全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊苑冤院员员缘缘 耀 员员远员允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿鄄园苑鄄圆缘摇 接受日期院圆园员源鄄园猿鄄员圆
基金项目院福建省自然科学基金资助项目渊圆园员圆允园员源圆圆冤
作者简介院林丛发袁男袁副研究员袁主要从事植物抗病育种研究及推广研究遥 耘鄄皂葬蚤造院造糟枣愿苑苑岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院同第一作者遥
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤园苑鄄员员缘缘鄄园苑
耘酝杂诱导太子参抗性突变体及分子检测
林丛发
渊宁德市农业科学研究所袁 福建 福安摇 猿缘缘园员苑冤
摘摇 要院为创建太子参突变体库及创造太子参抗叶斑病新种质袁用甲基磺酸乙酯渊耘酝杂冤 处理太子参愈伤
组织后通过叶斑病粗毒素离体胁迫培养筛选抗病突变体袁以愈伤组织 园豫相对生长量为指标袁筛选抗病
突变体的粗毒素临界致死浓度选择压袁以愈伤组织在粗毒素培养基上 缘园豫存活率为指标袁筛选 耘酝杂 半
致死处理组合遥 结果表明院圆缘 豫粗毒素液培养 圆园 凿 的处理组合可作为抗性突变体筛选的选择压曰
园郾 愿豫 耘酝杂处理 圆 澡袁 园郾 愿豫 耘酝杂处理 猿 澡和 员豫耘酝杂处理 圆 澡袁可作为筛选突变体的 耘酝杂半致死组合遥
经 耘酝杂处理的愈伤组织提高了在叶斑病粗毒素液临界致死浓度中的存活率遥 缘园 条 砸粤孕阅引物 孕悦砸检
测结果表明袁突变体 阅晕粤序列发生了变异遥 突变体苗经田间鉴定袁抗性评价为高抗遥 本研究为建立太
子参 耘酝杂离体诱变定向改良性状技术体系奠定基础遥
关键词院太子参曰甲基磺酸乙酯曰 突变体曰分子检测
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 园苑援 员员缘缘
摇 摇 农作物育种能否取得较大进展在很大程度上取决
于可以利用的种质资源的遗传多样性遥 大豆尧油菜尧玉
米等作物的遗传改良实践证明袁化学诱变能创造出优
质尧高产乃至抗病的种质咱员 原 圆暂 遥 在许多的化学诱变剂
中袁甲基磺酸乙酯渊藻贼澡赠造 皂藻贼澡赠造 泽怎造枣燥灶葬贼藻袁耘酝杂冤是应用
最好的诱变剂袁 员怨苑愿 年 晕藻怎枣枣藻则 利用 耘酝杂 原石蜡石油
处理玉米花粉袁获得各种突变体以来袁已被广泛应用于
农作物诱变育种咱猿暂 遥 研究较多的是采用离体培养筛
选抗盐和抗病突变体咱源 原 愿暂 遥 杨乾等咱怨暂对马铃薯茎段用
耘酝杂诱变进行抗盐筛选袁获得了耐 晕葬悦造 诱变植株曰
月葬则则燥等咱员园暂通过对埃塞俄比亚芥孢子的 耘酝杂 处理诱
变获得了改良芥酸含量的加倍单倍体品系曰国内在蔬
菜上开展的诱变筛选并获得抗性突变体的有院抗黑斑
病大白菜咱员圆暂 尧抗茎枯病芦笋咱员员暂 尧抗早疫病番茄咱员猿暂和抗
黄萎病茄子咱员源暂等曰在小麦咱缘暂 尧水稻咱员缘暂 尧玉米咱员远 原 员苑暂等多
种作物上也均获重大成就遥 但在太子参抗病育种中尚
未见报道遥
太子参叶斑病渊孕澡赠造造燥泽贼蚤糟贼葬 糟燥皂皂燥灶泽蚤蚤冤是我国太子
参产区最普遍尧危害较严重的一种病害咱员愿暂 遥 发病率高
达 猿园豫 耀 缘缘豫袁造成太子参叶片焦枯死亡袁减产 员缘豫
耀 圆愿豫袁严重影响了太子参的产量和质量咱员怨暂 遥 因目前
太子参还没有抗病品种袁防治太子参叶斑病主要依靠农
业防治和化学药剂防治袁易造成产品和环境污染咱圆园暂 遥
因此袁选育抗病品种具有重要意义遥 本研究采用 耘酝杂
处理太子参愈伤组织袁用太子参叶斑病菌粗毒素培养基
定向筛选抗叶斑病愈伤组织突变体袁并进一步诱导成
苗袁对其 阅晕粤 进行 砸粤孕阅 检测袁旨在探讨 耘酝杂 对太子
参的诱变效应袁筛选适宜的诱变处理组合袁建立太子参
耘酝杂离体诱变定向改良性状技术体系遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
员郾 员郾 员摇 化学试剂 摇 耘酝杂 购于加西亚公司渊上海晶纯
试剂有限公司冤遥
员郾 员郾 圆摇 太子参愈伤组织的诱导摇 以柘参 圆 号茎尖诱
