生变
化 [ 18]。在黑暗条件下, 叶片的水传导力比较低; 在
光照条件下,叶片的水传导力增加 400%, 而且在光
照条件下,叶片的水传导力随着温度 ( 35
以下 )的
升高而增大。叶片的水传导力与核桃水通道蛋白
JrPIP2, 1以及 JrPIP2, 2基因转录物的含量有关。在
黑暗条件下, JrPIP2基因的转录物含量下降, 与之相
对应叶片水传导性降低;在光照条件下, JrPIP2基因
的表达量上调,与之对应叶片水传导性升高。同时,
在光照条件下, 0. 1mmol /L放线菌酮处理对叶片的
水传导力产生抑制作用, 这主要是由于放线菌酮抑
制了 JrPIP2, 1和 JrPIP2, 2的累积。由此可见水通
道蛋白的生物合成在水传导过程中扮演了重要的角
色。此外,核桃中可调的叶片水传导力能提高叶片
的气体交换, 而叶片的水传导力与气孔开放程度
无关。
3
核桃的组织培养
核桃的传统育种方法周期长、难以保持优良性
状,而通过无性繁殖如嫁接、扦插等产生的种苗成活
率又低,以上因素一直制约着核桃优良品种的繁育
和推广。组织培养技术已广泛应用于植物良种繁
育,为核桃属植物的新品种培育、良种保存和扩繁提
供了一条新途径。
3. 1
外植体的选择
目前, 组织培养技术已成功的应用到早实核桃
(J. regia )、灰核桃 ( J. cinerea )等的研究中。核桃的
多个部位均可作为外植体, 如茎段、芽、子叶等。在
用茎段进行组织培养时, 应选择幼嫩的实生枝条作
为外植体,这样可以避免污染和严重的褐化现象产
生 [ 19]。核桃的幼胚是进行组织培养的较好选择。
从灰核桃果实中分离的未成熟子叶外植体可以再生
体细胞胚 [ 20]。开花后 9周的未成熟子叶在 DKW
( Driver andKun iyukimed ium )培养基 + 250 mg /L L

