全 文 :第9卷第1期
2011年1月
生 物 加 工 过 程
ChineseJournalofBioprocessEngineering
Vol.9No.1
Jan.2011
doi:10.3969/j.issn.1672-3678.2011.01.003
收稿日期:2010-08-03
基金项目:江西省自然科学基金资助项目(2008GZH0047);江西省产业化关键技术攻关项目(2007BN12100);长江学者创新团队发展计划
(IRT0540);中国江西留学人员创业园专项(2008718)
作者简介:刘建强(1984—),男,江西井冈山人,硕士研究生,研究方向:食品科学;阮榕生(联系人),教授,博士生导师,Email:liuyuhuan@ncu.edu.cn
利用市政污水培养Chlorelavulgaris生产生物柴油
刘建强1,2,刘玉环1,2,阮榕生1,2,刘 茜1,2,张锦胜1,2,彭 红1,2,巫小丹1
(1.南昌大学 生物质转化教育部工程研究中心,南昌 330047;
2.南昌大学 食品科学与工程国家重点实验室,南昌 330047)
摘 要:为了考察利用南昌市政污水规模化培养富油微藻生产生物柴油,同时达到净化污水的目的,取南昌市青山
湖污水处理厂未经任何处理的市政污水作为普通小球藻(Chlorelavulgaris)生长的培养液。监测了C.vulgaris在市
政污水中连续培养10d的特定生长率、生物质产量以及与之相关的市政污水中氨氮(NH+4N)、总磷(TP)、化学需
氧量(COD)、总悬浮固体(TSS)和挥发性悬浮固体(VSS)的清除情况。实验表明:营养物质的水平显著地影响了
C.vulgaris的生长。C.vulgaris的生长率在培养8d后达到最大,OD680为2856,总的生物质产量日均最大积累速率
为001g/L,油脂含量为干质量的18%,油脂的平均日产量为0001g/L。培养10d内NH+4N、TP和COD的去除
率分别为500%、321%和260%,TSS和VSS的日平均去除速率分别为001g/L和00061g/L。
关键词:普通小球藻;生物质产量;油脂产量;生物柴油
中图分类号:Q945178;TQ92015 文献标志码:A 文章编号:1672-3678(2011)01-0010-05
CultivatingChlorelavulgarisasbiodieselfeedstockbymunicipalwastewater
LIUJianqiang1,2,LIUYuhuan1,2,RUANRongsheng1,2,LIUQian1,2,
ZHANGJinsheng1,2,PENGHong1,2,WUXiaodan1
(1.EngineeringResearchCenterforBiomassConversionoftheMinistryofEducation,
NanchangUniversity,Nanchang330047,China;
2.StateKeyLaboratoryofFoodScienceandTechnology,NanchangUniversity,Nanchang330047,China)
Abstract:ThetechnicalfeasibilitybyNanchangmunicipalwastewaterofNanchangCitywasusedascul
turemediaforlargescalecultivationofoilrichmicroalgaeasbiodieselfeedstockandtreatingthe
wastewatersimultaneausly.ColectingthemunicipalwastewaterwithoutanytreatmentfromQingshanhu
sewageplantastheculturemediumforChlorelavulgarisgrowth.Theexperimentmonitoredthespecific
growthrateandbiomassyieldofC.vulgarisandassociatedammonianitrogen,phosphorous,COD,TSS,
andVSSremovalduring10days.Theexperimentalresultsshowedthatthelevelofnutrientsinfluenced
algaegrowthsignificantly.ThegrowthrateofC.vulgarisreachedamaximumofOD6802856after8days
culturingandthealgaebiomassaccumulationratereachedamaximumof001g/Lperday.Theoilcon
tentofC.vulgariswas180mg/gindrybiomassweightandtheoilaveragedailyproductionwas0001
g/Lperday.TheremovelrateofNH+4N,TPandCODwere500%,321% and260%.TheTSS
andVSSremovalrateswere001mg/Lperdayand00061mg/Lperday,respectively.
