全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊怨冤院员圆源源 耀 员圆源愿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员圆鄄园远鄄圆圆摇 接受日期院圆园员圆鄄园愿鄄员苑
基金项目院国家自然基金青年基金渊猿员员园员员苑愿冤袁山东省自然基金渊在砸圆园员圆悦酝园员源冤袁山东省中青年科学家奖励基金渊月杂圆园园怨晕再园圆愿冤袁山东省自然
基金青年基金渊在砸圆园员员悦匝园圆远冤
作者简介院乔利仙渊员怨苑猿鄄冤袁女袁山西太谷人袁博士袁研究方向为作物生物技术与遗传育种遥 栽藻造院园缘猿圆鄄愿远园愿园远源园曰耘鄄皂葬蚤造院造曾择蚤葬燥苑猿岳 员远猿援 糟燥皂曰
于新玲渊员怨愿缘鄄冤袁女袁山东莱州人袁硕士袁研究方向为花生基因工程遥 耘鄄皂葬蚤造院曾蚤灶造蚤灶早苑苑岳 员远猿援 糟燥皂
于新玲与乔利仙并列为本文第一作者
通讯作者院王晶珊渊员怨远园鄄冤袁女袁山东莱州人袁教授袁研究方向为作物遗传育种与生物技术遥 耘鄄皂葬蚤造院 躁泽憎葬灶早猿员怨岳 员圆远援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园怨鄄员圆源源鄄园缘
农杆菌介导的花生遗传转化体系的优化
乔利仙员 摇 于新玲圆 摇 隋炯明员 摇 范乾程员 摇 孙世孟员 摇 王晶珊员
渊员援 青岛农业大学生命科学学院 辕山东省高校植物生物技术重点实验室袁山东 青岛摇 圆远远员园怨曰
圆援 烟台工贸技师学院袁 山东 烟台摇 圆远源园园猿冤
摘摇 要院以花生胚小叶及其诱导形成的愈伤组织为转化受体袁采用农杆菌介导法袁通过评估外植体 郧哉杂
基因瞬时表达率袁优化花生遗传转化条件遥 结果表明袁侵染液中添加表面活性剂 圆鄄氮吗啉乙烷磺酸
渊酝耘杂冤员缘园皂早 辕 蕴或烟草提取物 园郾 缘皂造 辕 猿园皂造有利于提高胚小叶外植体 郧哉杂 瞬时表达率曰采用针刺法辅
助农杆菌介导转化袁其胚小叶外植体多点 郧哉杂 瞬时表达率渊圆怨郾 员豫 冤明显高于未针刺的对照渊员圆郾 员豫 冤曰
利用愈伤组织作为转化受体袁其多点 郧哉杂 瞬时表达率高达 苑园郾 员豫 遥 利用此优化体系进行花生遗传转
化袁获得的抗性苗 圆园员员 年经嫁接尧移栽于试验田袁孕悦砸检测获得了 栽园代转基因植株袁圆园员圆 年部分 栽员代植
株也检测出目的条带遥
关键词院花生渊粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 蕴援 冤曰遗传转化体系曰针刺法曰胚小叶曰愈伤组织曰郧哉杂瞬时表达
韵孕栽陨酝陨在粤栽陨韵晕 韵云 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽鄄酝耘阅陨粤栽耘阅 栽砸粤晕杂云韵砸酝粤栽陨韵晕 杂再杂栽耘酝 韵云 孕耘粤晕哉栽
匝陨粤韵 蕴蚤鄄曾蚤葬灶 再哉 载蚤灶鄄造蚤灶早摇 杂哉陨 允蚤燥灶早鄄皂蚤灶早摇 云粤晕 匝蚤葬灶鄄糟澡藻灶早摇 杂哉晕 杂澡蚤鄄皂藻灶早摇 宰粤晕郧 允蚤灶早鄄泽澡葬灶
渊员援 运藻赠 蕴葬遭 燥枣 孕造葬灶贼 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠 蚤灶 哉灶蚤增藻则泽蚤贼蚤藻泽 燥枣 杂澡葬灶凿燥灶早袁 悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻袁 匝蚤灶早凿葬燥 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匝蚤灶早凿葬燥袁
杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆远远员园怨曰 圆援 再葬灶贼葬蚤 陨灶凿怎泽贼则赠 葬灶凿 悦燥皂皂藻则糟藻 灾燥糟葬贼蚤燥灶葬造 悦燥造造藻早藻袁 再葬灶贼葬蚤袁 杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆远源园园猿冤