谷氨酰胺 + 0. 01 mg /L IBA + 1 mg /L 6
BA + 2mg /L
KT上培养 3周, 开始形成体细胞胚。开花后 8- 10
周的未成熟子叶在 DKW + 0. 25mg /L 6
BA + 2 mg /L
2, 4
D上培养 3周, 形成胚性愈伤组织。诱导体细胞
胚和胚性愈伤之后继代于不含激素的 DKW培养基
上,能分化形成球形胚至成熟胚的多种体细胞胚,但
是体细胞胚不能全部形成植株。通过规律的继代,
这种未成熟子叶形成的胚性愈伤组织能够在不含激
素的培养基上维持一年。
3. 2
培养基及激素
用于核桃组培的培养基种类并不是很多,培养效
果较好主要有 DKW、NCG、MS、WPM和改良 MS等培
养基,其中 DKW是用于核桃组织培养最好的培养基。
在基本培养基中,添加不同的激素配比对诱导核桃外
植体的再生起重要作用。早实核桃的幼胚在 DKW +
100mg /L肌醇 + 250mg /L谷氨酰胺 + 1mg /L BAP+
2mg /L KT+ 0. 01mg /L IBA + 30 g /L蔗糖 + 0. 3%
W /V凝胶的培养基上进行培养,大约 4个月后开始胚
胎发生反应 [ 21]。汾阳核桃实生苗组培研究发现,茎
段腋芽萌发的最佳培养基及激素配比为 DKW + 0. 5
mg /L 6
BA+ 0. 5mg /L KT+ 0. 02mg /L IBA [ 19] ,叶片
形成愈伤组织的最佳培养基及激素配比为 DKW +
0
01 mg /L 6
BA + 0. 01mg /L 2, 4
D[ 22 ]。
4 转基因核桃的培育
核桃病虫害严重影响了核桃树体的生长和果实
的产量,如果使用化学农药防治病虫害的发生又存
在极大的环境风险。随着生物技术的不断发展, 应
用转基因技术培育抗病虫的核桃新材料和新品种,
不仅能从根本上解决核桃的病虫害问题,还有利于
环境保护。此外, 通过组织培养产生的核桃再生植
株发根能力差,利用转基因技术也可以培育发根能
力强的核桃, 将大大推动核桃优良品种的繁殖和
推广。
4. 1
冠瘿病的防治
冠瘿病 ( crow n ga ll d isease)是一种由根瘤农杆
菌引起的病害,患病部位,尤其是根茎接合部形成肿
瘤状膨大,造成核桃的减产。虽然在一些农作物中
通过土壤熏蒸法、生物防治等方法有效地控制了冠
瘿病的发病,但是这些措施在核桃冠瘿病防治中效
果并不理想。根瘤农杆菌 T
DNA区的基因在植物细
胞内表达产生与生长素和细胞肽类激素合成相关的
蛋白,并且能够改变植物细胞对激素的敏感性 [ 23 ]。
色氨酸加单氧酶 ( iaaM基因 )和吲哚乙酰胺水解酶
21
生物技术通报 B iotechnology
Bulletin 2010年第 11期
( iaaH )基因产物能将色氨酸转化成生长素吲哚乙酸;
异戊烯转移酶 ( ipt)基因产物能将二甲基烯丙基焦磷
酸和 AMP合成异戊烯 AMP。因此, iaaM、iaaH和 ipt
基因是植物冠瘿病肿瘤形成所必需的,并且不同根瘤
农杆菌菌株中这些肿瘤基因具有大约 90%的核苷
酸序列相似性 [ 24]。构建 iaaM和 ipt基因的 RNA i载
体,并通过农杆菌介导的转化法将这两种载体转入
英国核桃 (J. regia )中 [ 25]。在表达自我互补 iaaM和
ipt转基因的植株中, 小干涉 RNA ( sma ll
interfering
RNAs, siRNA )大量积累, 并对冠瘿病产生了抗性,
有效地抑制了肿瘤的产生。
4. 2
B t抗虫基因转化核桃
虫害的发生减少核桃的坐果率, 使核桃的产量
严重下降,而其中危害核桃的主要害虫是苹果蠹蛾
( Cydia pomonella L. )。苹果蠹蛾的幼虫以核桃果
实为食,并且蚕食正在发育中的胚芽。化学杀虫剂
的使用并不能有效地控制苹果蠹蛾对核桃的危害,
而且对坏境也造成污染,还会引起严重的核桃蚜虫、
小蛀虫等虫害。苏云金芽孢杆菌 ( Bacillus thuring

