全 文 ：第 ３６ 卷第 １３ 期
２０１６年 ７月
生 态 学 报
ＡＣＴＡ ＥＣＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ
Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．１３
Ｊｕｌ．，２０１６
ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ．ｅｃｏｌｏｇｉｃａ．ｃｎ
基金项目：中央级公益性科研院所项目课题（ＹＺ２０１２⁃０９）；国家自然科学基金青年基金项目（８１１０２７４８）；国家自然科学基金地区联合基金项目
（Ｕ１４０３３２４）；国家科技支撑计划项目（２０１１ＢＡＩ０５Ｂ０３）
收稿日期：２０１４⁃１０⁃２１； 　 　 网络出版日期：２０１５⁃１０⁃３０
∗通讯作者 Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ．Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｊｕｎｚｉｃｈｅｎ＠ ２６３．ｎｅｔ
ＤＯＩ： １０．５８４６ ／ ｓｔｘｂ２０１４１０２１２０６３
沈亮， 徐荣， 刘赛， 徐常青， 贺宁， 刘同宁， 陈君．肉苁蓉寄主梭梭根际土壤微生物种类及群落结构特征．生态学报，２０１６，３６（１３）：３９３３⁃３９４２．
Ｓｈｅｎ Ｌ， Ｘｕ Ｒ， Ｌｉｕ Ｓ， Ｘｕ Ｃ Ｑ， Ｈｅ Ｎ， Ｌｉｕ Ｔ Ｎ， Ｃｈｅｎ Ｊ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ ｏｆ Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ．
Ａｃｔａ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ，２０１６，３６（１３）：３９３３⁃３９４２．
肉苁蓉寄主梭梭根际土壤微生物种类及群落结构特征
沈　 亮１， 徐　 荣１， 刘　 赛１， 徐常青１， 贺　 宁１，２， 刘同宁３， 陈　 君１，∗
１ 中国医学科学院， 北京协和医学院药用植物研究所，北京　 １００１９３
２ 河南理工大学资源环境学院，焦作　 ４５４００３
３ 宁夏永宁县本草苁蓉种植基地，银川　 ７５０１００
摘要：为探索梭梭根际土壤微生物结构特征及其与肉苁蓉寄生的关系，应用磷脂脂肪酸（ＰＬＦＡ）法分析了 ５—８月份梭梭生长季
节的根际土壤微生物种类及群落结构特征，采用湿筛倾注⁃蔗糖离心法对其根际土壤 ＡＭ 真菌进行了初步分离和鉴定，并分析
了肉苁蓉寄生与梭梭根际微生物及环境因子间的相关性。 结果表明，５—７月 ３个月份的梭梭根际土壤微生物磷脂脂肪酸种类
及含量均显著高于 ８月份，总磷脂脂肪酸和 ＡＭ 真菌磷脂脂肪酸以 ６月份含量最高。 梭梭根际土壤共鉴定出 ＡＭ 真菌 ４属 ３５
种，它们分别为球囊霉属（Ｇｌｏｍｕｓ）２２种、无梗囊霉属（Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ）７种、多孢囊霉属（Ｄｉｖｅｒｓｉｓｐｏｒａ）３种和巨孢囊霉属（Ｇｉｇａｓｐｏｒａ）
３种。 其中以黑球囊霉（Ｇｌｏｍｕｓ ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｕｍ）和双网无梗囊霉（Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ ｂｉｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）为优势种群，并且发现了与寄生有关的
巨孢囊霉属 ＡＭ真菌。 ６月份和 ８月份的 ＡＭ真菌孢子数量最多，而 ５月份的 ＡＭ真菌孢子数量最低。 ６月份梭梭根际土壤提
取液得到的肉苁蓉种子萌发率（６５．９４％）和田间接种寄生率（５９．１９％）均为最高值，而 ５月份土壤提取液测试得到的肉苁蓉种子
萌发率最低。 因此，推测梭梭根际 ＡＭ真菌可能参与了肉苁蓉的寄生过程。 相关分析表明梭梭根际土壤微生物种类和数量主
要与土壤温湿度和土壤理化性质相关性较大，其中可能与寄生有关的真菌数量与土壤温度呈显著正相关；肉苁蓉寄生率与土壤
温度及土壤养分呈显著负相关。 研究为解析梭梭根际土壤微生物在肉苁蓉寄生过程中的作用以及指导肉苁蓉人工种植提供
参考。
关键词：梭梭；肉苁蓉；土壤微生物群落结构；磷脂脂肪酸；湿筛倾注⁃蔗糖离心法；环境因子
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ ｏｆ Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ
ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ
ＳＨＥＮ Ｌｉａｎｇ１， ＸＵ Ｒｏｎｇ１， ＬＩＵ Ｓａｉ１， ＸＵ Ｃｈａｎｇｑｉｎｇ１， ＨＥ Ｎｉｎｇ１，２， ＬＩＵ Ｔｏｎｇｎｉｎｇ３， ＣＨＥＮ Ｊｕｎ１，∗
１ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｌａｎｔ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＆ Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３， Ｃｈｉｎａ
２ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ， Ｈｅｎａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｊｉａｏｚｕｏ ４５４００３， Ｃｈｉｎａ
３ Ｎｉｎｇｘｉａ Ｙｏｎｇｎｉｎｇ Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｒｂａ Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ， Ｙｉｎｃｈｕａｎ ７５０１００， Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ ｏｆ
Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ ｏｎ ｐａｒａｓｉｔｉｓｍ ｂｙ Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ． Ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ
ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｅ （ＡＭ） ｆｕｎｇａｌ ｓｐｅｃｉｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｍａｙ ２０１３ ｔｏ Ａｕｇｕｓｔ ２０１３ ｂｙ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ
ｆｕｍｉｇａｔｉｏｎ⁃ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ， ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ （ＰＬＦＡ） ａｎａｌｙｓｉｓ， ａｎｄ ｗｅｔ ｓｉｅｖｉｎｇ ａｎｄ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｔｈｅｓｅ ｆｉｎｄｉｎｇｓ
ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｕｓｅｄ ｔｏ ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐａｒａｓｉｔｉｓｍ ｂｙ Ｃ． ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ， ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｏｆ Ｈ． ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ
ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｆａｃｔｏｒｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｖｅｒａｌｌ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｍｏｒｅ ａｂｕｎｄａｎｔ ｔｈａｎ ｉｎ Ａｕｇｕｓｔ， ａｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＰＬＦＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＡＭ ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ
ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ．ｅｃｏｌｏｇｉｃａ．ｃｎ
ｓａｍｐｌｅｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｊｕｎｅ． Ｔｈｅ ＰＬＦＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄａｔａ ｗｅｒｅ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ （ＰＣＡ）， ａｎｄ ｔｈｅ
ｆｉｒｓｔ ｔｗｏ ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ （ ＰＣ１， ＰＣ２） ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ９０．１２％ ａｎｄ ９．２１％ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｉｓ
ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｏｉｌ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｏｆ Ｈ． ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ ｃｈａｎｇｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｕｒｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｍａｙ ａｎｄ
Ａｕｇｕｓｔ． Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ＰＬＦＡｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｔｈａｔ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｆｕｎｇｉ， ｗｅｒｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｏｎ ｔｈｅ
ｒｉｇｈｔ ｓｉｄｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｏａｄ ｄｉａｇｒａｍ， ｗｈｉｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｔｈａｔ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ｗｅｒｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｌｅｆｔ ｓｉｄｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｏａｄ
ｄｉａｇｒａｍ． Ｔｈｕｓ， ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈａｔ ｄｕｒｉｎｇ Ｈ． ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ ｇｒｏｗｔｈ， ｔｏｔａｌ ＰＬＦＡ， ＰＬＦＡ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ
ｆｕｎｇｉ， ａｎｄ ＰＬＦＡ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ａｌｌ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｆｒｏｍ Ｍａｙ ｔｏ Ａｕｇｕｓｔ． Ｔｈｉｒｔｙ⁃ｆｉｖｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ＡＭ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ ｆｏｕｒ
ｇｅｎｅｒａ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｗｅｔ⁃ｓｉｅｖｉｎｇ ａｎｄ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅｓｅ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ２２ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｇｌｏｍｕｓ， ｓｅｖｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ
ｏｆ Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ， ｔｈｒｅｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｄｉｖｅｒｓｉｓｐｏｒａ， ａｎｄ ｔｈｒｅｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｇｉｇａｓｐｏｒａ． Ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｗｅｒｅ Ｇｌｏｍｕｓ
ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｕｍ ａｎｄ Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ ｂｉｒｅｔｉｃｕｌａｔａ． Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＡＭ ｆｕｎｇａｌ ｓｐｏｒｅｓ， ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ， ｗａｓ
ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎ Ｊｕｎｅ ａｎｄ ｌｏｗｅｓｔ ｉｎ Ｍａｙ． Ｔｈｅ Ｇｉｇａｓｐｏｒａ ｇｅｎｕｓ， ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｃ． ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ，
ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｏｆ Ｈ． ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ． Ｗｅ ａｌｓｏ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ （６５．９４％） ａｎｄ ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｒａｔｅ
（５９．１９％） ｏｆ Ｃ． ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ Ｊｕｎｅ ｔｈａｎ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｍｏｎｔｈｓ， ｂｙ ｓｅｅｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｉｅｌｄ
ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｉｌ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｏｆ Ｈ．
ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ ｗｅｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｓｏｉｌ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ． Ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ｆｕｎｇｉ， ｗｈｉｃｈ ｍａｙ
ａｆｆｅｃｔ ｔｈｅ ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓ， ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｏｉｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｄｕｒｉｎｇ Ｈ．
ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ， ｔｈｅ ＰＬＦＡｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｆｕｎｇｉ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ． Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ， ｔｈｅ
ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｐａｒａｓｉｔｉｓｍ ｒａｔｅ ｏｆ Ｃ． ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ５０ ｃｍ ｓｏｉｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ａｎｄ ｓｏｉｌ ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ， ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｄｕｒｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｏｉｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｅｌｅｍｅｎｔｓ， ｔｈｅ ｐａｒａｓｉｔｉｓｍ ｒａｔｅ
ｏｆ Ｃ． ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ． Ｉｎ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ， ｗｅ ｓｐｅｃｕｌａｔｅ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｉｓ ａ ｓｔｒｏｎｇ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｏｉｌ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｉｎ ｔｈｅ
Ｈ． ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｒａｔｅ ｏｆ Ｃ． ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ． Ｔｈｅｓｅ ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ｄｅｅｐｅｒ ｉｎｓｉｇｈｔ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｐａｒａｓｉｔｉｃ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｃ． ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ ａｎｄ Ｈ． ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ．
Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ： Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ； Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ； ｓｏｉｌ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ； ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ
（ＰＬＦＡ）； ｗｅｔ⁃ｓｉｅｖｉｎｇ ａｎｄ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ； ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｆａｃｔｏｒｓ
肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年生寄生性草本植物，专性寄生于苋科藜亚科梭梭属植物梭梭 Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ
ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ （Ｃ． Ａ． Ｍｅｙ．） Ｂｕｎｇｅ根部［１］。 肉苁蓉为我国传统名贵中药材，具有补肾阳、益精血、润肠通便等
功效［２］，有“沙漠人参”之美誉。 随着人们医疗保健意识的增强，补益类中药需求量猛增，其野生资源蕴藏量
已不能满足市场需求。 国家明令禁止采挖野生肉苁蓉，鼓励通过人工种植满足市场需求［１］。 肉苁蓉种子在
没有梭梭根系分泌物的作用下，难以萌发及完成寄生生活史［３］；目前尚未鉴定出梭梭根系产生的刺激肉苁蓉
种子萌发的关键物质［４⁃５］。 由于肉苁蓉和梭梭的寄生机理不清，导致人工种植肉苁蓉的寄生率不高，产量不
稳定。 近年来，有研究表明寄主植物根系分泌物除了刺激寄生植物种子萌发外，还会促使寄主植物根际土壤
微生物繁殖。 根际微生物不仅在根系分泌物化学成分转化和分解方面发挥作用；而且在植物根际快速繁殖的
ＡＭ真菌还增大了寄主与土壤的接触面积，进而促进寄主对养分的吸收和根系分泌物的释放［６⁃７］，最终促使寄
生植物寄生率的提高。 此外，环境因子中的土壤养分、水分、温度和湿度等因子也可引起根际土壤微生物种类
及结构的变化［８］。 梭梭根际土壤微生物是否参与了肉苁蓉的寄生过程以及不同季节梭梭根际土壤微生物的
变化是否对肉苁蓉的寄生产生影响，目前未见相关报道。
对土壤微生物群落结构的研究通常采用传统的平板培养法，但该方法成本高、工作量大，能够培养分离的
微生物只占总数的 ０．１％—１０％，不能够全面反映土壤微生物群落结构的信息。 现代研究土壤微生物的方法
主要有磷脂脂肪酸法（ＰＬＦＡ）、ＢＩＯＬＯＧ法、变性梯度凝胶电泳法（ＤＧＧＥ）等［９⁃１０］。 其中 ＰＬＦＡ 是近几年发展
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起来的研究土壤微生物群落结构的新方法，它能够分析微生物群落的生物量和群落结构变化，主要用于揭示
植物栽培及季节变化等诸多因素对土壤微生物群落结构变化的影响［１１］。 Ｒａｍｓｅｙ 等［１２］研究表明 ＰＬＦＡ 也能
够表征 Ｂｉｏｌｏｇ和 ＤＧＧＥ方法检测出的土壤微生物群落结构变化，在土壤微生物检测领域具有一定优势。 因
此，本研究拟采用 ＰＬＦＡ法及常规 ＡＭ真菌鉴定法［１３］，对梭梭 ５—８月份生长季节的根际土壤微生物种类及群
落结构特征进行分析，结合环境因子探讨梭梭根际土壤微生物在肉苁蓉寄生过程中的作用，研究结果将为解
析肉苁蓉寄生机理及指导肉苁蓉人工种植提供参考。
１　 材料与方法
１．１　 梭梭根际土及对照土样采集与处理
试验设在宁夏回族自治区永宁县本草苁蓉种植基地，该基地地理坐标为东经 １０６°４０′、北纬 ３８°１５′，海拔
１１２５ ｍ。 肉苁蓉种子来自内蒙古阿拉善盟右旗野生肉苁蓉植株。 ４年生寄主梭梭来自宁夏肉苁蓉种植基地，
梭梭高 １—２ ｍ，行距 ３ ｍ，株距 １ ｍ。
５—８月份梭梭快速生长期，在种植基地选择一块长势一致、土壤质地均一、近 ２ 年内未受干扰的梭梭种
植田，面积为 ２０ ｍ×２０ ｍ。 调查期间该样地杜绝人为干扰，每月初在试验田按照“Ｓ”形取样法，收集 １５ 株
４０—５０ ｃｍ深处的梭梭根际土。 采用抖落法收集梭梭毛细根周围 ０．５ ｃｍ 内粘连的根际土壤 １．００ ｋｇ；供试土
壤为沙壤土，除去样品中植物残体和碎石，过 ２ ｍｍ筛后分成 ２部分，一部分土样冷冻干燥后保存在－８０℃，用
于 ＰＬＦＡ分析；另一部分土样风干用于土壤基本理化性状测定。 对照样品为 ５月份采集的试验地 ５０ ｃｍ深处
的非梭梭根际土 １份。
１．２　 土壤微生物种类及群落结构分析
１．２．１　 ＰＬＦＡ分析
ＰＬＦＡ的提取过程参考 Ｆｒｏｓｔｅｇｒｄ等方法［１４］。 提取过程分成 ４个步骤：脂肪酸释放与甲酯化、溶液中和、脂
肪酸萃取、脂肪酸溶解。 ＰＬＦＡｓ 成份测定参考 Ｄｏｎｇ 等方法［１５］进行，采用美国 Ａｇｉｌｅｎｔ ６８９０ 气相色谱仪、
Ａｇｉｌｅｎｔ ５９７７质谱联用仪、ＤＢ⁃５ ＭＳ 色谱柱（３０ ｍ×２５０ μｍ×０．２５ μｍ） （安捷伦科技有限公司）等仪器进行
测试。
ＰＬＦＡ命名及含量计算：采取通用的 ω命名系统，前缀 ａ，ｉ和 ｃｙ分别表示反式，顺式和环状支链构型。 以
１８：２ω６，９为例，１８表示主链 Ｃ原子数目，冒号“：”后数字代表不饱和度，ω 后数字代表双键所在位置。 表征
细菌、真菌、放线菌、革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌的磷脂脂肪酸标记参考 Ｋｉｍｕｒａ等方法［１６⁃１８］。 磷脂脂肪
酸含量测定用峰面积法，计算公式为
ＰＬＦＡ（ｎｍｏｌ ／ ｇ）＝ （ＰＰＬＦＡ×Ｓ×Ｖ） ／ （ＰＳＴＤ×Ｄ×Ｒ×Ｗ）
式中，ＰＰＬＦＡ和 ＰＳＴＤ分别是样品和标准物质的峰值面积，Ｓ 为内标物质浓度（ｎｇ ／ μＬ），Ｖ 为样品测试体积（１
μＬ），Ｒ为分取倍数（１ ／ １０００），Ｄ为稀释倍数（１０倍），Ｗ为干土质量（ｇ）。
１．２．２　 ＡＭ真菌分离与鉴定
采用湿筛倾注⁃蔗糖离心法［１９］分离土壤孢子，在体视显微镜下观察孢子大小、颜色、菌丝特征、孢子形态
等指标。 根据《ＶＡ菌根真菌鉴定手册》 ［２０］进行分类描述和种属检索和鉴定。 不同月份 ＡＭ 真菌孢子数量采
用计数法进行。
１．３　 肉苁蓉田间接种寄生及种子萌发试验
在距梭梭主根 ４０ ｃｍ处挖深 ５０ ｃｍ、宽 ２０ ｃｍ 接种坑，每坑接肉苁蓉种子 ４０—６０ 粒，共接种 ３０ 株梭梭。
首次接种时间为 ５月 １４日，１个月后调查寄生率，每次调查后重新接种，即分别得到 ６月 １５日、７月 １５日和 ８
月 １５日的接种寄生率：
肉苁蓉寄生率（％）＝寄生数 ／接种坑数×１００％
取每月采集的土样 １０ ｇ添加 ５０％的甲醇水溶液，超声 ３５ ｍｉｎ，温度为 ４７℃，震荡 １２ ｈ，１５０ｒ ／ ｍｉｎ，离心，取
５３９３　 １３期 　 　 　 沈亮　 等：肉苁蓉寄主梭梭根际土壤微生物种类及群落结构特征 　
ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ．ｅｃｏｌｏｇｉｃａ．ｃｎ
提取液 １０ ｍＬ，过 ０．２２ μｍ滤膜，做成 ０．２ ｇ ／ ｍ的提取液，稀释 １０００倍用于肉苁蓉种子萌发试验［２１］。
种子萌发率（％）＝萌发种子数 ／测试种子数×１００％
１．４　 环境因子测定方法
１．４．１　 气象数据收集
采自宁夏本草苁蓉种植基地的 ＡＲ５自动气象站，设定为 １ ｈ 采集 １ 次气象因子数据，不同月份气象数据
为该月气象数据的总平均值。 采集的气象因子有：气温（ＴＡ）、大气相对湿度（ＲＨ）、光照有效辐射（ＰＡＲ）、５０
ｃｍ土壤湿度（ＳＭ５０）、５０ ｃｍ土壤温度（ＳＴ５０），降雨量（ＰＴ）。
１．４．２　 土壤养分测定
土壤全氮（ＴＮ）采用凯氏定氮仪测定；有效磷（ＡＰ）采用钼锑抗比色法测定；速效钾（ＡＫ）采用原子吸收分
光光度计法测定；有机质（ＯＭ）采用重铬酸钾⁃外加热容重法测定；ｐＨ 值采用 ｐＨ ３００ 型便携式 ｐＨ 酸度计法
测定。
１．５　 数据分析
结果为 ３次重复测定数据的平均值，采用 ＳＰＳＳ ２０．０统计软件对试验数据进行方差分析、相关分析、主成
分分析，用单因素方差分析法（ＬＳＤ法）检验差异显著性，利用主成分分析法（ＰＣＡ）进行群落结构比较，结果
