全 文 ：生命科学
Chinese Bulletin of Life Sciences
第 18卷 第 4期
2006年 8月
Vol. 18, No. 4
Aug., 2006
选择性剪接在 Toll样受体 4信号转导通路中的作用
李洪忠，万敬员*，周岐新
(重庆医科大学重庆市生物化学与分子药理学重点实验室, 重庆 400010)
摘 要：Toll样受体 4(Toll-like receptor4，TLR4)属于模式识别受体，可识别来自 G-细菌细胞壁的脂
多糖(lipopoly-saccharides，LPS)，并通过MyD88依赖途径或MyD88非依赖途径进行信号转导，引发
核因子 -κB(NF-κB)和其他转录因子的表达，从而诱导细胞因子、化学趋化因子的产生，引起系统性炎
症反应。选择性剪接是真核生物控制基因表达的一种重要机制，在 TLR4通路中很多信号分子都存在着
选择性剪接产生的异构体，且这些剪接异构体分子大都可负性调控 TLR4信号转导通路。本文针对这方
面的研究进展作一综述。
关键词：T L R 4；脂多糖；信号转导；选择性剪接
中图分类号：Q538; Q501　　文献标识码：A
The role of alternative splicing in the Toll-like receptor 4 signal transduction
LI Hong-Zhong, WAN Jing-Yuan*, ZHOU Qi-Xin
(Chongqing Key Laboratory of Biochemistry and Molecular Pharmacology, Chongqing Unversity of
Medical Sciences, Chongqing 400010, China)
Abstract: Toll-like receptor4 (TLR4) is the primary recognition molecule for inflammatory responses initiated by
bacterial lipopolysaccharides(LPS). After LPS is recognized by TLR4, the transcription factors such as nuclear
factor-κB (NF-κB) can be expressed through MyD88-dependent pathway or MyD88-independent pathway
subsequently, which can induce the cytokines production provoking systematical inflammatory reaction. Al-
ternative splicing plays important roles in the eucaryotic gene expression, and a great deal of signaling mol-
ecules in the TLR4 passageway can be alternative spliced naturally. Furthermore, a majority of the isomerides
can negatively modulate TLR4 signal transduction.
Key words: TLR4；lipopolysaccharides；signal transduction；alternative splicing
收稿日期：2005-12-28；修回日期：2006-02-13
基金项目：国家自然科学基金资助(30500463)
作者简介：李洪忠(1981—)，男，硕士研究生；万敬员(1972—)，男，硕士，讲师，*通讯作者；周岐新(1947—)，
