全 文 ：第 １３卷第 ４期
２０１５年 ７月
生 物 加 工 过 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ １３ Ｎｏ ４
Ｊｕｌ ２０１５
ｄｏｉ：１０ ３９６９ ／ ｊ ｉｓｓｎ １６７２－３６７８ ２０１５ ０４ ００９
收稿日期：２０１４－０６－０６
基金项目：国家高技术研究发展计划（８６３计划）重大项目（２０１２ＡＡ０２２２０５）；国家重点基础研究发展计划（９７３计划）（２０１１ＣＢ７１０８００）
作者简介：秦 燕（１９８８—），女，重庆人，硕士研究生，研究方向：生物化工；何冰芳（联系人），教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｂｉｎｇｆａｎｇｈｅ＠ ｎｊｔｅｃｈ．ｅｄｕ．ｃｎ
脂肪酶 ＹＣＪ０１拆分对位取代 α 苯乙醇
秦 燕，李文豪，汪 斌，何冰芳
（南京工业大学 生物与制药工程学院，江苏 南京 ２１１８００）
摘 要：利用脂肪酶 ＹＣＪ０１催化拆分对位取代 α 苯乙醇衍生物。 以异丙醚为反应介质，采用乙酸乙烯酯作为酰基
供体，对 １８０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ的 １ （４ 甲基苯基）乙醇进行选择性酯化，脂肪酶粗酶粉添加量为 ５ ｇ ／ Ｌ，５０ ℃反应 ２１ ｈ后，
底物转化率可达 ４９ ９％，对映体过量值 ｅ ｅ． ｓ、ｅ ｅ．ｐ值分别为 ９７ １％和 ９７ ２％，对映体选择性 Ｅ＞２００；同样，对 １ （４
甲氧基苯基）乙醇进行选择性酯化，酰基供体为丁酸乙烯酯，底物浓度 １５０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ，脂肪酶粗酶粉添加量为 ２ ５
ｇ ／ Ｌ，３０ ℃反应 １２ ｈ后，底物转化率为 ４９ ８％，ｅ ｅ． ｓ、ｅ ｅ．ｐ值分别为 ９７ ７％和 ９８ ４％，对映体选择性 Ｅ＞２００，显示了
很好的手性拆分效果。
关键词：耐有机溶剂脂肪酶；手性拆分；Ｂｕｒｈｏｌｄｅｒｉａ ａｍｂｉｆａｒｉａ；α 苯乙醇
中图分类号：Ｑ８１４ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－３６７８（２０１５）０４－００４７－０５
Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ
ｐａｒａ⁃（Ｒ，Ｓ） ⁃α⁃ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌ ｂｙ ｌｉｐａｓｅ ＹＣＪ０１
ＱＩＮ Ｙａｎ，ＬＩ Ｗｅｎｈａｏ，ＷＡＮＧ Ｂｉｎ，ＨＥ Ｂｉｎｇｆａｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｒａ⁃（Ｒ， Ｓ）⁃α⁃ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｂｙ
ｌｉｐａｓｅ ＹＣＪ０１． Ｔｈｅ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐａｒａ⁃（Ｒ，Ｓ）⁃α⁃ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌ ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ． Ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ
ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｉｎ ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ｅｔｈｅｒ ｕｓｉｎｇ ｖｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ａｓ ａｃｙｌ ｄｏｎｏｒｓ ｗｉｔｈ ５ ｇ ／ Ｌ ｌｉｐａｓｅ ＹＣＪ０１ ａｎｄ １８０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ
１⁃（４⁃ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｅｔｈａｎｏｌ． Ｔｈｅ ｍｉｘｔｕｒｅ ｗａｓ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ａｔ ５０ ℃ ｆｏｒ ２１ ｈ． Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ ４９ ９６％ ｗｉｔｈ ｅ ｅ． ｓ ＝ ９７ １％，ｅ ｅ．ｐ ＝ ９７ ２％，Ｅ＞２００ Ｓｉｍｉｌａｒｌｙ，ｈｉｇｈ ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ
ｐｕｒｉｔｙ（ｅ ｅ． ｓ ＝ ９７ ７％，ｅ ｅ．ｐ ＝ ９８ ４％，Ｅ＞２００） ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ（４９ ８２％） ｗｅｒｅ ａｃｈｉｅｖｅｄ ａｔ ３０
℃ ａｆｔｅｒ １２ ｈ ｉｎ ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ｅｔｈｅｒ ｗｉｔｈ ２ ５ ｇ ／ Ｌ ｌｉｐａｓｅ ＹＣＪ０１ ａｎｄ １５０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ １⁃（ ４⁃ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）
ｅｔｈａｎｏｌ，ｖｉｎｙｌ ｂｕｔｙｒａｔｅ ａｓ ａｃｙｌ ｄｏｎｏｒｓ． Ａｌｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｌｉｐａｓｅ ＹＣＪ０１ ｗａｓ ａｎ ｅｘｐｌｏｉｔａｂｌｅ
ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔ ｆｏｒ ｃｈｉｒａｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈａｒａｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｏｌｅｒａｎｔ ｌｉｐａｓｅ； ｃｈｉｒａｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ； Ｂｕｒｈｏｌｄｅｒｉａ ａｍｂｉｆａｒｉａ；α⁃ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌ
光学纯的 α 苯乙醇及其衍生物是许多医药、
精细化学品及香料等物质的合成中间体［１］，其中对
位取代的 α 苯乙醇作为代表，其 Ｒ 和 Ｓ 两种对映
异构体均为重要的医药中间体，（Ｓ） １ （４ 甲基苯
基）乙醇是合成食品添加剂姜黄酮的中间体［２］；
（Ｓ） １ （４ 甲氧基苯基）乙醇是 １ （４ 甲基苯
基） １ （ ４ 甲氧基苯基） 乙硫醇的中间体［３］；
（Ｒ） １ （４ 甲基苯基）乙醇则可以用来合成具有防
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癌功能的硒化合物［４］，（Ｒ） １ （４ 甲氧基苯基）乙
醇可以合成环丙烷甲酸中间体，进而合成用于治疗
癌症的溶血磷脂酸受体的异恶唑基拮抗剂［５］等。
目前，对位取代 α 苯乙醇衍生物的单一对映体可
以通过不对称合成、化学拆分和酶法拆分等获得，
其中酶法催化的拆分反应具有反应条件温和、手性
选择性高等优点，因而越来越受到人们的重视［６］。
脂肪酶是一类广泛应用于类脂化合物水解、合
成以及酯交换的高效生物催化剂，多数脂肪酶在催