Keywords:Chlorelavulgaris;biomassproduction;oilyield;biodiesel
解决好资源可持续发展问题是实现社会经济
可持续发展的重要环节。近年来,快速发展的生物
质燃料工业对人类食物和动物饲料(主要是大豆和
玉米)的供应以及农业用地带来了巨大的压力。为
了维持生物燃料工业的可持续发展,新的非食品或
非食用性生物质原料必须得到开发[1]。微藻是能
够在海洋和淡水环境中快速生长的光合生物,微藻
的油脂含量和生物质产率高于陆生植物(如大豆、
玉米等)[2-6]几倍甚至几十倍,且具有不占用人类
食物和饲料生产用耕地的优势[7-10]。
市政废水是城市居民生活废水、工业废水等的
混合污水,含有大量藻类生长所需的 N、P以及其他
可被藻类利用的营养物质,而市政废水的化学法处
理成本十分昂贵且在技术上面临许多问题。因此,
利用微藻处理污水目前正成为一个可供选择的、具
有潜在工业价值的生物质三级处理方法[11],它在改
善水质的同时又生产可再生资源,这提供了生产微
藻生物柴油的一种可行性研究方案,能创造一种双
赢的局面。
本实验选用普通小球藻(C.vulgaris)作为市政
污水处理和生物柴油生产的候选藻种,考察 C.vul
garis在南昌市政污水中的生长情况,生物质和油脂
产率及市政污水N、P等营养物质的清除情况。
1 材料与方法
1.1 藻株
Chlorelavulgaris,由中国科学院水生研究所
提供。
1.2 藻类培养基
人工培养基 BG11(g/L):NaNO315,K2HPO4·
3H2O004,MgSO4·7H2O0075,CaCl2·2H2O0036,
柠檬酸 0006,柠檬酸铁铵 0006,EDTA0001,
Na2CO3002。需添加的微量元素(g/L):H3BO3
000286,MnCl2·4H2O 000181,ZnSO4·7H2O
0000222,Na2MoO4·2H2O000039,CuSO4·5H2O
0000079,Co(NO3)2·6H2O0000049。
市政污水培养基取自南昌市青山湖污水处理
厂,未作任何处理,主要由60% ~70%的工业废水
和30%~35%的城市居民生活污水组成。本实验
所用污水采样时间2010年5月19日~2010年5月
26日。实验用的水样先贮存在4℃的环境中。
1.3 仪器
UV9100系列紫外可见分光光度计(北京莱伯
泰科仪器有限公司),6B 2000型多参数小质测定
仪、6B 12型COD智能消解仪(江苏盛奥华环保科
技有限公司),沃特曼玻璃(25cm)过滤器(上海肯
强仪器有限公司),PYX 150S A生化培养箱(广
东韶关市科力实验仪器有限公司),SX 4 10型箱
式节能电阻炉(湖北英山国营实验设备厂),AA9000
火焰原子吸收光谱仪(合肥科普分析仪器有限公
司)。
1.4 藻类培养
C.vulgaris在(25±1)℃、4000~4500lx光强
条件下连续光照培养。按20%的藻种接种量先接
种到100mLBG11培养基中,并扩增到500mL,为
2L市政污水培养基锥形瓶培养提供足够的藻种,然
后按20%接种量接种到2L市政污水培养基中,每
天摇匀2~3次。取另一个锥形瓶装入2L的市政
污水,在相同条件下培养,作为空白对照。
1.5 水质特性
水质 指 标 主 要 以 测 量 总 氮 (TN)、氨 氮
(NH+4N)、总磷(TP)、磷酸态磷(PO
-3
4 P)、化学需
氧量(COD)、生化需氧量(BOD5)、总悬浮固体
(TSS)、挥发性悬浮固体(VSS)以及一些微量元素
Co2+、Cu2+、Mo6+、Zn2+、Mn2+、B3+的含量等参数
为准。
1.6 实验方法
光密度(OD)用 UV9100系列紫外可见分光光
度计在680nm下测量[1]。市政污水培养基的 pH
变化用MetlerToledo320 SpH计测量,并适时调
整到75左右。TN、NH+4N、TP、COD用6B 2000
型多参数水质测定仪测定;PO-34 P用钼锑抗分光光
度法测定;BOD5按 GBT7488 87稀释与接种法测
定;微量元素 Co2+、Cu2+、Mo6+、Zn2+、Mn2+、B3+的
含量用原子吸收分光光度法测定。
TSS、VSS按文献[12]方法测定并稍做了修饰:
先将玻璃纤维滤纸(47cm)于105℃烘箱内干燥
2h,移入干燥器内冷却至恒质量 m0,称量(至小数
点后四位,下同)。将混合均匀的水样 V(50mL)用
干燥过的玻璃纤维滤纸(47cm)过滤后,置于铝盘
上,在105℃的烘箱内隔夜干燥16h,取出,移入干
燥器内冷却至恒质量 m1,称量至小数点后四位;稍
后将铝盘移置于电阻炉内,在550℃下灼烧16h,取
出后于干燥器中冷却至恒质量 m2,称量。TSS和
VSS通过以下公式计算:ρ(TSS)=(m1-m0)×