男，教授，博士生导师。
文章编号 ：1004-0374(2006)04-0391-06
Toll样受体 4 (Toll-like receptor 4，TLR4)在脂
多糖(lipopolysaccharides，LPS)跨膜信号转导中起着
重要作用，在MD-2的辅助下，LPS通过识别TLR4
细胞外富含亮氨酸的重复结构与 TLR4结合，而在
细胞内有许多接头蛋白，如髓样细胞分化因子 88
(myeloid differentiation factor88, MyD88)、含Toll/IL-1
受体接头蛋白分子(Toll/IL-1 receptor-containing
adaptor molecule,TRIF)、TRIF相关接头蛋白分子
(TRIF-related adaptor molecule, TRAM)等，它们可
与活化的TLR4胞内结构相结合转导信号的下一步传
递。MyD88通过胞浆中的信号分子 IL-1受体相关激
酶 -1(IL-1 receptor associated kinase-1, IRAK-1)、肿
瘤坏死因子受体相关因子 -6 (TNF-receptor associ-
ated factor 6,TRAF-6)等，激活 NF-κB抑制蛋白
392 生命科学 第18卷
(inhibitor of NF-κB, IκB)激酶(IκB kinase, IKK)，使
IκB磷酸化而降解，被解除抑制的NF-κB转位入核
启动转录。TRAF-6还可通过激活MAPK、ERK、
P38和 JNK/SAPK通路，最后导致转录因子 AP-1
(activating protein-1)家族成员 jun和 fos的活化。另
外，活化的 TLR4与接头蛋白 TRIF和 TRAM结合，
可引起转录因子 IRF-3(interferon regulatory factor 3)
和NF-κB的迟发激活。这些转录因子的激活可导致
炎症因子TNF-α、L-1、IL-6、IFN-β、NO、COX-2
等的大量表达，而上述因子的表达失控则可导致全
身炎症反应综合征(systemic inflammatory response
syndrome, SIRS)、多器官功能障碍综合征(multiple
organ dysfuction syndrome, MODS)的发生[1]。选择
性剪接是指选择性地对 Pre-mRNA不同的剪接位点
的组合剪接加工，形成不同的成熟mRNA，进而产
生结构和功能不同的蛋白质的过程。选择性剪接是
真核生物控制基因表达的一种重要机制，生物体通
过这种机制，使有限的基因得以表达大量复杂的蛋
白质[2]。近几年来，TLR4信号转导通路中的几个
关键信号分子都发现了选择性剪接产生的异构体，
而其中绝大部分都能够负性调节TLR4的信号转导，
在炎症的拮抗及内毒素的耐受中起着重要的作用，
现将这方面的研究进展作一综述。
1　胞外及跨膜信号分子的选择性剪接
1.1　MD-2　MD-2为160个氨基酸组成的分泌型糖
蛋白，并有两个不同类的功能重要的氨基接糖基化
位点。MD-2与 LPS直接接合，并与 TLR4的外功
能区相联，对于TLR4介导的LPS信号转导是必不可
少的[3]。 Ohta等[4]通过RT-PCR在鼠的脾细胞和骨髓
细胞中提取出MD-2的一种剪接异构体：MD-2B。
与早先发现的编码MD-2的mRNA相比，MD-2B
mRNA缺失了外显子 3上 3 端的 54个碱基，而产
生了一个比先前发现的MD-2少 18个氨基酸的剪接
异构体蛋白，但MD-2B仍然保留了Arg90至Tyr102区
域，而此区域在MD-2B与TLR4的结合中起着重要
作用。因此，虽然MD-2B缺少了 18个氨基酸，但
仍然具有与 TLR4结合的能力。但通过流弍细胞仪
分析发现，在转染了 FLAG-TLR4 和MD-2B 的
