全 文 ：第７卷第２期
２００９年３月
生　物　加　工　过　程
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ．７Ｎｏ．２
Ｍａｒ．２００９
收稿日期：２００８－０６－１５
基金项目：国家自然科学基金资助项目（２０５７６０５４，２０７０６０３１）；国家高技术研究发展计划（８６３）资助项目（２００６ＡＡ０２Ｚ２４００）；国家重点基础研
究发展计划（９７３）资助项目（２００７ＣＢ７０７８０５）
作者简介：徐　晴（１９８３—），女，江苏苏州人，硕士研究生，研究方向：工业微生物及代谢工程；黄　和（联系人），博士，教授，Ｅｍａｉｌ：ｂｉｏｔｃｃｈ＠ｎｊｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ
米根霉 ＭＥＦ１２发酵产富马酸的菌体形态控制
徐　晴１，高　振１，付永前１，李　霜１，２，黄　和１，２
（１．南京工业大学 制药与生命科学学院，南京 ２１０００９；２．江苏省工业生物技术创新中心，南京 ２１１８１６）
摘　要：丝状真菌发酵体系中菌体形态对产量有着重要影响。考察富马酸产生菌ＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅＭＥ Ｆ１２种子培养
过程中不同ｐＨ条件、孢子悬浮液密度以及ＣａＣｌ２添加量对其形态的影响。结果表明，当控制种子培养液ｐＨ２３～
２７、接种孢子的终密度为１５×１０８～３０×１０８／Ｌ和添加０５ｇ／ＬＣａＣｌ２时，培养可获得直径约为０６５ｍｍ光滑规整菌
球，后继的产酸发酵中富马酸量高达５８９ｇ／Ｌ。正交实验表明，ｐＨ是影响菌球形成的最主要因素，孢子液密度主要影
响菌体生物量，而ＣａＣｌ２则是菌球表面光滑度的主要影响因素。
关键词：富马酸；形态；产量；米根霉
中图分类号：ＴＱ９２１　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－３６７８（２００９）０２－００４８－０５
ＭｏｒｐｈｏｌｏｇｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅＭＥＦ１２ｉｎｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ＸＵＱｉｎｇ１，ＧＡＯＺｈｅｎ１，ＦＵＹｏｎｇｑｉａｎ１，ＬＩＳｈｕａｎｇ１，２，ＨＵＡＮＧＨｅ１，２
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ；
２．ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｆｏｒＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１１８１６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｅｆｅｃｔｏｆｐＨ，ｉｎｏｃｕｌｕｍ，ａｎｄＣａＣｌ２ｉｎｔｈｅｓｅｅｄｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｏｎｔｈｅｓｔｒａｉｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄ
ｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅＭＥＦ１２ｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄＷｈｅｎｐＨｗａｓｂｅｔｗｅｅｎ２３ａｎｄ２７，ｔｈｅ
ｓｐｏｒｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｆｌａｓｋｗａｓ１５×１０８ｔｏ３０×１０８ｓｐｏｒｅｓ／Ｌ．ＢｙａｄｄｉｎｇｏｆＣａＣｌ２（０５ｇ／Ｌ），ｔｈｅｓｔｒａｉｎ
ｇｒｅｗｉｎｔｏｔｈｅｕｎｉｆｏｒｍａｎｄｓｍｏｏｔｈｐｅｌｅｔ，ａｎｄｔｈｅｄｉａｍｅｔｅｒｗａｓｌｅｓｓｔｈａｎ０６５ｍｍＩｎｔｈｉｓｃａｓｅ，ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａ
ｔｉｏｎｏｆｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄｗａｓｆｕｒｔｈｅｒｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｏ５８９ｇ／Ｌ．ＴｈｅｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉｎｃｌｕｄｉｎｇｆａｃｔｏｒｓｏｆｐＨ，ｉｎ