导的愈伤组织为试验材料遥 愈伤组织诱导培养基院酝杂
垣 远 原 月粤园郾 圆 皂早窑蕴 原员 垣 晕粤粤 园郾 缘 皂早窑蕴 原员曰继代培养基院
酝杂 垣 远 原 月粤园郾 缘 皂早窑蕴 原员 垣 晕粤粤园郾 缘 皂早窑蕴 原员曰分化培养
基为 酝杂 垣远 原 月粤 员郾 缘 皂早窑蕴 原员 垣 晕粤粤 园郾 园员 皂早窑蕴 原员曰增
殖培养基为院酝杂 基本培养基遥 以上培养基均加蔗糖
猿园 早窑蕴 原员 垣 琼脂粉 缘郾 园 早窑蕴 原员袁责匀 值 缘郾 愿袁光照强度
缘缘员员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
圆园园园蕴曾袁员圆 澡窑凿 原员 咱圆员暂 遥
员郾 员郾 猿摇 毒素液的制备摇 太子参叶斑病菌在 孕阅粤培养
基上分离尧纯化后袁挑取少量菌丝接种到 孕杂渊马铃薯 垣
蔗糖冤液体培养基上袁圆园 耀 圆缘益尧光照 员圆 澡窑凿 原员振荡培
养 圆员 凿袁用 源 层纱布滤弃菌渣袁再经 猿园园园 则窑皂蚤灶 原员离心
圆园 皂蚤灶袁取上清液用 园郾 源缘 滋皂的微孔膜加压过滤袁得到
无菌的粗毒素液咱圆圆暂 遥
员郾 员郾 源摇 砸粤孕阅引物摇 缘园 条 员园 碱基随机引物由生工生
物工程渊上海冤股份有限公司合成遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 愈伤组织选择压的筛选摇 毒素粗提液按照园尧
缘豫 尧员园豫 尧员缘豫 尧圆园豫 尧圆缘豫 尧猿园豫 尧猿缘豫 渊体积比 灾 辕 灾冤
的浓度加入到继代培养基中袁将接种 猿园 凿 的愈伤组织
转接于上述梯度浓度粗毒素液继代培养基中胁迫培
养袁分别在 园尧员园尧圆园 和 猿园 凿测其鲜重袁绘制生长曲线袁
以愈伤组织部分成活袁但相对生长量渊增重量 辕始重
量冤为 园 时的毒素浓度和培养时间作为筛选抗病突变
体的选择压咱圆猿暂 遥
员郾 圆郾 圆摇 耘酝杂诱变剂配制摇 用 园郾 园员 皂燥造窑蕴 原员的磷酸缓
冲液配制成 园尧园郾 圆豫 尧园郾 源豫 尧园郾 远豫 尧园郾 愿豫 尧员豫 远 个浓
度袁责匀值 苑郾 园 过滤灭菌备用咱圆源暂 遥
员郾 圆郾 猿摇 耘酝杂 诱变处理 摇 以不同时间渊园郾 缘尧员尧圆尧猿 澡冤
与不同浓度梯度 耘酝杂 原磷酸缓冲液组合浸泡处于旺
盛生长的愈伤组织袁对照 悦运 为缓冲液浸泡遥 处理完
先后用无菌磷酸缓冲液和无菌水浸洗各 猿 次袁接种于
愈伤组织继代培养基上袁猿园 凿 后统计各组合处理的愈
伤组织成活率袁以愈伤组织处于半致死状态下的 耘酝杂
处理组合作为诱变筛选突变体的适宜剂量咱圆缘 原 圆远暂 遥
员郾 圆郾 源摇 愈伤组织抗性突变体的筛选摇 挑取经 耘酝杂 半
致死处理成活的和未经 耘酝杂 处理的对照愈伤组织接
种于 员郾 圆郾 员 选出的叶斑病粗毒素液抗性选择压的胁迫
培养基上袁重复 猿 次袁培养条件为 圆园 益袁光照强度
圆园园园 蕴曾袁员圆 澡窑凿 原员遥 为淘汰生理性适应的愈伤组织袁将
经过选择压胁迫培养 圆园 凿 的愈伤组织转入未添加毒
素液的继代培养基中培养 圆园 凿 后袁再转入浓度为圆缘豫
的粗毒素液继代培养基中进行第二次抗性筛选袁以后
每 猿园 凿继代培养一次袁远园 凿后观察统计愈伤组织生长
状况和存活率渊存活数 辕接种总数冤 咱圆苑暂 遥
员郾 圆郾 缘摇 太子参抗性突变体的 砸粤孕阅 检测摇 随机选取
经 耘酝杂组合半致死处理并胁迫培养成活的 缘 组愈伤
组织用 砸粤孕阅方法检测 阅晕粤 多态性袁对照 悦运 为磷酸
缓冲液处理的愈伤组织遥 用植物 阅晕粤 提取试剂盒
渊生工 杂运愿源员员冤分别提取部分突变体和对照愈伤组织
总 阅晕粤曰并用 缘园 条随机引物进行 孕悦砸 扩增袁采用
圆缘滋蕴体系袁模板 阅晕粤 渊圆园 原 猿园 灶早窑滋蕴 原员 冤 员郾 园 滋蕴袁员园
伊 月怎枣枣藻则 圆郾 缘滋蕴袁 酝早悦造圆 渊 圆缘皂皂燥造窑蕴 原员 冤 圆郾 园滋蕴袁 凿晕栽孕
园郾 缘滋蕴袁栽葬择酶渊缘哉窑滋蕴 原员冤 园郾 圆缘滋蕴袁随机引物渊园郾 缘责皂燥造
窑滋蕴 原员 冤 员郾 园滋蕴袁用灭菌双蒸水补足至 圆缘滋蕴遥 在 孕悦砸
反应扩增仪渊加拿大 月月陨 公司冤上扩增袁反应程序为院
怨缘益预变性 猿皂蚤灶袁怨源益变性 源缘泽袁猿远益退火 远园泽袁苑圆益延