为所测指标的平均值±标准差。
２　 结果与分析
２．１　 不同月份梭梭土壤微生物磷脂脂肪酸含量比较
由表 １得知，不同月份梭梭根际土壤微生物 ＰＬＦＡ种类及含量差异显著。 ５—８月份土壤微生物总磷脂脂
肪酸的含量为 ６月＞７月＞５月＞８月，说明随着月份变化，梭梭根际土壤微生物的总磷脂脂肪酸含量呈现先上
升后下降的趋势。 细菌、革兰氏阴性细菌、真菌、放线菌以及需氧菌 ５—７月份的 ＰＬＦＡ含量均高于 ８ 月份，且
均呈现先上升后下降的趋势。 其中真菌的 ＰＬＦＡ含量范围为 １．７０—２．２７ ｎｍｏｌ ／ ｇ，以 ７月份含量最高，８月份含
量较低；ＡＭ真菌含量范围为 ０．２４—０．３３ ｎｍｏｌ ／ ｇ，以 ６月份含量最高，８ 月份含量最低。 此外，对照土 ＣＫ 土壤
微生物的 ＰＬＦＡ含量均显著低于不同月份梭梭根际土壤微生物的 ＰＬＦＡ 值。 因此，不同月份环境条件的改变
能够引起梭梭根际土壤微生物的结构变化。
表 １　 梭梭土壤微生物磷脂脂肪酸含量比较 ／ （ｎｍｏｌ ／ ｇ）
Ｔａｂｌｅ １　 Ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅｓ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ＰＬＦＡｓ ｉｎ ｓｏｉｌ ｏｆ Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ
微生物种群 Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ 对照 ＣＫ ５月 Ｍａｙ ６月 Ｊｕｎｅ ７月 Ｊｕｌｙ ８月 Ａｕｇｕｓｔ
总磷脂脂肪酸 Ｔｏｔａｌ ＰＬＦＡ ３．８４±０．４２ｃ ４．９０±０．５１ｂ ６．００±０．４０ａ ５．１５±０．４０ａｂ ３．６２±０．６６ｃ
饱和脂肪酸 Ｎｏｒｍａｌ ｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ２．２２±０．１２ｂ ２．５３±１．０８ａ ３．１０±０．１０ａ ２．７９±０．６２ａ ０．４０±０．３６ｂ
单不饱和脂肪酸 Ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ０．１９±０．１８ｂ ０．３２±０．１５ａ ０．２６±０．１１ａ ０．３４±０．１１ａ —
细菌 Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｍａｓｓ ３．０７±１．５３ａ ４．４５±１．２３ａ ４．４４±０．５５ａ ４．４９±０．１３ａ ４．０４±１．５３ａ
革兰氏阳性细菌 Ｇｒａｍ＋ ０．６５±０．１６ｃ １．１５±０．０７ａ ０．７４±０．１２ｂｃ ０．９５±０．０３ａｂ ０．５５±０．１６ｃ
革兰氏阴性细菌 Ｇｒａｍ－ ０．３５±０．１２ｂ ０．８６±０．３１ａ ０．４５±０．３２ａ ０．６６±０．０４ａ ０．１６±０．０２ｂ
革兰氏阳性 ／阴性细菌 Ｇｒａｍ＋ ／ Ｇｒａｍ－ １．２３±０．１７ａ １．７３±０．６８ｂ １．３５±０．３７ｂ １．４３±０．０６ｂ ３．５８±０．０７ａ
真菌 Ｆｕｎｇｉ １．６１±０．１６ａ １．７８±０．２８ａ ２．０７±０．３２ａ ２．２７±０．１３ａ １．７０±０．２７ａ
ＡＭ真菌 ＡＭ ｆｕｎｇｉ ０．２１±０．０４ａ ０．３２±０．１５ａ ０．３３±０．１１ａ ０．２６±０．０６ａ ０．２４±０．０８ａ
真菌 ／细菌 Ｆｕｎｇａｌ ／ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｍａｓｓ ０．３９±０．０８ａ ０．４９±０．０６ａ ０．５４±０．０５ａ ０．４９±０．０６ａ ０．５８±０．０４ａ
放线菌 Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ０．４４±０．０６ａ ０．７０±０．０７ａ ０．５０±０．２９ａ ０．６４±０．０４ａ ０．６４±０．０５ａ
需氧菌 Ａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ １．２１±０．０４ａ １．８６±０．４７ａ １．７３±０．５８ａ ２．２０±０．１４ａ １．５１±０．２３ａ
厌氧菌 Ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ — ０．１９±０．０６ｃ ０．２２±０．０４ａ ０．２０±０．００ｂ —
　 　 每组同列的不同字母表示差异显著性水平，小写字母为 ５％差异显著水平
２．２　 不同月份梭梭根际土壤微生物群落结构主成分分析
对不同月份梭梭根际土壤微生物的磷脂脂肪酸进行主成分分析（图 １ａ）。 结果表明，第一主成分对总
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ＰＬＦＡ数据变异的贡献率是 ９０．１２％，第二主成分对总 ＰＬＦＡ 数据变异的贡献率是 ９．２１％，累计贡献率达到
９９．３３％。 因此，两个主成分可以全面反映研究区域微生物群落的情况。 从图 １ａ可看出，ＣＫ及 ５—８月份的梭
梭根际土壤微生物均与第一主成分高度正相关；大部分 ５ 月份、７ 月份及 ８ 月份的梭梭根际土壤微生物与第
二主成分高度正相关，而大部分的 ６月份样品与 ＰＣ２呈负相关。 除 ８月份梭梭根际土壤微生物外，５—７月份
梭梭样品相距较近。 对照处理 ＣＫ与 ６月份的样品距离较近，说明二者结构较为相似。 总之，环境因子对不
同月份的土壤微生物群落结构变化影响极为明显，５—７月份梭梭根际土壤微生物结构相似，三者均与 ８ 月份
样品差异显著。
通过各种土壤微生物在主成分上的载荷因子分析表明（图 １ｂ），代表细菌、厌氧菌、革兰氏阴性细菌和放
线菌的磷脂脂肪酸在主成分一（６５．７５％）上的载荷值较高，主成分一是它们的代表因子，而代表真菌及需氧菌
的磷脂脂肪酸在主成分一上均具有较低的载荷值。 说明梭梭根际土壤的细菌、厌氧菌、革兰氏阴性细菌和放
线菌的数量较多，而真菌及需氧菌的数量相对较少。 代表革兰氏阳性细菌及 ＡＭ真菌的磷脂脂肪酸在主成分
二（２５．４３％）上有较高的载荷值，而代表真菌的磷脂脂肪酸在主成分二上的含量较低。 说明革兰氏阴性细菌
及 ＡＭ真菌的数量较多，而真菌的含量较低。 综合分析得出，随着月份上升，土壤中的细菌及放线菌类微生物
数量不断增多，而真菌类微生物数量较少。
图 １　 梭梭根际土壤微生物群落 ＰＬＦＡ主成分分析（ａ）；梭梭根际土壤微生物群落 ＰＬＦＡ载荷因子贡献（ｂ）
Ｆｉｇ．１　 ＰＣＡ ｏｆ ＰＬＦＡ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ （ａ）； Ｅｉｇｅｎｖｅｃｔｏｒ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｆ ＰＬＦＡ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｎｇ
ｔｏ ｓｏｉｌ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ ｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ （ｂ）
２．３　 不同月份梭梭根际 ＡＭ真菌种类及数量分析
由图 ２得知，梭梭根际土壤共分离鉴定出 ４属 ３５种 ＡＭ真菌。 其中球囊霉属（Ｇｌｏｍｕｓ）２２种、无梗囊霉属
（Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ）７种、多孢囊霉属（Ｄｉｖｅｒｓｉｓｐｏｒａ）３ 种、巨孢囊霉属（Ｇｉｇａｓｐｏｒａ）３ 种。 黑球囊霉（Ｇ． ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｕｍ）
和双网无梗囊霉（Ａ． ｂｉｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）为其中主要的优势菌种，且在各土壤样品中均有分布。 通过计数法分析得知
５—８月份梭梭根际土壤 ＡＭ真菌孢子数量随气温升高而呈现上升趋势。 ５ 月份土壤样品中孢子数量（１７．５
个 ／ ｇ）最低，６月份（３１．０个 ／ ｇ）和 ８月份（３５．５个 ／ ｇ）ＡＭ真菌孢子密度最高。
２．４　 肉苁蓉寄生率及梭梭根际土壤微生物与环境因子相关分析
肉苁蓉种子萌发及接种寄生试验表明不同月份的肉苁蓉田间接种寄生率差异较大（表 ２）。 与对照相比，
测试 ６月份的梭梭根际土壤提取液得到的肉苁蓉种子萌发率最高，而 ５ 月份的种子萌发率最低；６ 月份的肉
苁蓉田间接种寄生率最高，而 ８月份的肉苁蓉田间接种寄生率最低。
本试验基地地处我国温带大陆性气候区，不同月份的气候因子差异较大，且随着气候因子的变化，梭梭根
际土壤的基本养分也发生了显著变化（表 ３，表 ４）。 土壤养分及气候因子均可以引起根际土壤微生物种类及
结构的变化。相关分析表明（表５），厌氧菌与气温的相关性达到负显著性水平（Ｐ＜０．０５） ，需氧菌与５０ｃｍ深
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图 ２　 梭梭根际土 ＡＭ真菌孢子光镜照片（×４００）
Ｆｉｇ．２　 ＡＭ ｆｕｎｇａｌ ｓｐｅｃｉｅｓ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ （×４００）
球囊霉属（Ｇｌｏｍｕｓ）（１—２２）：１． 幼套球囊霉（Ｇ． ｅｔｕｎｉｃａｔｕｍ）， ２． 象牙白球囊霉（Ｇ． ｅｂｕｒｎｅｕｍ）， ３． 微丛球囊霉（Ｇ． ｍｉｃｒｏａｇｇｒｅｇａｔｕｍ）， ４． 网状
球囊霉（Ｇ． ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）， ５． 未知 １， ６． 缩球囊霉（Ｇ． ｃｏｎｓｔｒｉｃｔｕｍ）， ７． 沙荒球囊霉（Ｇ． ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌ）；８． 膨胀球囊霉（Ｇ． ｐａｎｓｉｈａｌｏｓ）， ９． 明球囊霉
（Ｇ． ｃｌａｒｕｍ）， １０． 卷曲球囊霉（Ｇ． ｃｏｎｖｏｌｕｔｕｍ）， １１． 聚丛球囊霉（Ｇ． ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ）， １２． 近明球囊霉（Ｇ． ｃｌａｒｏｉｄｅｕｍ）， １３． 黑球囊霉（Ｇ．
ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｕｍ）， １４． 多梗球囊霉 （ Ｇ． ｍｕｌｔｉｃａｕｌｅ）；１５． 地球囊霉 （ Ｇ． ｇｅｏｓｐｏｒｕｍ）， １６． 层状球囊霉 （ Ｇ． ｌａｍｅｌｌｏｓｕｍ）， １７． 棒孢球囊霉 （ Ｇ．
ｃｌａｖｉｓｐｏｒｕｍ）， １８． 凹坑球囊霉（Ｇ． ｍｕｌｔｉｆｏｒｕｍ）， １９． 膨果球囊霉（Ｇ． ｐａｎｓｉｈａｌｏｓ）， ２０． Ｇｌｏｍｕｓ ｃａｌｅｄｏｎｉｕｓ， ２１． Ｃｌａｒｏｉｄｅｏｇｌｏｍｕｓ ｌｕｔｅｕｍ， ２２． 幼套近
明囊霉（Ｃ． ｅｔｕｎｉｃａｔｕｍ）；无梗囊霉属（Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ）（２３—２９）：２３． 未知 １， ２４． 双网无梗囊霉（Ａ． ｂｉｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）， ２５． 瑞士无梗囊霉（Ａ． ｒｅｈｍｉｉ），
２６． 蜜色无梗囊霉（Ａ． ｍｅｌｌｅａ）， ２７． 孔窝无梗囊霉（Ａ． ｍｅｌｌｅａ）， ２８． 未知 ２， ２９． 未知 ３；多孢囊霉属（Ｄｉｖｅｒｓｉｓｐｏｒａ）（３０—３２）：３１． 未知 ４， ３２． 未
知 ５， ３３． 未知 ６；巨孢囊霉属（Ｇｉｇａｓｐｏｒａ） （ ３３—３５）：３３． 珠状巨孢囊霉（Ｇ． ａｌｂｉｄａ）， ３４． 巨孢囊霉（Ｇ． ｒｏｓｅａ）， ３５． 巨大巨孢囊霉（ Ｇ．
ｇｉｇａｎｔｅａｎ）
表 ２　 肉苁蓉种子萌发率及接种寄生率
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｐａｒａｓｉｔｉｓｍ ｒａｔｅ ｏｆ Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ
肉苁蓉 Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ 对照 ＣＫ ５月 Ｍａｙ ６月 Ｊｕｎｅ ７月 Ｊｕｌｙ ８月 Ａｕｇｕｓｔ
种子萌发率 Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｅｅｄ ２１．６５±１．５４ｄ ３７．８３±８．８６ｃ ６５．９４±２．７７ａ ４９．６１±６．７６ｂ ４８．１５±７．８８ｂ
接种寄生率 Ｐａｒａｓｉｔｉｓｍ ｒａｔｅ — — ５９．１９±２７．０４ａ ４６．７５±２７．０３ｂ ４５．５６±２４．０８ｂ
土壤湿度间的相关性达到正显著性水平（Ｐ＜０．０５），真菌与土壤温度之间的相关性达到正显著性水平（Ｐ＜
０．０５）。 由此说明，梭梭根际土壤微生物种类及含量主要受温度和湿度影响。 梭梭根际微生物与土壤养分间
的相关分析表明，革兰氏阳性细菌与各土壤养分的相关性均达到负显著性水平（Ｐ＜０．０５），真菌与土壤全氮、
有效磷和有机质呈正相关性，其它微生物与土壤养分各指标不相关。 这说明革兰氏阳性细菌的数量随着土壤
养分的上升而上升，真菌随着土壤养分的增加而上升。 肉苁蓉寄生率与环境因子的相关分析表明，肉苁蓉种
子萌发率及田间寄生率与 ５０ ｃｍ深土壤温度呈现极显著负相关性（Ｐ＜０．０１），与土壤全氮呈现显著负相关（Ｐ＜
０．０５），与有效磷、速效钾和有机质呈现极显著负相关（Ｐ＜０．０１）。 这说明随着 ５０ ｃｍ 深土壤温度的增大，肉苁
蓉的寄生率逐渐降低；随着土壤养分的升高，肉苁蓉的寄生率逐渐下降。
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表 ３　 梭梭采样点环境因子
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｔｈｅ ｃｌｉｍａｔｅ ｄａｔａ ｏｆ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ｏｆ Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ
月份
Ｍｏｎｔｈｓ
气温
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ／ ℃
大气相对湿度
Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｈｕｍｉｄｉｔｙ
ｏｆ ａｔｍｏｓｐｈｅｒｅ ／ ％