HEK293细胞表面并没有检测到TLR4的表达，而且
MD-2B可剂量依赖性的竞争性的阻断TLR4/MD-2复
合物在细胞表面的表达。NF-κB指示分析发现，在
同量的MD-2和MD-2B共转染的HEK293细胞中，
可以观察到 NF-κB活性较缓和地减弱；当转染的
MD-2B剂量达到MD-2的 8倍水平时，NF-κB活性
将降低到与转染了TLR4和MD-2，但未受LPS刺激
的细胞相同的水平。这都说明MD-2B可以剂量依赖
性的阻断TLR4/MD2介导的LPS信号转导。但MD-
2B在脾细胞、骨髓来源的巨噬细胞及树突状细胞的
含量远少于MD-2，已有资料也未显示在 LPS刺激
下MD-2B mRNA 表达的增加。
1.2　TLR4　TLR4属于 IL-1R/TLR家族，其细胞外
富含亮氨酸的重复结构，细胞内有 TIR(Toll/IL-1
receptor)结构域。Iwami等[5]报道了一种 20kDa大小
的鼠 TLR4选择性剪接蛋白，因其在中国仓鼠卵巢
(CHO)-K1 细胞中表达时，可部分分泌到培养基
中，因此，命名为 smTLR4(soluble mTLR4)。一
般的鼠 TLR4 (mTLR4) mRNA由三个外显子组成，
而 smTLR4 mRNA在第二、三外显子之间还有一个
包含框架终止密码子的附加外显子，并导致一种包
含mTLR4胞外域 86个氨基酸和另外 36个氨基酸的
剪接异构体蛋白的产生，此蛋白含有信号肽，但缺
少明显的跨膜区域和胞内域，其胞外亮氨酸区域除
了与mTLR4相同的亮氨酸序列外，在mTLR4中未
发现的羧基末端氨基酸可形成另外的亮氨酸标记，
因此，可能使 smTLR4与mTLR4的氨基末端区域在
功能上有所不同，例如性质上或者数量上不同的结
合亲和力。研究显示，smTLR4 在鼠巨噬细胞株
RAW264.7的过量表达，可阻断 LPS介导的 TNF-α
的产生和NF-κB的激活，但其具体阻断机制尚不明
了。同时 LPS可以刺激 smTLR4 mRNA的表达，有
理由推测 smTLR4可能在 LPS过度反应中起着反馈
作用。
2　胞浆内信号分子的选择性剪接
2.1　MyD88　MyD88作为TLR4信号通路的接头蛋
白，由C-末端TIR结构域、中间连接区(intermediate
domain, ID)和N-末端死亡结构域(death domain, DD)
组成。C-末端 TIR结构域和DD分别与 TLR4及下
游的 IRAK相互作用，介导通路的转导[6]。Janssens
等[7]发现了一缺少 ID 的MyD88s的剪接异构体：
MyD88s(27kDa)，其只在脾细胞和少量的脑组织中
表达。正常的小鼠MyD88基因有五个外显子和四个
内含子组成，第一个外显子编码 D D ( 氨基酸
1~109)，第二个外显子编码 ID(氨基酸 110~154)，
剩下的三个外显子编码 TIR区域(氨基酸 155~296)。
MyD88s因缺少第二个外显子而导致了 ID的丢失[7]。
ID对于信号的下行转导有着重要的作用，缺少了ID
393第4期 李洪忠，等：选择性剪接在 Toll样受体 4信号转导通路中的作用
的MyD88s无法与 IRAK4结合，从而阻断了 IRAK4
诱导的 IRAK1的激活，使信号无法下行传导[8]。实
验结果也证明了MyD88s可抑制 IL-1、LPS诱导的
NF-κΒ的激活，LPS的刺激也能够诱导单核细胞中
MyD88s的表达，但当其在HEK293T细胞过量表达
时，仍允许 JNK的磷酸化和AP-1的激活，揭示了
选择性剪接在精细调节信号通路中起着重要作用，
但其具体机制不明[9]。
2.2　IRAK　IRAK-1是TLR4通路重要的下游信号分
子，由 712 个氨基酸组成，包含两个功能域：与
MyD88s和Toll相互作用蛋白(Toll interacting protein,
