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研究报告

生物技术通报
BIOTECHNOLOGY
BULLETIN 2010年第 5期
猪肝沙门菌的分离鉴定及耐药性分析
刘茜
(邢台医学高等专科学校微生物与免疫教研室,邢台 054000)


摘
要:
根据动物产品中沙门菌的分离和耐药性分析, 来评估猪肝中沙门菌的危害程度。对猪肝沙门菌采用分离培
养, 并进行药敏纸片扩散试验法分析,得出猪肝中沙门菌耐药现象严重的结论。从猪肝中所分离出的 5株沙门菌都有不同程
度的耐药存在, 而且多重耐药现象也普遍存在, 特别是对庆大霉素、利福平、多粘菌素 B等常用药物耐药 (耐药率 100% ),建议
近期对猪沙门菌病的治疗用药为阿米卡星、头孢克肟、头胞噻肟。这些提示当用药物进行治疗时, 必须在用药前对病原菌进
行药敏试验, 只有这样才能有针对性地筛选敏感药物, 以提高疗效。
关键词:
猪肝 沙门菌 分离鉴定 耐药性
Separation of Salmonella Bacteria and Drug
Resistance Analysis in Liver of Pig
L iu Q ian
(T eaching of M icrobiology and Immuno logy in X ingtaiM edicalCo llege, X ingtai 054000)


Abstrac:t
Fo rSalm onella bacteria sepa ra tion and drug resistance analysis in an im al products, harm degree o f salm onella bacter ia
in the liver of p ig w as eva luated. Form any Salmonella bac teria separa ted, and drug susceptibility test ana ly sis me thod, the paper con

cluded that spread in the liver of pig Salm onella bacteria resistant phenom enon seriously. There are different leve ls o f resistance in 5
stra ins of Salm onella bacter ia of separation, but a lso ex istsm ultip le resistance is w idespread, espec ia lly resistant to gentamycin, r ifabu tin
and polym yx in B tolerance, and resistance rate is h ighly to 100% . Am y, latter gram s and la tter th iazide cytoplasm are recomm ended fo r
treatmen.t Th is suggests tha t when trea ted w ith m edic inew hile m ed ication, m ust be in be fo re pathogen on susceptib ility test, only then
can pertinently screen ing drugs, in orde r to improve the sens itiv ity.
Key words:
L iver o f pig
Salm onella bacter ia Separation Identification drug res istance
收稿日期: 2010
02
08
作者简介:刘茜,女,硕士研究生,研究方向:微生物的分类鉴定; E
m ai:l liuq ian xpyz@ yahoo
wm
cn
近年来, 动物产品中遭受病原菌污染的现象不
断增多,由沙门菌感染引发的许多公共卫生事件屡
屡发生。鉴于沙门菌对人类的侵害性和分布的广泛
性,动物产品检验时, 往往将沙门菌检出与否作为一
项重要的卫生指标来控制。为此, 对猪肝沙门菌进
行分离及耐药性研究, 以为今后沙门菌理论研究及
疾病治疗奠定一定的基础。
1
材料和方法
1
1
材料
1
1
1
猪肝样本
1号 ( 46 d仔猪肝 )、2号 (种公
猪猪肝 )、3号 (哺乳母猪猪肝 )、4号 (经产母猪猪
肝 )、5号 (后备母猪猪肝 ) ,由本地区猪场提供。
1
1
2
培养基
缓冲蛋白胨水增菌液 ( BP )、氯化
镁孔雀绿肉汤 ( MM )、亚硒酸盐胱氨酸增菌液
( SC)、亚硫酸铋琼脂培养基 ( BS )、XLD琼脂培养
基、三糖铁琼脂培养基、尿素琼脂培养基、氰化钾培
养基、氨基酸脱羧酶试验培养基、LB肉汤培养基、营
养琼脂、生理盐水等。
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1
3
药敏纸片
庆大霉素,阿米卡星, 头孢三嗪,
新霉素,利福平, 头孢噻肟, 头孢克肟, 多粘菌素 B,
氧氟沙星,痢特灵, 硫酸粘杆菌素,土霉素等,购自北
京微生物试剂有限公司。
1
1
4
试验仪器 LDZX
40B I型立式自动电热压
力蒸气灭菌器、THZ
82气浴恒温振荡箱、SW
C J