ｏｃｕｌｕｍ，ａｎｄＣａＣｌ２ｗａｓｃａｒｉｅｄｏｕｔ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｐＨｗａｓｔｈｅｍｏｓｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｆａｃｔｏｒｆｏｒｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌ
ｏｇｙ，ｔｈｅｉｎｏｃｕｌｕｍａｆｅｃｔｅｄｔｈｅｍａｓｓｏｆｓｅｅｄａｎｄＣａＣｌ２ａｆｅｃｔｅｄｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆｐｅｌｅｔｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄ；ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ；ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ；Ｒｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅ
　　丝状真菌在发酵工业中有着广泛的应用，常用
来生产有机酸、酶制剂、抗生素等［１－４］，在深层发酵
过程中，丝状真菌一般存在３种形态：团状、絮状和
球状［５］。团状内部比较致密，存在严重的传质、传
氧问题，且不易接种，故一般认为是最不理想的形
态；絮状能够增加发酵液黏度，形成非牛顿型、假塑
型流体，影响营养物质传递，并且容易缠绕搅拌桨，
使发酵产物产量、发酵罐性能降低；而球状不但能
克服以上不足，同时还能增加发酵液的流变特性和
氧的有效传递性，降低通气量和搅拌转速，减少能
量消耗［６－８］。因此，控制发酵过程菌体形态被认为
是丝状真菌工业化生产的首要工作。
　　在米根霉产富马酸、乳酸等有机酸的发酵体系
中，菌体形态对有机酸产量有重要影响［８－１０］。影响
丝状真菌形态的因素有很多，如培养基成分、ｐＨ、接
种量、聚合物的添加等［８１０］，但不同菌种形成菌球的
条件各异。本研究针对米根霉 ＭＥＦ１２产富马酸的
发酵体系，详细探讨种子培养基中 ｐＨ、孢子细胞密
度、ＣａＣｌ２等因素对菌体形态及富马酸产量影响，为进
一步实现利用根霉菌发酵法制备富马酸奠定基础。
１　材料与方法
１．１　菌种
　　米根霉（ＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅＭＥ Ｆ１２），本实验室保藏。
１．２　培养基与培养条件
１．２．１　培养基及培养条件
　　斜面培养基（ｇ／Ｌ）：酵母膏３０，麦芽浸出液３０，
蛋白胨３０，甘油２０，琼脂２０。３５℃培养７ｄ。
　　种子培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖５０，尿素２，ＫＨ２ＰＯ４
０６，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０５，ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ００１７６，ＦｅＳＯ４·
７Ｈ２Ｏ００００４９８。培养条件：２５０ｍＬ摇瓶装液量５０
ｍＬ，３５℃，２００ｒ／ｍｉｎ，培养１ｄ。
　　发酵培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖 １００，ＫＨ２ＰＯ４０６，
ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０５，ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ００１７６，ＦｅＳＯ４·
７Ｈ２Ｏ００００４９８，ＣａＣＯ３６０。ｐＨ自然。培养条件：
２５０ｍＬ摇瓶装液量４０ｍＬ，以体积分数１０％接入种
子液，于３５℃、２００ｒ／ｍｉｎ培养３～４ｄ。
１．２．２　孢子液的制备
　　无菌水洗脱斜面培养基中孢子，经无菌脱脂棉
过滤去除菌丝体后，制备成孢子悬浮液，通过改变
无菌水的用量控制不同孢子悬浮液的密度。
１．３　分析方法
　　孢子数量的测定：采用血球计数板计数。
　　图像采集：莱卡显微镜ＤＭ１０００，菌球直径是５０
个菌球的平均直径。
　　生物量的测定：菌体抽滤，生理盐水洗涤，抽
干，８０℃烘干至恒质量后称质量，取平均值。
　　试样制备：停止发酵后添加适量１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ，
水浴加热，抽滤后取上清液用于分析检测。
　　富马酸产量的测定［１１］：高效液相色谱 ＤＩＯＮＥＸ
ＨＰＬＣＰ６８０工作站，Ａｌｔｅｃｈ有机酸色谱柱。