Tollip)产生蛋白-蛋白间作用的N-末端DD以及中心
位置的丝氨酸 / 苏氨酸激酶区域 [ 1 0 ]。J e n s e n 和
Whitehead[11]鉴别出了一种 IRAK-1的剪接异构体，
并命名为 IRAK-1b。与早先发现的 IRAK-1a相比，
其编码基因缺失了外显子 12 5 端的 90个碱基对，
因而造成IRAK-1b激酶区域C-末端30个氨基酸的缺
乏。与 IRAK-1a一样，IRAK-1b可以在人和鼠身上
广泛的组织中表达。免疫共沉淀试验显示，IRAK-1b
可与 IRAK-1a形成二聚体，且可与 Tollip共沉淀，
说明 IRAK-1b与 IL-1信号转导有关。与 IRAK-1a不
同的是，IRAK -1b 不能够磷酸化，也不易降解，
IRAK-1b激活NF-κΒ的效率也比 IRAK-1a低得多，
大约20倍于IRAK-1a的IRAK-1b才能诱导与IRAK-1a
相同水平的 NF-κΒ的激活。当未受 IL-1刺激的细
胞，IRAK-1b与 IRAK-1a有着差不多相同的半衰
期，但在 IL-1的刺激下，IRAK-1b的水平基本保持
不变，而 IRAK-1a水平却因磷酸化而变得不稳定。
因此，在未受刺激的细胞及炎症早期，IRAK-1a作
为主要的异构体存在，并可以在急性期反应中引起
NF-κΒ的高水平激活，快速启动炎症反应；为了
避免NF-κΒ基因表达的刺激过度，IRAK-1a被逐渐
降解掉，取而代之以 IRAK-1b，从而使炎症水平保
持在一个长久但相对温和的水平。
新近，一被命名为 IRAK1c的异构体被发现，
其缺失了外显子 11，并因缺少激酶活性而不能被
IRAK4磷酸化，但依然保留有与 IRAK2、MyD88、
Tollip和 TRAF6等强烈 IRAK1c相互作用的能力。
IRAK1c过量表达抑制了NF-κΒ的活性，并阻滞IL-1β
诱导产生 IL-6及LPS和CpG诱导的TNF的产生，因
此，IRAK1c在信号转导中起着负性调节的作用。
IRAK1c可与 IRAK1一样在大部分组织中表达，但
在脑组织中却是 IRAK1的主要表达形式[12]。
Yanagisawa等[13]也发现了鼠IRAK-1的剪接异构
体：IRAK-1-S。与早先发现的 IRAK-1相比，IRAK-1-S
cDNA缺失了外显子 12上的 271个核苷酸，并引起
读码移位而使转录在23个氨基酸后过早的终止。因
其缺少了激酶域的全部 C-末端区域，IRAK-1-S蛋
白不能够与 TRAF6结合，但可通过DD与 IRAK-1
结合而激活 TRAF6，并进一步激活NF-κB和 JNK，
但其功能仍不清楚，而且当其与 IRAK-1结合形成
复合物后，只能与一个 TRAF6分子结合，这样就
减弱了 IL-1和 IRAK依赖性的信号级联，这是否与
TLR和 LPS介导的信号通路相关也不确定。
Hardy等[14]在鼠身上发现了 IRAK2的四个剪接
异构体：IRAK2a、IRAK2b、IRAK2c、IRAK2d
(此四种异构体未在人类身上发现)。鼠 IRAK2基因
由 13个外显子和 12个内含子组成，并编码一个全
长 622个氨基酸的蛋白。此蛋白包含一个明显的激
酶区域(氨基酸 206~471)和不明显的 DD(氨基酸
14~93)。外显子 1包含 IRAK2a、IRAK2b、 IRAK2d
的普通 5 端非转录区(untranslated region, UTR)、起
始密码子(ATG)和N-末端(aa1~13); 外显子 2编码整
个DD；外显子 3和 4分别编码中间域的α和 β子域
(aa94~205); 外显子 5~11编码激酶域；外显子12~13
编码C-末端，IRAK2的所有异构体的终止密码子都
存在于外显子 13上。IRAK2a包含全部的外显子，
IRAK2b和IRAK2d在基因跳跃的过程中分别因为外