1000/V;ρ(VSS)=(m1-m2)×1000/V。ρ(TSS)
11 第1期 刘建强等:利用市政污水培养Chlorelavulgaris生产生物柴油
和ρ(VSS)被检测用于计算生物质的产量[13]。
总的生物质干质量按文献[1]的方法测定:沃
特曼玻璃(25cm)过滤器在80℃烘箱内经4h干
燥后,在分析天平上称质量;然后用微孔过滤装置
过滤20mL藻液直至过滤器干燥;过滤器用10mL
的065mol/LNH4Cl去除过量的盐,并在80℃下
干燥4h后称质量。
总藻油含量的确定用有机溶剂石油醚索氏提
取的方法:取干的藻样3~4g在索氏提取器中用
300mL石油醚提取,试样以每秒3~4滴的冷凝率
提取3h。提取油脂后的藻样在80℃下干燥4h至
恒质量。油脂的含量通过质量差确定。
2 结果与讨论
2.1 市政污水特性
表1和表2分别列出了南昌市政污水的一般特
性和微量元素含量。与BG11培养基相比较,南昌市
政污水有更高的 NH+4N含量,但 TN、TP含量不足,
N、P比率不平衡,微量元素主要缺乏 Co2+、Mo6+、
Mn2+和B3+。
表1 南昌市政污水特性
Table1 Characteristicsofthenanchangmunicipalwastewater
参数 COD BOD5 TSS VSS PO-34 P TP NH
+
4N TN
ρ/(mg·L-1) 101491 45647 120000 80000 1208 1682 12246 13642
表2 南昌市政污水中溶解性微量营养素的含量
Table2 Solublemicronutrientcontentsinthe
nanchangmunicipalwastewater
微量元素 Co2+ Cu2+ Mo6+ Zn2+ Mn2+ B3+
ρ/(mg·L-1) <00070021 0009 0065 0103 <0006
22 C.vulgaris在市政污水中的生长曲线
C.vulgaris在南昌市政污水中的生长曲线用光
密度(OD680)表示(图1)。用一条仅有市政污水的
基线作为控制曲线,市政污水在生长曲线中也占有
一定的光密度(OD680)。
图1 C.vulgaris在市政污水培养基中的生长曲线
Fig.1 GrowthcurveofC.vulgarisinmunicipal
wastewatermedium
由图1可知:市政污水在接种 C.vulgaris后最
初的48h内,OD680没有明显的变化,处于对市政污
水的适应期;接种72h后开始逐渐增殖,此时市政
污水的OD680为0357。在培养到第8天后,C.vul
garis细胞密度达到最大,OD680为2856。增殖最快
的时间段是在第4天到第5天以及第7天到第8天
之间;第8天后由于 N、P的消耗,C.vulgaris的生长
受到影响,因此增殖速率开始下降。
2.3 营养物质的清除和生物质产量
N和P是市政污水中2种主要的成分,也是支
持藻类生长的主要营养物质。C.vulgaris接种到南
昌市政污水中培养10d后,污水中的NH+4N、TP的
变化曲线如图2和图3所示。
图2 C.vulgaris在市政污水培养基
培养过程中的NH+4N变化
Fig.2 NH+4Nconcentrationprofileofmunicipal
wastewatermediumduringC.vulgariscultivation
由图2和图3可知:市政污水中的N、P的浓度随
着C.vulgaris在污水中培养时间的延长而逐渐下降。
C.vulgaris在南昌市市政污水中培养10d后,市政污
21 生 物 加 工 过 程 第9卷
图3 市政污水培养基在C.vulgaris
培养过程中的TP变化
Fig.3 TPconcentrationprofileofmunicipalwastewater
mediumduringC.vulgariscultivation
水中的 NH+4N和 TP含量分别由最初的12246和
1682mg/L下降到6123和1142mg/L,NH+4N和
TP的去除率分别达到500%和321%。
C.vulgaris接种到南昌市政污水中培养 10d
后,市政污水营养物质清除率和生物质产量如表3
所示。
表3 市政污水营养物质清除率和生物质产量
Table3 Nutrientremovalrateofmunicipal
wastewaterandbiomassyield
项目 数值
COD去除率/(mg·L-1) 26387±02004
NH+4N去除率/(mg·L
-1) 06123±00211
TP去除率/(mg·L-1) 00540±00058
m(TSS)/g 00200±00071
m(VSS)/g 00122±00063
ρ(TSS)/(g·L-1) 00100±00052