生物技术通报 B iotechnology
Bulletin 2010年第 5期
LCU型双人单面净化工作台。
1
2
方法
1
2
1
猪肝中沙门菌的分离和鉴定 [ 1- 4] 以无菌
操作于仔猪、种公猪、哺乳母猪、经产母猪及后备母
猪,分别采集约 50 g左右的猪肝样本, 放入灭菌三
角瓶中,包扎封口后贴标签。无菌称取以上各种肝
样 25 g,置于 225 mL缓冲蛋白胨水 ( BP) ,摇匀, 36

1
, 4 h进行前增菌。
吸取 100 mL前增菌液, 分别接种于 100 mL氯
化镁孔雀绿增菌液 (MM )和 100 mL亚硒酸盐胱氨
酸增菌液 ( SC ) , 两者分别在 42
及 36
1
培养
18- 24 h, 进行增菌。
将可疑菌落接种于三糖铁琼脂、BP(供作靛基
质试验 )、尿素琼脂培养基、氰化钾培养基 ( KCN )、
赖氨酸脱羧酶试验培养基中, 36
1
培养 18024 h,
记录结果 [ 5]。据生化反应结果,按照沙门菌属生化
反应判定表做初步判定。反应结果属于 A的可判
定为沙门菌属,属于 B、C的进一步用A
F多价血清
做凝集试验再作判定,其它反应结果均可排除。
O抗原鉴定 [ 6]首先用 A
F多价血清作玻片凝集
试验,同时用生理盐水作对照, A
F多价血清反应阳
性为
+
,即呈现凝集。生理盐水为


的, 进行 O
因子血清分型。H抗原鉴定: 根据所确定的 O群,
依次用 H因子血清检查 1相和 2相 H抗原。
1
2
2
猪肝中沙门菌的耐药性分析 菌液制备 [ 7]
分别挑取 LB斜面保存的 1
2
1中的 5株沙门菌 2
- 3环,接种于 5 mL LB肉汤中, 37
过夜摇培 (转
速为 250 r /m in) ,稀释至 10– 5备用。
药敏纸片扩散试验法 [ 8]分别取 10
5菌液 1 mL
均匀涂布于营养琼脂平板表面, 用无菌镊子将各种
抗菌药物纸片,分别贴于培养基表面, 37
培养 24 h
观察结果,测量抑菌圈直径。
2
结果与分析
2
1
猪肝沙门菌分离后的生化鉴定
将 1- 5号猪肝样本中分离出的可疑菌, 进行硫
化氢、靛基质、尿素等有关生化反应试验,结果见表
1。从表 1中得出,可疑菌属于沙门菌属、艾希菌属、
志贺菌属中的一种。根据沙门菌属生化反应判定
表, 分离出的可疑菌还需进一步用 A
F多价血清做
凝集试验后再作判定。
表 1 猪肝中沙门菌的生化鉴定结果表
样本 硫化氢 靛基质 pH7
2尿素 氰化钾 赖氨酸脱羧酶 判定菌属
沙门菌 1号 S1 (小猪肝中分离 ) - - - - +
沙门菌 2号 S2 (种公猪肝中分离 ) + - - - +
沙门菌 3号 S3 (哺乳母猪肝中分离 ) + - - - +
沙门菌 4号 S4 (经产母猪肝中分离 ) - - - - +
沙门菌 5号 S5 (后备母猪肝中分离 ) - - - - +