化过程中具有高度的区域选择性、立体选择性，并
且在反应中不需要添加辅因子等特点。 另外，脂肪
酶可以接受众多复杂的非天然化合物作为底物，因
此，利用脂肪酶的高度立体选择性，在有机相中通
过转酯反应进行对位取代的 α 苯乙醇衍生物的手
性拆分备受人们的关注。 然而现有报道中对 １
（４ 甲基苯基）乙醇和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇的
酶法拆分的研究比较少，其中 Ｈａｔｚａｋｉｓ 等［７］对脂肪
酶拆分 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇做过初步研究，但
是其在拆分过程中转化率较低且产物 ｅ ｅ．ｐ值仅为
８８％；王晨等［８］研究了多种脂肪酶对 １ （４ 甲氧基
苯基） 乙醇拆分，其中 Ｎｏｖｏｚｙｍｅ ４３５ 及 ＰＳ ＩＭ
（Ｐ ｃｅｐａｃｉａ）脂肪酶显示了很好的拆分效果，然而在
整个反应体系中底物浓度低，酶用量大。 因而，进
一步开发能够高效拆分 １ （４ 甲基苯基）乙醇和
１ （４ 甲氧基苯基）乙醇的脂肪酶具有重大意义。
本课题组 Ｙａｏ等［９］筛选获得 １株耐有机溶剂脂
肪酶产生菌 Ｂｕｒｈｏｌｄｅｒｉａ ａｍｂｉｆａｒｉａ ＹＣＪ０１，该菌株所
产的脂肪酶 ＹＣＪ０１不仅在 ６０ ℃下稳定而且用 ２５％
（体积分数）有机溶剂（甲醇、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）
等）处理 ６０ ｄ 后仍有较高的活力，展现出了优异的
温度稳定性和有机溶剂耐受性。 在有机相催化方
面具有广泛的应用前景。
本文中，笔者拟采用脂肪酶 ＹＣＪ０１对 １ （４ 甲
基苯基）乙醇和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇的选择性
酯化拆分，优化反应工艺，以期实现这两种医药中
间体的高效手性拆分。
１ 材料与方法
１ １ 材料
脂肪酶产生菌 Ｂ ａｍｂｉｆａｒｉａ ＹＣＪ０１（ＣＣＴＣＣ Ｎｏ：
２０１１０５８），该脂肪酶核酸序列 ＧｅｎＢａｎｋ 登录号为
ＪＱ７３３５８３［１０］。 １ （４ 甲基苯基）乙醇购于东京化成
工业株式会社。 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇购于阿法
埃莎（天津）化学有限公司。 其他试剂均为市售分
析纯。
１ ２ 培养基
活化培养基（ＬＢ 培养基，ｇ ／ Ｌ）：酵母粉 ５、蛋白
胨 １０、ＮａＣｌ １０、琼脂 ２０。
发酵培养基：糊精 ８ ｇ ／ Ｌ、酵母粉 ５ ２ ｇ ／ Ｌ、牛肉
膏 ７ ８ ｇ ／ Ｌ、ＭｇＳＯ４ ０ ５ ｇ ／ Ｌ、Ｋ２ＨＰＯ４ ２ ｇ ／ Ｌ、菜籽油 ５
ｍＬ ／ Ｌ、ＴｒｉｔｏｎＸ １００ ０ ７５ ｍＬ ／ Ｌ。 ｐＨ ８ ０。
１ ３ 脂肪酶粗酶粉的制备
从冻存管中接菌株 Ｂ ａｍｂｉｆａｒｉａ ＹＣＪ０１于 ＬＢ平
板上，３０ ℃培养 １２ ｈ后，接取一环于发酵培养基中，
于 ３０ ℃、１８０ ｒ ／ ｍｉｎ的摇床上培养 ７２ ｈ。
取脂肪酶发酵上清液，置冰水浴中，收集
（ＮＨ４） ２ＳＯ４ 饱和度为 ６５％时沉淀下来的蛋白，在
ｐＨ７ ０、５０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ的磷酸缓冲液中透析 １ ｄ 后，冷
冻干燥得脂肪酶 ＹＣＪ０１粗酶粉。
１ ４ 脂肪酶催化拆分对位取代 α 苯乙醇
转酯化拆分反应在 ５ ｍＬ 具塞反应瓶中进行。
初始反应体系为 ２ ｍＬ 预脱水的异丙醚，拆分底物
（Ｒ，Ｓ） α 苯乙醇衍生物 ３０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ，酰基供体（乙
酸乙烯酯、丁酸乙烯酯） ３００ ｍｍｏｌ ／ Ｌ，添加脂肪酶
ＹＣＪ０１酶粉 １０ ｍｇ。 在 １８０ ｒ ／ ｍｉｎ 的恒温摇床中反
应一定时间，检测底物的转化率和光学纯度。