粤遭泽贼则葬糟贼院月赠 藻增葬造怎葬贼蚤灶早 郧哉杂 贼则葬灶泽蚤藻灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 怎泽蚤灶早 藻皂遭则赠燥灶蚤糟 造藻葬枣造藻贼 葬灶凿 糟葬造造怎泽 葬泽 藻曾责造葬灶贼泽袁 泽藻增藻则葬造
枣葬糟贼燥则泽 憎澡蚤糟澡 皂葬赠 葬枣枣藻糟贼 早藻灶藻贼蚤糟 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 皂藻凿蚤葬贼藻凿 遭赠 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽 憎藻则藻 泽贼怎凿蚤藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿
贼澡葬贼 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 泽怎泽责藻灶泽蚤燥灶 泽怎责责造藻皂藻灶贼藻凿 憎蚤贼澡 员缘园皂早 辕 蕴 酝耘杂 燥则 园郾 缘园皂造 辕 猿园皂造 贼燥遭葬糟糟燥 藻曾贼则葬糟贼 糟燥怎造凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠
蚤皂责则燥增藻 贼澡藻 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠援 粤糟怎责怎灶糟贼怎则藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 贼澡藻 郧哉杂 贼则葬灶泽蚤藻灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
枣则藻择怎藻灶糟赠 遭赠 圆怨郾 员豫 憎蚤贼澡 皂怎造贼蚤鄄凿燥贼 泽贼葬蚤灶蚤灶早 糟燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 悦运渊员圆郾 员豫 冤援 匀蚤早澡鄄枣则藻择怎藻灶糟赠 郧哉杂 贼则葬灶泽蚤藻灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
皂怎造贼蚤鄄凿燥贼 泽贼葬蚤灶蚤灶早 渊苑园郾 员豫 冤 憎葬泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿 怎泽蚤灶早 糟葬造造怎泽 葬泽 贼澡藻 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 则藻糟藻责贼燥则援 砸藻泽蚤泽贼葬灶贼 责造葬灶贼造藻贼泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿 怎泽蚤灶早
贼澡蚤泽 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂 憎藻则藻 早则葬枣贼藻凿 葬灶凿 贼则葬灶泽责造葬灶贼藻凿 贼燥 贼澡藻 枣蚤藻造凿袁 贼澡藻灶 贼澡藻 栽燥 责燥泽蚤贼蚤增藻 责造葬灶贼泽 憎藻则藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 遭赠 孕悦砸葬灶葬造赠泽蚤泽 葬灶凿 贼澡藻 贼葬则早藻贼 早藻灶藻 憎葬泽 蚤灶澡藻则蚤贼藻凿 泽贼藻葬凿蚤造赠 蚤灶 贼燥 泽燥皂藻 燥枣 栽员 责造葬灶贼泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院责藻葬灶怎贼 渊粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 蕴援 冤曰 早藻灶藻贼蚤糟 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂曰 葬糟怎责怎灶糟贼怎则藻曰 藻皂遭则赠燥灶蚤糟 造藻葬枣造藻贼曰 糟葬造造怎泽曰
郧哉杂 贼则葬灶泽蚤藻灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
摇 摇 利用转基因技术可较快地将外源遗传物质转移到
受体中袁从而改良农作物性状遥 花生是重要的经济和
