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摇 摇 摇 摇 摇 生 态 学 报
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 (SHENGTAI XUEBAO)
摇 摇 第 31 卷 第 21 期摇 摇 2011 年 11 月摇 (半月刊)
目摇 摇 次
基于景观格局理论和理想风水模式的藏族乡土聚落景观空间解析———以甘肃省迭部县扎尕那村落为例
史利莎,严力蛟,黄摇 璐,等 (6305)
……
……………………………………………………………………………
武夷山风景名胜区景观生态安全度时空分异规律 游巍斌,何东进,巫丽芸,等 (6317)…………………………
旅游地道路生态持续性评价———以云南省玉龙县为例 蒋依依 (6328)…………………………………………
城市空间形态紧凑度模型构建方法研究 赵景柱,宋摇 瑜,石龙宇,等 (6338)……………………………………
丹顶鹤多尺度生境选择机制———以黄河三角洲自然保护区为例 曹铭昌,刘高焕,徐海根 (6344)……………
西南喀斯特区域水土流失敏感性评价及其空间分异特征 凡非得,王克林,熊摇 鹰,等 (6353)…………………
流域尺度海量生态环境数据建库关键技术———以塔里木河流域为例 高摇 凡,闫正龙,黄摇 强 (6363)………
雌雄异株植物鼠李的生殖分配 王摇 娟,张春雨,赵秀海,等 (6371)………………………………………………
长白山北坡不同年龄红松年表及其对气候的响应 王晓明,赵秀海,高露双,等 (6378)…………………………
不同高寒退化草地阿尔泰针茅种群的小尺度点格局 赵成章,任摇 珩,盛亚萍,等 (6388)………………………
残存银杏群落的结构及种群更新特征 杨永川,穆建平,TANG Cindy Q,等 (6396)……………………………
濒危植物安徽羽叶报春两种花型的繁育特性及其适应进化 邵剑文,张文娟,张小平 (6410)…………………
神农架海拔梯度上 4 种典型森林的乔木叶片功能性状特征 罗摇 璐,申国珍,谢宗强,等 (6420)………………
不同植被恢复模式下煤矸石山复垦土壤性质及煤矸石风化物的变化特征
王丽艳,韩有志,张成梁,等 (6429)
………………………………………
……………………………………………………………………………
火烧对黔中喀斯特山地马尾松林分的影响 张摇 喜,崔迎春,朱摇 军,等 (6442)…………………………………
内蒙古高原锦鸡儿属植物的形态和生理生态适应性 马成仓,高玉葆,李清芳,等 (6451)………………………
古尔班通古特沙漠西部梭梭种群退化原因的对比分析 司朗明,刘摇 彤,刘摇 斌,等 (6460)……………………
白石砬子国家级自然保护区天然林的自然稀疏 周永斌,殷摇 有,殷鸣放,等 (6469)……………………………
黑龙江省东完达山地区东北虎猎物种群现状及动态趋势 张常智,张明海 (6481)………………………………
基于 GIS的马铃薯甲虫扩散与河流关系研究———以新疆沙湾县为例 李摇 超,张摇 智,郭文超,等 (6488)……
2010 年广西兴安地区稻纵卷叶螟发生动态及迁飞轨迹分析 蒋春先,齐会会,孙明阳,等 (6495)……………
B型烟粉虱对寄主转换的适应性 周福才,李传明,顾爱祥,等 (6505)……………………………………………
利用 PCR鄄DGGE方法分析不同鸡群的盲肠微生物菌群结构变化 李永洙,Yongquan Cui (6513)………………
鸡粪改良铜尾矿对 3 种豆科植物生长及基质微生物量和酶活性的影响
张摇 宏,沈章军,阳贵德,等 (6522)
…………………………………………
……………………………………………………………………………
铜绿微囊藻对紫外辐射的生理代谢响应 汪摇 燕,李珊珊,李建宏,等 (6532)……………………………………
10 种常见甲藻细胞体积与细胞碳、氮含量的关系 王摇 燕,李瑞香,董双林,等 (6540)…………………………
冬季太湖表层底泥产毒蓝藻群落结构和种群丰度 李大命,孔繁翔,于摇 洋,等 (6551)…………………………
城市机动车道颗粒污染物扩散对绿化隔离带空间结构的响应 蔺银鼎,武小刚,郝兴宇,等 (6561)……………
新疆城镇化与土地资源产出效益的空间分异及其协调性 杨摇 宇,刘摇 毅,董摇 雯,等 (6568)…………………
山东潍坊地下水硝酸盐污染现状及 啄15N溯源 徐春英,李玉中,李巧珍,等 (6579)……………………………
增温对宁夏引黄灌区春小麦生产的影响 肖国举,张摇 强,张峰举,等 (6588)……………………………………
一种估测小麦冠层氮含量的新高光谱指数 梁摇 亮,杨敏华,邓凯东,等 (6594)…………………………………
黄河上游灌区稻田 N2O排放特征 张摇 惠,杨正礼,罗良国,等 (6606)…………………………………………
专论与综述
植物源挥发性有机物对氮沉降响应研究展望 黄摇 娟,莫江明,孔国辉,等 (6616)………………………………
植物种群更新限制———从种子生产到幼树建成 李摇 宁,白摇 冰,鲁长虎 (6624)………………………………
研究简报
遮荫对两个基因型玉米叶片解剖结构及光合特性的影响 杜成凤,李潮海,刘天学,等 (6633)…………………
学术信息与动态
科学、系统与可持续性———第六届工业生态学国际大会述评 石海佳,梁摇 赛,王摇 震,等 (6641)……………
期刊基本参数:CN 11鄄2031 / Q*1981*m*16*340*zh*P* ￥ 70郾 00*1510*37*
室室室室室室室室室室室室室室
2011鄄11
封面图说: 鹤立———丹顶鹤是世界 15 种鹤数量极小的一种,主要栖息在沼泽、浅滩、芦苇塘等湿地,以捕食小鱼虾、昆虫、蛙蚧、
软体动物为主,也吃植物的根茎、种子、嫩芽。 善于奔驰飞翔,喜欢结群生活。 丹顶鹤属迁徙鸟类,主要在我国的黑
龙江、吉林,俄罗斯西伯利亚东部、朝鲜北部以及日本等地繁殖。 在长江下游一带越冬。 在中国文化中有“仙鹤冶之
说。 被列为中国国家一级重点保护野生动物名录,濒危野生动植物种国际贸易公约绝对保护的 CITES 附录一物种
名录。
彩图提供: 陈建伟教授摇 国家林业局摇 E鄄mail: cites. chenjw@ 163. com
第 31 卷第 21 期
2011 年 11 月
生 态 学 报
ACTA ECOLOGICA SINICA
Vol. 31,No. 21
Nov. ,2011
http: / / www. ecologica. cn
基金项目:973 计划“大中型浅水湖泊蓝藻水华暴发机理研究冶 (2008CB418000); 中国科学院南京地理与湖泊研究所所长基金(07SL021001)
收稿日期:2010鄄09鄄03; 摇 摇 修订日期:2011鄄06鄄07
*通讯作者 Corresponding author. E鄄mail: fxkong@ niglas. ac. cn
李大命,孔繁翔,于洋,阳振,史小丽.冬季太湖表层底泥产毒蓝藻群落结构和种群丰度.生态学报,2011,31(21):6551鄄6560.