显子 3和 2的缺失而产生。IRAK2c有自己的被外显
子 4的 5 连续区编码的 5 UTR(命名为外显子 4 )，
其ATG位于外显子 4上。IRAK2d也利用外显子 12
上的选择性剪接受体位点30个碱基而导致C-末端10
个氨基酸(C-box)的缺失，但 C-box的功能不明，也
未找到与之匹配的蛋白质基点：因此，产生的异构
体中 IRAK2a是全长 622氨基酸的蛋白；IRAK2b
(574aa)缺少中间域的 α子域；IRAK2c(479aa)缺少
N-末端 143个氨基酸；IRAK2d缺少DD和 C-box。
当过量表达时，IRAK2a和 IRAK2b可以加强LPS诱
导的NF-κΒ的激活，但 IRAK2c和 IRAK2d却可以
阻滞之。这说明 IRAK2中间域α子域的缺失并不影
响 IRAK2b的功能，而N-末端部分氨基酸的缺失和
DD对于 IRAK2的功能是必需的。尤其是 IRAK2c，
其 5 UTR与其他三个异构体的 5 UTR被 30kb所分
开，这暗示它的表达和调控是由不同的启动子引起
的。对外显子 1和 4的 5侧翼区序列的分析发现，
IRAK2c的此区域有NF-κB、信号换能器和转录激
394 生命科学 第18卷
活子 1(signal transducers and activators of transcrip-
tion 1)、白介素调节因子 7(interferon regulator factor
7)等的转录因子结合位点，而其他三个编码 5UTR
的外显子1的5侧翼区却没有这些位点。这说明LPS
能够诱导其表达，实验结果也证明了这一点。因
此，在 IRAK2a和 IRAK2b调节 TLRs信号转导时，
IRAK2c也能够快速的被诱导产生，并负性的调节
TLRs 通路。
2.3　IkB　NF-kB的释放入核需要与之结合的 IkB a
和 IkB b被磷酸化和蛋白水解掉，两个蛋白都包含
保守的信号反应性磷酸化位点和锚蛋白重复序列。
IkB b的两个异构体 IkB b1和 IkB b2在人类细胞上
被发现，而在鼠身上只发现了 IkB b1。与 IkB b1
相比较，IkB b2用内含子起源的序列取代了 C-末
端 PEST序列，并导致 C-末端 PEST基点的缩短。
IkB b1有着和 IkB a相同的信号反应能力，而 IkB
b2信号反应性较低，甚至抵抗信号诱导的降解，这
与其被截短的PEST序列有关，而此基点正促进 IkB a
的高效诱导降解。因此，IkB b2可以被看作起着
负调节作用的 IkB 异构体，它的表达能够使NF-kB
对于各种诱导因子保持低反应状态[15]。
2.4　P38　P38MAPK蛋白已被证实具有抗炎药物结
合蛋白、LPS激活蛋白激酶和应激反应蛋白激酶等
多种作用。至少有四种 P38家族成员被鉴定出来，
其中 P38α 和 P38β 在炎症反应中起着重要作用。
Yagasaki等[16]鉴定出了 P38α的异构体：Exip，其
基因编码 307aa蛋白，但由于读码框架的移位产生
了独特的 53aa C-末端，并缺少了与上游激酶和下
游底物相互作用的对接区域。虽然保留了除蛋白激
酶家族保守子域Ⅺ外的几乎全部激酶催化域，但通
过传统方法未能观察到它的激酶活性。免疫共沉淀
实验还显示 Exip可以与 Tollip结合，而非 P38α；
另外，它还能够像与 Tollip那样与 IRAK结合，说
明它可能参与到 IL-1信号转导的受体相关复合物
中。通过实验也发现，Exip能够下调 IL-1刺激下
的NF-κB的活性，也能损伤 TLRs通路中NF-κB和
AP-1 的活性。Exi p在细胞中的表达量明显低于
P38α，其内源性表达在炎症反应中的生理作用有待
进一步研究。
3　核转录因子的选择性剪接
3.1　NF-κB　NF-κB家族有 p65(RelA)、RelB、c-