油料作物之一袁自 员怨怨源 年报道花生转基因成功咱员暂以
来袁许多研究者进行了花生遗传转化方面的研究袁已有
源源圆员
摇 怨 期 农杆菌介导的花生遗传转化体系的优化
标记基因和控制农艺性状基因成功转入花生的报
道咱圆 耀 苑暂 袁但仍然存在转化率低和受基因型限制等难题遥
和多数豆科作物一样袁花生被认为是较难转化的作物
之一袁近年来的研究重点仍放在遗传转化体系的建立
上遥
选择适宜的转化条件对提高遗传转化率非常重
要遥 表面活性剂具有增强细胞膜通透性的作用袁易于
农杆菌粘附在外植体伤口袁据报道 杂蚤造憎藻贼 蕴鄄苑苑尧孕造怎则燥灶蚤糟
云鄄远愿尧栽憎藻藻灶 圆园 的应用可提高转化率约 员园豫 咱愿暂 遥 同
时袁烟草组织受伤时产生的能够激活农杆菌 灾蚤则 基因
的酚类物质如乙酰丁香酮渊粤杂冤和 茁鄄羟基乙酰丁香酮
渊韵匀鄄粤杂冤等较多袁添加于农杆菌侵染液中可以提高外
植体的转化率遥 此外袁为提高农杆菌介导的遗传转化
效率袁研究人员还采用了不同的辅助方法袁如超声波
法尧针刺法等遥 超声波法是通过破坏外植体细胞膜和
细胞壁的通透性袁创造微创口袁从而便于农杆菌的导
入遥 针刺法也具有创造微创口的作用袁其微创口对外
植体的伤害较小袁不会影响植株再生遥 谢宏峰等咱怨暂在
农杆菌介导的大豆遗传转化中袁利用复合针刺法增加
外植体伤口袁明显提高了遗传转化效率遥 花生遗传转
化研究方面袁极少数报道在农杆菌侵染液中添加表面
活性剂咱员园暂和烟草提取物咱员员暂 袁而创造微创口的辅助农
杆菌介导的转化方法未见报道遥 本研究以花生胚小叶
为转化受体袁以针刺法辅助农杆菌介导袁应用 郧哉杂 基
因瞬时表达技术评价转化效率袁优化花生遗传转化条
件袁并探讨了以愈伤组织为转化受体的遗传转化效率遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
供试材料为花生品种花育 圆圆 号和鲁花 员员 号的成
熟种子遥
农杆菌菌株 郧灾猿员园员袁栽鄄阅晕粤 区含有 郧哉杂基因袁由
悦葬酝灾 猿缘杂 作为启动子袁以潮霉素渊匀月冤作为抗性筛选
标记遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 培养基摇 本试验所用基本培养基为 酝杂月缘渊酝杂
无机盐 垣 月缘有机成分冤培养基遥
诱导培养基院酝杂月缘 垣 员园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅
筛选培养基院酝杂月缘 垣 员园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 垣 缘园园皂早 辕 蕴
羧苄青霉素渊悦遭冤 垣 园 耀 圆缘皂早 辕 蕴 匀月
体胚萌发培养基院酝杂月缘 垣 源皂早 辕 蕴 远鄄苄氨基嘌呤渊月粤孕冤 垣 缘园园皂早 辕 蕴 悦遭
以上培养基均添加 猿豫蔗糖尧园郾 愿豫琼脂袁责匀 值调
至 缘郾 愿遥
员郾 圆郾 圆摇 农杆菌侵染液的制备摇 从 原 苑园益冰箱中取保
存的菌液袁于含有 缘园皂早 辕 蕴 运皂 和 缘园皂早 辕 蕴 砸蚤枣 的 蕴月 固
体培养基平板上划线培养袁挑取单菌落接种到含
缘园皂早 辕 蕴 运皂 的液体 再耘月 培养基中袁黑暗尧圆愿益 下袁
圆园园则 辕 皂蚤灶震荡培养至对数生长期渊韵阅远园园 越 园郾 远 耀 园郾 愿冤遥
菌液离心后弃上清液袁用等体积 酝杂 液体培养基悬浮
后置于 源益冰箱 员 耀 圆澡袁用于外植体侵染遥
员郾 圆郾 猿摇 农杆菌介导的遗传转化摇 胚小叶外植体预培
养院将花育 圆圆 号的种子去子叶袁种胚用 苑缘豫酒精浸泡
圆园泽袁再用 园郾 员豫的升汞浸泡 员园皂蚤灶进行表面消毒袁用无
菌水漂洗 缘 次后袁置于装有无菌水的广口瓶中浸泡 员圆
耀 员远澡遥 取浸泡的种胚袁置于无菌培养皿中分离胚小
叶袁然后接种到添加 员园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 的 酝杂月缘培养基上
预培养 源凿遥
愈伤组织的获得院将鲁花 员员 号的种子经消毒后取
种胚袁在添加 员园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 的 酝杂月缘培养基上培养 愿耀 员园凿诱导愈伤组织遥