采用戴安 Ｐ６８０型高效液相色谱（ＨＰＬＣ）检测。
１ （４ 甲基苯基）乙醇的检测条件：色谱柱为 Ｃｈｉｒａｌ
ＯＪ Ｈ 柱（４ ６ ｍｍ×２５０ ｍｍ）；流动相为正己烷 ／异
丙醇溶液（体积比为 ９５ ∶ ５）。 ［１ （４ 甲氧基苯基）
乙醇的检测条件：色谱柱为 Ｃｈｉｒａｌ ＡＤ Ｈ 柱（４ ６
ｍｍ×２５０ ｍｍ）；流动相为正己烷 ／异丙醇溶液（体积
比为 ８５ ∶ １５）］。 其余条件如下：流速 １ ｍＬ ／ ｍｉｎ；检
测波长 ２２０ ｎｍ；柱温 ３０ ℃。 底物 １ （４ 甲基苯基）
乙醇的 Ｒ型及 Ｓ 型对映体的保留时间分别为 １０ ９
ｍｉｎ和 １２ ６ ｍｉｎ，产物酯的 Ｒ 型及 Ｓ 型对映体的保
留时间分别为 ６ ７ 和 ７ １ ｍｉｎ；底物 １ （４ 甲氧基
苯基）乙醇的 Ｒ型及 Ｓ型对映体的保留时间分别为
６ ２和 ６ ４ ｍｉｎ，产物酯的 Ｒ型及 Ｓ型对映体的保留
时间分别为 ３ ９和 ４ ４ ｍｉｎ。
底物转化率（Ｃ）＝ ｅ ｅ． ｓ ／ （ ｅ ｅ． ｓ ＋ ｅ ｅ．ｐ） ×１００％，
底物对映体过量值 （ ｅ ｅ． ｓ ） ＝ （ ｃＳ － ｃＲ ） ／ （ ｃＳ ＋ ｃＲ ） ×
１００％，产物对映体过量值（ ｅ ｅ．ｐ）＝ （ ｃＳ１－ｃＲ１） ／ （ ｃＳ １ ＋
ｃＲ１）×１００％，对映体选择率 Ｅ ＝ ｌｎ［１－Ｃ（１＋ｅ ｅ．ｐ） ／ ｌｎ
［１－Ｃ（１－ｅ ｅ．ｐ）］。 式中：ｃＲ、ｃＳ为反应后残留 ２ 个对
映体的浓度（ｍｍｏｌ ／ Ｌ），ｃＲ１、ｃＳ１为反应后生成的酯的
８４ 生 物 加 工 过 程 第 １３卷
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２个对映体的浓度（ｍｍｏｌ ／ Ｌ）。
２ 结果与讨论
２ １ 酶法催化对位取代 α 苯乙醇手性拆分反应中
酯化产物构型分析
根据现有文献中关于 α 苯乙醇衍生物分析的
相关报道，笔者采用 Ｃｈｉｒａｌ ＯＤ Ｈ 柱（４ ６ ｍｍ×２５０
ｍｍ）对反应中底物和产物的构型进行了分析，结合
文献［８，１１］可知，对于（Ｒ，Ｓ） １ （４ 甲基苯基）乙
醇，脂肪酶 ＹＣＪ０１ 可以选择性地催化 Ｓ 型的底物生
成酯化产物 Ｓ 型的乙酰 对甲基苯乙酯，光学纯的
Ｒ １ （４ 甲基苯基）乙醇并未发生反应。 而对于
（Ｒ，Ｓ） １ （４ 甲氧基苯基）乙醇则结果相反，脂肪
酶 ＹＣＪ０１优先选择催化 Ｒ型底物生成 Ｒ 型的丁酰
对甲氧基苯乙酯，Ｓ型的１ （４ 甲氧基苯基）乙醇未
发生反应，其相关选择性的机制有待于进一步研
究。 据此可以判断其 ２ 种底物的反应式，如图 １
所示。
图 １ 脂肪酶 ＹＣＪ０１拆分对位取代 α 苯乙醇
Ｆｉｇ １ Ｌｉｐａｓｅ ＹＣＪ０１ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｒａ⁃（Ｒ，Ｓ） ⁃α⁃ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌ
２ ２ 温度对拆分反应的影响
在生物催化反应中，温度既影响酶的活力，也
影响酶的立体选择性，因而对反应的影响很大［１２］。
考察温度对脂肪酶 ＹＣＪ０１拆分 １ （４ 甲基苯基）乙
醇和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇反应的影响，反应 ６ ｈ
的结果见图 ２。 由图 ２ 可知：随着温度的升高底物
１ （４ 甲基苯基）乙醇和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇
的转化率和 ｅ ｅ． ｓ值均呈现先升后降的过程，但是
ｅ ｅ．ｐ值在整个升温过程中变化不大，说明脂肪酶
ＹＣＪ０１ 的选择性并没有发生变化。 １ （４ 甲基苯
基）乙醇和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇的反应转化率
分别在 ５０、３０ ℃下达到最高，分别为 ４９ ５９％和