沙门菌属、大肠艾希菌属、志
贺菌属等


通过对血清学试验鉴定,查阅沙门菌属抗原表
判定菌型,得出鉴定结果。其中, 沙门菌 1号 S1血
清学结果为 O1, 4, 12 + , H b+ , h1, 2 + , 查表菌型为乙型副
伤寒沙门菌; 沙门菌 2 号 S2 血清学结果为
O1, 4, 12, 27 + , H d + , h1, 2 + ,查表菌型为斯坦利沙门菌; 沙
门菌 3号 S3血清学结果为 O3, 1 o+ , H f, g, s+ , h1, 6 + , 查
表菌型为雷根特沙门菌;沙门菌 4号 S4血清学结果
为 O1, 4, 12 + ,H f, g + , h1, 2 + , 查表菌型为德尔卑沙门菌;
沙门菌 5号 S5血清学结果为 O1, 4, 12 + , H i+ , h1, 2 + ,查
表菌型为鼠伤寒沙门菌。
由此可见,猪肝样本中共分离鉴定 5株沙门菌,
它们分别是 S1乙型副伤寒沙门菌; S2斯坦利沙门
菌; S3雷根特沙门菌; S4德尔卑沙门菌; S5鼠伤寒
沙门菌。
2
2
猪肝中沙门菌的药敏试验与耐药性分析结果
对 1- 5号猪肝样本中分离出的 5株沙门菌经
培养后,接种于营养琼脂平板表面,贴上不同的药物
纸片,药敏试验结果见表 2。从表 2看出, S1乙型副
伤寒沙门菌、S2斯坦利沙门菌、S3雷根特沙门菌、
S4德尔卑沙门菌、S5鼠伤寒沙门菌, 在贴入阿米卡
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2010年第 5期 刘茜: 猪肝沙门菌的分离鉴定及耐药性分析
星、头孢克肟及头胞噻肟 3种药片后经培养,其抑菌
圈直径较大。根据抑菌圈直径大小与药物敏感标准
判断, 5株沙门菌对阿米卡星、头孢克肟及头胞噻肟
3种药物高度敏感。
表 2 五株沙门菌的药敏试验结果
药敏纸片
不同沙门菌的抑菌圈直径大小 ( mm )
沙门菌 1号 S1
(小猪肝中分离 )
沙门菌 2号 S2
(种公猪肝中分离 )
沙门菌 3号 S3
(哺乳母猪肝中分离 )
沙门菌 4号 S4
(经产母猪肝中分离 )
沙门菌 5号 S5
(后备母猪肝中分离 )
新霉素 20 8 17 10 8
庆大霉素 10 8 12 9 0
土霉素 10 7 0 12 0
阿米卡星 22 18 20 22 19
头孢克肟 30 28 26 17 20
痢特灵 12 10 13 0 5
头孢三嗪 28 25 18 16 20
利福平 7 9 5 15 11
氧氟沙星 10 11 12 14 15
头胞噻肟 19 20 22 19 18
多粘菌素 B 5 0 0 8 9
硫酸粘杆菌素 5 13 13 15 20
根据药物敏感性标准及表 2的试验结果, 进一
步进行了耐药性分析 (表 3)。由表 3看出, S1乙型
副伤寒沙门菌、S2斯坦利沙门菌、S3雷根特沙门
菌、S4德尔卑沙门菌及 S5鼠伤寒沙门菌对阿米卡
星、头孢克肟及头胞噻肟这 3种药物高度敏感,这 3
种药中又以阿米卡星最为敏感; 对庆大霉素、利福
平、多粘菌素 B等药物高度耐药, 耐药率为 100%。
对新霉素的耐药率为 60%, 对氧氟沙星的耐药率均
为 40% ,对土霉素、利特灵、头孢三嗪和硫酸粘杆菌
素的耐药率为 20%。
表 3 五株沙门菌的药敏性及耐药性试验结果
药物 沙门菌 1号 S1
(小猪肝中分离 )
沙门菌 2号 S2
(种公猪肝中分离 )
沙门菌 3号 S3
(哺乳母猪肝中分离 )
沙门菌 4号 S4
(经产母猪肝中分离 )
