全 文 ：第 １３卷第 ５期
２０１５年 ９月
生 物 加 工 过 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ １３ Ｎｏ ５
Ｓｅｐ ２０１５
ｄｏｉ：１０ ３９６９ ／ ｊ ｉｓｓｎ １６７２－３６７８ ２０１５ ０５ ０１４
收稿日期：２０１４－０３－３１
作者简介：王 寒（１９８６—），男，山东烟台人，硕士研究生，研究方向：发酵工学；丁重阳（联系人），副教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｚｙｄｉｎｇ＠ ｊｉａｎｇｎａｎ．ｅｄｕ．ｃｎ
阿魏菇与胶红酵母共培养产漆酶对
活性艳蓝 Ｗ ＲＶ的脱色
王 寒１，２，彭 林１，丁重阳１，２，顾正华１，张 梁１，２，石贵阳１，２
（１ 江南大学 生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 ２１４１２２；
２ 江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室，江苏 无锡 ２１４１２２）
摘 要：利用阿魏菇与胶红酵母共培养所产漆酶对染料活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 进行脱色，同时考察不同 ｐＨ、温度、染料
浓度和漆酶酶活等条件对脱色的影响。 结果显示，酸性范围内的 ｐＨ有利于活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 的脱色，较高温度并
不适于脱色反应。 在研究不同染料浓度的影响时发现，不同浓度染料的脱色率在 ７ ｈ反应后都达到了稳定，而漆酶
酶活在达到 ２００ Ｕ ／ Ｌ后脱色率不再变化。 因此，最终得到的最适反应条件为 ｐＨ ４ ５、３０ ℃、染料质量浓度 １００
ｍｇ ／ Ｌ、漆酶酶活 ２００ Ｕ ／ Ｌ，在此条件下，活性艳蓝 Ｗ ＲＶ的最高脱色率为 ８９ ９１％。
关键词：漆酶；阿魏菇；胶红酵母；活性艳蓝 Ｗ ＲＶ；脱色
中图分类号：Ｘ７８８ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－３６７８（２０１５）０５－００７４－０５
Ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ ｄｙｅ ｗｉｔｈ ｌａｃｃａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ
ｔｈｅ ｃｏ⁃ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｆｅｒｕｌａｅ ａｎｄ Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ
ＷＡＮＧ Ｈａｎ１，２，ＰＥＮＧ Ｌｉｎ１，ＤＩＮＧ Ｚｈｏｎｇｙａｎｇ１，２，ＧＵ Ｚｈｅｎｇｈｕａ１，ＺＨＡＮＧ Ｌｉａｎｇ１，２，ＳＨＩ Ｇｕｉｙａｎｇ１，２
（１ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｊｉａｎｇｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ ２１４１２２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｃｅｒｅａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｊｉａｎｇｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ ２１４１２２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ ｂｙ ｌａｃｃａｓｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｏ⁃ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｆｅｒｕｌａｅ ａｎｄ Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
ｐＨ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｄｙｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｌａｃｃａｓｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｔ ａｃｉｄｉｃ ｐＨ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ｕｎｆａｖｏｕｒａｂｌｅ． Ｔｈｅ
ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｉｔｏｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ ａｃｈｉｅｖｅｄ ａ ｓｔａｂｌｅ ｌｅｖｅｌ ａｆｔｅｒ ａ ７⁃ｈ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｙｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ． Ｔｈｅ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｌａｃｃａｓｅ ａｍｏｕｎｔ ｕｎｔｉｌ ２００ Ｕ ／ Ｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｃｅｓｓ
ｌａｃｃａｓｅ （ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ２００ Ｕ ／ Ｌ） ｄｉｄ ｎｏｔ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ
ｐＨ ４ ５，３０ ℃，１００ ｍｇ ／ Ｌ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ ａｎｄ ２００ Ｕ ／ Ｌ ｌａｃｃａｓｅ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ
ｈｉｇｈｅｓｔ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ｌａｃｃａｓｅ ｗａｓ ８９ ９１％
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｌａｃｃａｓｅ；Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｆｅｒｕｌａｅ；Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ；ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ；ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ
染料是一种人工合成的大分子芳香烃化合物，
目前全世界年产量大约（８ ０ ～ ９ ０） ×１０５ ｔ，其中，我
国年产量约 １ ５×１０５ ｔ。 在染料的生产和使用过程
中，大约有 １０％～１５％的染料被排放到环境中，对环
境造成了严重影响［１］。 蒽醌类染料是染料中重要
的一类，由于其分子结构中含有一个或多个羰基
（Ｃ Ｏ）共轭体系，具有稳定的稠环芳香烃结构，从
而导致蒽醌类染料的废水具有色度高、毒性大、生
物降解性差的特点［２］。 常规的用于含染料废水处
理及脱色的方法包括物理法和化学法，但是这些方
法存在处理费用高、泥渣产生量大以及容易造成二
次污染等问题，制约了其在工业中的应用［３－５］。 因
此，寻找高效清洁低廉的生物处理染料脱色技术是
目前研究的热点。
漆酶（ｌａｃｃａｓｅ，ＥＣ１．１０．３．２）是一种含铜的多酚
氧化酶，属于铜蓝氧化酶蛋白家族。 漆酶是单电子
氧化还原酶，能够催化酚类物质发生氧化反应，同
时伴随着分子氧还原生成水。 漆酶可以催化酚及
其衍生物、芳胺及其衍生物等多种底物［６］，在染料
脱色、秸秆生物转化、纸浆漂白及环境保护等多个
方面已得到了一定程度的应用［７－１０］，例如 Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ
ｏｓｔｒｅａｔｕｓ产漆酶对 ａｚｕｒｅ Ｂ 与 ｉｎｄｉｇｏ ｃａｒｍｉｎｅ 的脱色
率均达到 １００％，对 ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ 脱色率达到
７４ ５％［１１］，此外，漆酶对有机磷农药可以进行有效
的氧化脱毒，如对 Ｏ，Ｏ 二乙基 Ｓ （Ｎ，Ｎ 二异丙
胺乙基）磷酰硫醇（ＤｉＰｒ Ａｍｔｉｏｎ）、Ｏ 乙基 Ｓ
（Ｎ，Ｎ 二异丙胺乙基）甲基磷酰硫醇（ＶＸ）和 Ｏ 异
丁基 Ｓ （Ｎ，Ｎ 二乙基胺乙基）甲基磷酰硫醇
（ＲＶＸ）３种有机磷杀虫剂的降解［１２］。 本文中，笔者
选用蒽醌染料中应用较为广泛的活性艳蓝 Ｗ ＲＶ，
利用阿魏菇与胶红酵母共培养产生的漆酶，研究漆
酶对活性艳蓝 Ｗ ＲＶ的脱色条件。
１ 材料与方法
１ １ 材料
１ １ １ 菌种
阿魏菇（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｆｅｒｕｌａｅ ＪＭ３０１） （自新疆野生
阿魏菇中筛选分离得到）、胶红酵母 （Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ
ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ ＪＢ４０１），保存于江南大学粮食发酵工艺
与技术国家工程实验室。
１ １ ２ 培养基
ＰＤＡ斜面（ｇ ／ Ｌ）：土豆 ２００，葡萄糖 ２０，琼脂 ２０。
ｐＨ自然。
基本培养基（ｇ ／ Ｌ）：麸皮 １０，玉米粉 １０，葡萄糖
２０，Ｋ２ＳＯ４０ １７４ ２。 ｐＨ９ ０。
ＹＥＰＤ培养基（ ｇ ／ Ｌ）：蛋白胨 ２０，酵母膏 １０，葡
萄糖 ２０。 ｐＨ７ ０。
１ ２ 方法
１ ２ １ 活性艳蓝 Ｗ ＲＶ染料的配制
将 ０ ５ ｇ 活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 染料用去离子水溶