Li D M, Kong F X,Yu Y, Yang Z,Shi X L. The community structure and abundance of microcystin鄄producing cyanobacteria in surface sediment of Lake
Taihu in winter. Acta Ecologica Sinica,2011,31(21):6551鄄6560.
冬季太湖表层底泥产毒蓝藻群落结构和种群丰度
李大命1,2,孔繁翔1,*,于摇 洋1,阳摇 振1,史小丽1
(1. 中国科学院南京地理与湖泊研究所,南京摇 210008; 2. 中国科学院研究生院,北京摇 100049)
摘要:应用荧光定量 PCR对冬季太湖不同湖区底泥表面有毒微囊藻和总微囊藻种群丰度进行调查,同时基于 PCR鄄DGGE 技术
对底泥中有毒微囊藻群落结构进行分析。 结果表明:微囊藻在太湖底泥表面分布广泛,所有采样点都检测到有毒微囊藻存在,
且不同湖区有毒微囊藻和总微囊藻种群丰度存在显著差异,有毒微囊藻和微囊藻基因型丰度范围分别为 1. 23伊104—3. 75伊106
拷贝数 / g干重和 2. 56伊104—1. 07伊107拷贝数 / g干重,有毒微囊藻与微囊种群丰度的比例为 4. 8%—35. 2% ;DGGE指纹图谱显
示,冬季太湖不同湖区表层底泥中有毒微囊藻群落结构相似性较高,相似性系数为 70郾 2%—96. 0% 。 虽然不同湖区基因型组
成存在差异,但所有样品中占优势的基因型是一致的。 同时发现,优势基因型所占的比例与样品的香农多样性指数呈负相关。
序列分析表明,mcyA序列长度为 291bp,序列相似性超过 97% 。 综合定量 PCR结果和底泥中叶绿素 a 和藻蓝素浓度的测定结
果,可以得出 2010 年冬季太湖蓝藻越冬主要集中在梅梁湾、竺山湾、贡湖湾和湖心。 通过建立荧光定量 PCR分析方法,为研究
湖泊底泥中蓝藻种群丰度动态变化奠定了基础。
关键词:荧光定量 PCR;有毒蓝藻;群落结构;变性梯度凝胶电泳;太湖
The community structure and abundance of microcystin鄄producing cyanobacteria
in surface sediment of Lake Taihu in winter
LI Daming1,2, KONG Fanxiang1,*,YU Yang1, YANG Zhen1,SHI Xiaoli1
1 Nanjing Institute of Geography and Limnology, Chinese Academy of Sciences, Nanjing 210008, China
2 Graduate university of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China
Abstract: Lake Taihu is a large, shallow, eutrophic freshwater lake, which has frequently experienced cyanobacterial
bloom in summer in the past decades. In winter, a large quantity of cyanobacterial cells sink on the sediment surface to
overwinter. Therefore, it is important to quantify the biomass of cyanobacteria on the sediment to predict the location and
the extent of water bloom in summer. However it is difficult to identify and to count cyanobacterial cells in sediment using
microscopy method, and microscopic identification cannot differentiate between the toxigenic and non鄄toxigenic genotypes.
In recent years, this problem has been resolved by using molecular techniques such as PCR and quantitative real鄄time PCR
(qPCR) with primers targeting toxin鄄producing genes. The microcystin gene cluster which contains 10 genes, namely from
mcyA to mcyJ has been widely used to reveal microcystin鄄producing species in genera Anabaena, Microcystis and
Planktothrix. Detection of cyanobacteria and their toxin鄄producing ability using molecular methods has been successfully
applied to a diverse range of water and sediment environments. In this study, we use quantitative real time PCR to quantify
the abundance of microcystin鄄producing cyanobacteria and Microcystis, and PCR鄄denaturing gradient gel electrophoresis
technique to investigate the community structure of microcystin鄄producing cyanobacteria in surface sediment of Lake Taihu
in winter. qPCR data showed that Microcystis and microcystin鄄producing cyanobacteria were present in all of sediment
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samples and their abundance varied significantly in different lake areas, ranging from 1. 23 伊104 copies / g dry weight to
3. 75伊106 copies / g dry weight and from 2. 56 伊 104 to 1. 07 伊 107 copies / g dry weight, respectively. The proportion of
microcystin鄄producing cyanobacteria to Microcystis ranged from 4. 8% to 35. 2% . DGGE patterns indicated that the
composition of microcystin鄄producing cyanobacteria were very similar in surface sediments collected from different lake
areas, and the similarity values were between 70. 2% and 96. 0% . Although the composition of genotypes of microcystin鄄
producing cyanobacteria slightly varied among samples, the dominant band is same. The number of dominant band was
negatively correlated with Shannon index. Taking into consideration of qPCR analysis and the concentration of Chlorophyll鄄a
and Phycocyanin, we concluded that in the winter of 2010 cyanobacteria of Lake Taihu mainly overwinter in four lake areas,
Mei liang bay, Zhu shan bay,Gong hu bay and center part of Lake Taihu. Our results showed that quantitative real time
PCR is a feasible method to investigate the dynamics of toxic cyanobacteria in lake sediment.