侵染及共培养院取预培养之后的胚小叶外植体或
诱导形成的愈伤组织袁浸于添加表面活性剂 酝耘杂渊园尧
员园园尧员缘园尧圆园园尧圆缘园皂早 辕 蕴冤或烟草提取物渊园尧园郾 圆缘尧园郾 缘园尧
园郾 苑缘尧员郾 园园皂造 辕 猿园皂造冤的农杆菌侵染液渊韵阅远园园 越 园郾 远 耀园郾 愿冤中袁圆愿益袁怨园则 辕 皂蚤灶温和震荡袁侵染 员缘皂蚤灶遥 用无菌
滤纸将表面残留菌液吸干后袁接种到添加 员园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄
阅的 酝杂月缘培养基上袁共培养 源凿遥
员郾 圆郾 源摇 郧哉杂染色摇 参照张庆林等咱员圆暂的方法进行 郧哉杂
染色遥
郧哉杂瞬时表达率渊豫 冤 越显色的外植体数 辕处理的
总外植体数 伊员园园豫 遥
员郾 圆郾 缘摇 抗性植株的筛选及移栽管理摇 以花育 圆圆 号种
子的胚小叶为外植体袁以上述优化体系为基础进行遗
传转化遥 共培养结束后袁将胚小叶转移到含 员园皂早 辕 蕴
圆袁源鄄阅尧员缘皂早 辕 蕴 匀月和 缘园园皂早 辕 蕴 悦遭 的筛选培养基上进
行筛选培养袁猿 周后将抗性体胚转接到含 源皂早 辕 蕴 月粤孕
和 缘园园皂早 辕 蕴 悦遭 的体胚萌发培养基上袁每 源 周继代 员
次袁直至成苗遥
培养条件均为 圆缘益尧员猿澡 辕 凿光照尧猿园园园造曾遥
以获得的抗性苗为接穗袁苗龄约 员圆凿的花育 圆猿 号
为砧木袁参照郝世俊等咱员猿暂的方法进行嫁接尧驯化移栽
及田间管理遥 成熟后分单株收获荚果遥
员郾 圆郾 远摇 转化植株的 孕悦砸检测摇 嫁接苗移栽田间 源 周
后取植株叶片袁采用 悦栽粤月 法咱员源暂提取基因组 阅晕粤袁以
质粒 阅晕粤 为阳性对照袁采用 郧哉杂 基因引物进行 孕悦砸
检测遥 郧哉杂 基因的上游引物院缘忆悦粤悦 粤悦悦 郧粤栽 粤悦悦
缘源圆员
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
粤栽悦 粤郧粤 郧粤栽 悦 猿忆袁下游引物院缘忆栽悦粤 悦悦郧 粤粤郧 郧郧悦
粤栽郧 悦悦粤 郧栽悦 悦 猿忆遥 孕悦砸 反应体系 圆缘滋造袁 包含
员园皂皂燥造 辕 蕴 栽则蚤泽鄄匀悦造 渊责匀愿郾 猿冤尧员郾 缘皂皂燥造 辕 蕴 酝早悦造圆尧员哉的栽葬择 酶尧 源灶皂燥造 辕 蕴 凿晕栽孕尧 员园责皂燥造 辕 蕴 引物尧 圆园灶早 模板
阅晕粤遥 反应条件院怨缘益 预变性 缘皂蚤灶曰怨缘益 变性 缘园泽袁
缘愿益退火 缘园泽袁苑圆益 延伸 源园泽袁猿园 个循环曰苑圆益 延伸
员园皂蚤灶遥 反应产物用 员郾 缘豫琼脂糖凝胶电泳检测遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 匀月抗性筛选浓度的确定
将花育 圆圆 号的花生胚小叶外植体接种至添加
员园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 的 酝杂月缘体胚诱导培养基上培养 愿凿袁然
后转接到含不同浓度 匀月渊园尧员园尧员缘尧圆园尧圆缘皂早 辕 蕴冤的体
胚诱导培养基上袁观察 匀月对外植体的抑制情况渊图版
员冤袁统计体胚诱导率见表 员遥
由图版 员 和表 员 可以看出袁匀月明显抑制花生胚小
叶形成体胚袁随 匀月浓度的增高袁体胚诱导率呈明显降
低趋势遥 当 匀月浓度为 员缘皂早 辕 蕴时袁培养 圆员凿的胚小叶
全部褐化死亡遥 说明 员缘皂早 辕 蕴 匀月 能完全抑制体胚的
形成袁因此确定 匀月 员缘皂早 辕 蕴 为遗传转化适宜的筛选
压遥
表 员摇 匀月对外植体体胚诱导的影响
栽葬遭造藻 员摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 匀月 燥灶 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶
枣则燥皂 藻曾责造葬灶贼泽
匀月浓度
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣
匀月 渊皂早 辕 蕴冤