光照有效辐射
Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｏｆ ｌｉｇｈｔ
ｒａｄｉａｔｉｏｎ ／ ｌｘ
５０ ｃｍ土壤湿度
Ｓｏｉｌ ｍｏｉｓｔｕｒｅ
ｏｆ ５０ ｃｍ ／ ％
５０ ｃｍ土壤温度
Ｓｏｉｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｏｆ ５０ ｃｍ ／ ℃
降雨量
Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ／ ｍｍ
５ １８．８６±１．５７ｂ ２９．０７±０．９６ａ ３２２．５０±３４．５０ａ ８．２７±８．６０ａｂ １７．２０±１．４２ａ ０．０４±０．０４ａ
６ ２２．３５±１．４７ａ ２７．１２±１．５６ａ ３２１．４２±４１．１２ａ １７．６６±０．９６ａ ２０．６５±０．１２ｂ ０．０３±０．０５ａ
７ ２３．８７±０．３６ａ ２１．８７±０．２１ｂ ３２０．８５±１９．４３ａ ９．６７±１．８０ａｂ ２３．５０±０．３５ｃ ０．０２±０．０２ａ
８ ２４．１６±２．１４ａ ２９．０５±３．１７ａ ３２０．７５±２３．４２ａ ５．９７±８．３０ｂ ２４．４８±０．５５ｃ ０．０１±０．０１ａ
　 　 ｎ＝ ３０，每组同列的不同字母表示差异显著性水平；小写字母为 ５％差异显著水平
表 ４　 梭梭根际土壤养分基本理化指标
Ｔａｂｌｅ ４　 Ｂａｓｉｃ ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ ｏｆ Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ
月份
Ｍｏｎｔｈｓ
全氮
Ｔｏｔａｌ Ｎ ／
（ｇ ／ ｋｇ）
有效磷
Ａｖａｉｌａｂｌｅ Ｐ ／
（ｍｇ ／ ｋｇ）
速效钾
Ｒｅａｄｉｌｙ ａｖａｉｌａｂｌｅ Ｋ ／
（ｍｇ ／ ｋｇ）
有机质
Ｏｒｇａｎｉｃ ｍａｔｔｅｒ ／
（ｇ ／ ｋｇ）
ｐＨ
５ ０．３７±０．０２ｃ ７．９０±０．５４ｃ ３６．１０±２．１２ｃ ３．９１±０．２３ｃ ８．７６±０．７９ｄ
６ ０．３５±０．０７ｄ ７．１０±０．６３ｄ ３５．３０±１．２７ｄ ３．２４±０．２６ｄ ９．２６±０．８３ｂ
７ ０．４０±０．０４ｂ ９．７０±０．８２ａ ６４．４０±４．３７ｂ ４．０５±０．２８ａ ９．１３±０．６１ｃ
８ ０．４６±０．０５ａ ８．６０±０．７３ｂ ６６．２０±４．７２ａ ３．９５±０．３１ｂ ９．３２±０．５２ａ
　 　 每组同列的不同字母表示差异显著性水平；小写字母为 ５％差异显著水平
表 ５　 环境因子与梭梭根际土壤微生物磷脂脂肪酸及肉苁蓉寄生率的 Ｐｅｒｓｏｎ相关分析
Ｔａｂｌｅ ５ 　 Ｐｅａｒｓｏｎ′ ｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｍｏｎｇ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｆａｃｔｏｒ， ｐａｒａｓｉｔｉｓｍ ｒａｔｅ ｏｆ Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ ａｎｄ ｓｏｉｌ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ＰＬＦＡｓ ｏｆ
Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ
微生物种群 Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ＴＡ ＲＨ ＰＡＲ ＳＭ５０ ＳＴ５０ ＰＴ ＴＮ ＡＰ ＡＫ ＯＭ ｐＨ
细菌 Ｔｏｔａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ －０．７５ ０．５８ －０．５９ －０．５２ －０．６８ ０．６１ －０．７２ －０．６８ －０．６６ －０．６９ －０．６５
革兰氏阳性细菌 Ｇｒａｍ＋ －０．６７ ０．５４ ０．０３ －０．５３ －０．６９ －０．２３ －０．８８∗ －０．８５∗ －０．８４∗ －０．８６∗ －０．８３∗
革兰氏阳性细菌 Ｇｒａｍ－ ０．４０ －０．３６ ０．８０ －０．１０ ０．３１ －０．６３ －０．２３ －０．２８ －０．３０ －０．２７ －０．３１
需氧菌 Ａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ０．６２ －０．４１ ０．３３ ０．８５∗ ０．６０ －０．１６ ０．５２ ０．４７ ０．４５ ０．４８ ０．４４
厌氧菌 Ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ －０．８１∗ ０．６４ －０．５１ －０．６６ －０．７８ ０．２６ －０．５９ －０．５４ －０．５２ －０．５５ －０．５１
真菌 Ｔｏｔａｌ ｆｕｎｇｉ ０．８０ －０．７０ ０．１７ ０．６１ ０．８３∗ －０．１０ ０．８３∗ ０．８０∗ ０．７９ ０．８１∗ ０．７８
ＡＭ真菌 ＡＭ ｆｕｎｇｉ －０．１２ ０．３４ ０．３３ ０．６４ －０．１７ －０．４２ －０．４０ －０．３５ －０．３２ －０．３６ －０．３１
放线菌 Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ －０．０４ ０．０７ ０．５０ －０．６８ －０．１８ －０．３７ －０．２７ －０．３２ －０．３４ －０．３１ －０．３５
肉苁蓉种子萌发率 Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ －０．３３ ０．４９ ０．２９ ０．７５ －０．９８∗∗ ０．４１ －０．８５∗ －０．９２∗∗ －０．９９∗∗ －０．９８∗∗ ０．４６
肉苁蓉寄生率 Ｐａｒａｓｉｔｉｓｍ ｒａｔｅ －０．２８ ０．５４ ０．３７ ０．７５ －０．９９∗∗ ０．３９ －０．８５∗ －０．９３∗∗ －０．９９∗∗ －０．９９∗∗ ０．４８
　 　 ∗表示 Ｐ＜０．０５水平显著相关，∗∗表示 Ｐ＜０．０１水平极显著相关；ＴＡ：气温 ａｉｒ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；ＲＨ：大气相对湿度 ｒｅｌａｔｉｖｅ ｈｕｍｉｄｉｔｙ；ＰＡＲ：光照有
效辐射 ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇｈｔ；ＳＭ５０：５０ ｃｍ土壤湿度 ｓｏｉｌ ｍｏｉｓｔｕｒｅ；ＳＴ５０：５０ ｃｍ土壤温度 ｓｏｉｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；ＰＴ：降雨量 ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ；ＴＮ：全氮 ｔｏｔａｌ
ｎｉｔｒｏｇｅｎ；ＡＰ：有效磷 ａｖａｉｌａｂｌｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ；ＡＫ：速效钾 ａｖａｉｌａｂｌｅ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ；ＯＭ：有机质 ｏｒｇａｎｉｃ ｍａｔｔｅｒ
３　 讨论
３．１　 梭梭根际土壤微生物种类及群落结构分析