Rel、p50/p105(NF-κB1)和 p52/p100(NF-κB2)五个成
员组成。Inoue等[17]通过抗 p105 NF-κB C-末端的
抗体在淋巴样细胞中鉴别出了 70 kDa的蛋白：IκB γ。
它含有607个与p105NF-κB C-末端相同的氨基酸序
列， 在细菌中表达时可抑制 p50-p65 NF-κB异源二
聚体、p50同源二聚体和c-Rel等序列特异性的DNA
结合，并且干扰 c-Rel引起的转活及核转运。但具
体生理作用尚不十分清楚。
3.2　IRF-3　在MyD88非依赖性通路中，转录因子
IRF-3的激活可以诱导 IFN-β基因的表达。Alla等[18]
鉴别出了 IRF-3的异构体 IRF-3a，其氨基末端的
DNA连接区域部分丢失，并在相应部位另加了一独
特的 20氨基酸序列。IRF-3a不能够与 ISREs (IFN-
stimulated response elements)等结合，可能与其
N-末端区域有关，而且 IRF-3a可抑制 IRF-3和内生
性 IFN-β启动子的活性，但由于内在DNA结合能力
的缺乏，不可能竞争性的抑制 IRF-3，可能通过抑
制 IRF-3的转录辅助物，也可能与 IRF-3形成聚合
体而起抑制作用，后者已经通过免疫共沉淀实验观
察到了。IRF-3a 的表达广泛而且存在着组织特异
性，但除了在脑组织中 IRF-3a存在着优势外，在
大多数组织中 IRF-3的水平要比 IRF-3a略高些。因
此，两者之间的相对水平可能在 IFN-β的激活中起
着微调作用。
4　下游效应分子的选择性剪接
在通路的下游效应分子 COX-2、IL-4、IL-6
等，也发现了剪接异构体的存在。
4.1　COX-2　最近，COX-2的异构体 COX-2a和
COX-2b被相继发现。与人体正常表达的 COX-2相
比较，COX-2a丢失了外显子 5的 5端 110个核苷
酸，因此而引起的读码移位使翻译在外显子 5的未
被删除部位终止[19]。通过鼠巨噬细胞mRNA的PCR
扩增及在临产妇女的子宫肌层中，COX-2b均被发
现，其保留了外显子 7 和 8 之间的内含子 7 序列
（282bp），并在内含子 7的第 48~50碱基出现终止
密码[20~21]。两个异构体蛋白都因为亚铁血红素结合
位点的切除而丧失了环氧化酶活性，但 COX-2a的
功能尚不清楚，而对 COX-2b的研究初步证实：炎
症早期，COX-2表达主要导致 PGE2等促炎性 PGs
的产生；晚期，则以 COX-2b的表达为主，主要
产生 PGJ2等抗炎性 PGs，促进炎症的消退[20]。
4.2　IL-4　IL-4的剪接异构体 IL-4δ2删除了外显子
2，因此，只有外显子 1、3 和 4 组成开放式读码
框架，所编码的蛋白缺失了环状域（loop region）
的 22~37aa。IL-4δ2可以特异性的与 IL-4R的 α链
395第4期 李洪忠，等：选择性剪接在 Toll样受体 4信号转导通路中的作用
结合，与 IL-4竞争结合位点[22~23]。在单核细胞中，
重组人 IL-4δ2阻断了人 IL-4在LPS诱导的COX-2表
达和后续 PGE2分泌等方面的抑制作用；而在 B细
胞，重组人 IL-4δ2却是人 IL-4诱导的 IgE合成和
CD23表达的拮抗剂[24]。因此，IL-4δ2的作用是有
目标细胞依赖性的。IL-4δ2在人体的表达也存在着
组织特异性，而在鼠的表达却不存在组织特异性，
其表达的量一般少于 IL-4，半衰期也明显短于 IL-4[25]，
两者之间的表达平衡对于 IL-4的作用可能起着重要
的作用。
4.3　IL-6　现已发现多种 IL-6的异构体，如缺少外
显子 2的 IL-6异构体，它丢失了包含 gp130 IL-6相
互作用区的大部分螺旋 A，因此，它可以和 IL-6R
结合，却不能够与 gp130相互作用，这导致其在信