解定容到 １ Ｌ容量瓶中，用超声波振荡破碎，配制成
５００ ｍｇ ／ Ｌ的母液备用。
１ ２ ２ 发酵培养及漆酶粗酶液的制备
从 ＰＤＡ斜面上取 ４块 ０ ５ ｃｍ２大小的活化阿魏
菇菌种斜面接入装有 ８０ ｍＬ 基本培养基的 ２５０ ｍＬ
三角瓶中，２５ ℃、１５０ ｒ ／ ｍｉｎ 培养 ７ ｄ。 将 ＰＤＡ 斜面
上活化的胶红酵母菌种接入装有 ８０ ｍＬ ＹＥＰＤ培养
基的 ２５０ ｍＬ 三角瓶中，３０ ℃、１５０ ｒ ／ ｍｉｎ 培养 ２ ｄ。
得到的阿魏菇种子液按体积分数 ５％接种量接入装
有 １５０ ｍＬ基本培养基的 ５００ ｍＬ 三角瓶中，２５ ℃、
１５０ ｒ ／ ｍｉｎ 培养 ２ ｄ 后，按体积分数 ５％接种量将胶
红酵母种子液接入阿魏菇进行共培养，培养 ７ ｄ 后
得到的发酵液在 ８ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ 条件下离心 ５ ｍｉｎ，上
清液即为实验所用粗酶液。
１ ２ ３ 漆酶活力测定［１３］
１ ｍＬ 反应体系中，含有 ８８０ μＬ 乙酸钠缓冲液
（浓度 ０ １ ｍｏｌ ／ Ｌ，ｐＨ ４ ５）、１００ μＬ ２，２ 联氮 二
（３ 乙基 苯并噻唑 ６ 磺酸）二铵盐（ＡＢＴＳ）底物
（终浓度为 １ ｍｍｏｌ ／ Ｌ）和 ２０ μＬ发酵上清液，整个反
应体系在 ３０ ℃下反应，在 ４２０ ｎｍ 下测定其吸光度
的变化，定义每分钟氧化 １ μｍｏｌ ＡＢＴＳ 底物所需要
的酶量为 １个酶活单位（Ｕ）。 酶活按式（１）计算。
酶活 ＝
（Ａ２ － Ａ１） × ５０ × １０６
ｔ × ε
（１）
式中：Ａ１为空白对照吸光值；Ａ２为反应后吸光值；ｔ为
反应时间；ε 为底物 ＡＢＴＳ 的摩尔吸光系数，３ ６ ×
１０４ Ｌ ／ （ｍｏｌ·ｃｍ）。
１ ２ ４ 活性艳蓝 Ｗ ＲＶ脱色率测定
用紫外可见分光光度计在 ２００～９００ ｎｍ 波长范
围内对活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 溶液进行扫描，确定活性
艳蓝 Ｗ ＲＶ最大吸收峰在 ５９５ ｎｍ处（图 １）。
脱色条件的确定：２０ ｍＬ反应体系，由活性艳蓝
Ｗ ＲＶ 溶液（终质量浓度 １００ ｍｇ ／ Ｌ）、粗酶液（２００
Ｕ ／ Ｌ）和 ０ １ ｍｏｌ ／ Ｌ 的缓冲液组成。 反应体系在恒
温振荡水浴锅中反应，初始反应在 ３０ ℃下脱色 １５
ｈ。 通过改变反应体系中相应条件，考察不同条件
对脱色的影响，在最大吸收波长条件下测定各反应
体系的吸光值，计算和比较脱色率。 所研究的脱色
条件包括 ｐＨ、温度、染料浓度和漆酶酶活。
脱色率的计算方法：利用分光光度计测定反应
５７ 第 ５期 王 寒等：阿魏菇与胶红酵母共培养产漆酶对活性艳蓝 Ｗ ＲＶ的脱色
图 １ 活性艳蓝Ｗ ＲＶ的吸收光谱
Ｆｉｇ １ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ
ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ
体系中剩余活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 的含量，以加入等量
灭活漆酶酶液的反应体系为对照，测定染料的脱
色率。
脱色率 ＝ （Ａ０ － Ａｔ） ／ Ａ０ × １００％ （２）
式中：Ａ０和 Ａｔ分别表示 ０ 时刻和 ｔ 时刻反应体系在
最大吸收波长处的吸光值。 实验重复 ３ 次，取平
均值。
２ 结果与讨论
图 ２ ｐＨ对活性艳蓝Ｗ ＲＶ脱色的影响
Ｆｉｇ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐＨ ｏｎ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ
ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ ｂｙ Ｐ． ｆｅｒｕｌａｅ ｌａｃｃａｓｅ
２ １ ｐＨ对脱色率的影响
在不同 ｐＨ 脱色体系中，考察漆酶对活性艳蓝
Ｗ ＲＶ 的脱色效果，结果如图 ２ 所示。 由图 ２ 可
知：漆酶对活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 的脱色效果在酸性范
围较好，ｐＨ ４ ５～６ ０时，脱色率保持较高水平，其中
ｐＨ ４ ５ 时，脱色率最高。 当 ｐＨ 低于 ４ ５ 或高于
６ ０，活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 的脱色效果迅速下降，这可
能是由于 ｐＨ过高或者过低都会使酶因变性而活性
下降，最终影响到脱色效果。 在之前研究的漆酶脱
色中也有类似结果，Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ漆酶经固定化
后，ｐＨ ４ ５ 条件下对染料 ｒｅｍａｚｏｌ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｒ
（ＲＢＢＲ）脱色率达到 ７０％以上［１４］，Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｆｌｏｒｉｄａ
产生的漆酶在 ｐＨ ４ ５ 条件下，对 ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｌｕｅ １９８
的脱色率可达到 ９６％［１５］。
２ ２ 温度对脱色率的影响
考察温度对活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 脱色率的影响，
结果如图 ３所示。 由图 ３可知：２０～６０ ℃内，漆酶对
活性艳蓝 Ｗ ＲＶ的最适脱色温度为 ３０ ℃，脱色率
达到 ８９ ７５％；温度超过 ３０ ℃后，脱色率逐渐下降；
当温度达到 ６０ ℃时，脱色率仅有 ４９ ８１％。 因此，高
温并不适合脱色反应，而在较低温度下可以获得很
好的脱色效果，也有利于工业推广。 在漆酶染料脱
色反应中，随着温度的升高，漆酶本身活性得到加
强，脱色率随之上升，但温度过高会导致脱色率因
漆酶变性失活而下降，酶反应速率始终受此 ２ 种因
素影响［１６］。 此外，底物不同，漆酶的最适脱色温度
也不相同。 在 Ｐａｒａｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ ｖａｒｉａｂｉｌｅ 产漆酶脱色
中，ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｌｕｅ １９、ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｌａｃｋ ５ 以及 ｒｅａｃｔｉｖｅ ｒｅｄ
１２０ 的最适脱色温度为 ５０ ℃， ｒｅａｃｔｉｖｅ ｙｅｌｌｏｗ１５、
ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｒａｎｇｅ １６为 ４０ ℃，ｄｉｒｅｃｔ ｂｌｕｅ ７１为 ６０ ℃ ［１７］。
图 ３ 温度对活性艳蓝Ｗ ＲＶ脱色的影响
Ｆｉｇ ３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ
ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ ｂｙ Ｐ． ｆｅｒｕｌａｅ ｌａｃｃａｓｅ
２ ３ 染料浓度对脱色率的影响
在 ｐＨ ４ ５、３０ ℃条件下，对不同浓度的染料
（２５～２５０ ｍｇ ／ Ｌ）进行脱色，结果见图 ４。 由图 ４ 可
知：当活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 质量浓度低于 １００ ｍｇ ／ Ｌ
时，漆酶具有良好的脱色效果，脱色率均在 ８９％以
上；当质量浓度大于 １００ ｍｇ ／ Ｌ 时，随着染料浓度的
增加，脱色率逐渐下降。 此结果与 Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｆｌｏｒｉｄａ
所产漆酶脱色 ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｌｕｅ １９８相似，染料质量浓度
超过 １５０ ｍｇ ／ Ｌ，脱色率也出现下降［１５］。 在之前的
研究中，Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ Ｆ０３２脱色偶氮染料 ｒｅａｃｔｉｖｅ
ｂｌａｃｋ ５，染料浓度增加造成脱色率下降，是由于染料
毒性的增强抑制了真菌的生长以及木质素酶系的
６７ 生 物 加 工 过 程 第 １３卷
活性［１８］。 本研究中，当染料质量浓度超过 １５０
ｍｇ ／ Ｌ，反应 ４～５ ｈ后，脱色率已保持不变，可能由于
高浓度染料条件下，漆酶活性中心达到饱和，同时
染料本身对漆酶的催化作用有负面影响，最终造成
染料脱色率较低。 此外，不同浓度的染料在降解过
程中，脱色 ７ ｈ 后，脱色率基本保持不变，表明不同
浓度下染料的最终脱色率具有一定限度，因此，为
提高漆酶对染料的脱色效率，１００ ｍｇ ／ Ｌ染料既可以
保持反应具有较高脱色率，也可以使染料的降解量
达到最优。
图 ４ 染料浓度对活性艳蓝Ｗ ＲＶ脱色的影响
Ｆｉｇ ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｙｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ ｂｙ Ｐ． ｆｅｒｕｌａｅ
ｌａｃｃａｓｅ
图 ５ 酶活对活性艳蓝Ｗ ＲＶ脱色的影响
Ｆｉｇ ５ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｎ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ Ｗ⁃ＲＶ ｂｙ Ｐ． ｆｅｒｕｌａｅ
ｌａｃｃａｓｅ
２ ４ 漆酶酶活对脱色率的影响
为考察漆酶酶活对活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 脱色的影
响，笔者在漆酶酶活 ２５ ～ ４００ Ｕ ／ Ｌ 的范围内考察脱
色率的变化，结果如图 ５所示。 由图 ５可知：当漆酶
酶活低于 ２００ Ｕ ／ Ｌ时，反应体系脱色率随着漆酶活