iensis, B t)是世界上应用面积最广、研究最为深入的
杀虫微生物,目前已从多株野生菌株中克隆得到了
上百个杀虫谱广、高效、具有特异杀虫活性的 Bt毒
蛋白基因,并成功应用于多种抗虫转基因植物的培
育。苹果蠹蛾对从苏云金芽孢杆菌中分离纯化的晶
体蛋白非常敏感,极其微量的 Bt毒素就能使苹果蠹
蛾致死 [ 26]。 cryIA ( c)基因编码一种 B t杀虫晶体蛋
白,载体 pMON10518含有 cry IA ( c)基因的全长结
构,通过农杆菌介导将该基因转入核桃的体细胞胚,
cryIA ( c)基因编码的蛋白在转基因植株茎段的表达
量达到细胞总蛋白的 0. 02% ,而 cryIA ( c)基因编码
的晶体蛋白达到细胞总蛋白的 0. 01%就能使苹果
蠹蛾致死,再生的转基因核桃植株表现了高度的抗
虫性。
4. 3
查尔酮合酶反义基因转化核桃
虽然目前已能够对一些具有优良性状的幼嫩核
桃植株进行微繁殖,但由于生根极难,大多数幼嫩和
发育成熟的具优良性状的核桃植株并不能进行大量
的商品化繁殖。一些物理和化学因素能调控核桃再
生植株的生根能力,其中包括温度、氧浓度、pH值、
植物激素、酶、聚胺类化合物、碳水化合物和酚类化
合物。通过体外试验和体内组分分析发现类黄酮的
存在会抑制核桃苗的生根过程 [ 27]。苯丙氨酸解氨
酶 ( pheny lalan ine ammon ia
lyase, PAL)是苯丙氨酸合
成途径中的关键酶,在类黄酮的生物合成过程中具
有关键作用。从核桃克隆的苯丙氨酸解氨酶基因
JrPAL长 866 bp, 编码 289个氨基酸 [ 28 ]。查尔酮合
酶 ( chalcone synthase, CHS)是植物类黄酮化合物代
谢途径中的一个限速酶, 也是第一个关键酶, 因此
CHS的活性决定了类黄酮化合物的合成量。通过
PCR反应, 从核桃基因组 DNA中得到 400 bp的
CHS基因片段, 将其构建到载体上, 农杆菌介导将
载体转入核桃的胚状体细胞,得到了 13株携带反义
CHS基因的转基因植株,其中 6株的查尔酮合酶表
达量极低 [ 29 ]。在这些转基因核桃植株中类黄酮类
物质的含量也相应减少,微繁新梢中检测不到栎素、
杨梅苷、原花青素等物质。此外, 转基因新梢表现对
外源生长素敏感,生根能力增强。
5
核桃种质资源的遗传分析
核桃的种质资源十分丰富,不同种质在抗病虫
害、耐寒性、丰产性及果实品质等方面都存在显著的
差异,具有丰富的遗传多样性。由于技术的落后,使
核桃种质资源的收集、保存和管理较为困难。近年
来, 分子生物学技术,特别是分子标记技术的出现为
核桃种质资源的保护和利用开辟了新的途径。
通过同工酶酶谱对黑核桃 ( J. nigra )和 8个灰
核桃 ( J. reg ia)品种的种间差异进行研究,过氧化物
酶 I( PRO I)的存在与否是区分核桃与黑核桃的可
靠标记,而脂酶和苹果酸脂脱氢酶是核桃种质鉴定
的最佳酶系统 [ 30]。该研究还从 5个酶系统中发现
了 13个位点和 24个等位基因,而其中有 8个位点
为多态性位点。此外,计算了不同品种核桃之间的
遗传多样性指数和遗传距离, 并在此基础上绘制了
树状遗传关系图, 从中可以看出核桃品种 Tutle和
B lackmore的遗传差异很大, 而 B lackmo re与 Payne
的亲缘关系较近。利用叶绿体 DNA的 PCR
RFLP
对 J. n igra、J. major、J. hind sii、J. h indsf和 J. australis
5个种的种间遗传多样性进行了研究, 结果显示, J.
nigra、J. major、J. h indsii、J. australis与 J. hind sf之间
的叶绿体 DNA存在显著的差异, 亲缘关系较远;其中
J. nigra与 J. major、J. hindsii和 J. australis的叶绿体
22
2010年第 11期 田荣欢等:核桃分子生物学研究进展
染色体基因组也存在差异,而 J. major、J. hindsii和 J.
australis来自同一个母系 [ 32]。使用 30对黑核桃微卫
星引物对东部黑核桃 (J. nigra L. )、小果核桃 ( J. m i

crocarpa Dode)、麻核桃 (J. hop eiensisHu)等 13个种进
行扩增,黑核桃 5个样品的扩增有效性达到了 90% ,
而且其它种扩增有效性也达到了 72
78% [ 33]。每个
SSR位点扩增的等位基因达 8- 22个, 其中黑核桃
的多态性信息含量最高, 为 0. 804; 核桃楸 ( J. mand