Key Words: quantitative real time PCR; microcystin鄄producing cyanobacteria; community structure; denaturing gradient
gel electrophoresis(DGGE); Lake Taihu
微囊藻在温带浅水湖泊的生长规律具有明显的周年变化规律,一般是夏秋季节在水体中生长,冬季和春
季下沉到底泥表面越冬,藻类生理特征伴随着环境条件的不同而变化,使得微囊藻种群得以生存[1鄄4]。 孔繁
翔等根据太湖研究结果明确提出针对温带浅水湖泊蓝藻水华形成可分为 4 个连续而又相互区别过程:下沉和
越冬、复苏、生物量积累、上浮聚集并形成水华,同时认为每个阶段的主导生态因子不同[5]。 越冬微囊藻下沉
到底泥表面是躲避不良环境,保护种群生存的一种策略,同时可以为来年蓝藻水华提供种源[2,5]。 在不同湖
泊中,底泥中蓝藻复苏对水柱中蓝藻的贡献量有所不同[2],一般而言,浅水湖泊微囊藻复苏进入水柱中的微
囊藻要超过深水湖泊,对蓝藻水华的贡献量也较大[4]。 因此,底泥中微囊藻种群的时空分布及其动态变化的
研究越来越受到关注。
一般是通过显微观察法研究藻细胞数目表征微藻生物量生物量,但该方法在对底泥样品中藻细胞鉴别和
计数受到了限制,无法对泥样中的微囊藻直接进行观察和计数[6]。 色素定量法是根据藻类的特征色素来表
示藻类生物量,能够利用该方法对底泥中蓝藻相对含量变化进行研究[7]。 近年来,荧光定量 PCR技术发展迅
速,且已在蓝藻水华研究中广泛应用[7鄄8]。 与前 2 种方法相比,荧光定量法具有诸多优势,该方法灵敏度高、
重复性好,对样品没有特殊要求,能够广泛应用于野外调查研究,同时,该方法特异性强,根据设计的引物,可
以对样品中特定的种群动态变化进行研究[9]。 所以,荧光定量 PCR 已经成为蓝藻水华研究中最常用的工具
之一。
太湖是我国第三大湖泊,也是一个典型的浅水湖泊,平均水深只有 1. 89m。 是该地区重要的水源地,同时
具有航运、旅游、灌溉等多种功能。 太湖从 20 世纪 80 年代一些湖区已经处于富营养化状态,蓝藻水华开始出
现。 进入 2000 年以来,几乎每年夏季都暴发微囊藻水华,持续时间越来越长,发生区域已经向全湖蔓延。 进
入冬季后,水体中微囊藻下沉到底泥表面越冬,来年 3 月份开始底泥中微囊藻复苏进入水体,对水体中微囊藻
水华有一定的贡献。 因此,掌握越冬期间底泥中微囊藻种群分布对提高微囊藻水华预测的准确性有重要意
义。 到目前为止,对太湖越冬蓝藻在底泥中的时空分布研究比较少,仅见季健等利用色素定量法对太湖冬季
蓝藻空间分布进行了初步分析[10],本文利用微囊藻毒素合成酶家族基因成员 mcyA和小核糖体亚基 16S rDNA
为定量 PCR扩增对象,对太湖越冬蓝藻在底泥中的空间分布进行研究,同时借助 PCR鄄DGGE 分析技术,研究
底泥中有毒微囊藻群落结构,以期为太湖蓝藻水华预测预警提供科学依据。
1摇 材料和方法
1. 1摇 采样点分布和样品采集
本研究设置了 8 个采样点,分别位于梅梁湾(N2)、竺山湾(N5),东太湖的贡湖湾(N4),西太湖(W2 和
W4),梅梁湾口(S5)、湖心( S4),南太湖( S2),如图 1 所示。 利用 GPS 定位系统对采样点进行精确定位。
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2010 年 2 月采集样品,用柱状采泥器采集底泥,切下表层底泥(0—3 cm),放入冰盒内保存,每个采样点采集 6
个样品,混合均匀,于 4h内带回实验室做进一步分析。 同步采集整水柱水样,混匀后带回实验室测定其营养
盐浓度。 同时利用 YSI(YSI6600鄄V2)(Yellow Spring Instruments, USA)记录水质参数,包括溶解氧、温度、浊
度、pH值、电导率等。
1. 2摇 营养盐测定
GF / F 滤膜过滤 50mL湖水,滤液用 Skalar 自动分析系统测定氨态氮(NH+4 鄄N)、硝态氮(NO-3 鄄N)、亚硝态
氮(NO-2 鄄N)和正磷酸盐(PO3-4 鄄P)。 总氮(包含水体中的藻类)、总磷(包含水体中的藻类)和泥样总氮、总磷按
照标准方法测定[11]。
1. 3摇 底泥中叶绿素 a(Chl鄄a)和藻蓝素(PC)浓度
按照文献方法对泥样进行处理、提取和测定叶绿素 a(Chl鄄a)和藻蓝素(PC)的浓度[12]。
N
N5 N4N2S5
S4W2W4
S2
图 1摇 采样点位置
Fig. 1摇 The location of sampling sites
1. 4摇 泥样基因组 DNA提取
泥样 DNA提取参照文献进行[13],主要步骤如下:
称量 0. 8g冻干泥样放入 10mL 离心管中,加入 2. 0 mL
裂解液(0. 1 mol / L PBS缓冲液(pH = 8. 0), 0. 1 mol / L
EDTA (pH = 8. 0), 0. 1 mol / L Tris (pH = 8. 0), 1郾 5
mol / L NaCl, 1. 0% CTAB, 5 mg / mL溶菌酶),充分震荡
混匀后于 37 益水浴 1 h,每隔 15 min 上下颠倒数次。
取出离心管,加入 0. 5 mL 10% SDS、20 滋L 10 mg / mL
protein K,颠倒混匀,65 益水浴 2—3h。 冷却至室温,加
入 2. 5 mL酚 /氯仿 /异戊醇(25 颐24 颐1),剧烈震荡 10 s,
13000 r / min 离心 10 min,将上清液转移到新离心管中,
加入 2 mL 氯仿 颐异戊醇(24 颐1)。 12000 r / min 离心 8
min。 转移上清液,再次加入等体积的氯仿 颐异戊醇(24
颐1)抽提 1 次,将水相转移到至新离心管,加入 2 倍体积无水乙醇和 0. 1 倍体积 10mol / L 醋酸氨,轻轻颠倒浑
匀,-20益放置过夜。 13000 r / min 离心 15 min,弃上清液,2mL 70%乙醇洗涤 2 次,13000 r / min 离心 10 min,
小心倾弃上清液,室温晾干,加入 TE缓冲液溶解,-20 益保存。 用 1郾 0%琼脂糖凝胶电泳检测,凝胶成像系统
检测(Bio鄄Rad)拍照。
1. 5摇 泥样基因组 DNA纯化