性的提高而提高，漆酶酶活在超过 ２００ Ｕ ／ Ｌ后，脱色
率趋于不变。 这是由于酶的用量决定催化反应速
率，在底物过量时，酶用量增加，提供的与底物结合
的活性中心也增加，若酶用量过高，几乎所有的底
物都与酶活性中心结合，继续增大酶量，也不会提
高染料的脱色率。 这一结果在漆酶降解 ＲＢＢＲ的研
究中也得到了证实［１４，１９］。
３ 结论
笔者在之前的研究工作中，利用阿魏菇与胶红
酵母共培养提高了漆酶在发酵过程中的表达。 由
于漆酶在多种复杂有机物的降解方面具有较好的
催化能力和广泛的底物选择性，因此已被用于多种
有害物质的降解应用。 为深入了解阿魏菇漆酶在
染料脱色方面的能力，本文考察了多种脱色反应条
件对阿魏菇漆酶降解蒽醌类染料活性艳蓝 Ｗ ＲＶ
的影响。 研究结果显示，酸性范围内的 ｐＨ 有利于
活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 的脱色，较高温度并不适于脱色
反应。 在研究不同染料浓度的影响时发现，不同浓
度染料的脱色率在 ７ ｈ 反应后都达到了稳定，而漆
酶酶活在达到 ２００ Ｕ ／ Ｌ 后脱色率不再变化。 在 ｐＨ
４ ５、温度 ３０ ℃，染料质量浓度 １００ ｍｇ ／ Ｌ、漆酶酶活
为 ２００ Ｕ ／ Ｌ条件下，活性艳蓝 Ｗ ＲＶ 的脱色率可
达到 ８９ ９１％。 通过对阿魏菇漆酶降解能力的了
解，对今后利用阿魏菇漆酶降解其他染料及有机化
合物的研究具有良好的借鉴意义。
参考文献：
［ １ ］ Ｗｅｓｅｎｂｅｒｇ Ｄ，Ｋｙｒｉａｋｉｄｅｓ Ｉ，Ａｇａｔｈｏｓ Ｓ Ｎ．Ｗｈｉｔｅ⁃ｒｏｔ ｆｕｎｇｉ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ
ｅｎｚｙｍｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｄｙｅ ｅｆｆｌｕｅｎｔｓ ［ Ｊ ］ ．
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ａｄｖ，２００３，２２（１ ／ ２）：１６１⁃１８７．
［ ２ ］ Ｋｎａｐｐ Ｊ Ｓ， Ｎｅｗｂｙ Ｐ Ｓ，Ｒｅｅｃｅ Ｌ Ｐ． Ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｙｅｓ ｂｙ
ｗｏｏｄ⁃ｒｏｔｔｉｎｇ ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅ ｆｕｎｇｉ［Ｊ］ ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ Ｔｅｃｈ，１９９５，
１７（７）：６６４⁃６６８．
［ ３ ］ Ｍｉｔｔａｌ Ａ，Ｋｕｒｕｐ Ｌ，Ｇｕｐｔａ Ｖ Ｋ．Ｕｓｅ ｏｆ ｗａｓｔｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ⁃ Ｂｏｔｔｏｍ
Ａｓｈ ａｎｄ Ｄｅ⁃Ｏｉｌｅｄ Ｓｏｙａ，ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｄｓｏｒｂｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｍｏｖａｌ ｏｆ
Ａｍａｒａｎｔｈ ｆｒｏｍ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｈａｚａｒｄ Ｍａｔｅｒ，２００５，１１７
（２⁃３）：１７１⁃１７８．
［ ４ ］ Ｓａｑｕｉｂ Ｍ， Ｍｕｎｅｅｒ Ｍ． Ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｈｏｔｏｃａｔａｌｙｓｅｄ
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｎｔｈｒａｘｑｕｉｎｏｎｅ ｄｙｅ，Ｒｅｍａｚｏｌ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ
ｕｎｄｅｒ ｓｕｎｌｉｇｈｔ ａｎｄ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｌｉｇｈｔ ｓｏｕｒｃｅ ［ Ｊ］ ． Ｄｙｅｓ Ｐｉｇｍｅｎｔｓ，
２００２，５３（３）：２３７⁃２４９．
［ ５ ］ Ｃｈｅｎ Ｇ， Ｈｏａｇ Ｇ Ｅ， Ｃｈｅｄｄａ Ｐ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ａｎｄ
ａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｉｎ ｓｉｔｕ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ ｗｉｔｈ Ｆｅｎｔｏｎ′ｓ
ｒｅａｇｅｎｔ［Ｊ］ ．Ｊ Ｈａｚａｒｄ Ｍａｔｅｒ，２００１，８７（１ ／ ２ ／ ３）：１７１⁃１８６．
［ ６ ］ Ｊｕｎｇ Ｈ Ｃ， Ｘｕ Ｆ， Ｌｉ Ｋ Ｃ． Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｌａｃｃａｓｅ ｆｒｏｍ ｗｏｏｄ⁃ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｆｕｎｇｕｓ Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ ＬＫＹ⁃７