shurica M ax. )多态性信息含量最低,为 0. 222。
采用 AFLP标记技术对土耳其 22株核桃耐寒
基因型的遗传关系进行分析,发现基因型间的遗传
变异水平相对较低, 说明核桃耐寒基因型的遗传基
础窄, 地域差异并不影响核桃耐寒基因型的遗传关
系 [ 31]。叶绿体基因组属于母系遗传, 通过叶绿体基
因可以确定出核桃品种之间的亲缘关系。运用
RAPD标记对 8个核桃 ( J. reg ia )样品和 8个铁核桃
(J. sigillata Dode)样品的基因池进行 PCR扩增,结
果表明 D6
250可能是核桃与铁核桃之间的特异性
分子标记,而两个基因池间在基因组水平上的差异
非常小 [ 28]。利用 RAPD技术对新疆核桃早实特性
进行研究 [ 29]。采用 180个 10
m er随机引物对 12个
早实核桃品种和 2个晚实核桃品种进行 RAPD扩
增,而其中只有引物 OPG15扩增出一条早实核桃特
异片段,经测序分析表明该特异条带长度为 759 bp。
然后设计重复性和特异性更好的 SCAR引物分别对
早实核桃和晚实核桃进行 PCR扩增, 结果显示只有
早实核桃扩增出了预期的 759 bp特异条带。这也说
明这对特异引物有可能是核桃早实性的特异 SCAR
标记。
以上这些分子水平的检测结果表明, 核桃种质
资源存在丰富的遗传多样性。同时, AFLP、RAPD、
SCAR、同工酶谱等分子水平技术手段可作为核桃种
质鉴定、分类以及新品种保护的有效工具。综合已
有的核桃种质资源信息, 充分利用核桃种植资源的
鉴定方法, 就可以合理开发利用和保存核桃种质
资源。
6 展望
我国的核桃品种繁多,种质资源丰富,核桃种植
面积与产量均居世界首位。但我国核桃的研发与发
达国家还存在一定差距, 单位面积产量与产品质量
也相对较差。而制约核桃产业发展的主要因素为优
良品种的繁育技术落后、抗性差、产量低、品质差。
开展核桃组培技术、转基因技术、遗传多样性的研
究, 将有助于确定核桃核心种质, 合理的开发和利用
核桃的种植资源, 培育出早实、丰产、抗逆性强的核
桃优良品种,建立快速有效的核桃繁育体系,发展一
种快速高效的核桃优良苗木繁育技术,从而推动我
国核桃的产业化发展。
参 考 文 献
[ 1] 李敏,刘媛,孙翠, 等.核桃营养价值研究进展.中国粮油学报,
2009, 24( 6 ): 166
170.
[ 2] Teuber SS, Dandek ar AM, Peterson WR, et a.l C lon ing and sequen

cing of a gen e encoding a 2S album in seed storage p rotein p recursor
from E nglish w alnut( Jug lan s reg ia ), a m ajor food allergen. JA llergy
C lin Imm uno,l 1998, 101 ( 6 P t 1) : 807
814.
[ 3] Pastorello EA, Fario li L, Pravetton i V, et a.l L ip id t ransfer protein
and vicil in are important w alnu t allergens in patients not allerg ic to
pollen. JA llergy C lin Immuno,l 2004, 114( 4) : 908
914.
[ 4] Teuber SS, PetersonWR. System ic allergic react ion to coconut( Cocos
nucif era ) in 2 sub jects w ith hypersen sitivity to tree nu t and dem on

strat ion of cross
react ivity to legum in
l ike seed storage p roteins: new
coconu t and w alnut food allergen s. J A llergy C lin Imm uno,l 1999,
103( 6) : 1180
1185.
[ 5] W allow itzM, PetersonWR, U ratsu S, et a.l Jug r 4, a legum in group
food a llergen from w alnu t(Jug lans regia cv. C hand ler) . JAgric Food
Ch em, 2006, 54 ( 21) : 8369
8375.
[ 6] van Ree R, Vo itenko V, van Leeuw enWA, et a.l P rofilin is a cross