４９ ３４％。 所以，脂肪酶 ＹＣＪ０１ 拆分 １ （４ 甲基苯
基）乙醇和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇的最适反应温
度分别为 ５０、３０ ℃。
２ ３ 酰基供体与底物摩尔比对拆分反应的影响
对于拆分反应而言，不同的底物有不同的最佳
酰基供体且酰基供体的浓度直接影响酶催化反应
图 ２ 温度对拆分反应的影响
Ｆｉｇ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｃｈｉｒａｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ
ｏｆ α⁃ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌ
的平衡，从而影响反应的速度［１３］。 因此，考察 １
９４ 第 ４期 秦 燕等：脂肪酶 ＹＣＪ０１拆分对位取代 α 苯乙醇
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（４ 甲基苯基）乙醇与乙酸乙烯酯的摩尔比和
１ （４ 甲氧基苯基）乙醇与丁酸乙烯酯的摩尔比对
脂肪酶 ＹＣＪ０１ 催化转酯反应的影响，反应 ６ ｈ 的结
果见图 ３。 由图 ３可知，随着酰基供体比例的提高，
底物转化率和 ｅ ｅ． ｓ值先升后降。 这可能是由于随
着酰基供体比例的提高，反应平衡向正方向进行，
但过高的比例引起底物抑制且降低了反应速率，导
致转化率和 ｅ ｅ ｓ值下降。 Ｅ 值变化不大，说明脂肪
酶 ＹＣＪ０１ 的选择性并没有发生变化。 当 １ （４ 甲
基苯基）乙醇与乙酸乙烯酯和 １ （４ 甲氧基苯基）
乙醇与丁酸乙烯酯的摩尔比分别为 １ ∶ ６和 １ ∶ ５时，
转化率达到最高，分别为 ４９ ６４％和 ４９ ７９％。 所以
分别选取 １ （４ 甲基苯基）乙醇与乙酸乙烯酯的摩
尔比为 １ ∶ ６和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇与丁酸乙烯
酯的摩尔比为 １ ∶ ５时为最适反应摩尔比。
图 ３ 酰基供体与底物的摩尔比对拆分反应的影响
Ｆｉｇ ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｏｌｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ａｃｙｌ ｄｏｎｅｒ ｔｏ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
ｏｎ ｃｈｉｒａｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ
２ ４ 底物浓度对拆分反应的影响
在普通的生物催化体系中，当底物浓度较低
时，反应速率与底物浓度成正比，不存在底物抑制
现象，当底物浓度达到一定程度或过高时，可能会
存在底物抑制和酶活性中心的使用效率受限［１４］。
本研究分别在上述优化反应条件下，考察了 １ （４
甲基苯基）乙醇的浓度和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇
的浓度对反应的影响，反应 ６ ｈ的结果见图 ４。 由图
４可知：当 １ （４ 甲基苯基）乙醇和 １ （４ 甲氧基
苯基）乙醇处于低浓度时，反应速率随着底物浓度
的提高而加快，当底物浓度分别增加到 １８０ 和 １５０
ｍｍｏｌ ／ Ｌ时，反应速率达到最大值，继续提高时，反应
速率下降。 ｅ ｅ．ｐ值变化不大，说明脂肪酶 ＹＣＪ０１ 的
选择性并没有发生变化。 所以 １ （４ 甲基苯基）乙
醇和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇的浓度分别为 １８０
ｍｍｏｌ ／ Ｌ（２４ ５ ｇ ／ Ｌ）和 １５０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ（２２ ８ ｇ ／ Ｌ）时为