［Ｊ］ ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ Ｔｅｃｈ，２００２，３０（２）：１６１⁃１６８．
［ ７ ］ Ｊａｄｈａｖ Ｕ Ｕ，Ｄａｗｋａｒ Ｖ Ｖ，Ｇｈｏｄａｋｅ Ｇ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ
７７ 第 ５期 王 寒等：阿魏菇与胶红酵母共培养产漆酶对活性艳蓝 Ｗ ＲＶ的脱色
Ｄｉｒｅｃｔ Ｒｅｄ ５Ｂ，ａ ｔｅｘｔｉｌｅ ｄｙｅ ｂｙ ｎｅｗｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｓｐ．
ＵＶＳ［Ｊ］ ．Ｊ Ｈａｚａｒｄ Ｍａｔｅｒ，２００８，１５８（２ ／ ３）：５０７⁃５１６．
［ ８ ］ Ｋｅ Ｌ Ｘ，Ｗｕ Ｑ，Ｚｈａｎｇ Ｄ Ｑ． Ｂｉｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｒａｐｅ ｓｔｒａｗ ｉｎｔｏ ａ
ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｂｙ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ａｎｄ ｙｅａｓｔ
［Ｊ］ ．Ａｆｒ Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１１，１０（２９）：５６４８⁃５６５３．
［ ９ ］ Ｄｗｉｖｅｄｉ Ｐ，Ｖｉｖｅｋａｎａｎｄ Ｖ，Ｐａｒｅｅｋ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｅａｃｈ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ
ｍｉｘｅｄ ｗｏｏｄ ｐｕｌｐ ｂｙ ｘｙｌａｎａｓｅ⁃ｌａｃｃａｓｅ ｃｏｎｃｏｃｔｉｏｎ ｄｅｒｉｖｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ
ｃｏ⁃ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ［ Ｊ］ ． Ａｐｐｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２０１０，１６０ （ １）：
２５５⁃２６８．
［１０］ Ｃｏｅｌｈｏ Ｊ Ｄ，ｄｅ Ｏｌｉｖｅｉｒａ Ａ Ｌ，ｄｅ Ｓｏｕｚａ Ｃ Ｇ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ
ｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓ ｂｅｎｔａｚｏｎ ａｎｄ ｄｉｕｒｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇｎｉｎｏｌｙｔｉｃ
ｅｎｚｙｍｅｓ ｂｙ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ［ Ｊ］ ． Ｉｎｔ Ｂｉｏｄｅｔｅｒ Ｂｉｏｄｅｇｒ，２０１０，
６４（２）：１５６⁃１６１．
［１１］ Ｐａｐｉｎｕｔｔｉ Ｌ，Ｆｏｒｃｈｉａｓｓｉｎ Ｆ．Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｙｅｓ
ｕｓｉｎｇ ｓｏｌｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｆｒｏｍ Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ ｍｕｓｈｒｏｏｍ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
［Ｊ］ ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｐｒｏｃ Ｅ，２０１０，１５（６）：１１０２⁃１１０９．
［１２］ Ａｍｉｔａｉ Ｇ，Ａｄａｎｉ Ｒ，Ｓｏｄ⁃Ｍｏｒｉａｈ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ
ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏｌａｔｅｓ ｂｙ ｆｕｎｇａｌ ｌａｃｃａｓｅ［Ｊ］ ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，１９９８，４３８
（３）：１９５⁃２００．
［１３］ Ｈｏｕ Ｈ Ｍ， Ｚｈｏｕ Ｊ Ｔ， Ｗａｎｇ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｌａｃｃａｓｅ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｓｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ ｄｙｅ ［ Ｊ］ ． Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ， ２００４， ３９ （ １１ ）：