伸 圆皂蚤灶袁共 源园 个循环袁最后 苑圆益延伸 员园皂蚤灶遥 砸粤孕阅
扩增产物物在 圆豫琼脂糖凝胶尧员缘园灾尧员园园皂粤尧圆园皂蚤灶 条
件下跑电泳袁并在凝胶成像系统渊郧藻灶藻 郧藻灶蚤怎泽公司冤上
拍照记录电泳图谱袁分析每条随机引物扩增产生的电
泳条带的多态性咱圆愿暂 遥
员郾 圆郾 远摇 突变体苗的田间抗性观察摇 将 耘酝杂 诱变并经
叶斑病粗毒素胁迫筛选和 砸粤孕阅检测得到的愈伤组织
突变体分化成 猿 园园园 株苗袁扩繁后得到 员 万株苗袁圆园员猿
年 员 月 源 日于田间种植袁试验地点选在柘荣县富溪村袁
设置 缘 个栽培点袁每个点面积为 远苑 皂圆袁种植 圆园园园 株袁
对照 悦运 为当地柘参 圆 号栽培种遥 在叶斑病盛发期
渊圆园员猿 年 远 月 员缘 日冤袁采用田间抽样相等配置法袁按
缘豫抽样袁调查发病率和病情指数渊阅蚤泽藻葬泽藻 蚤灶凿藻曾袁 阅陨冤袁
并按如下标准划分病株级别咱圆怨暂 院园 级院无病症植株曰员
级院 约 员 辕 员园 叶片发病的植株曰猿 级院员 辕 员园 耀 员 辕 源 叶片发
病的植株曰缘 级院员 辕 源 耀 员 辕 圆 叶片发病的植株曰苑 级院员 辕 圆
耀 猿 辕 源 叶片发病的植株曰怨 级院猿 辕 源 以上叶片发病的植
株遥 病情指数 越 撞渊病级数 伊各级株数冤 辕 渊最高病级数
伊调查总株数冤 伊 员园园豫 遥 依据病情指数渊阅陨冤平均值
确定其抗性水平咱猿园暂 院阅陨 越 园袁免疫曰园 约 阅陨 约 员园袁高抗
渊匀砸冤曰员园臆 阅陨 约 猿园袁抗病 渊 砸冤曰猿园臆阅陨 约 源园袁中抗
渊酝砸冤曰源园臆 阅陨袁感病遥
圆摇 结果和分析
圆郾 员摇 愈伤组织抗性选择压的筛选
愈伤组织生长受到粗毒素液的充分抑制渊图 员冤袁
粗毒素液浓度越大袁抑制效果越明显袁员园 凿 以后袁各处
理的愈伤组织相对生长量尧成活率差异较大遥 外观上袁
猿园 豫 尧猿缘 豫毒素上的愈伤组织第 缘 天开始变褐尧松散袁
到第 圆园 天几乎完全褐化袁成活率为 园袁相对生长量为
园曰粗毒素液浓度为 圆缘 豫的处理袁第 缘 耀 圆园 天愈伤组织
相对生长量为 缘豫 袁处于缓慢生长状态袁而从第 圆园 耀 源园
天袁成活率为 远郾 远豫 袁愈伤组织相对生长量为 原缘 豫 袁可
能是此时细胞已开始死亡解体袁造成重量减轻遥 因此袁
大部分愈伤组织细胞生长临界点为 圆缘豫粗毒素液处
理 圆园 凿袁故在抗性突变体的筛选试验中可选用含 圆缘 豫
粗毒素液的培养基作为胁迫选择培养基遥
远缘员员
摇 苑 期 耘酝杂诱导太子参抗性突变体及分子检测
图 员摇 不同浓度粗毒素处理对愈伤
组织相对生长量的影响
云蚤早援 员摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 糟则怎凿藻
贼燥曾蚤灶 燥灶 贼澡藻 则藻造葬贼蚤增藻 憎藻蚤早澡贼 蚤灶糟则藻葬泽藻 燥枣 栽葬蚤扎蚤泽澡藻灶 糟葬造造蚤
表 圆摇 耘酝杂诱变愈伤组织经粗毒素胁迫培养后的成活率
栽葬遭造藻 圆摇 杂怎则增蚤增葬造 则葬贼藻 燥枣 糟葬造造蚤 蚤灶凿怎糟藻凿 蚤灶 耘酝杂 葬枣贼藻则 糟则怎凿藻 贼燥曾蚤灶 泽糟则藻藻灶蚤灶早
诱变处理组合
酝怎贼葬早藻灶蚤糟 贼则藻葬贼皂藻灶贼
糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶
重复玉
砸藻责藻葬贼 员
重复域
砸藻责藻葬贼 圆
重复芋
砸藻责藻葬贼 猿
总愈伤
块数
栽燥贼葬造
糟葬造造蚤
成活愈伤
块数
杂怎则增蚤增葬造
糟葬造造蚤
成活率
杂怎则增蚤增葬造
则葬贼藻 辕 豫
总愈伤
块数
栽燥贼葬造
糟葬造造蚤
成活愈伤
块数
杂怎则增蚤增葬造
糟葬造造蚤
成活率
杂怎则增蚤增葬造
则葬贼藻 辕 豫
总愈伤
块数
栽燥贼葬造
糟葬造造蚤
成活愈伤
块数
杂怎则增蚤增葬造
糟葬造造蚤
成活率
杂怎则增蚤增葬造
则葬贼藻 辕 豫
平均成活率
粤增藻则葬早藻
泽怎则增蚤增葬造
则葬贼藻 辕 豫
园郾 愿豫 耘酝杂袁圆澡 圆缘猿 缘猿 圆园郾 怨 猿圆员 圆缘 苑郾 愿 圆猿园 圆愿 员圆郾 圆 员猿郾 圆
园郾 愿豫 耘酝杂袁猿 澡 圆愿园 圆怨 员园郾 源 猿园缘 缘源 员苑郾 苑 员怨园 员缘 苑郾 怨 员圆郾 远