２　结果与讨论
２１　种子液ｐＨ对菌体形态和富马酸产量的影响
　　选取孢子液终密度 １×１０８个／Ｌ，考察种子液
ｐＨ对米根霉ＭＥＦ１２菌体形态、生物量及发酵产富
马酸量的影响，结果见表１。种子液的ｐＨ对米根霉
菌体形态具有重要影响，而对生物量影响较小。种
子液ｐＨ为２１时，孢子不能萌发；ｐＨ２３～２７时
米根霉可形成直径约５００～６００μｍ的分散菌球（图
１（ａ）），在发酵培养基中仍保持为球状形态；ｐＨ２９
时形成菌球与絮状菌丝的混合物，在发酵培养基中
菌体相互缠绕呈絮状；ｐＨ３１～３３时形成絮状种
子（图１（ｂ）），在发酵培养过程中缠绕成团块状；种
子培养基ｐＨ高于３３时形成菌丝体紧密缠绕的团
块状，在发酵培养基中保持团块状（图１（ｃ））。将３
种不同菌体形态的种子在相同的条件下进行发酵
培养基，检测富马酸量，结果表明球状形态下富马
酸量最高，平均质量浓度为５５２ｇ／Ｌ，比絮状和团状
形态分别高６０％和１１２％。因此，种子培养基中ｐＨ
控制在２３～２７内，米根霉 ＭＥ Ｆ１２可形成有利
于富马酸产生的分散菌球。
表１　种子液ｐＨ对菌体形态、生物量及富马酸产量的影响
Ｔａｂｌｅ１　ＥｆｅｃｔｏｆｐＨｏｎｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｂｉｏｍａｓｓａｎｄｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＭＥＦ１２
种子培养基
ｐＨ 菌体形态
ρ（生物量）／
（ｇ·Ｌ－１）
ρ（富马酸）／
（ｇ·Ｌ－１）
２１ 未生长
２３ 分散菌球状 ７９２±０６１ ５５２±１７
２５ 分散菌球状 ７９５±０８３ ５５１±１６
２７ 分散菌球状 ７９６±０５５ ５３８±１８
２９ 菌球状且含有部分絮状菌丝 ８１８±０６２ ３６５±１９
３１ 松散絮状 ８２４±０７３ ３５０±２０
３３ 松散絮状 ８２７±０７１ ３４５±２０
３５ 致密团块状 ８３６±０６０ ２５３±１６
３７ 致密团块状 ８３７±０８０ ２７１±１７
３９ 致密团块状 ８４１±０５５ ２５４±１９
５６ 致密团块状 ８４４±０４４ ２６０±２０
９４　第２期 徐　晴等：米根霉ＭＥ Ｆ１２发酵产富马酸的菌体形态控制
图１　不同ｐＨ下的菌体形态
Ｆｉｇ．１　ＴｈｅｅｆｅｃｔｏｆｐＨｉｎｔｈｅｓｅｅｄｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｏｎｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅ
２２　孢子密度对种子培养及富马酸产量的影响
　　孢子密度是影响丝状真菌菌球大小的主要因
素，而菌球直径大小对目标产物生成有较大影
响［６］。向ｐＨ２５的种子培养基中接种孢子，使其终
密度从７５×１０６个／Ｌ增加至３０×１０８个／Ｌ，在相同
的发酵条件下考察其对菌体形态及富马酸产量的
影响，结果见图２。在所考察的孢子浓度范围内菌
体形态均呈球状，但菌球直径、数目和富马酸产量
随孢子密度的变化而差异显著。当接种孢子终密
度由７５×１０６个／Ｌ增加至１５×１０８个／Ｌ时，种子培
养基中菌体生物量呈增加趋势，菌球直径由 １５４
ｍｍ降至０６５ｍｍ，菌球数目由４７×１０５个／Ｌ增至
２４×１０７个／Ｌ，富马酸量也由 ４６６ｇ／Ｌ增加至
５５９ｇ／Ｌ。接种孢子密度高于１５×１０８个／Ｌ后，菌
球直径降至０４５ｍｍ，菌球数目增至３０×１０７个／Ｌ，
但种子液的生物量及富马酸的质量浓度变化均不
显著。因此，接种米根霉的孢子终密度应控制在
１５×１０８～３０×１０８个／Ｌ。
图２　孢子悬浮液密度对菌球直径、菌体
干质量及富马酸产量的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｅｃｔｏｆｓｐｏｒｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｐｅｌｅｔｄｉａｍｅｔｅｒ，ｐｅｌｅｔ
ｎｕｍｂｅｒ，ｂｉｏｍａｓｓａｎｄｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
　　已有文献报道［６］，球状真菌发酵过程中，存在
一临界直径，菌球直径小于临界直径时，产物积累
不受影响，而当菌球直径大于临界直径时，易造成
菌球中心营养物质匮乏，产物生成减少。其原因在
于菌球直径过大，菌球内部的传质、传氧出现困难，
菌球中心易发生自溶，形成空洞，最终导致发酵产
物产量降低［６］。本实验中当菌球直径小于０６５ｍｍ
时，富马酸产量变化不大；而菌球直径大于０６５ｍｍ
后，富马酸产量呈下降趋势，由此推测，富马酸产生
菌米根霉ＭＥＦ１２菌株在液体深层发酵时菌球临界