体胚诱导率
枣则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 渊豫 冤
苑凿 员源凿 圆员凿
园 远苑郾 园 愿怨郾 圆 愿怨郾 圆
员园 圆远郾 园 圆园郾 园 愿郾 园
员缘 源郾 园 圆郾 园 园
圆园 源郾 园 园 园
圆缘 园 园 园
圆郾 圆摇 酝耘杂对外植体 郧哉杂瞬时表达率的影响
将预培养 源凿的花生胚小叶外植体分别浸于添加
不同浓度 酝耘杂渊园尧员园园尧员缘园尧圆园园尧圆缘园皂早 辕 蕴冤的农杆菌侵
染液渊韵阅远园园 越 园郾 远 耀 园郾 愿冤中侵染 员缘皂蚤灶遥 共培养 源凿 后郧哉杂染色袁统计外植体 郧哉杂 瞬时表达率见表 圆遥 从表
圆 可以看出袁酝耘杂可以明显提高外植体 郧哉杂 瞬时表达
率袁当侵染液中添加 员缘园皂早 辕 蕴 酝耘杂 时袁外植体 郧哉杂 瞬
时表达率最高渊苑员郾 苑豫 冤袁明显高于对照渊员远郾 苑豫 冤遥 因
此确定适宜的 酝耘杂浓度为 员缘园皂早 辕 蕴遥
圆郾 猿摇 烟草提取物对外植体 郧哉杂瞬时表达率的影响
将预培养 源凿的花生胚小叶外植体分别浸于添加
摇 摇 摇 摇表 圆摇 酝耘杂对外植体 郧哉杂瞬时表达率的影响
栽葬遭造藻 圆摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 酝耘杂 燥灶 郧哉杂 贼则葬灶泽蚤藻灶贼
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠
酝耘杂浓度
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
燥枣 酝耘杂
渊皂早 辕 蕴冤
外植体数
晕燥援 燥枣
藻曾责造葬灶贼泽
显色外植
体数
晕燥援 燥枣 泽贼葬蚤灶藻凿
藻曾责造葬灶贼泽
郧哉杂瞬时
表达率
郧哉杂 贼则葬灶泽蚤藻灶贼
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
枣则藻择怎藻灶糟赠渊豫 冤
园 苑圆 员圆 员远郾 苑
员园园 愿源 源愿 缘苑郾 员
员缘园 怨圆 远远 苑员郾 苑
圆园园 员园圆 远园 缘愿郾 愿
圆缘园 苑远 缘园 远缘郾 愿
不同浓度烟草提取物 渊园尧园郾 圆缘尧 园郾 缘尧 园郾 苑缘尧 员郾 园园皂造 辕
猿园皂造冤的农杆菌侵染液 渊韵阅远园园 越 园郾 远 耀 园郾 愿冤中侵染员缘皂蚤灶遥 共培养 源凿后 郧哉杂染色袁统计外植体 郧哉杂瞬时
表达率见表 猿遥 由表 猿 可以看出袁烟草提取物的添加
可以明显提高 郧哉杂 瞬时表达率袁当烟草提取物浓度为
园郾 缘园皂造 辕 猿园皂造 时袁外植体 郧哉杂 瞬时表达率最高袁为
猿愿郾 远豫 袁而对照仅为 员员郾 愿豫 遥 试验证明适量的烟草提
取物可提高外植体的转化率袁加入过量会导致外植体
褐化从而降低转化率遥 因此袁农杆菌侵染花生胚小叶
时袁适宜的烟草提取物浓度约为 园郾 缘园皂造 辕 猿园皂造遥
表 猿摇 烟草提取物对外植体 郧哉杂瞬时表达率的影响
栽葬遭造藻 猿摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼燥遭葬糟糟燥 藻曾贼则葬糟贼 燥灶 郧哉杂
贼则葬灶泽蚤藻灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠
烟草提取
物浓度
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
燥枣 贼燥遭葬糟糟燥
藻曾贼则葬糟贼渊皂造 辕 猿园皂造冤
外植体数
晕燥援 燥枣
藻曾责造葬灶贼泽
显色外植
体数
晕燥援 燥枣 泽贼葬蚤灶藻凿
藻曾责造葬灶贼泽
郧哉杂瞬时
表达率
郧哉杂 贼则葬灶泽蚤藻灶贼
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
枣则藻择怎藻灶糟赠渊豫 冤
园 苑远 怨 员员郾 愿
园郾 圆缘 怨猿 圆猿 圆猿郾 苑
园郾 缘园 苑园 圆苑 猿愿郾 远
园郾 苑缘 愿愿 猿员 猿缘郾 圆
员郾 园园 缘远 员猿 圆猿郾 圆