利用Mobio公司纯化试剂盒(Mobio鄄12877)对泥样基因组 DNA进行纯化,纯化后基因组用于普通 PCR扩
增和定量 PCR分析。
1. 6摇 定量 PCR
荧光定量 PCR反应所应用的引物如表 1 所示,其中微囊藻毒素合成基因 mcyA指示底泥样品中有毒微囊
藻的丰度,小核糖体 16S rDNA 表示微囊藻种群丰度。 室内纯培养产毒微囊藻株 Microcystis aeruginosa
(FACHB915)为标准 DNA浓度构建标准曲线。 离心收集处于对数生长期的藻细胞,按照文献方法[14]提取基
因组 DNA,用 Bio Photometer Plus(Eppendorf, German)测定 DNA浓度(ABS260)和纯度(ABS260 / ABS280),该藻
株基因组大小为 5. 2 MB,单个碱基的摩尔分子量是 660 g / mol,标准 DNA浓度中含有目的基因的拷贝数可以
用下面的公式计算[15]:微囊藻 M. aeruginosa7806 基因组 DNA 浓度(拷贝数 / mL)= 6. 02伊1023(拷贝数 / mol) 伊
DNA浓度(g / mL) /基因组分子量(g / mol)。 设置 6 个标准浓度梯度,每个梯度 3 个平行。 qPCR 反应体系 25
滋L,其中 12. 5 滋L 2伊 SYBR premix Ex TaqTM混合液 (TaKaRa, DRR041A),正反引物各 1 pmol,2 滋L模板,超纯
水补足 25 滋L。 PCR反应在Mastercycler ep realplex PCR仪完成(Eppendorf, German)。 反应程序如下:95益预
变性 2 min,95 益变性 20 s,58 益退火 30 s,72 益延伸 30 s,40 个循环,最后进行溶解曲线(Melting curve)分
3556摇 21 期 摇 摇 摇 李大命摇 等:冬季太湖表层底泥产毒蓝藻群落结构和种群丰度 摇
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析。 泥样基因组 DNA定量 PCR反应设置 3 个平行,定量 PCR反应体系为 25 滋L,引物 2 pmol,5 滋L纯化后基
因组模板。 样品定量 PCR反应条件和构建定量 PCR 标准曲线一样。 实验结果用定量 PCR 仪自带的 Replex
软件分析,根据标准曲线得出样品中有毒蓝藻和微囊藻种群丰度。 荧光定量 PCR反应扩增效率 E = 10-1 / s-1,
S代表标准曲线斜率。
1. 7摇 PCR扩增和 DGGE分析
选用引物 mcyA鄄Cd 1R和 mcyA鄄Cd 1F扩增 mcyA基因片段(表 1),该对引物可以扩增所有有毒蓝藻 mcyA
基因片段,扩增产物长度为 291bp(微囊藻属)或 297bp(鱼腥藻属和浮丝藻属) [16]。 本实验 PCR 扩增体系为
25 滋L,其中含有 2伊PCR混合液 12. 5 滋L(上海博彩),上下游引物各 0. 25 滋L(10 滋mol / L),5 滋L DNA模板,加
超纯水补足 25 滋L,反应程序采用 touch down模式:94 益预变性 5 min,94 益变性 40 s,退火 40 s,从 62 益降低
到 58益,每个反应降低 1益,72 益延伸 30 s,进行 6 个循环, 然后 94 益变性 40 s,58 益退火 40 s,72 益延伸 30
s,30 个循环,最后 72 益延伸 5 min,4 益保存。
DGGE分采用 C. B. S DGGE鄄2001 型垂直凝胶电泳系统。 凝胶浓度为 10% ,变性剂梯度为 25%—45%
(100%变性胶含有 7mol / L尿素和 40%去离子甲酰胺),缓冲液为 1伊TAE,温度 60 益,电压 75 V,连续电泳 16
h,电泳完毕后用 SYBR green 玉染色 30 min,Bio鄄Rad凝胶成像系统拍照并保存,DGGE 图谱利用 quantity one
4郾 62 分析,并用手工校正。 产毒蓝藻多样性分析采用 Shannon 多样性指数评价,多样性指数 H= -移
S
i = 1
Pi logPi =
- 移
S
i = 1
(ni / N)log(ni / N) ,P i = ni / N ,ni 为条带的光密度值, N泳道内所有条带的光密度值。
表 1摇 mcyA和 16S rDNA基因片段引物
Table 1摇 Primers of mcyA and 16S rDNA gene fragments
目标 DNA Target DNA 引物 Primers 序列(5忆鄄3忆) Sequence(5忆鄄3忆)
微囊藻 16S rDNA 184F GCCGCRAGGTGAAAMCTAA
431R AATCCAAARACCTTCCTCCC
微囊藻毒素合成基因 mcyA mcyA鄄Cd1R AAAAGTGTTTTATTAGCGGCTCAT
mcyA鄄Cd1F(1) AAAATTAAAAGCCGTATCAAA
(1) 根据 PCR 产物进行 DGGE 分析的需要,上游引物 mcyA鄄Cd1F 前带有 40 个碱基的 GC 夹:
CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCC。
1. 8摇 DGGE条带测序及构建系统发育树
用灭菌手术刀切下 DGGE图谱上的条带装入 1. 5 mL离心管,加入 30 滋L超纯水浸泡,4 益放置 24 h,并
以此作为 DNA模板用不带 GC夹的 mcyA鄄Cd1R / Cd1F进行 PCR 扩增,PCR 产物纯化后送英俊测序。 测序结
果在 GenBank数据库中用 BLAST进行检索和进行同源性比较。 利用 CLUSTALX程序对所有序列进行比对,
软件 MEGA3. 1 中的邻接法构建系统发育树。
2摇 结果
2. 1摇 水体和底泥营养盐及理化指标
采样在 8:00—10:00 之间进行,水温平均值为 8. 5 益,pH 值范围为 7. 50—8. 24,浊度为 21. 0—90. 3
NTU,电导率为 0. 66—1. 68 ms / cm,溶解氧为 10. 86—11. 87 mg / L。 营养盐浓度如表 2 所示,采样点间的营养
盐浓差异比较大,其中采样点 W2、N2 和 N5 营养盐浓度较高,采样点 S4、S5 和 N4 营养盐浓度较低。 底泥中