reactive allergen in pollen and vegetable foods. In tA rch A llergy Im

m uno,l 1992, 98( 2 ): 97
104.
[ 7] D
H ondtK, V an Damm e J, Van Den B ossche C, et a.l Studies of the
role of the p ropep tides of the Arabid opsis tha liana 2S album in. Plant
Physio,l 1993, 102( 2 ) : 425
433.
[ 8] Sordet C, Cu lerrier R, Gran ier C, et a.l Expression of Jug r 1, the 2S
album in al lergen from w alnut ( Jug lan s reg ia ) , as a correctly fo lded
and functional recom b inant p rote in. Pept ides, 2009, 30 ( 7 ):
1213
1221.
[ 9] Borroto K, Du re L. Th e g lobu lin seed storage protein s of flow ering
plants are derived from tw o an cestral genes. P lantM ol B io,l 1987, 8
( 2) : 113
131.
[ 10] Doy le JJ, Schu ler MA, G odette WD, et a.l Th e g lycosylated seed
storage protein s ofG lycin e max and P haseolu s vu lgaris. S tru ctural
hom ologies of gen es and protein s. J B iol Ch em, 1986, 261 ( 20 ):
9228
9238.
[ 11] Teuber SS, Jarvis KC, Dandek ar AM, et a.l Iden tif icat ion and clo

n ing of a com p lem en tary DNA en cod ing a vicilin
like proprotein,
23
生物技术通报 B iotechnology
Bulletin 2010年第 11期
Jug r 2, from E nglish wa lnut kernel( Juglans reg ia ) , a m ajor food
allergen. J A llergy C lin Imm uno,l 1999, 104 ( 6) : 1311
1320.
[ 12 ] Fr
as I, C aldeiraMT, P
rez
C as tin~ eira JR, et a.l A m ajor isoform of
th em aize p lasm a m emb rane H ( + )
ATPase: characterization and
induct ion by aux in in coleopt iles. P lan t C el,l 1996, 8 ( 9 ) :
1533
1544.
[ 13 ] A lves G, Decou rteix M, F leu rat
Lessard P, et a.l Spatial act ivity and
express ion of p lasm a m em bran eH +
ATPase in stem xy lem ofw al

nu t du ring dormancy and grow th resump tion. T ree Physio,l 2007, 27
( 10) : 1471
1480.
[ 14 ] Decou rteix M, A lves G, Bonhomm e M, et a.l Sucrose( JrSUT1) and
h exose( JrHT1 and JrHT2) transporters inw alnu txylem parenchym a
cells: their poten tial role in early events of grow th resum pt ion. T ree
Phys io,l 2008, 28( 2 ) : 215
224.
[ 15 ] Decourte ix M, A lves G, B runel N, et a.l JrSUT1, a putative xylem
su crose transporter, cou ld m ed iate sucrose in flux in to xylem paren

chym a cells and be up
regu lated by freeze
thaw cycles over th e au

tum n
w in ter period in w alnut tree( Jug lans reg ia L. ) . P lan t C ell
Environ, 2006, 29( 1 ): 36
47.
[ 16 ] Daud et FA, Am
glio T, C och ard H, et a.l Experim en tal analys is of
th e role ofw ater and carbon in tree stem d iam eter variations. J Exp
Bot, 2005, 56( 409 ): 135
144.
[ 17 ] M orillon R, C hrispeelsM J. The role of ABA and th e transp irat ion
stream in th e regulation of th e osmot ic w ater perm eab ility of leaf
cells. Proc Natl Acad SciUSA, 2001, 98( 24 ): 14138
14143.
[ 18 ] C och ard H, Ven isse JS, Barigah TS, et a.l Putative role of aqu apor

in s in variab le hyd rau lic conductan ce of leaves in response to ligh t.
Plan t Physio,l 2007, 143 ( 1) : 122
133.
[ 19 ] 张进,张燕,吴国良,等.核桃茎段组织培养.经济林研究, 2005,
23( 2) : 36
38.
[ 20 ] Piju t PM. Som atic emb ryogen es is in butternut, Jug lans cinerea. Ca