员郾 园豫 耘酝杂袁圆 澡 圆苑园 猿愿 员源郾 员 圆怨圆 远愿 圆猿郾 猿 圆圆园 猿苑 员远郾 愿 员愿郾 圆
磷酸缓冲液渊悦运冤 远圆 猿 源郾 愿 缘猿 猿 缘郾 苑 缘园 圆 源郾 园 源郾 愿
表 员摇 摇 愈伤组织经 耘酝杂处理后的成活率
栽葬遭造藻 员摇 栽澡藻 泽怎则增蚤增葬造 则葬贼藻 燥枣 糟葬造造蚤 葬枣贼藻则 耘酝杂 贼则藻葬贼皂藻灶贼
辕 豫
耘酝杂处理浓度
耘酝杂 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
猿园凿愈伤组织成活率
杂怎则增蚤增葬造 则葬贼藻 燥枣 糟葬造造蚤
园郾 缘 澡 员 澡 圆 澡 猿澡
园 渊悦运冤 员园园 员园园 员园园 员园园
园郾 圆 怨缘 怨猿 愿猿 苑缘
园郾 源 怨圆 怨园 愿园 愿园
园郾 远 愿愿 愿源 苑缘 苑猿
园郾 愿 苑园 远园 缘圆 源缘
员郾 园 远缘 远猿 源园 圆园
圆郾 圆摇 耘酝杂处理对太子参愈伤组织存活率的影响
由表 员 可知袁随着 耘酝杂 处理浓度的增大尧处理时
间的延长袁愈伤组织成活率呈下降趋势遥 园 耀 园郾 远豫 袁处
理时间为 园郾 缘尧员 澡 时袁存活率差异不大袁当浓度增大到
园郾 愿 豫处理 圆 澡时袁存活率为 缘圆 豫 袁员豫耘酝杂 处理 猿 澡袁
外植体大部分呈褐色袁存活率 圆园豫 遥 未经 耘酝杂处理的
对照愈伤组织呈淡黄绿色袁存活率为 员园园豫 遥 考虑到
实际试验中半致死剂量只能在愈伤组织成活率约为
缘园 豫左右的范围内而无法精确确定袁在本试验所有的
处理组合中袁有 猿 个处理组合的愈伤组织存活率接近
缘园豫 袁即 园郾 愿豫 耘酝杂处理 圆 澡尧 园郾 愿豫 耘酝杂 处理 猿 澡和
员豫耘酝杂处理 圆 澡遥
圆郾 猿摇 抗叶斑病愈伤组织的筛选
经 园郾 愿豫 耘酝杂 处理 圆 澡尧园郾 愿豫 耘酝杂 处理 猿 澡 和
员豫耘酝杂处理 圆 澡的太子参愈伤组织在含 圆缘 豫叶斑病
粗毒素液培养基上袁经 远园 凿胁迫继代培养后的成活率
见表 圆遥 结果表明袁愈伤组织经过同一 耘酝杂 诱变组合
浸泡处理后袁再经 圆缘 豫粗毒素液胁迫筛选袁各重复愈
伤组织成活率高低差异较大袁不具备规律性遥 园郾 愿豫
耘酝杂处理 圆 澡的 愿园源 块愈伤组织在胁迫筛选后有 员园远
块成活袁平均成活率为 员猿郾 圆 豫 曰园郾 愿豫 耘酝杂 处理 猿 澡
处理的 苑苑缘 块愈伤组织经胁迫筛选后有 怨愿 块成活袁平
均成活率为 员圆郾 远 豫 曰员豫 耘酝杂 处理 圆 澡 的 苑愿圆 块愈伤
组织经胁迫筛选后有 员源猿 块成活袁平均成活率为 员愿郾 圆
豫 曰而磷酸缓冲液渊对照冤处理的 员远缘 块愈伤组织经胁
迫培养后仅有 愿 块成活袁平均成活率为 源郾 愿豫 袁但从外
观上看袁在含 圆缘 豫叶斑病粗毒素液培养基上袁耘酝杂 诱
变的成活愈伤组织生长正常袁而对照处理的愈伤组织
处于缓慢或停止生长状态遥 说明经 耘酝杂 诱变处理过
苑缘员员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
的太子参愈伤组织提高了在叶斑病粗毒素液临界致死
浓度中的存活率遥
表 猿摇 太子参突变体苗的田间抗性调查
栽葬遭造藻 猿摇 云蚤藻造凿 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 造藻葬枣 泽责燥贼 蚤灶 孕泽藻怎凿燥泽贼藻造造葬则蚤葬 澡藻则藻则燥责澡赠造造葬 皂怎贼葬灶贼 泽藻藻凿造蚤灶早泽
处理
栽则藻葬贼皂藻灶贼
重
复
砸藻责援
各级病害发病株
蕴藻增藻造泽 燥枣 凿蚤泽藻葬泽藻 蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻
园 员 猿 缘 苑 怨
发病株数
晕燥援 燥枣
凿蚤泽藻葬泽藻凿
责造葬灶贼泽
调查株数
晕燥援 燥枣
责造葬灶贼泽
蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻凿
发病率
阅蚤泽藻葬泽藻
蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻 辕
豫
病情指数
阅蚤泽藻葬泽藻
蚤灶凿藻曾
平均发病率