圆郾 源摇 针刺处理对外植体 郧哉杂瞬时表达率的影响
将预培养 源凿 的花生胚小叶外植体用针刺渊用无
菌的针头刺扎花生胚小叶 猿园 次左右冤处理后袁分别浸
于农杆菌侵染液渊韵阅远园园 越 园郾 远 耀 园郾 愿冤中侵染 员缘皂蚤灶遥
共培养 源凿后 郧哉杂染色渊图版 圆冤袁统计外植体 郧哉杂 瞬
时表达率于表 源遥 由表 源 可以看出袁针刺处理的外植
体袁其多点 郧哉杂 瞬时表达率渊圆怨郾 员豫 冤明显高于对照
渊员圆郾 员豫 冤遥 单点 郧哉杂 瞬时表达指每个胚小叶上仅有
少数几个染色小点曰多点 郧哉杂 瞬时表达指染色面积较
大袁每个胚小叶上有多个染色点遥 因此袁用针刺法处理
外植体可有效提高外植体的转化率遥
远源圆员
摇 怨 期 农杆菌介导的花生遗传转化体系的优化
表 源摇 针刺法处理对外植体 郧哉杂瞬时表达率的影响
栽葬遭造藻 源摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 葬糟怎责怎灶糟贼怎则藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼 燥灶
郧哉杂 贼则葬灶泽蚤藻灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠
外植体处
理方式
贼则藻葬贼皂藻灶贼 枣燥则
藻曾责造葬灶贼泽
外植体数
晕燥援 燥枣
藻曾责造葬灶贼泽
多点染色外
植体数
晕燥援 燥枣 皂怎造贼蚤鄄凿燥贼
泽贼葬蚤灶藻凿 藻曾责造葬灶贼泽
外植体多
点染色率
则葬贼藻 燥枣 皂怎造贼蚤鄄
凿燥贼 泽贼葬蚤灶藻凿
藻曾责造葬灶贼泽 渊豫 冤
对照
悦运 缘愿 苑 员圆郾 员
针刺
葬糟怎责怎灶糟贼怎则藻 缘缘 员远 圆怨郾 员
圆郾 缘摇 愈伤组织为转化受体的 郧哉杂瞬时表达
将鲁花 员员 号种子的胚小叶培养在体胚诱导培养
基上袁愿 耀 员园凿 后将诱导出的愈伤组织作为转化受体袁
浸于农杆菌侵染液渊韵阅远园园 越 园郾 远 耀 园郾 愿冤中侵染 员缘皂蚤灶遥
共培养 源凿后 郧哉杂染色渊图版 猿冤袁统计外植体 郧哉杂 瞬
时表达率遥 统计结果表明袁愈伤组织 郧哉杂 瞬时表达率
渊包括单点和多点 郧哉杂 瞬时表达率冤为 愿源郾 缘豫 袁尤其
多点 郧哉杂 瞬时表达率高达 苑园郾 员豫 遥 并且愈伤组织上
的 郧哉杂染色点密集袁部分愈伤组织几乎全部染成蓝色
渊图版 猿鄄月冤遥 说明利用愈伤组织作为转化受体袁能有
效提高遗传转化效率遥
圆郾 远摇 农杆菌介导的转基因花生的获得
以优化体系为基础袁以花育 圆圆 号种子的胚小叶为
外植体进行遗传转化袁将诱导形成的抗性体胚转接到
添加 员缘皂早 辕 蕴 匀月 和 缘园园皂早 辕 蕴 悦遭 的体胚萌发培养基
上袁使体胚萌发成苗渊图 源冤遥
圆园员员 年抗性小苗经嫁接尧驯化后移栽于田间渊图
源冤遥 提取抗性苗叶片的基因组 阅晕粤袁进行 孕悦砸 检测
渊图 缘冤遥 由图 缘 可以看出袁抗性苗扩增出约 源员园遭责 的
目的条带袁表明 郧哉杂基因已转入花生中遥
摇 摇 圆园员圆 年将 栽园代植株获得的种子单粒播种袁提取植
株的叶片基因组 阅晕粤 进行 孕悦砸 检测袁部分 栽员植株检
测出目的条带渊图 远袁源 与 苑 泳道冤遥
猿摇 讨论
本研究在侵染液中添加表面活性剂 酝耘杂 和烟草
提取物明显提高了花生胚小叶外植体 郧哉杂 瞬时表达
率袁酝耘杂浓度为 员缘园皂早 辕 蕴袁烟草提取物浓度为 园郾 缘园皂造 辕
猿园皂造时袁外植体 郧哉杂瞬时表达率最高袁分别与邱金梅
等咱员园暂和刘峰咱员员暂的研究结果基本一致袁进一步证实侵
染液中添加适宜浓度的 酝耘杂 和烟草提取物有利于提
高农杆菌介导的花生遗传转化效率遥
图 圆摇 花生 匀月抗性苗的 孕悦砸检测
云蚤早援 圆摇 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 匀月鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼 责藻葬灶怎贼 责造葬灶贼泽
酝院阅蕴圆园园园曰员院阴性对照曰圆院质粒曰猿 耀 缘院抗性苗