总氮和总磷浓度范围分别 1. 13—2. 04 mg / g和 0. 23—0. 40 mg / g。
2. 2摇 底泥中叶绿素 a和藻蓝素(PC)浓度
底泥中叶绿素 a和藻蓝素(PC)浓度分布如图 2 所示。 叶绿素 a 表征泥样中所有藻类的生物量,藻蓝素
指示蓝藻生物量。 可以看出,底泥中藻蓝素浓度和叶绿素 a 浓度变化趋势具有一致性,说明蓝藻是底泥中藻
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类群落结构的重要组成部分。 不同湖区底泥中藻类生物量分布具有空间差异性:其中梅梁湾(N2)、贡湖湾
(N4)、竺山湾(N5)和梅梁湾口(S5)叶绿素 a和藻蓝素浓度明显高于西太湖(W2 和 W4)和南太湖(S2)。
表 2摇 冬季水体和底泥营养盐浓度
Table 2摇 Nutrient concentration of water body and surface sediment in winter
采样点 Sampling sites TN/ (mg / L)
TP
/ (mg / L)
PO3-4 鄄P
/ (滋g / L)
NH+4 鄄N
/ (滋g / L)
NO-3 鄄N
/ (滋g / L)
NO-2 鄄N
/ (滋g / L)
TN
/ (滋g / g)
TP
/ (滋g / g)
W2 5. 26 0. 04 53. 91 1. 83 3. 30 0. 03 1. 67 0. 36
W4 2. 70 0. 10 6. 04 0. 22 1. 67 0. 02 1. 23 0. 23
S2 4. 91 0. 14 6. 10 0. 56 3. 43 0. 04 1. 13 0. 32
S4 2. 68 0. 08 4. 41 0. 18 2. 24 0. 03 1. 37 0. 26
S5 1. 96 0. 06 5. 81 0. 07 1. 77 0. 01 1. 38 0. 27
N2 2. 94 0. 05 3. 12 0. 04 2. 89 0. 01 1. 93 0. 39
N4 1. 91 0. 06 3. 08 0. 06 1. 58 0. 01 1. 38 0. 30
N5 6. 60 0. 17 85. 98 1. 09 4. 42 0. 07 2. 04 0. 40
2. 3摇 底泥样品基因组检测
8 个不同湖区底泥样品基因组琼脂糖凝胶电泳检测如图 3 所示。 可以看出,本实验采用的方法能够有效
提取底泥基因组 DNA,条带整齐,没有托尾现象。 但是粗提物中杂质比较多,包括有机质、腐植酸、重金属离
子等,能够严重干扰 PCR反应,尤其对于定量 PCR分析。 因此,本文利用纯化试剂盒(Mobio1鄄2877)对基因组
进行了纯化,能够有效除去各种杂质,用于后续 PCR扩增和定量 PCR分析。
W2100
150200
250300
350400
450 Chl-a
020
4060
80100
120140PC
藻蓝
素浓
度/
(ng/g
干重
)
PC c
once
ntrat
ion
采样点 Sampling sites W4 S2 S4 S5 N2 N4 N5叶
绿素
a浓度
/(ng/
g 干重
)
Chl-a
conc
entra
tion
图 2摇 底泥中叶绿素 a和藻蓝素浓度空间分布
摇 Fig. 2摇 The spatial distribution of chlorophyll a and PC
concentrations摇
W2 W4 S2 S4 S5 N2 N4 N5
图 3摇 底泥样品基因组 DNA琼脂糖凝胶电泳图谱
摇 Fig. 3摇 Agarose electrophoresis of genomic DNA of surface
sediment samples摇
2. 4摇 荧光定量 PCR标准曲线及产毒蓝藻和微囊藻基因型丰度
05
1015
2025
3035
4045 mcyA16S rDNA
0 1 2 3 4 5 6 7 8DNA浓度 DNA concentration
循环
阈值
Thre
shold
valu
e
图 4摇 mcyA和 16S rDNA基因定量 PCR标准曲线
Fig. 4摇 Standard curve of qPCR for mcyA and 16S rDNA gene
如图 4 所示,mcyA和 16S rDNA基因荧光定量 PCR
标准曲线,可以得出,循环阈值 Ct(Threshold cycle)和
DNA 浓度对数值(log10基因组拷贝数)之间呈线性关系
(R2 =0. 99) 。 定量 PCR扩增效率为 0. 92,满足了实验
要求。 定量 PCR 产物溶解曲线分析显示(数据未给
出),定量 PCR扩增产物均为目的产物,野外样品定量
PCR扩增效率和室内藻株 M. aeruginosa 扩增效率基本
一致。 如图 5 所示,底泥样品中有毒蓝藻和微囊藻种群
丰度分布,可以看出,太湖冬季底泥中越冬蓝藻种群丰
度差异显著,其中西太湖(W2 和 W4)和南太湖(S2)种
5556摇 21 期 摇 摇 摇 李大命摇 等:冬季太湖表层底泥产毒蓝藻群落结构和种群丰度 摇
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104
105
106
107
10
10
10
108
7
6
5有毒
微囊
藻基
因型
丰度
Toxi
c Mic
rocys
tis ab
unda
nce
/(cop
ies/g
干重
)
微囊
藻基
因型
丰度
Micr
ocyst
is ab
unda
nce
/(cop
ies/g
干重
)mcyA16S rDNA
W2W4 S2 S4 S5 N2 N4 N5
采样点 Sampling sites
图 5摇 McyA和 16S rDNA基因型丰度的空间分布
摇 Fig. 5摇 The spatial distribution of mcyA and 16S rDNA
genotypes abundance
群丰度较低,而北太湖的梅梁湾(N2)和竺山湾(N5)种
群丰度较高,并且还发现有毒微囊藻占总微囊藻种群丰
度的比例在不同湖区显著不同,其波动范围为 4郾 8%—
35. 2% 。
2. 5摇 DGGE 指纹图谱分析
如图 6 所示,基于 mcyA 基因片段的太湖冬季 8 个
底泥样品的 DGGE图谱。 可以看出,底泥中产毒微囊藻
多样性在不同湖区差异较小。 对于 DGGE图谱分析,泳