反应的最适底物浓度。
图 ４ 底物浓度对拆分反应的影响
Ｆｉｇ ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｎ ｃｈｉｒａｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ
２ ５ 脂肪酶 ＹＣＪ０１ 拆分对位取代 α 苯乙醇的进
程曲线
在上述优化条件下分别研究了 １ （４ 甲基苯
基）乙醇和 １ （４ 甲氧基苯基）乙醇的拆分反应进
程曲线，结果见图 ５。 由图 ５ 可知：１ （４ 甲基苯
基）乙醇的拆分体系反应 ２１ ｈ 后，底物转化率达到
４９ ９６％，ｅ ｅ． ｓ值为 ９７ １％、ｅ ｅ．ｐ值为 ９７ ２％，对映体
的选择性（Ｅ） ＞２００；１ （４ 甲氧基苯基）乙醇的拆
分体系反应 １２ ｈ 后，底物转化率达到 ４９ ８２％，ｅ ｅ． ｓ
值为 ９７ ７％、ｅ ｅ．ｐ值为 ９８ ４％，对映体的选择性（Ｅ）
＞２００。 Ｈａｔｚａｋｉｓ等［７］利用脂肪酶拆分 １ （４ 甲氧
基苯基）乙醇，其转化率及产物 ｅ ｅ．ｐ均较低；王晨
等［８］筛选了对 １ （４ 甲氧苯基）乙醇选择性较高的
脂肪酶，而底物浓度仅为 １ ｍｍｏｌ ／ Ｌ，脂肪酶用量为
５０ Ｕ ／ ｍＬ，时空产率低；本研究利用自主研发的脂肪
酶粗酶粉手性拆分对位取代 α 苯乙醇，底物浓度
分别达到了 １８０ 和 １５０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ，表明脂肪酶 ＹＣＪ０１
对对位取代 α 苯乙醇具有很高的催化效率。
０５ 生 物 加 工 过 程 第 １３卷
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图 ５ 反应时间对拆分反应的影响
Ｆｉｇ ５ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｃｈｉｒａｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ
３ 结论
采用脂肪酶 ＹＣＪ０１ 在非水相体系中拆分对位
取代 α 苯乙醇，在异丙醚体系中，１ （４ 甲基苯
基）乙醇和乙酸乙烯酯的浓度分别为 １８０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ和
１ ０８０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ，反应 ２１ ｈ 后，产物为 Ｓ 型的乙酰 对
甲基苯乙酯和 Ｒ型的对甲基苯乙醇，底物转化率达
到 ４９ ９０％，ｅ ｅ． ｓ为 ９７ １％、ｅ ｅ．ｐ为 ９７ ２％，对映体
的选择性 Ｅ＞２００；１ （４ 甲氧基苯基）乙醇和丁酸
乙烯酯的浓度分别为 １５０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ 和 ７５０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ，
反应 １２ ｈ后，产物为 Ｒ 型的丁酰 对甲氧基苯乙酯
和 Ｓ 型的对甲氧基苯乙醇，底物转化率达到
４９ ８２％，ｅ ｅ． ｓ为 ９７ ７％，ｅ ｅ．ｐ为 ９８ ４％，对映体的选
择性（Ｅ）＞２００。 本实验中一直采用游离游离脂肪酶
ＹＣＪ０１做研究，不可重复利用，在后续的工作中，将
对脂肪酶 ＹＣＪ０１进行固定化研究，以期提高其在催
化过程中的重复利用率。
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（责任编辑 荀志金）
１５ 第 ４期 秦 燕等：脂肪酶 ＹＣＪ０１拆分对位取代 α 苯乙醇
＼ ＼ＤＺ１９ ＼Ｄ ＼孙桂云 ＼生物加工 ２０１５ ＼第 ４期 ＼第 ４期．ＰＳ ４校样 排版：孙桂云 修改日期：２０１５ ／ ０７ ／ ０８