nadian Journal of Forest Research, 1993, 23( 5 ): 835
838.
[ 21 ] Breton C, C ornu D, Chriqu i D, et a.l Som at ic emb ryogenesis, m icro

p ropagation and p lant regen erat ion of
Early M ature
w alnut trees
(Jug lans reg ia ) th at f low er in vi tro. Tree physio,l 2004, 24 ( 4 ) :
425
435.
[ 22 ] 张燕,范宏伟,张国强,等.汾阳核桃叶片愈伤组织的诱导、增殖
及分化培养.中国农学通报, 2006, 22 ( 8) : 91
94.
[ 23 ] Z iem ienow icz A. Odyssey ofAg robacterium T
DNA. A cta B ioch im
Po,l 2001, 48( 3) : 623
635.
[ 24] Escobar MA, C iverolo EL, Summ erfelt KR, et a.l RNA i
m ed iated
on cogene s ilen cing con fers res is tan ce to crown ga ll tum origenes is.
P roc N at lAcad S ciUSA, 2001, 98 ( 23) : 13437
13442.
[ 25 ] E scobar MA, L es lie CA, M cG ranahan GH, et a.l S ilen cing crow n
ga ll disease in w alnut( Jug lan s reg ia L. ) . Plant S cience, 2002, 163
( 3 ): 591
597.
[ 26] Dandekar AM, M cGranahan GH, V ail PV, et a.l H igh levels of ex

pression of fu ll
length cryIA( c) gene from Baci llu s thuring ien sis in
transgen ic som at ic w alnut em bryos. P lan t Sc,i 1998, 13 ( 2 ):
181
193.
[ 27] 王燕,张凤霞,朱俊,等.核桃苯丙氨酸解氨酶的基因克隆与序
列分析.湖北农业学报, 2008, 47( 6 ): 622
626.
[ 28] C laudot AC, D rouetA, Jay
A llem and C. T issue d istribut ion of phe

nolic com pounds in annu al shoots from adult and rejuve
nated hy

brid w alnu t trees. P lan t Phys iol B iochem, 1992, 30( 5 ) : 565
572.
[ 29] E l Euch C, Jay
A llem and C, Pastug lia M, et a.l Expression of ant i

sense chalcone synthase RNA in transgen ic hyb ridw alnu tm icrocu t

t ings. E ffect on flavonoid con tent and rooting ab ility. P lan tM ol B i

o,l 1998, 38( 3 ): 467
479.
[ 30] V yasD, Sharm a SK, Sharm a DR. Gen et ic structu re of w alnut geno

type using leaf isozym es as variab ility m easure. Scient ia H ort,
2003, 97( 2) : 141
152.
[ 31] A bu inM , Diaz R, A lfonsin J, et a.l PCR
RFLP analysis ofC p
DNA
in the genu sJug lans. ActhH ort icu ltu rae, 2006, 705: 215
222.
[ 32] 郝艳宾,肖永强,齐建勋,等.微卫星 DNA在核桃属近缘种同源
性分析上的应用.北京农学院学报, 2006, 21 ( 3) : 1
4.
[ 33] Bayazit S, K azan S, Gt llb itti K, et a.l AFLP analys is of genetic d i

vers ity in low ch ill requ iring w alnu t( Jug lans reg ia L. ) genotypes
from H atay, Turk ey. Scien t ia H ort icu ltu rae, 2007, 111 ( 4 ):
394
398.
[ 34] 陈良华,胡庭兴,张帆.核桃与铁核桃种间关系的 RAPD鉴定.
四川农业大学学报, 2007, 25( 4 ): 513
516.
[ 35] 牛建新,吕建强,王林,等.核桃早实性相关性状的 SCAR标记.
果树学报, 2008, 25( 5 ) : 732
773.
24