道中的每个条带表示一个操作单元,条带的光密度值表
示条带所代表的基因型的相对丰度,利用香农多样指数
W2 W4 S2 S4 S5 N2 N4 N5
1 234 56 78910 11
12
图 6摇 表层底泥中有毒微囊藻 DGGE图谱
摇 Fig. 6 摇 DGGE profiles of toxic Microcystis in surface sediment
samples摇
评价样品的多样性。 所有样品中,条带 8 是所有样品中
的优势基因型,其在样品中所占的比例与香农多样性指
数呈显著负相关(表 3),样品中的条带丰富度基本一
致。 根据非加权组平均法(UPGMA)构建了 UPGMA 树
状图来表示样品间的相关,树状图显示(图 7),太湖 8
个底泥样品中有毒蓝藻群落结构相似性超过 70% ,其
中距离位于西太湖的 W2 和 W4 采样点的样品间产毒
蓝藻群落结构相似性最高,而距离较远的 S4、N2 和 N4
聚为一支,S2、S5 和 N5 聚为一支,说明底泥中有毒微囊
藻群落结构与空间距离并无直接关系。
2. 6摇 DNA序列分析和系统进化树构建
在本研究中,共获得了 12 条 mcyA 序列,长度均为
291bp,序列间的相似性超过 97% 。 在 GenBank 数据库
中用 BLAST程序搜索同源性序列,构建了不同种属系
统进化树,如图 8 所示。 发现本研究中所得到的 12 条
mcyA序列与微囊藻属聚为一类,说明太湖底泥有毒基
因型属于微囊藻藻属(Microcystis spp. )。
表 3摇 样品的香农多样性指数和条带丰富度
Table 3摇 The Shannon diversity index and Band richness in the DGGE analysis of eight sediment samples
W2 W4 S2 S4 S5 N2 N4 N5
香农多样性指数
The Shannon diversity index 2. 849 2. 83 3. 13 2. 959 3. 441 2. 886 2. 986 3. 195
优势基因型占的比例
The ratio of dominant band 0. 358 0. 364 0. 232 0. 272 0. 216 0. 303 0. 21 0. 207
DGGE条带数 Band richness 11 11 11 11 11 11 11 12
3摇 讨论
近年来,荧光定量 PCR在蓝藻水华研究中广泛应用,该方法能够对样品中的目标生物精确定量,专一性
强,灵敏度高,结果重复性强,对样品没有限制,能够应用于野外水样和泥样[7鄄8]。 Schober 等通过比较相同样
品在不同研究小组和不同定量 PCR仪实验结果,发现结果误差率在 10%以下。 在对蓝藻水华样品的分析中,
根据所设计的引物,可以对样品中的蓝藻、微囊藻和有毒微囊藻种群丰度分别进行研究,为更深入认识蓝藻水
华动态变化提供了技术支持[14]。 应用荧光定量 PCR分析样品中的目标生物首先需要构建标准曲线,一般是
用室内纯培养藻株构建标准曲线,设置 5—7 个浓度梯度,同时要保证所要分析样品和标准品的扩增效率一
6556 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 31 卷摇
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0.76
0.80 0.85
0.80
0.86 0.92
0.96
N5S5S2W4W2S4N4N2
0.76 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00
图 7摇 不同湖区样品聚类分析
摇 Fig. 7 摇 Cluster analysis of sediment samples from different
lake area
致。 相对于水样而言,湖泊底泥样品成分更为复杂,含
有多种 PCR抑制剂,主要有腐质酸、有机化合物和重金
属等[17],均会对定量 PCR 结果产生影响。 在实验中大
多采用直接稀释法和基因组纯化法去除抑制剂对 PCR
扩增的影响[18鄄20]。 本文在比较 2 种方法后选择了对基
因组直接进行纯化,因为发现稀释法的效果不理想,对
基因组稀释 50 倍以后,还不能完全消除抑制剂的影响,
样品间的定量 PCR 扩增效率误差很大,纯化后基因组
定量 PCR 分析效果比较理想。 需要注意的是,基于
DNA水平的定量 PCR 可能会过高估计藻细胞种群丰
度,因为藻细胞死亡后 DNA会长时间留在底泥中,和底
SLT5 SLT11 03LO-OS6(EF424349) Microcystis sp.199(AJ515452) Microcystis sp.205(AJ515453) SLT8 SLT10 Microcystis.aeruginosa 7806(AF183408) Microcystis cf. aeruginosa PCC7941(AJ515460) SLT9 Microcystis sp. GL280646(AJ515455) Microcystis sp. HUB 5.2.4(AJ515451) Microcystis cf. viridis NIES-102(AJ515457) SLT12 SLT6 Microcystis sp. TuM7C(AJ515458) SLT1 Microcystis aeruginosa LE-3(DQ379709) Microcystis sp. GL260735(AJ515454) SLT3 SLT4 Microcystis cf. aeruginosa NIES-89(AJ515459) SLT7 Microcystis sp. IZANCYA5(AJ515456) SLT2 Planktothrix sp. NIVA-CYA128(AJ515469) Planktothrix sp. PCC7821(AJ515473) Nostoc sp. IO-102-I(AY566856) Nostoc sp. 152(AJ515475) Anabaena sp. 90(AJ536158) Anabaena sp. 66A(AJ515462) Anabaena cf. flos-aquae NIVA-CYA83(AJ515466)7399