号转导或者高亲和力结合位点形成中的缺陷。因
此，此异构体起着 IL-6拮抗剂的作用[26]。Bihl等[27]
在人类肺组织中鉴别出了缺少外显子 4的 IL-6异构
体—— IL-6D4。它保留了 IL-6的大部分功能位点，
但丢失了两个氨基酸，而它们对于 IL-6/IL-6的同源
二聚体的形成及与 IL-6Rβ的相互作用是必需的。受
体迁移率变动分析试验确证其可以与IL-6Rα形成稳
定复合物，但与 IL-6Rβ的结合却没有观察到。因
此，此异构体可以与 IL-6竞争 IL-6Rα结合位点，
但却不能转导 IL-6Rβ介导的信号传递。Yatsenko
等[25]也发现了缺失了外显子 3的异构体 IL-6∆3和缺
失了外显子5的异构体IL-6∆5, 两者具体作用尚不清
楚。
5　问题与展望
TLR4通路介导 LPS的信号转导，成为近来治
疗 G-细菌引起的败血症及脓毒性休克的新研究热
点。选择性剪接作为近年来，尤其是人类基因组计
划完成以后的一个新兴研究热点也备受瞩目，它可
能将在治疗药物、药物靶点和诊断标记中扮演重要
角色[28]。TLR4信号通路中的很多关键信号分子和
下游效应分子都存在着自然产生的选择性剪接异构
体，而其中大部分都起着负性调节 TLR4通路的作
用。选择性剪接异构体在细胞中的表达一般不占据
主导地位，但在特殊的情况下，如 LP S 刺激下、
炎症的晚期或炎症反应过度时，它们可以大量或迅
速表达。因此，可以想象选择性剪接异构体与正常
信号分子之间的表达平衡将协调炎症反应的发展，
但其具体机制仍不清楚，如果能够探明其剪接机
制，进而探寻控制剪接异构体多态性表达的可能基
因位点，发现其关键性靶点，将对败血症等的治疗
提供新的思路和方法。
[参　考　文　献]
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我国生物反应器技术取得突破进展
据科学技术部网 2006年 7月 25日报道，在国家“863”计划支持下，我国生物反应器技术取得突
破进展。
(1)在国际上首次成功克隆水牛。广西大学经过 3年的刻苦攻关，首次在国际上成功克隆了水牛，这
是一个全新物种的克隆成功，对水牛的高效繁殖和转基因产业化有巨大的影响，研究结果有望在Nature发
表相关论文。试验一共移植受体母牛 18头，妊娠 2头，于 2004年 11月 19日经剖腹产获得 1头世界首例
体细胞克隆雌性水牛，另一头于 2005年 3月产犊。
(2)胡萝卜根系特异性表达系统完成。获得和改造胡萝卜直根特异表达的启动子－胡萝卜 II型转化酶
(invertase II)基因(invII)启动子，目前正在用于胡萝卜直根中特异表达疫苗蛋白。该系统是国际上第一个
直根表达生物反应器系统，是国际植物生物反应器的突破性进展。
(3)获得了一批具有自主知识产权的生物反应器调控元件。获得了一批依据于酵母人工染色体(YAC)和
细菌人工染色体(BAC)的高效稳定表达的必需调控元件，并且利用这些调控元件构建了一批高效稳定表达的
YAC和BAC载体。获得和建立了CMV外壳蛋白N端 14肽(NP14)和泛素(UBQ)双融合蛋白表达元件，可以
提高胡萝卜直根中疫苗蛋白的表达水平。分离一批在叶绿体特异表达的调控元件，并利用这些元件构建了
多个植物叶绿体表达载体。
(4)转基因体细胞克隆牛技术达到国际前沿水平。建立了转基因体细胞克隆牛生产的技术平台，总体
效率完全达到国际前沿水平。利用双标记筛选外源转基因的成功率达到 100%；转基因克隆胚胎的移植受
体牛妊娠率达到 33.3%；转基因克隆胚的移植受体牛产犊率达到 37.5%。因此，我国转基因体细胞克隆
牛生产的总体效率达到了 10%。
摘自 http://www.cas.ac.cn
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