粤增藻则葬早藻 凿蚤泽藻葬泽藻
蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻 辕
豫
平均
病指
粤增藻则葬早藻
阅陨
抗性评价
砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻
藻增葬造怎葬贼蚤燥灶
突变
体苗
陨 怨圆 愿 园 园 园 园 愿 员园园 愿 员郾 远
陨陨 怨猿 苑 园 园 园 园 苑 员园园 苑 员郾 源
陨陨陨 怨猿 远 员 园 园 园 苑 员园园 苑 员郾 源
陨灾 怨猿 缘 圆 园 园 园 苑 员园园 苑 员郾 源
灾 怨源 缘 员 园 园 园 远 员园园 远 员郾 圆
苑 员郾 源 高抗
柘参 圆 号
渊悦运冤
陨 员源 缘圆 圆远 远 园 园 愿远 员园园 愿远 猿圆
陨陨 员苑 源缘 猿园 愿 园 园 愿猿 员园园 愿猿 猿缘
陨陨陨 员怨 缘员 圆缘 缘 园 园 愿员 员园园 愿员 猿园郾 圆
陨灾 员怨 猿缘 猿远 员园 园 园 怨园 员园园 愿员 猿愿郾 远
灾 员猿 猿园 源园 员苑 园 园 苑源 员园园 愿苑 源苑
愿猿郾 远 猿远郾 远 中抗
圆郾 源摇 部分突变体的分子鉴定
提取经 猿 组 耘酝杂 诱变的愈伤组织及对照基因组
总 阅晕粤袁用随机引物 孕悦砸扩增遥 结果表明袁缘园 条随机
引物 中 有 缘 条 引 物 杂怨源 渊 郧郧粤栽郧粤郧粤悦悦 冤尧 杂怨愿
渊 郧郧悦栽悦粤栽郧栽郧 冤尧 杂员源缘 渊 栽悦粤郧郧郧粤郧郧栽 冤尧 杂 员源远
渊粤粤郧粤悦悦悦悦栽悦冤和 杂怨园渊粤郧郧郧悦悦郧栽悦栽冤扩增效果较
好袁从多态性类型看袁表现为不同随机引物 孕悦砸 扩增
产生不同比例的 砸粤孕阅多态性袁圆 号尧猿 号尧源 号尧缘 号突
变体在引物 杂怨愿 的扩增下都出现部分扩增带的缺失袁
或增加特异带渊图 圆冤袁猿 号尧缘 号突变体在引物 杂怨源 的
扩增下出现条带缺失渊图 猿冤袁源 号尧缘 号突变体在引物
杂员源缘 的扩增下在同一位置出现条带增加渊图 源冤袁缘 号
图 圆摇 引物 杂怨愿 的扩增产物
云蚤早援 圆摇 孕则蚤皂藻则 杂怨愿 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
图 猿摇 引物 杂怨源 的扩增产物
云蚤早援 猿摇 孕则蚤皂藻则 杂怨源 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
突变体在引物 杂员源远 的扩增下出现 圆 条带缺失渊图 缘冤袁
员号尧圆尧号尧猿 号尧源 号尧缘 号突变体在引物 杂怨园 的扩增下
在同一位置出现条带缺失渊图 远冤袁均显示出对照和突
变体的扩增条带带型不同袁说明突变体发生了变异曰员
号和 圆 号突变体经 园郾 愿豫 耘酝杂尧圆澡 组合处理尧猿 号和 源
号突变体经 园郾 愿豫 耘酝杂尧猿 澡 处理袁并在同一引物和反
应条件下各自表现出不同的条带变化渊图 圆 耀图 源冤袁
反映出 耘酝杂对 阅晕粤的诱变存在一定的偶然性遥
圆郾 缘摇 突变体苗的田间抗性表现
突变体苗的田间抗病评价结果见表 猿袁对照品种
柘参 圆 号渊当地栽培种冤田间平均发病率为 愿猿郾 远豫 袁平
均病情指数 阅陨为 猿远郾 远袁抗性评价为中抗袁而经 耘酝杂诱
愿缘员员
摇 苑 期 耘酝杂诱导太子参抗性突变体及分子检测
图 源摇 引物 杂员源缘 的扩增产物
云蚤早援 源摇 孕则蚤皂藻则 杂员源缘 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
图 缘摇 杂员源远 的扩增产物
云蚤早援 缘摇 孕则蚤皂藻则 杂员源远 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
变的突变体种苗田间平均发病率为 苑豫 袁平均病情指
数 阅陨为 员郾 源袁抗性评价为高抗遥
猿摇 讨论
化学诱变育种在作物品质改良上具有独特的作
用袁主要是通过化学试剂的处理造成 阅晕粤的损伤和错
误修复而产生突变体袁这些突变往往以点突变为主袁并
且因诱变剂不同具有较高突变频率和较为稳定的突变
谱咱猿员 原 猿圆暂 遥 其中袁耘酝杂 的诱变机制主要是直接作用于