71
5852
51
54
99
9699
99
0.02
图 8摇 基于 mcyA序列的系统进化树,其中 SLT(1—12)分别表示 DGGE图谱中测序的条带
Fig. 8摇 Phylogenetic tree based on the partial mcyA sequences,SLT(1—12) obtained from excised gel bands in the DGGE Profiles of
eight samples
泥中成分结合[21]。 因此,构建 RNA特异性探针可以检测底泥中活细胞及其定量将是今后研究的重点[9]。
蓝藻在底泥中越冬是躲避不良环境,保持种群生存的一种策略,同时也能够为来年蓝藻水华发生提供种
源,具有双重效应。 尤其是在一些浅水湖泊,底泥中的蓝藻能够持续为水体提供种源,对湖泊夏季蓝藻水华的
形成具有重要影响[2]。 太湖是一个典型的大型浅水湖泊,平均水深仅有 1. 89m。 张晓峰等对太湖梅梁湾水华
复苏过程进行了研究,发现底泥底泥中蓝藻复苏对太湖水华形成具有很关键的作用[22]。 本实验室通过近 2a
的连续研究,发现冬季蓝藻越冬地和来年最先出现水体蓝藻水华的湖区之间有对应关系。 因此,对越冬期间
蓝藻在底泥中空间分布研究具有重要意义,可以为来年蓝藻水华预测、预警提供重要参考。
从 mcyA定量 PCR结果来看,有毒微囊藻在底泥中广泛分布,所有样品中都有检出,且不同湖区间种群丰
7556摇 21 期 摇 摇 摇 李大命摇 等:冬季太湖表层底泥产毒蓝藻群落结构和种群丰度 摇
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度差异显著(图 5),其中梅梁湾(N2)、竺山湾(N5)、贡湖湾(N4)和湖心(S4)种群丰度都比较高,都超过了
105拷贝数 / g干重,而西太湖(W2 和 W4)和南太湖(S2)种群丰度较低;16S rDNA 定量 PCR 结果表明微囊藻
种群丰度分布与有毒蓝藻分布基本一致,但是不同湖区有毒蓝藻在微囊藻种群丰度中的比例有显著差异,其
中采样点 W2、W4、S2、S4 和 S5 样品中有毒蓝藻的比例较低;而梅梁湾(N2)、竺山湾(N5)和贡湖湾(N4)较
高,所有采样点的平均值为 19. 1% 。 与 Rinta鄄Kanto等对伊犁湖底泥样品中的研究结果相比较,太湖底泥样品
中产毒微囊藻所占的比例高于伊犁湖,伊犁湖有毒微囊藻的比例平均值为 4. 8% [23],说明不同湖泊间微囊藻
种群丰度及其组成存在差异。 但总的看来,太湖底泥中的有毒微囊藻的比例相对较低,不超过 50% ,这与水
体中得出的结论是一致的[24]。 在自然水体中,温度,营养盐和生物因子等均可以影响有毒微囊藻种群相对比
例[25鄄27]。 但底泥中有毒微囊藻种群丰度的相对变化尚无见相关报道,需要进一步研究。 综合考虑定量 PCR
结果和底泥中色素含量,可以得出 2010 年太湖蓝藻越冬地主要集中在梅梁湾(N2)、竺山湾(N5)、贡湖湾
(N4)和湖心(S4),这和 2008 年越冬蓝藻在底泥中的空间分布有一定的差异,2008 年太湖冬季底泥中的蓝藻
主要分布于西南湖区,而梅梁湾浓度比较低[13],且底泥中叶绿素 a 和藻蓝素浓度总体比本研究结果低,说明
蓝藻在底泥中的分布具有一定的年季变化,同时,也说明了极端气候对藻类浓度的影响,在 2008 冬季出现了
多年未见强降温降雪天气,太湖水体温度降至冰点以下,导致水体和底泥中藻类含量普遍偏低。 这和文献报
道的结果类似[1]。 所以,要充分考虑极端天气(降温、降雪和大风等)对蓝藻种群分布及其动态的影响。
PCR鄄DGGE技术广泛应用于藻类群落结构组成及时空变化研究[28鄄29]。 该技术具有灵敏度高,可靠性强、
重复性好、方便快捷等优点。 总的来说,研究者大多关注水体中藻类群落结构的动态变化,而对底泥中蓝藻群
落结构研究相对较少。 关于太湖蓝藻群落结构特征已有报道:谭啸等利用 PCR鄄DGGE 技术分析了太湖微囊
藻群落组成的季节变化[29]。 Ye等研究了太湖梅梁湾有毒蓝藻群落结构的周年变化,发现水华期间有毒蓝藻
基因型多样性高于非水华阶段,水华早期多样性高于水华后期,冬季(2 月份)水体中仅有 1 条占优势的基因
型条带出现[30]。 本文利用 PCR鄄DGGE分析技术首次对太湖底泥中有毒微囊藻群落结构进行分析。 从研究结
果可以看出,太湖冬季底泥样品中有毒微囊藻基因型比较丰富,与 Ye 等人的研究结果相比较,太湖冬季底泥
样品中有毒微囊藻基因型丰富度远远高于冬季水体,说明冬季蓝藻下沉到底泥表明越冬,水柱中仅有少量藻
细胞存在。 本研究的结果间接验证了孔繁翔等提出的温带浅水富营养化湖泊蓝藻水华形成的四阶段理论,该
理论提出是基于水体和底泥中蓝藻生物量和生理指标的季节变化,本研究则从种群结构的变化验证了该理论
的正确性[5]。 同样,与 Ye等人的研究结果相一致,底泥样品中有毒基因型均属于微囊藻藻属,没有发现属于
鱼腥藻属(Anabaena)和浮丝藻属(Planktothrix)有毒基因型,也没有检测到 Hotto 等报道的一类长度为 297bp
同样属于微囊藻属的 mcyA片段[31]。 这说明太湖中微囊藻毒素是由微囊藻产生。 尽管鱼腥藻属和浮丝藻属
在太湖浮游植物群落中也有发现,推测它们可能不含有微囊藻毒素合成酶基因簇,因而也缺乏产生微囊藻毒
素的能力。
总之,本研究利用建立的荧光定量 PCR技术分析了太湖 2010 年冬季底泥样品中微囊藻和产毒蓝藻种群
丰度,同时基于 PCR鄄DGGE技术研究了底泥中有毒蓝藻群落结构,发现有毒基因型均属于微囊藻属,底泥样
品中有毒微囊藻种群丰度及其相对比例在不同湖区差异显著,结合样品中色素含量,推测太湖 2010 年蓝藻水
华最早可能出现在竺山湾(N5)、梅梁湾(N2)、和梅梁湾至湖心(S4)一带,需要对这些湖区加强监测力度。
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[24] 摇 李大命, 孔繁翔, 于洋, 张民, 史小丽. 太湖蓝藻水华期间水体和底泥中产毒微囊藻与非产毒微囊藻种群丰度研究. 环境科学学报,
2011, 31(2): 292鄄298.
[29] 摇 谭啸, 孔繁翔, 曾庆飞, 钱善勤, 张民. 太湖中微囊藻群落的季节变化分析. 生态与农村环境学报, 2009, 25 (1) : 47鄄52.