沙门菌 5号 S5
(后备母猪肝中分离 )
沙门菌耐药率
%
新霉素 + - + - - 60
庆大霉素 - - - - - 100
土霉素 - - - + - 20
阿米卡星 + + + + + + + + + + 0
头孢克肟 + + + + + + + + + 0
痢特灵 + - - - - 20
头孢三嗪 + + + + + + 20
利福平 - - - - - 100
氧氟沙星 - - - + + 40
头胞噻肟 + + + + + 0
多粘菌素 B - - - - - 100
硫酸粘杆菌素 - + + + + + 20
注: - .耐药; + .中度敏感; + + .敏感
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生物技术通报 B iotechnology
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在这些药中,庆大霉素,利福平等经常用于防治
沙门菌的药并没有表现出良好的抑菌效果。这与国
内外其他相关研究结果相似 [ 9- 11] , 从本次药敏试验
结果可以看出,猪肝沙门菌的耐药现象严重,特别是
对庆大霉素、利福平、多粘菌素 B等常用药物耐药
(耐药率 100% ),建议近期对猪中沙门菌病的治疗
用药为阿米卡星,头孢克肟, 头胞噻肟, 这几种药在
市场上的出现时间并不长,使用较少,在提高猪沙门
菌病的疗效上可以产生积极的效果。
从表 3中还可以看出,不同沙门菌的耐药性也
存在着差异,如乙型副伤寒沙门菌 S1对新霉素、痢
特灵等药物敏感,而斯坦利沙门菌 S2和鼠伤寒沙门
菌 S5则对这些药物耐药; 德尔卑沙门菌 S4对土霉
素敏感,而斯坦利沙门菌 S2、雷根特沙门菌 S3和鼠
伤寒沙门菌 S5则对其耐药; 分析其原因: 一是沙门
菌依据不同的 O、H、K和菌毛抗原分为许多种血清
型,耐药性存在差异可能是因为不同的血清型所致;
二是由于养殖户长期的滥用抗生素且使用剂量在不
断加大,造成菌株的耐药性不断增加,且造成了菌株
间的耐药性差异。所分离出的 5株沙门菌, 都有不
同程度的耐药现象存在, 而且多重耐药现象也普遍
存在, 给临床治疗带来了困难, 使得疗效不容易提
高,这与国内其他地区的现象是一致的,这提示当用
药物进行治疗时,必须在用药前对病原菌进行药敏
试验, 只有这样才能有针对性地筛选敏感药物,以提
高疗效。
3
结论
S1乙型副伤寒沙门菌、S2斯坦利沙门菌、S3雷
根特沙门菌、S4德尔卑沙门菌、S5鼠伤寒沙门菌对
阿米卡星、头孢克肟、头胞噻肟这 3种药物高度敏
感,在生产中阿米卡星、头孢克肟、头胞噻肟这 3种
药物应作为治疗由沙门菌引起疾病的首选药物。
选择药物治疗应在药敏试验基础上, 选择高敏
药物用于治疗,这样,既能收到理想的治疗效果,又
可降低生产成本,获取较高的经济效益;同时又可避
免或减少耐药菌株的产生, 还应考虑联合用药和交
替用药避免耐药性的产生。
为了减少细菌耐药性的产生,提高抗菌药物的
疗效,可采取下列措施一是杜绝或尽量少用抗菌药
物作为饲料添加剂。因为小剂量长期用药, 实际上
就是细菌耐药性的诱导过程。二是抗菌药物的
轮
休
。若减少或不使用抗菌药, 细菌对抗菌药物的
抵抗能力会逐渐减弱,过一段时间后耐药菌株在细
菌中所占的比例下降,甚至恢复到敏感状态。
参 考 文 献
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