注院员尧圆 号为 园郾 愿豫 耘酝杂尧圆澡 组合处理产物袁猿尧源 号为 园郾 愿豫 耘酝杂尧
猿 澡处理产物袁缘 号为 员郾 园豫 耘酝杂尧圆 澡处理产物袁酝为 阅晕粤 皂葬则噪藻则袁
摇 摇 摇 悦运为对照遥
晕燥贼藻院 晕燥援 员 葬灶凿 晕燥援 圆 皂怎贼葬灶贼泽 憎藻则藻 枣则燥皂 园郾 愿豫 耘酝杂 圆澡 贼则藻葬贼皂藻灶贼援
晕燥援 猿 葬灶凿 晕燥援 源 憎藻则藻 枣则燥皂 园郾 愿豫 耘酝杂 猿澡 贼则藻葬贼皂藻灶贼援 晕燥援 缘 憎葬泽 枣则燥皂
摇 摇 员豫 耘酝杂 圆澡 贼则藻葬贼皂藻灶贼援 酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则援 悦运院糟澡藻糟噪援
图 远摇 引物 杂怨园 的扩增产物
云蚤早援 远摇 孕则蚤皂藻则 杂怨园 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
阅晕粤的碱基和磷酸袁使之发生烷化袁进而造成转换或
颠换袁由于点突变不对作物基因组进行大的调整袁因此
也不易引发基因的沉默或丢失袁有利于保持原品种的
优良性状袁只对作物的某个性状进行改良咱猿猿暂 遥 所以化
学诱变方法仍是一种创造和改良物种的有效方法之
一遥 但突变发生的方向是随机的袁因此育种中须进行
定向筛选袁在诱变中或诱变后针对所需选育的突变性
状类型设计选择压袁以期获得具有某些性状改良的突
变体袁然后再进行子代性状的筛选袁无疑将提高突变体
的选出率袁缩短和减少常规筛选的周期袁有效避免了在
大量后代群体中筛选突变体袁减少了育种者的工作量尧
缩短了育种周期遥 本研究中袁太子参愈伤组织经 耘酝杂
不同浓度和不同时间组合处理后袁经 圆缘豫叶斑病粗毒
素液定向筛选袁再生出抗性突变体苗袁经田间抗性鉴定
为高抗叶斑病遥
影响植物离体化学诱变效应的因素主要有外植
体尧诱变剂的浓度尧处理方法及处理时间等遥 诱变处理
的剂量决定于药剂和作用的作物本身袁而其中主要的
是浓度和处理的持续时间遥 诱变过程中常使用对处理
材料造成半致死效应的剂量袁可设置诱变剂浓度梯度
和时间梯度来筛选出最佳组合咱员源袁猿源暂 遥 在本研究所有
的处理组合中袁筛选出 猿 个处理组合的愈伤组织存活
怨缘员员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
率接近 缘园豫 袁即 园郾 愿豫 耘酝杂处理 圆 澡尧园郾 愿豫 耘酝杂 处理
猿 澡和 员豫耘酝杂处理 圆 澡袁均可作为筛选突变体的半致
死组合遥
对性状突变体植物的筛选和鉴定的方法主要有田
间鉴定和分子鉴定遥 田间鉴定是一种比较简单和原始
的方法袁无需特殊设备袁简单易行袁通过性状表现进行
鉴定袁但存在工作量大袁可比性差袁周期长等缺点遥
阅晕粤分子标记具有多态性高尧不受组织器官尧季节尧环
境限制尧方便快捷的优点遥 砸粤孕阅 分析技术是突变体
检测和筛选的常用方法咱猿缘 原 猿怨暂 袁在种质资源亲缘关系分
析等方面得到广泛应用咱源园 原 源员暂 遥 该方法以 孕悦砸 技术为
基础袁对基因组 阅晕粤 进行随机扩增袁无需预先了解
阅晕粤序列的信息遥 本试验采用 砸粤孕阅 分析 耘酝杂 处理
得到的太子参愈伤组织袁结果表明袁与未处理的对照相
比袁诱变材料 阅晕粤 条带产生了增加或缺失袁证实突变
体存在 阅晕粤水平上的变异遥
源摇 结论
经 耘酝杂 不同浓度尧不同时间处理后袁筛选出 猿 个
处理组合袁即 园郾 愿豫 耘酝杂处理 圆 澡尧园郾 愿豫 耘酝杂处理 猿 澡
和 员豫耘酝杂处理 圆 澡袁可作为筛选太子参愈伤组织突变
体的 耘酝杂半致死组合遥 太子参愈伤组织抗性突变体
筛选培养基为 酝杂 垣 远 原 月粤园郾 缘 皂早窑蕴 原员 垣 晕粤粤园郾 缘 皂早
窑蕴 原员 垣蔗糖 猿豫 垣圆缘 豫 渊体积比冤叶斑病粗毒素液曰经
耘酝杂处理的愈伤组织提高了在叶斑病粗毒素液临界
致死浓度中的存活率袁成活率从对照的 源郾 愿豫提高到
员圆郾 远 耀 员愿郾 圆豫 曰缘园 条 砸粤孕阅 引物 孕悦砸 检测结果表明袁
突变体 阅晕粤序列发生变异袁表现出 砸粤孕阅图谱带型的
多态性曰愈伤组织突变体经分化培养基 酝杂 垣 远 原 月粤
员郾 缘 皂早窑蕴 原员 垣 晕粤粤 园郾 园员 皂早窑蕴 原员 垣蔗糖 猿豫诱导形成