0656 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 31 卷摇
ACTA ECOLOGICA SINICA Vol. 31,No. 21 November,2011(Semimonthly)
CONTENTS
Landscape spatial analysis of a traditional tibetan settlement based on landscape pattern theory and feng鄄shui theory:the case of
Zhagana, Diebu, Gansu Province SHI Lisha, YAN Lijiao, HUANG Lu, et al (6305)……………………………………………
Temporal鄄spatial differentiation and its change in the landscape ecological security of Wuyishan Scenery District
YOU Weibin,HE Dongjin,WU Liyun,et al (6317)
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Evaluation of eco鄄sustainability of roads in a tourism area: a case study within Yulong County JIANG Yiyi (6328)…………………
Study on the compactness assessment model of urban spatial form ZHAO Jingzhu, SONG Yu, SHI Longyu, et al (6338)……………
A multi鄄scale analysis of red鄄crowned crane忆s habitat selection at the Yellow River Delta Nature Reserve, Shandong, China
CAO Mingchang, LIU Gaohuan, XU Haigen (6344)
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Assessment and spatial distribution of water and soil loss in karst regions, southwest China
FAN Feide,WANG Kelin,XIONG Ying,et al (6353)
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Construction of an eco鄄environmental database for watershed鄄scale data: an example from the Tarim River Basin
GAO Fan, YAN Zhenglong, HUANG Qiang (6363)
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Reproductive allocation in dioecious shrub, Rhamnus davurica WANG Juan, ZHANG Chunyu, ZHAO Xiuhai, et al (6371)………
Age鄄dependent growth responses of Pinus koraiensis to climate in the north slope of Changbai Mountain, North鄄Eastern China
WANG Xiaoming, ZHAO Xiuhai, GAO Lushuang, et al (6378)
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Fine鄄scale spatial point patterns of Stipa krylovii population in different alpine degraded grasslands
ZHAO Chengzhang, REN Heng, SHENG Yaping, et al (6388)
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Community structure and population regeneration in remnant Ginkgo biloba stands
YANG Yongchuan, MU Jianping, TANG Cindy Q. ,et al (6396)
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Reproductive characteristics and adaptive evolution of pin and thrum flowers in endangered species, Primula merrilliana
SHAO Jianwen, ZHANG Wenjuan, ZHANG Xiaoping (6410)
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Leaf functional traits of four typical forests along the altitudinal gradients in Mt. Shennongjia
LUO Lu, SHEN Guozhen, XIE Zongqiang,et al (6420)
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Reclaimed soil properties and weathered gangue change characteristics under various vegetation types on gangue pile
WANG Liyan, HAN Youzhi, ZHANG Chengliang, et al (6429)
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Influence of fire on stands of Pinus massoniana in a karst mountain area of central Guizhou province
ZHANG Xi, CHUI Yingchun, ZHU Jun, et al (6442)
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Morphological and physiological adaptation of Caragana species in the Inner Mongolia Plateau
MA Chengcang, GAO Yubao, LI Qingfang, et al (6451)
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A comparative study on reasons of degenerated of Haloxylon ammodendron population in the western part of Gurbantunggut desert
SI Langming,LIU Tong,LIU Bin,et al (6460)
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Self鄄thinning of natural broadleaved forests in Baishilazi Nature Reserve ZHOU Yongbin, YIN You, YIN Mingfang, et al (6469)…
Population status and dynamic trends of Amur tiger忆s prey in Eastern Wandashan Mountain, Heilongjiang Province
ZHANG Changzhi, ZHANG Minghai (6481)
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The relationship between the occurrence of Colorado Potato Beetle, Leptinotarsa decemlineata, and rivers based on GIS: a case
study of Shawan Country LI Chao, ZHANG Zhi, GUO Wenchao, et al (6488)…………………………………………………
Occurrence dynamics and trajectory analysis of Cnaphalocrocis medinalis Guen佴e in Xing忆an Guangxi Municipality in 2010
JIANG Chunxian, QI Huihui, SUN Mingyang, et al (6495)
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Adaptability of B鄄biotype Bemisia tabaci (Gennadius) to Host Shift ZHOU Fucai, LI Chuanming, GU Aixiang, et al (6505)………
Structural change analysis of cecal bacterial flora in different poultry breeds using PCR鄄DGGE LI Yongzhu,Yongquan Cui (6513)…
Effect of chicken manure鄄amended copper mine tailings on growth of three leguminous species, soil microbial biomass and enzyme
activities ZHANG Hong, SHEN Zhangjun, YANG Guide, et al (6522)…………………………………………………………
Physiological response of Microcystis to solar UV radiation WANG Yan, LI Shanshan, LI Jianhong, et al (6532)……………………
Relationship between cell volume and cell carbon and cell nitrogen for ten common dinoflagellates
WANG Yan,LI Ruixiang,DONG Shuanglin,et al (6540)
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The community structure and abundance of microcystin鄄producing cyanobacteria in surface sediment of Lake Taihu in winter
LI Daming, KONG Fanxiang,YU Yang, et al (6551)
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Influence of green belt structure on the dispersion of particle pollutants in street canyons
LIN Yinding, WU Xiaogang, HAO Xingyu, et al (6561)
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Spatio鄄temporal variation analysis of urbanization and land use benefit of oasis urban areas in Xinjiang
YANG Yu, LIU Yi, DONG Wen, et al (6568)
………………………………
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Nitrate contamination and source tracing from NO-3 鄄啄15N in groundwater in Weifang, Shandong Province
XU Chunying, LI Yuzhong, LI Qiaozhen, et al (6579)
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The impact of rising temperature on spring wheat production in the Yellow River irrigation region of Ningxia
XIAO Guoju, ZHANG Qiang, ZHANG Fengju, et al (6588)
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A new hyperspectral index for the estimation of nitrogen contents of wheat canopy
LIANG Liang, YANG Minhua, DENG Kaidong, et al (6594)
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The feature of N2O emission from a paddy field in irrigation area of the Yellow River
ZHANG Hui,YANG Zhengli,LUO Liangguo, et al (6606)
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Review and Monograph
Research perspective for the effects of nitrogen deposition on biogenic volatile organic compounds
HUANG Juan, MO Jiangming, KONG Guohui, et al (6616)
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Recruitment limitation of plant population: from seed production to sapling establishment
LI Ning, BAI Bing, LU Changhu (6624)
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Scientific Note
Response of anatomical structure and photosynthetic characteristics to low light stress in leaves of different maize genotypes
DU Chengfeng, LI Chaohai, LIU Tianxue, et al (6633)
…………
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2009 年度生物学科总被引频次和影响因子前 10 名期刊绎
(源于 2010 年版 CSTPCD数据库)
排序
Order
期刊
Journal
总被引频次
Total citation
排序
Order
期刊
Journal
影响因子
Impact factor
1 生态学报 11764
2 应用生态学报 9430
3 植物生态学报 4384
4 西北植物学报 4177
5 生态学杂志 4048
6 植物生理学通讯 3362
7
JOURNAL OF INTEGRATIVE
PLANT BIOLOGY
3327
8 MOLECULAR PLANT 1788
9 水生生物学报 1773
10 遗传学报 1667
1 生态学报 1. 812
2 植物生态学报 1. 771
3 应用生态学报 1. 733
4 生物多样性 1. 553
5 生态学杂志 1. 396
6 西北植物学报 0. 986
7 兽类学报 0. 894
8 CELL RESEARCH 0. 873
9 植物学报 0. 841
10 植物研究 0. 809
摇 绎《生态学报》 2009 年在核心版的 1964 种科技期刊排序中总被引频次 11764 次,全国排名第 1; 影响因
子 1郾 812,全国排名第 14;第 1—9 届连续 9 年入围中国百种杰出学术期刊; 中国精品科技期刊
摇 摇 编辑部主任摇 孔红梅摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 执行编辑摇 刘天星摇 段摇 靖
生摇 态摇 学摇 报
(SHENGTAI摇 XUEBAO)
(半月刊摇 1981 年 3 月创刊)
第 31 卷摇 第 21 期摇 (2011 年 11 月)
ACTA ECOLOGICA SINICA
摇
(Semimonthly,Started in 1981)
摇
Vol郾 31摇 No郾 21摇 2011
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