酝院 阅蕴圆园园园曰 员院灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 圆院 责造葬泽皂蚤凿曰
猿 耀 缘院匀月鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼 责造葬灶贼泽
图 远摇 栽员代植株的 孕悦砸检测
云蚤早援 远摇 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 栽员 责造葬灶贼泽
酝院阅蕴圆园园园曰员院阴性对照曰圆院质粒曰猿 耀 愿院栽员代转基因植株
酝院 阅蕴圆园园园曰 员院灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 圆院 责造葬泽皂蚤凿曰
猿 耀 愿院 栽员 责造葬灶贼泽
超声波辅助介导法袁其主要作用是创造微创口袁便
于农杆菌的导入袁在大豆咱员缘暂 尧黄瓜咱员远暂 尧番木瓜咱员苑暂等作
物的遗传转化中应用袁其转化频率明显高于单纯的农
杆菌介导法遥 针刺法也是创造微创口袁有利于农杆菌
的导入袁在大豆的遗传转化中应用袁明显提高了农杆菌
介导的转化效率咱怨暂 遥 本研究首次在花生中利用针刺
法辅助农杆菌介导进行遗传转化袁结果也表明针刺法
可以明显提高花生胚小叶外植体 郧哉杂 瞬时表达率袁尤
其是外植体多点 郧哉杂 瞬时表达率遥 多点 郧哉杂 瞬时表
达说明 郧哉杂基因在外植体上转化位点多袁进而可以提
高外植体的转化效率遥
选择合适的转化受体对提高遗传转化率非常重
苑源圆员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员圆袁圆远渊怨冤院员圆源源 耀 员圆源愿
要咱员愿暂 遥 近年来研究者利用愈伤组织为转化受体进行
研究咱员怨 耀 圆员暂 遥 张艳贞等咱圆圆暂以玉米自交系 猿源园尧源员员圆 为
材料进行农杆菌介导的遗传转化袁结果表明幼胚预培
养后形成的新鲜初始愈伤组织是比较适宜的转化受
体袁转化率优于幼胚遥 花生遗传转化效率较低袁可能是
由于外植体表面的角质层阻碍农杆菌的侵染遥 本研究
利用愈伤组织为转化受体袁明显提高了 郧哉杂 瞬时表达
率渊 愿源郾 缘豫 冤袁尤其是多点 郧哉杂 瞬时表达率高达
苑园郾 员豫 遥 并且愈伤组织上的 郧哉杂 染色点密集袁部分愈
伤组织几乎全部染成蓝色遥 这可能是因为愈伤组织细
胞壁薄袁并且没有角质层的阻碍袁有利于农杆菌的侵染
及 栽鄄阅晕粤 的转移和整合遥 因此袁如果将花生幼叶尧胚
小叶等外植体首先诱导愈伤组织袁然后再进行农杆菌
的侵染袁有可能会提高花生的遗传转化率遥
源摇 结论
本研究以花生胚小叶为转化受体袁通过 郧哉杂 瞬时
表达评价影响农杆菌介导的花生遗传转化因素袁优化
了花生遗传转化体系遥 侵染液中添加 员缘园皂早 辕 蕴 酝耘杂
或 园郾 缘皂造 辕 猿园皂造的烟草提取物有利于提高外植体 郧哉杂
瞬时表达率曰应用针刺法辅助农杆菌介导袁有助于提高
转化率曰以愈伤组织为转化受体袁可以获得较高的
郧哉杂瞬时表达率遥 以上述优化的转化体系为基础袁以
花生胚小叶为转化受体袁利用针刺法辅助农杆菌介导
进行遗传转化袁获得了转基因植株遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 耘责藻灶 杂袁 郧藻燥则早藻 蕴援 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤灶泽鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿 早藻灶藻 贼则葬灶泽枣藻则
蚤灶 责藻葬灶怎贼 渊粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 蕴援 冤咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造 砸藻责燥则贼泽袁员怨怨源袁员猿院
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咱 圆 暂 摇 刘凤珍袁 万善勇袁王洪刚援 γ鄄维生素 耘甲基转移酶基因转化花生