再生苗袁经田间鉴定袁抗性评价为高抗遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 王培英袁 许德春袁郭玉虹袁孟丽芬袁赵晓南援 人工诱变改良大豆品
质的研究咱允暂 援 核农学报袁 圆园园园袁 员源渊员冤 院圆员 原 圆猿
咱 圆 暂 摇 王传堂袁王秀贞袁唐月异袁陆殿绪袁张建成袁崔凤高袁禹山林援 耘酝杂
直接注入花生花器创制高产突变体咱 允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁圆源
渊圆冤 院圆猿怨 原 圆源圆
咱 猿 暂 摇 晕藻怎枣枣藻则 酝 郧袁 孕葬则葬枣枣蚤灶 燥蚤造 贼藻糟澡灶蚤择怎藻 枣燥则 贼则藻葬贼蚤灶早 皂葬贼怎则藻 糟燥则灶 责燥造造藻灶
憎蚤贼澡 皂怎贼葬早藻灶泽 咱允暂 援 酝葬赠凿蚤糟袁 员怨苑愿袁 圆圆院 圆员 原 圆愿
咱 源 暂摇 徐冠仁援植物诱变育种学咱酝暂援北京院中国农业出版社袁员怨怨远郾 猿 原
圆园猿
咱 缘 暂 摇 石春海援 小麦诱变育种的研究进展咱 允暂 援 核农学通报袁员怨怨圆袁员猿
渊圆冤院愿缘 原 怨园
咱 远 暂 摇 吕善勇援 世界蔬菜诱变育种及发展趋势咱 允暂 援 北方园艺袁员怨怨猿
渊员冤院员远 原 员苑
咱 苑 暂摇 韩伟袁魏岳荣袁盛鸥袁胡春华袁易干军袁杨乔松袁黄永红袁李春雨袁邝
瑞彬援 巴西蕉离体芽的化学诱变和抗镰刀菌酸材料的筛选咱 允暂 援
核农学报袁圆园员圆袁圆远渊怨冤院员圆猿苑 原 员圆源猿
咱 愿 暂摇 虞秋成袁尹道川袁朱际君袁王路援离体培养中诱发抗病突变系的研
究进展咱允暂 援核农学通报袁员怨怨园袁源渊猿冤院员愿园 原 员愿缘
咱 怨 暂摇 杨乾袁张峰袁王蒂袁张俊莲袁杨宏羽袁刘玉汇援 耘酝杂 诱变筛选马铃
薯茎段离体耐盐变异体咱允暂 援核农学报袁圆园员员袁圆缘渊源冤院远苑猿 原 远苑愿
咱员园暂摇 月葬则则燥 云袁 云藻则灶葬灶凿藻扎鄄耘泽糟燥澡葬则 允援 通过分离袍子的 耘酝杂 处理诱变获
得芥酸含量得到改良的埃塞俄比亚芥的加倍单倍体品系渊邱敦
莲译冤国外作物育种袁圆园园圆袁渊员冤院源园
咱员员暂摇 郑元梅袁陈福如袁翁文袁贺建波援运用病菌毒素筛选芦笋愈伤组织
突变体研究初报咱允暂 援福建省农科院学报袁员怨怨远袁员员渊圆冤院缘猿 原 缘远
咱员圆暂摇 杨广东袁郭勤平袁马树斌袁薛建斌兵袁张战备援 大白菜抗黑斑病突
变株筛选技术研究咱允暂 援中国农学通报袁圆园园园袁员远渊远冤院缘苑 原 缘愿
咱员猿暂摇 赵晓明袁李明山袁宋秀英援 通过组织培养筛选番茄抗早疫病突变
体咱允暂 援山西农业大学学报袁员怨怨远袁员远渊源冤院猿缘园 原 猿缘猿
咱员源暂摇 刘君绍袁田时炳袁皮伟袁 陈亦康袁罗章勇袁王永清援 茄子抗黄萎病
突变体离体筛选咱允暂 援西南农业学报袁圆园园猿袁员远渊源冤院员园圆 原 员园远
咱员缘暂摇 蕴藻藻 允 匀袁 蕴藻藻 杂 再援 杂藻造藻糟贼蚤燥灶 燥枣 泽贼葬遭造藻 皂怎贼葬灶贼泽 枣则燥皂 糟怎造贼怎则藻凿 则蚤糟藻
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葬灶凿 悦怎造贼怎则藻袁 圆园园圆袁 苑员渊圆冤院员远缘 原 员苑员
咱员远暂摇 祝丽英袁池书敏袁刘志增袁孟义江袁 陈景堂袁宋占权援 耘酝杂 玉米花
粉诱变的 酝员 代生物学效应咱 允暂 援玉米科学袁圆园园圆袁员园渊员冤院圆员源 原
圆员远
咱员苑暂摇 李海军袁池书敏袁刘志增袁陈景堂袁路鹏袁张丽华援 利用 耘酝杂 化学
诱变改造玉米自交系的研究咱允暂 援玉米科学袁圆园园圆袁员园渊猿冤院猿远 原 猿苑
咱员愿暂摇 桑维钧袁熊继文袁宋宝安袁李晓霞袁练启仙袁张忠民袁夏忠敏援 贵州
太子参主要真菌病害的调查与防治咱允暂 援安徽农业科学袁圆园园远袁猿源
渊员源冤院猿猿员源 原 猿猿员远袁猿猿员愿
咱员怨暂摇 徐宏辉援太子参叶斑病发生规律及防治措施咱 允暂 援 植物医生袁
圆园园苑袁圆园渊圆冤院圆苑 原 圆愿
咱圆园暂摇 王晓平援 员园豫世高等药剂对太子参咱 允暂 援 内蒙古农业科技袁圆园园远
渊源冤院缘苑 原 缘愿
咱圆员暂摇 林丛发袁翁琳琳袁钟爱清袁陈芦根援太子参叶斑病抗性诱导因子筛
选咱允暂 援中国生物防治学报袁圆园员员袁圆苑渊猿冤院猿愿猿 原 猿愿苑
咱圆圆暂摇 林丛发袁钟爱清袁翁琳琳袁陈芦根袁罗仰奋援 利用叶斑病粗毒素离