ρ(VSS)/(g·L-1) 00061±00024
注:数据是6个重复组的平均值和标准偏差。
由表3可知:C.vulgaris能去除南昌市政污水中
26%的 COD,每天的干物质 TSS产量大约为
001g/L,VSS产量大约为00061g/L。
2.4 藻油产量
分别测定微藻 C.vulgaris在市政污水培养基中
培养10d前后的总干物质及油脂含量,结果如表4
所示。
C.vulgaris在锥形瓶培养至指数生长后期,采样
后测定微藻的总干物质质量浓度大约为07678
g/L,微 藻 生 物 质 的 日 平 均 积 累 速 率 约 为
00053g/L;油脂质量浓度大约为01382g/L,油
脂约占微藻生物质干质量的18%,小球藻油脂的平
均日产量大约为0001g/L。油脂含量还达不到生
物质燃料规模化生产所期望的要求。
表4 C.vulgaris在市政污水中培养10d
前后总干物质及油脂含量的变化
Table4 TotaldrybiomassandoilcontentofC.vulgaris
beforeandafter10dcultivatinginmunicipal
wastewater g·L-1
项目 ρ(总干物质) ρ(油脂)
10d前 07148±00036 01282±00017
10d后 07678±00043 01382±00022
注:数据是6个重复组的平均值和标准偏差。
3 结 论
南昌市政污水中的养分状况相对贫乏,对于微
藻生长所需的条件而言,市政污水中 NH+4N、TP含
量不足,N、P比率不平衡,微量元素主要缺乏 Co2+、
Mo6+、Mn2+和B3+。
C.vulgaris能够逐步适应南昌市政污水的养分
条件,但是10d内微藻生物质的日平均积累速率仅
为00053g/L;藻油平均日积累速率仅为 0001
g/L。两项指标均大大低于预期,达不到藻类生物
质燃料规模化生产所期望的要求。
C.vulgaris在10d内NH+4N和TP的清除速率
分别为06123mg/L和00540mg/L,10d内
NH+4N和TP的清除率分别为500%和321%;总
生物质每天生产效率为001g/L(干物质),其中油
脂含量为 18%;10d内污水中 COD的去除率
为260%。
为了使微藻的繁殖速度能够满足污水排放的
速度,必须采用其他的藻种或利用多种生物共生组
合来适应市政污水中的养分状况,以获得生物柴油
生产所需的大量藻类生物质和油脂。
致谢:
衷心感谢江西省科技厅、国家教育部、南昌大
学食品科学与工程国家重点实验室和南昌大学生
物质转化工程中心的支持。
参考文献:
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2009.
国内简讯
我国生物医药产业5大领域前景广阔
2010年12月3日,中国科学院院士、南开大学校长饶子和在昆明演讲时说,我国生物医药产业有望发
展成为6000亿~8000亿元的支柱型产业。我国生物医药产业的重点发展方向包括以下5个方面:一是大
力发展新型疫苗和改造传统疫苗;二是抗体药物和蛋白质药物等生物技术药物的产业化;三是重大疾病诊
断和检测技术的研究与产品的开发;四是加强发展基因治疗、细胞治疗等生物治疗技术;五是再生医学技术
的研究与应用。
益母草碱对治疗脑中风有明显疗效
复旦大学药学院院长朱依谆教授率领的团队经5年多的研究发现,从中药益母草中提取的益母草碱对
治疗脑中风具有明显疗效:它能明显减少脑缺血造成的大脑皮质的梗死面积,改善神经功能缺损的症状,遂
将其命名为“SCM 198”。目前,此项目作为国家一类新药的候选药物已在国家重大新药创制大平台孵育,
其研究成果在最新一期国际脑中风疾病研究的权威杂志《中风(Stroke)》上发表。《中风》杂志认为,“SCM
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北冬虫夏草子实体达到规模化工厂生产
在“十一五”863计划的支持下,北冬虫夏草子实体工厂化生产的关键技术研究基本得到解决。课题明
确了工厂化生产的工艺标准,解决了人工培育的生长周期、光照、温度和湿度对虫草生长的关系;营养基、营
养液的配伍与优化方案;菌种的筛选、优化、复壮和保存技术;子实体的生物转化率与出草率;虫草子实体系
列产品质量标准等重大关键技术问题,形成了可产百吨级虫草子实体的生产能力。项目研究进一步证实了
无论是天然冬虫夏草,还是北冬虫夏草(蛹虫草),其主要有效成分和活性物质大量存在于草中(即子实体),
为实现产业化替代濒危的野生资源有着不可估量的意义与价值,为研发和生产此类新药在原料与技术上奠
定了可靠的基础。
(文伟河)
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