研究咱允暂 援中国粮油学报袁圆园园缘袁圆园渊员冤院远员 原 远愿
咱 猿 暂 摇 蕴蚤 在袁 允葬则则藻贼 砸 蕴袁 阅藻皂泽噪蚤 允 宰援 耘灶早蚤灶藻藻则藻凿 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 贼燥皂葬贼燥
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咱 源 暂摇 刘 强袁王晶珊袁乔利仙袁隋炯明援花生 枣憎圆郾 圆 基因的克隆及遗传转
化咱允暂 援核农学报袁 圆园员员袁圆缘渊猿冤院员员圆猿 原 员员圆愿
咱 缘 暂 摇 丁 霄袁隋炯明袁王晶珊袁乔利仙援以木糖异构酶基因作为选择标
记的花生遗传转化咱允暂 援核农学报袁圆园员圆袁圆远渊猿冤院源源源 原 源源愿
咱 远 暂摇 冯 凯袁刘立侠援应用基因沉默技术改良花生脂肪酸组分咱阅暂援哈
尔滨院东北师范大学袁圆园园远
咱 苑 暂摇 刘凤珍袁万善勇袁潘昱名援 花生遗传转化高效基因型的筛选与研
究咱允暂 援花生学报袁圆园园怨袁猿愿渊源冤院圆员 原 圆缘
咱 愿 暂摇 付绍红袁牛应泽袁杨洪全袁韦献雅援 表面活性剂 泽蚤造憎藻贼鄄苑苑 对 枣造燥则葬造鄄
凿蚤责 转化甘蓝型油菜效果的影响咱 允暂 援 核分子植物育种袁圆园园源袁圆
渊缘冤院远远员 原 远远远
咱 怨 暂摇 谢宏峰袁曹银生袁薛仁镐援 影响复合针介导的大豆遗传转化效率
的主要因素研究咱允暂 援生物技术通讯袁圆园园苑袁员愿渊远冤院怨源远 原 怨源愿
咱员园暂摇 邱金梅袁温世杰袁刘海燕袁梁炫强援根癌农杆菌介导花生高效遗传
转化体系的优化咱允暂 援中国油料作物学报袁圆园员园袁猿圆渊圆冤院圆园愿 原 圆员员
咱员员暂摇 刘 峰袁单世华袁闫彩霞袁毕玉平袁李光敏袁伦伟志援 花生子叶遗传
转化再生体系影响因素的研究咱 允暂 援 花生学报袁圆园园苑袁猿远渊员冤院员猿
原 员怨
咱员圆暂摇 张庆林袁赵 艳袁李晓薇袁翟 莹袁张 艳袁王 英袁李景文援大豆硬脂酸
原 粤悦孕脱饱和酶基因启动子的克隆及其表达活性分析咱允暂 援作物
学报袁圆园员员袁猿苑渊苑冤院员圆园缘 原 员圆员员
咱员猿暂摇 郝世俊袁隋炯明袁乔利仙袁 王晓杰袁王晶珊援花生组培苗嫁接技术
的研究咱允暂 援青岛农业大学学报渊自然科学版冤袁圆园员园袁圆苑渊圆冤院员员园
原 员员猿
咱员源暂摇 贾士荣袁曹冬孙援转基因植物咱允暂 援植物学通报袁员怨怨圆袁渊怨冤院猿 原 员缘
咱员缘暂 摇 杜 鹃袁赵 峰袁曹越平援超声波辅助农杆菌介导转化大豆 早怎泽基因
在不同外植体中的瞬时表达咱允暂 援上海交通大学学报渊农业科学
版冤袁圆园员园袁圆愿渊缘冤院猿猿怨 原 源源愿
咱员远暂摇 姚春娜袁王亚馥援超声波辅助发根农杆菌对黄瓜遗传转化的影响
咱允暂 援园艺学报袁圆园园员袁圆愿院愿园 原 愿圆
咱员苑暂摇 姜 玲袁栽藻贼泽怎燥 酝袁杂葬凿葬燥 运援 超声波辅助农杆菌介导 悦孕 基因转化
番木瓜的有效方法咱允暂 援实验生物学报袁圆园园源袁猿苑渊猿冤院员愿怨 原 员怨缘
咱员愿暂摇 马志梅袁王 忆袁许雪峰袁孔 谨袁韩振海援根癌农杆菌介导的山定子
遗传转化的影响咱允暂 援核农学报袁圆园园愿袁圆圆渊圆冤院员远园 原 员远源
咱员怨暂摇 蒋 苏袁陈彩艳袁程祝宽袁蔡 润袁翟文学袁朱立煌援用花药愈伤组织
作为转化受体的水稻转基因植株的分析咱允暂 援遗传学报袁圆园园源袁猿员
渊员圆冤院员猿愿员 原 员猿愿苑
咱圆园暂摇 叶兴国袁杂澡蚤则造藻赠 杂葬贼燥袁徐惠君袁杜丽璞袁栽燥皂 悦造藻皂藻灶贼藻援 小麦农杆菌
介导转基因植株的稳定获得和检测咱允暂 援中国农业科学袁圆园园员袁猿源
渊缘冤院源远怨 原 源苑源
咱圆员暂 摇 吴关庭袁胡张华袁郎春秀袁陈笑芸袁王伏林袁金 卫袁陈锦清袁夏英
武援农杆菌介导高羊茅遗传转化体系的建立 咱 允暂 援 核农学报袁
圆园园缘袁员怨渊缘冤院猿源园 原 猿源远
咱圆圆暂摇 张艳贞袁正摇 罡袁胡汉桥袁魏松红袁季 静袁王军军袁李 昌援农杆菌介
导将 月贼杀虫蛋白基因导入优良玉米自交系的研究咱 允暂 援 遗传袁
圆园园圆袁圆源渊员冤院猿缘 原 猿怨
渊责任编辑摇 王媛媛冤
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