体筛选太子参抗叶斑病突变体 咱 允暂 援 中国农学通报 圆园员园袁圆远
渊圆猿冤院源圆 原 源苑
咱圆猿暂摇 刘君绍袁田时炳袁皮伟袁陈亦康袁罗章勇袁王永清援 茄子抗黄萎病
突变体离体筛选域援 突变体筛选咱 允 暂 援 西南农业学报袁圆园园猿袁员远
渊源冤 院员园圆 原 员园远
咱圆源暂摇 景士西袁 园艺植物育种学总论咱酝暂援 北京院中国农业出版社袁
圆园园缘袁圆源远
咱圆缘暂摇 陈超袁王桂兰袁乔永旭袁张莉敏援 蝴蝶兰类圆球茎的化学诱变试
验咱允 暂 援 核农学报袁圆园园远袁圆园 渊圆冤 院怨怨 原 员园圆
咱圆远暂摇 徐美隆袁张怀渝袁唐宗祥袁任正隆援 耘酝杂 对丽格海棠离体诱变的
生物学效应咱允 暂 援 核农学报袁圆园园苑袁圆员 渊远冤 院缘苑苑 原 缘愿园
咱圆苑暂摇 罗静袁周厚成袁王永清袁赵霞援 耘酝杂 离体诱变及抗草莓灰霉病愈
伤组织的筛选咱允 暂 援核农学报袁圆园园怨袁圆猿 渊员冤 院怨园 原 怨源
咱圆愿暂摇 梁宏伟袁 王长忠袁 李忠袁 罗相忠袁 邹桂伟援 聚丙烯酰胺凝胶快
速尧高效银染方法的建立咱 允暂 援 遗传袁 圆园园愿袁 猿园渊员园冤 院 员猿苑怨 原
园远员员
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咱圆怨暂 摇 李社增袁马平袁 匀怎葬灶早 匀 悦袁 陈新华援相对病情指数划分棉花品种
抗病性的统计学基础咱允暂 援棉花学报袁 圆园园猿袁员缘渊远冤院猿源源 原 猿源苑
咱猿园暂摇 李新海袁 韩晓清袁张锦芬袁张世煌援玉米矮花叶病毒抗性资源鉴
定的研究咱允暂 援华北农学报 圆园园员袁员远 渊圆冤 院猿愿 原 源圆
咱猿员暂摇 夏英武援作物诱变育种咱酝暂援 北京院中国农业出版社袁员怨怨苑院圆源 原
猿园
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圆员园
咱 猿猿暂摇 安学丽袁蔡一林袁王久光袁王国强袁孙海燕援 化学诱变及其在农
作物育种上的应用咱 允暂 援 核农学报袁 圆园园猿袁 员苑渊 猿冤 院 圆猿怨 原 圆源圆
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悦怎造贼怎则藻袁 圆园园源袁苑苑渊员冤院 员园猿 原 员园远
咱猿缘暂摇 李莉袁官春云袁刘忠松援 植物体细胞无性系变异及其突变体的
砸粤孕阅鉴定分析咱允暂 援 作物研究袁圆园园源袁员愿渊缘冤院猿苑远 原 猿苑怨
咱猿远暂摇 冯霞袁孙振元袁韩蕾袁彭镇华援 多年生黑麦草体细胞无性系变异
分析咱允暂 援 核农学报袁圆园园远袁圆园渊员冤院源怨 原 缘园
咱猿苑暂摇 章宁袁苏明华袁徐夙侠袁林清洪援 应用 砸粤孕阅 技术辅助蝴蝶兰辐
射育种咱允暂 援 亚热带植物科学袁圆园园苑袁猿远渊猿冤院员怨 原 圆圆
咱猿愿暂摇 丁群英袁王涛袁张瑞袁廖新福袁郭霭光援 太空诱变哈密瓜两性花性
状连锁标记的 砸粤孕阅 分析咱 允暂 援 西北植物学报袁圆园园怨袁圆怨 渊苑冤院
造猿园怨 原 员猿员猿
咱猿怨暂摇 温亮袁王中华袁霍雪梅袁李彦慧袁张晓曼袁杨建民援 李属植物叶片
红色性状 砸粤孕阅分子标记研究咱 允暂 援 河北农业大学学报袁圆园园怨袁
猿圆渊源冤院源猿 原 源缘
咱源园暂摇 明凤袁董玉光袁娄玉霞袁王敬文袁梁斌袁叶鸣明袁沈大棱援 蝴蝶兰不
同花色品种遗传多样性的 砸粤孕阅 分析 咱 允暂 援 上海农业学报袁
圆园园猿袁员怨渊圆冤院源源 原 源苑
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泽赠泽贼藻皂 枣燥则 孕泽藻怎凿燥泽贼藻造造葬则蚤葬 澡藻则藻燥责澡赠怎葬 贼澡则燥怎早澡 蚤灶 增蚤贼则燥 耘酝杂 皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院孕泽藻怎凿燥泽贼藻造造葬则蚤葬 澡藻则藻则燥责澡赠造造葬曰耘贼澡赠造 皂藻贼澡赠造 杂怎造枣燥灶葬贼藻曰酝怎贼葬灶贼曰酝燥造藻糟怎造葬则 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
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