半径可能为０６５ｍｍ左右，略小于文献报道［８，１０］的
米根霉菌球临界直径。
２３　ＣａＣｌ２对菌球形态及富马酸产量的影响
　　Ｃａ２＋是影响菌丝顶端生长的重要因素，同时
Ｃａ２＋表面带有正电荷，一定程度上能抑制细胞间
的排斥作用，促进细胞的交联［１２］。在上述优化条
件下考察种子培养基中添加少量 ＣａＣｌ２对菌球直
径、生物量及相应富马酸产量的影响，结果见表２。
种子培养基中添加 ０５ｇ／ＬＣａＣｌ２后，菌体生物量
有所增加，平均菌球直径也由０５３ｍｍ增至０６２
ｍｍ左右，菌球表面变得光滑、规整（图３），富马酸
产量增至５８９ｇ／Ｌ，与对照相比提高了５９％（发
酵条件相同）。此后随着 ＣａＣｌ２添加量的增加，富
马酸生成量变化不明显。由此可知，种子培养基
中添加 ＣａＣｌ２有利于菌体形态的控制和富马酸的
积累。
表２　ＣａＣｌ２对ＭＥ Ｆ１２菌球形态及富马酸产量的影响
Ｔａｂｌｅ２　ＥｆｅｃｔｏｆＣａＣｌ２ｏｎｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆＭＥＦ１２
Ｒ．ｏｒｙｚａｅａｎｄｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ρ（ＣａＣｌ２）／
（ｇ·Ｌ－１）
菌球直径／
ｍｍ
ρ（生物量）／
（ｇ·Ｌ－１）
ρ（富马酸）／
（ｇ·Ｌ－１）
０ ０５３ ７９３±０５６ ５５６±１３
０５ ０６２ ８１０±０６７ ５８９±１１
１０ ０６４ ８３８±０６４ ５８７±１２
１５ ０６５ ８４８±０５１ ５７５±１５
０５ 生　物　加　工　过　程　　 第７卷　
图３　ＣａＣｌ２对ＭＥＦ１２菌球表面的影响
Ｆｉｇ．３　ＥｆｅｃｔｏｆＣａＣｌ２ｏｎｔｈｅｐｅｌｅｔｓｕｒｆａｃｅｏｆＭＥＦ１２
２４　三因素交互作用
　　鉴于种子培养基中ｐＨ、孢子密度和ＣａＣｌ２质量浓
度等因素对米根霉菌体形态均有影响，采用正交实
验Ｌ９（３
３）对上述因素进行进一步的考察，从而寻找
对米根霉种子培养阶段菌体形态具有决定性的因
素，结果见表３。由正交实验可知，种子培养基 ｐＨ
决定米根霉菌体形态，ｐＨ２５时在其他各因素条件
下均能形成菌球；ｐＨ３～３５时，不论其他因素如何
优化，均不能形成菌球；从生物量角度分析，孢子终
密度是影响种子生物量的主要因素，不同密度下种
子生物量差异明显，密度越高，种子生物量越大，而
其他因素对生物量的影响相对较小；ＣａＣｌ２不是影响
菌体形态及生物量的主要因素，但对菌球表面光滑
度有较大影响。
表３　正交实验设计与结果
Ｔａｂｌｅ３　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔ
序号 培养基ｐＨ
孢子终密度／
（个·Ｌ－１）
ρ（ＣａＣｌ２）／
（ｇ·Ｌ－１）
形态 ρ
（生物量）／
（ｇ·Ｌ－１）
菌球表面特征
１ ２５（１） ５×１０６（１） ００（１） １ ５４７±０１８
２ ２５ ５×１０７（２） １０（３） １ ６８３±０１５ 光滑
３ ２５ ５×１０８（３） ０５０（２） １ ８２１±０１３ 光滑
４ ３（２） ５×１０６ １０ ０ ５５１±０１５
５ ３ ５×１０７ ０５ ０ ６９０±０１４
６ ３ ５×１０８ ００ ０ ８３１±０１１
７ ３５（３） ５×１０６ ０５０ －１ ５６１±０１６
８ ３５ ５×１０７ ００ －１ ６９９±０１９
９ ３５ ５×１０８ １０ －１ ８４１±０１７
　　　　注：“０”—絮状，“－１”—团块状，“１”—小球状；“（）”中的数据代表该条件对应的水平
表４　菌球形态误差来源分析
Ｔａｂｌｅ４　Ｉｎａｃｃｕｒａｃｙａｎａｌｙｓｉｓ
因素 １水平平均
２水平
平均
３水平
平均 极差
培养基ｐＨ １ ０ －１ ２
孢子终密度 ０ ０ ０ ０
ρ（ＣａＣｌ２）／
（ｇ·Ｌ－１）
０ ０ ０ ０
　　注：仅分析 ｐＨ、孢子终密度、ＣａＣｌ２质量浓度对菌球形态
的影响
３　结　论
　　对影响米根霉种子形态的主要因素：ｐＨ、孢子
浓度以及ＣａＣｌ２添加量进行了优化，实验结果表明，
当控制种子培养溶液 ｐＨ２３～２７、孢子终密度为
（１５～３０）×１０８个／Ｌ和添加少量ＣａＣｌ２（０５ｇ／Ｌ）
时，生成直径为０６５ｍｍ左右的光滑规整菌球，有
效地促进了富马酸的生成，为米根霉发酵制备富马
酸的工业化生产奠定了基础，而三因素的正交实验
表明，ｐＨ是影响菌体形态的最重要因素，孢子液终
密度是影响生物量的主要因素，而 ＣａＣｌ２主要对菌
球表面光滑度产生影响。
１５　第２期 徐　晴等：米根霉ＭＥ Ｆ１２发酵产富马酸的菌体形态控制
参考文献：
［１］　ＣａｏＮ，ＤｕＪ，ＧｏｎｇＣＳ，ｅｔａｌ．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｒｅ
ｃｏｖｅｒｙｏｆｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄｆｒｏｍｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅｗｉｔｈａｒｏ
ｔａｒｙｂｉｏｆｉｌｍｃｏｎｔａｔｏｒａｎｄａｎａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｃｏｌｕｍｎ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄａｎｄ
ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９６，６２：２９２６２９３１．
［２］　ＨａｎｇＹＤ．ＤｉｒｅｃｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｃｏｒｎｔｏＬ（＋）ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂｙ
Ｒｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＬｅｔｅｒｓ，１９８９，１１（４）：
２９９３００．
［３］　ＹａｎｇＸｕｅｈａｏ，ＷａｎｇＢｉｎｇｗｕ，ＣｕｉＦｅｎｇｎａｎ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆ
ｌｉｐａｓｅｂｙｒｅｐｅａｔｅｄｂａｔｃｈｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＲｈｉｚｏｐｕｓ
ａｒｈｉｚｕｓ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｓｓＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，４０：２０９５２１０３．
［４］　ＣａｓａｓＬｏｐｅｚＪＬ，ＳａｎｃｈｅｚＰｅｒｅｚＪＡ，ＦｅｒｎａｎｄｅｚＳｅｖｉｌａＪＭ，ｅｔ
ａｌ．ＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｌｏｖａｓｔａｔｉｎｂｙＡｓ
ｐｅｒｇｉｌｕｓｔｅｒｅｕｓ：ｕｓｅｏｆｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４，７９（１０）：１１１９
１１２６．
［５］　ＭｅｔｚＢ，ＫｏｓｓｅｎＮＷＦ．Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｍｏｌｄｓｉｎｔｈｅｆｏｒｍｏｆｐｅｌｅｔｓ
［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１９７７，１９（６）：７８１７９９．
［６］　ＰａｐａｇｉａｎｎｉＭ．Ｆｕｎｇａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎ
ｓｕｂｍｅｒｇｅｄｍｙｃｅｌｉａｌｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡｄｖａｎｃｅｓ，２００４，
２２：１８９２５９．
［７］　ｖａｎＳｊｉｊｄａｍＪＣ，ＫｏｓｓｅｎＮＷＦ，ＰａｕｌＰＧ．Ａｎｉｎｏｃｕｌｕｍｔｅｃｈ
ｎｉｑｕｅｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｆｕｎｇａｌｐｅｌｅｔｓ［Ｊ］．ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆ
ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９８０，１０（３）：２１１２２１．
［８］　ＢａｉＤｏｎｇｍｅｉ，ＪｉａＭｉｎｚｅ，ＺｈａｏＸｕｅｍｉｎｇ．Ｌｌａｃｔｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｂｙ
ｐｅｌｅｔｆｏｒｍＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅＲ１０２１ｉｎａｓｔｉｒｅｄｔａｎｋｆｅｒｍｅｎｔｏｒ［Ｊ］．
ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＳｃｉｅｎｃｅ，２００３，５８：７８５７９１．
［９］　ＺｈａｎｇＺＹ，ＪｉｎＢ，ＫｅｌｙＪＭ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｎ
ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆＲｈｉｚｏｐｕｓａｒｈｉｚｕｓａｎｄｔｈｅｌａｃｔｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｉｎａｂｕｂｂｌｅｃｏｌｕｍｎｒｅａｃｔｏｒ［Ｊ］．ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｉｎＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，
２００７，７（５）：４９０４９６．
［１０］ＬｉａｏＷ，ＬｉｕＹ，ＣｈｅｎＳ．Ｓｔｕｄｙｉｎｇｐｅｌｅｔｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆａｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ
ｆｕｎｇｕｓＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅｔｏｅｎｈａｎｃｅｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｐ
ｐｌｉｅｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，１３７（１）：６８９７０１．
［１１］张昆，高振，李霜，等．基于Ｄｅｓｉｒａｂｉｌｉｔｙ函数法对米根霉发酵制
备富马酸的多目标优化［Ｊ］．中国生物工程杂志，２００８，２８
（４）：５９６４．
ＺｈａｎｇＫｕｎ，ＧａｏＺｈｅｎ，ＬｉＳｈｕａｎｇ，ｅｔａｌ．Ｍｕｉｔｉｐｌｅｔａｒｇｅｔｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ
ｏｎｔｈｅｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅｂａｓｅｄｏｎｄｅｓｉｒａｂｉｌｉ
ｔｙｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（４）：５９６４．
［１２］ＺｎｉｄａｒｓｉｃＰ，ＫｏｍｅｌＲ，ＰａｖｋｏＡ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｓｏｍｅｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ
ｆａｃｔｏｒｓｏｎＲｈｉｚｏｐｕｓｎｉｇｒｉｃａｎｓｓｕｂｍｅｒｇｅｄｇｒｏｗｔｈｉｎｔｈｅｆｏｒｍｏｆｐｅｌ
ｌｅｔｓ［Ｊ］．ＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４，
１６（７）：
櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒
５８９５９３．
国外动态
ＺｅａＣｈｅｍ投资３４００万美元建设纤维素乙醇厂
ＺｅａＣｈｅｍ公司是美国较早开始发展下一代生物燃料的企业。２００９年１月７日，该公司宣布将投入３４００
万美元开发纤维素乙醇燃料，并将于今年在俄勒冈州建设年产约５７０万Ｌ乙醇的生产厂。
ＺｅａＣｈｅｍ人员宣称其在纤维素乙醇产率方面将会比Ｃｏｓｋａｔａ、Ｍａｓｃｏｍａ和 Ｉｏｇｅｎ等任一竞争对手企业的
提高４０％。该公司采用的工艺包括将糖转化为乙酸的生物过程，和进一步将木质素等残余物转化为氢的热
化学过程，以及最后在反应器中混合反应的过程；并首次采用了当地的低成本可持续作物———杨树作为
原料。
印度开展生物基产品生产工艺研究
２００８年１２月２５日，印度ＧｕｒｕＮａｎａｋＤｅｖ大学（ＧＮＤＵ）得到了来自印度农业研究协会的６８０万美元资
助，用于开展为期３年的“利用稻秆和蔗渣生产高价值产品的新型生物技术工艺”项目的研究。项目负责人
ＳＳＣｈａｈａｌ称，该项目被农业研究理事会列为世界银行支持的国家农业创新计划（ＮＡＩＰ）中的农业科学前沿
领域的基础与战略研究专项。
项目的合作单位还包括印度采后工程与技术研究中心（ｔｈｅＣｅｎｔｒａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｏｓｔＨａｒｖｅｓｔＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
ａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＩＰＨＥＴ）和印度理工学院。项目的研究目标包括发展分离纤维素、半纤维素和木质素的膜
技术，开发高温下稳定的生物转化酶以及利用富含蛋白质的稻秆制备动物饲料等。
（文伟河）
２５ 生　物　加　工　过　程　　 第７卷