土壤微生物主要包括土壤中的细菌、真菌、放线菌及藻类。 本研究中除对照 ＣＫ 及 ８ 月份的样品没有检
测到厌氧菌外，其他不同月份的梭梭根际土壤中均检测到了细菌、真菌、ＡＭ 真菌及放线菌。 其中以表征细菌
的 ＰＬＦＡ所占的比例最高，其次是真菌、放线菌占的比例最低，这与以往的研究结果相似［２２］。 一般来说，土壤
中细菌数量最多，其次为真菌，放线菌数量最少。 随着环境变化，土壤微生物区系种类也会发生显著改变［２３］。
细菌含量较高因其结构简单、繁殖快、抗逆性强、可以生存于湿润及透气性不好的环境［２４］；真菌含量相对较少
是因其只适宜于生长在通气良好的环境中；放线菌喜热、耐旱，但其竞争力较弱［２５⁃２６］，种群较小。 梭梭根际土
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壤微生物的 ＰＬＦＡ含量显著高于对照土 ＣＫ，说明梭梭根系分泌物可以促进其根际土壤微生物生长。 罗倩
等［２７］采用平板培养法研究了梭梭根际和非根际土壤微生物的数量及群落结构特征，结果表明梭梭具有较强
的根际正效应，且根际微生物也显著促进梭梭的生长及其对土壤养分的吸收。 通常植物光合产物有 ４％—７％
通过分泌作用进入土壤，在根系分泌物的作用下，根际微生物得到快速生长，其种类及数量远高于非根际土壤
微生物［２８］。
３．２　 环境因子对梭梭根际土壤微生物的影响
研究表明梭梭在不同生长时期，其根际土壤微生物的数量、种类及优势种等均存在一定差异，这与不同环
境条件下的梭梭根系分泌物种类和含量有关［２９］。 梭梭一般为 ４ 月底抽出新芽，５ 月中旬开花，６ 月初进入生
长旺盛期，７—８月发育中的种子进入休眠期，９—１０月种子进入成熟期。 研究表明 ５—７月份的梭梭根系微生
物种类及含量高于 ８月份样品。 这与 ５—７月气温及湿度适宜，梭梭生长活跃，大量产生根系分泌物促进其根
际土壤微生物的生长有关；８月份天气炎热，梭梭生长缓慢进入夏季休眠阶段导致其根系分泌物减少，使得其
根际土壤微生物的活动减弱。 陈子英等［３０］研究表明冬小麦由幼苗期到返青期间的根际微生物的数量最高，
而返青后迅速减少，这与小麦返青期间产生的大量根系分泌物有关。
相关分析表明真菌与土壤温度间的相关性达到正显著性水平，说明梭梭根际真菌的数量随着温度上升逐
渐增大。 ５—７月份的梭梭根际细菌、真菌、放线菌等微生物 ＰＬＦＡ含量显著高于 ８ 月份，可能与 ５—７月份采
样点降雨量、大气相对湿度和土壤湿度等条件较好，使得土壤微生物快速生长有关；土壤温湿度较高也促使梭
梭毛细根生长较快，使其根系分泌物增加，进而促进了土壤微生物种类及数量的增加。 肉苁蓉寄生率与 ５０
ｃｍ深土壤温度呈显著负相关，说明随着土壤温度升高，肉苁蓉的寄生率逐渐降低。 因此，结合真菌与土壤温
度的相关分析，得出肉苁蓉的最适寄生温度应该在 ６ 月份。 肉苁蓉的寄生率与土壤养分显著负相关，说明在
土壤养分含量较低的时候肉苁蓉寄生率较高，这可能与土壤贫瘠引起其根际土壤微生物的大量繁殖，促进了
肉苁蓉的寄生有关。 该试验基地的平均 ｐＨ值为 ９．１２，较高的 ｐＨ值与该基地位于偏碱性水质的黄河附近有
关，这与梭梭耐盐碱的生长特性也一致。 大多数微生物适宜在中性或微碱性环境中生存，土壤 ｐＨ 值降低会
减弱微生物的活动并影响到其生长状况［３１］，该基地 ６月份较高的 ｐＨ值及适宜的气候可能促进梭梭根际土壤
微生物大量繁殖，这对梭梭根系分泌物的释放具有一定的促进作用。
３．３　 梭梭根际土壤微生物变化对肉苁蓉寄生的影响
近年来，肉苁蓉与梭梭的寄生机理已成为肉苁蓉研究领域的热点。 李天然等［３］研究表明肉苁蓉种子只
有在梭梭根系分泌物存在的情况下才能萌发，且只在多年生的梭梭根际才能完成寄生生活史。 梭梭是多年生
旱生小乔木，一些较为成熟的寄生性草本植物根系分泌物研究方法，如独角金 （ Ｓｔｒｉｇａａｓｉａｔｉｃａ）、百脉根
（Ｌｏｔｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）和菟丝子（Ｃｕｓｃｕｔａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）等水溶液培养方法很难用于梭梭根系分泌物的研究，且多年生、
沙生性的生物特征也使得梭梭很难在实验室开展研究［７，３２⁃３３］；田间收集的梭梭根系分泌物因受土壤微生物、
土壤小动物及植物残体等因素影响难以有效控制。 因此，目前还未见有关从梭梭根系分泌物中得到刺激肉苁
蓉种子萌发的相关物质报道。 有研究表明植物根际土壤微生物可以通过改变寄主植物根际营养状况和植物
激素含量来改变植物体内生理生化过程，从而影响寄主根系分泌物种类和数量［３４］。 本研究首次对不同季节
的梭梭根际土壤微生物种类及群落结构特征进行分析，结果表明肉苁蓉田间寄生率与其根际土壤微生物的结
构变化有一定相关性，二者的最高值均出现在 ６ 月份。 Ａｋｉｙａｍａ 等［７］研究表明，百脉根根系分泌物中含有促
进产生菌丝分支的化学物质 ５⁃ｄｅｏｘｙｓｔｒｉｇｏｌ，在很低的浓度时就可以刺激其根系周围菌根真菌产生大量分支。
因此，寄生植物在寄生过程中与其寄主根际土壤微生物的关系密切。 有研究表明珠状巨孢囊霉 （ Ｇ．
ｍａｒｇａｒｉｔａ）通过在寄主百脉根毛细根处定植及产生分支，增大百脉根与土壤的接触面积，从而促进其对土壤养
分的吸收和寄生关键物质的分泌，本研究也从梭梭根际土壤中发现了可能参与寄生的巨孢囊霉属 ＡＭ 真
菌［７］。 因此，梭梭根际土壤微生物可能参与肉苁蓉的寄生过程。
由于田间试验影响因素较多，梭梭根际微生物是否参与肉苁蓉的寄生，还需要进一步证实。 根据梭梭的
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生长特性及前人研究方法，已经初步摸索出了一套严谨的田间梭梭根系分泌物和根际土壤微生物收集及分析
方法，相关研究工作正在进行中。 由于磷脂不能作为细胞的贮存物质，一旦生物细胞死亡，其中的磷脂化合物
就会迅速分解，使得 ＰＬＦＡ的测试结果不能准确的代表土壤微生物的真实信息。 此外，该方法只能从土壤微
生物属的水平上进行鉴定，不能到达种的水平。 因此，后续用于梭梭根际特定微生物类群的分析还需要利用
ＰＣＲ⁃ＤＧＧＥ等方法进行。
４　 结论
（１）５—７月份梭梭根际土壤微生物种类及 ＰＬＦＡ 含量显著高于 ８ 月份，以 ６ 月份总 ＰＬＦＡ 及 ＡＭ 真菌
ＰＬＦＡ含量最高；采用湿筛倾注⁃蔗糖离心法，从梭梭根际土壤共鉴定出 ４ 属 ３５ 种 ＡＭ 真菌。 它们分别为：球
囊霉属 ２２种、无梗囊霉属 ７种、多孢囊霉属 ３种、巨孢囊霉属 ３ 种。 其中以黑球囊霉和双网无梗囊霉为优势
种群，以 ６月份和 ８月份的梭梭根际土壤 ＡＭ 真菌孢子数量最高，且发现了可能参与寄生的巨孢囊霉属 ＡＭ
真菌。
（２）梭梭根际土壤微生物群落结构的变化受气候因子及土壤养分的显著影响；与寄生有关的真菌数量与
５０ ｃｍ深土壤温度呈显著正相关；肉苁蓉寄生率与 ５０ ｃｍ深土壤温度及土壤养分呈显著负相关。
（３）６月份梭梭根际土壤提取液得到的肉苁蓉种子萌发率和肉苁蓉田间接种寄生率在 ５—８月份中均最
高，这与 ６月份梭梭根际土壤微生物的种类及 ＰＬＦＡ 含量较高显著相关。 根据以上结果，本研究推测梭梭根
际土壤微生物可能参与了肉苁蓉的寄生过程。
致谢：孔垂华教授、董红云博士、夏志超博士、刘源经理及常玉成农艺师在实验材料收集、样品测试及分析工作
中给予帮助，特此致谢。
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