１４１５⁃１４１９．
［１４］ Ｐａｌｍｉｅｒｉ Ｇ， Ｇｉａｒｄｉｎａ Ｐ， Ｓａｎｎｉａ Ｇ． Ｌａｃｃａｓｅ⁃ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｒｅｍａｚｏｌ
Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｆｉｘｅｄ⁃ｂｅｄ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ ［ Ｊ ］ ．
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｐｒｏｇｒ，２００５，２１（５）：１４３６⁃１４４１．
［１５］ Ｓａｔｈｉｓｈｋｕｍａｒ Ｐ，Ｍｕｒｕｇｅｓａｎ Ｋ，Ｐａｌｖａｎｎａｎ Ｔ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｃｃａｓｅ
ｆｒｏｍ Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｆｌｏｒｉｄａ ｕｓｉｎｇ ａｇｒｏ⁃ｗａｓｔｅｓ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅａｃｔｉｖｅ ｂｌｕｅ １９８［ Ｊ］ ．Ｊ Ｂａｓｉｃ Ｍｉｃｒｏｂ，２０１０，５０
（４）：３６０⁃３６７．
［１６］ Ｙａｎｇ Ｘ Ｑ， Ｚｈａｏ Ｘ Ｘ， Ｌｉｕ Ｃ Ｙ， ｅｔ ａｌ． Ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｚｏ，
ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈａｎｅ ａｎｄ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ ｄｙｅｓ ｂｙ ａ ｎｅｗｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ
Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｓｐ ＳＱ０１ ａｎｄ ｉｔｓ ｌａｃｃａｓｅ［Ｊ］ ．Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００９，４４
（１０）：１１８５⁃１１８９．
［１７］ Ａｓｈｒａｆｉ Ｓ Ｄ， Ｒｅｚａｅｉ Ｓ， Ｆｏｒｏｏｔａｎｆａｒ Ｈ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ
ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｏｘｉfiｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｄｙｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｌａｃｃａｓｅ
ｆｒｏｍ ａ ｓｏｉｌ⁃ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅ，Ｐａｒａｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ ｖａｒｉａｂｉｌｅ［ Ｊ］ ．
Ｉｎｔ Ｂｉｏｄｅｔｅｒ Ｂｉｏｄｅｇｒ，２０１３，８５：１７３⁃１８１．
［１８］ Ｈａｄｉｂａｒａｔａ Ｔ， Ａｄｎａｎ Ｌ Ａ， Ｙｕｓｏｆｆ Ａ Ｒ Ｍ， ｅｔ ａｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｚｏ ｄｙｅ ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｂｌａｃｋ ５ ｕｓｉｎｇ ｗｈｉｔｅ⁃ｒｏｔ
ｆｕｎｇｕｓ Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ Ｆ０３２［Ｊ］ ．Ｗａｔｅｒ Ａｉｒ Ｓｏｉｌ Ｐｏｌｌ，２０１３，２２４
（６）：１５９５．
［１９］ Ｓａｔｈｉｓｈｋｕｍａｒ Ｐ， Ｂａｌａｎ Ｋ， Ｐａｌｖａｎｎａｎ Ｔ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｆｌｏｒｉｄａ ｌａｃｃａｓｅ ｏｎ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｄｙｅ Ｒｅｍａｚｏｌ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ （ ＲＢＢＲ ） ｕｎｄｅｒ
ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［ Ｊ］ ． Ｃｌｅａｎ： Ｓｏｉｌ Ａｉｒ Ｗａｔｅｒ，２０１３，４１ （ ７）：
６６５⁃６７２．
（责任编辑 管 珺）
８７ 生 物 加 工 过 程 第 １３卷